文摘
莲花28草药multicompound补救,起源于藏族传统医学和具有抗炎,抗氧化,抗菌,angioprotecting,伤口愈合的特性。本研究的目的是评估的影响,这种疗法在免疫Balb / c小鼠血管生成和粒细胞代谢活动。七天,老鼠每天5.8毫克的莲花(从人类每日推荐剂量计算)或0.085毫克(剂量范围内的有效剂量的其他草药提取物研究我们之前)。结果。高度的新成立的血管数量显著增加体外移植后皮肤lymphocyte-induced血管生成测试(LIA) Balb / c两剂量组脾细胞杂交F1 (Balb / c×影响);增加血液淋巴细胞和粒细胞数量只在老鼠较低剂量的药物;和显著抑制代谢活动(化学发光测试)老鼠的血液粒细胞与高剂量的莲花。结论。莲花28表现良好的生理刺激血管生成,但为此应当使用的剂量远低于推荐的厂家避免粒细胞功能的恶化。
1。介绍
莲花28日是一个多组分,藏族传统草药植物补救由20特定药草和2 nonherbal成分。莲花的活性物质主要有生物黄酮素、丹宁酸、酚酸、酚醇类,萜类化合物(1,2]。Weseler等人提出的证据,这种疗法的抗菌活性。水和酒精的莲花28准备表现出明显的对革兰氏阳性细菌和抗菌效果肺炎克雷伯氏菌在体外(3]。从20草药出现在莲花,13已经证据确凿的抗菌活性。Azadirachta indica表现出对革兰氏阳性细菌的活动。Aegle marmelos水果表达抗真菌活性。Elettaria cardamomum(小豆蔻)精油有活动枯草芽孢杆菌孢子。这种草药也提出了抗炎和immunotropic活动,加强Th2和抑制Th1细胞因子释放的淋巴细胞。最近,chemopreventive豆蔻对化学诱导小鼠皮肤致癌作用的影响。Sida等以其再生性能,活跃的反对棒状杆菌属白喉,结合对五制霉菌素和克霉唑表现出抗菌效果假丝酵母菌株。萜类化合物中丁香酚气味清香植物表示一般的抗菌效果;酚醛酒精从甘草glabra活跃的反对结核分枝杆菌,金黄色葡萄球菌,和疟原虫(2,4- - - - - -9]。最近,抗流感病毒核出口抑制剂的影响Valerianae基数描述(10]。
另一个莲花28组件,光学披巾根,其有效成分dehydrocostus内酯抑制前列腺癌细胞迁移在体外和已被证明有抗癌活性。Santamarin,倍半萜烯内酯这种草药隔绝,压制LPS-induced小鼠巨噬细胞的炎症反应和强有力地抑制的增长锥虫属brucei rhodesiense(11- - - - - -15]。另一个莲花28组件,榄仁树属chebulaRetz。,is called the “King of Medicine” in Tibet. The plant possesses multiple activities, among them, antioxidant, antimicrobial, anti-inflammatory, and wound healing activities [16]。
一些immunotropic活动莲花28和有益效果的补救措施在炎症和伤口愈合实验模型的报道(17- - - - - -24]。
在人类中,莲花28一直用作滋补有益心脏和血管和抗氧化剂。莲花28 Intercantonal办公室自1977年以来一直在瑞士注册的药物控制的补救措施来缓解跛行症状,末梢循环障碍,疼痛走路,腿抽筋,感觉异常。盈利的影响莲花28也观察到患者的动脉粥样硬化,多发性硬化患者25,26]。1992年,在波兰莲花28日注册成立。其功效是进一步证明在预防和治疗一些疾病与炎症、僵化,退行性的起源。治疗慢性感染性肺疾病的研究在波兰与莲花一大群孩子带来积极的结果(27,28]。然而,正如莲花被用于各种各样的疾病,通常在很长一段时间内(如两周),因为它具有强大的抗氧化性能,它会影响免疫系统的各种参数,其中,粒细胞的氧化破裂。事实上,一些作者报道,这种疗法抑制人类中性粒细胞呼吸爆发在体外(29日,30.]。这就是为什么我们决定评估在目前的研究中,在小鼠实验模型,在活的有机体内莲花效应28(高剂量与推荐给人类,而在低剂量,与这些我们以前用于研究各种其他草药提取物)免疫血管生成,同时,粒细胞代谢活动评估化学发光。这个测试是被广泛接受的方法测量粒细胞氧依赖性杀死的潜力。重要的是要知道选择剂量的这种疗法请勿打扰粒细胞活性和免疫刺激血管生成,因此,可以作为一个安全的药物的治疗性血管新生血管和免疫系统紊乱。
2。材料和方法
莲花28平板电脑(批28/6311,莲花AG)、瑞士),草药混合物组成的22个成分:Aegle marmelos水果(20毫克),Pimenta dioica水果(25毫克),耧斗菜寻常的地上部分(15毫克),金盏花officinalis花(5毫克),Elettaria cardamomum水果(30毫克),气味清香植物花蕾(12毫克),光学披巾根(40毫克),Hedychium spicatum粉末(10毫克),摘要以叶(6毫克),冰岛衣属多毛叶状体(40毫克),甘草glabra根(15毫克),Azadirachta indica水果(35毫克),榄仁树属chebula水果(30毫克),Plantago生长状况地上部分(15毫克),蓼属植物aviculare地上部分(15毫克),蕨麻钻进地上部分(15毫克),Pterocarpus santalinus木材(30毫克),Sida等地上部分(10毫克),乌头napellus块茎(1毫克)缬草officinalis根(10毫克)、樟脑(4毫克),和硫酸钙(20毫克)。
2.1。动物
这项研究是进行48女性天生的Balb / c小鼠6 - 8周大,重约20克,和24日女F1杂交(Balb / c×影响),6周大,来自波兰科学院繁殖生长。莲花28接种小鼠每个操作系统在日常剂量5.8毫克或0085毫克。高剂量计算根据最高剂量(6片),推荐给人类(应用因子7老鼠和人类之间的差异与身体质量的表面)。低剂量的范围符合有效剂量的其他草药提取物及其多酚类化合物用于我们先前的实验(31日- - - - - -35]。
2.2。Lymphocyte-Induced血管生成测试(LIA)
Balb / c小鼠喂食了莲花(5.8毫克或0.085毫克)埃普多夫吸管,在40μ或40 L的水μL的水(控制),7天,然后流血在麻醉(氯胺酮和甲苯噻嗪10毫克/公斤100毫克/公斤,BIOWET, Pulawy,波兰),颈椎错位牺牲。脾脏的脾细胞分离Balb / c捐助者在无菌条件下应变通过不锈钢筛和纱布,离心Histopaque 1077(美国Sigma-Aldrich) 8分钟400克为了去除红细胞。分离脾细胞在帕克resuspended培养基(TC199,生物医学,卢布林)和集中在组织内。当地GVH反应(lymphocyte-induced血管生成,LIA测试)根据执行(36与一些修改()33]。不久,脾细胞悬浮液是接枝皮内注射(100万细胞0.05毫升的帕克介质/贪污)进入F1 (Balb / c×影响)。在执行注射之前,老鼠麻醉腹腔内用3.6%水合氯醛(美国Sigma-Aldrich;0.1毫升/体重的10 g)。两侧翼的鼠标都是精心刮刀片;每一个侧面被注射细胞的2至3倍。细胞悬浊液补充0.05毫升/毫升0.01%台盼蓝为了方便识别的注射部位。植入Balb / c脾淋巴细胞识别影响抗原,产生许多免疫介质包括proangiogenic因素(免疫血管生成)。在该测试中,新成立的血管被数的t细胞反应的措施。72小时后小鼠治疗致命剂量的Morbital (Biowet、Puławy、波兰)。 All newly formed blood vessels were identified and counted in dissection microscope on the inner skin surface, using criteria suggested by the authors of the method, at magnification of 6x, in 1/3 central area of microscopic field. Identification was based on the fact that new blood vessels, directed to the point of cells injection, are thin and differ from the background vasculature in their tortuosity and divarications.
实验进行了两次(24 Balb / c小鼠和24 F1杂交总)。
2.3。估计白细胞数量及其代谢活动(Luminol-Dependent化学发光测试,CL)
Balb / c小鼠喂食了莲花(5.8毫克或0.085毫克)埃普多夫吸管,在40μ或40 L的水μL的水(控制),7天,然后流血在麻醉(氯胺酮和甲苯噻嗪10毫克/公斤100毫克/公斤,BIOWET Pulawy,波兰)由颈椎脱位retroorbital神经丛和牺牲。CL测量使用的方法Easmon et al。37与一些修改()38- - - - - -40)在室温下,闪烁计数器(LKB RackBeta 1218年,瑞典)。简而言之,0.05毫升heparinised血液稀释样品1:4磷酸缓冲盐(PBS、生物医学卢布林、波兰)和补充0.1%牛血清白蛋白(美国Sigma-Aldrich BSA)和0.1%葡萄糖(Polfa、波兰)。接下来,0.05毫升的血液稀释混合0.2毫升的鲁米诺(美国Sigma-Aldrich)解决方案(10−5米)在PBS和放置在一个闪烁计数器“巧合”模式的背景化学发光测量。然后,细胞被激活的0.02毫升溶液的调理的酵母聚糖(10毫克/毫升,美国赛瓦,美国),和化学发光活动测量在接下来的15分钟。白细胞计数和血涂片检查是由常规方法,结果显示为最大值的化学发光(cpm)获得了103粒细胞。实验进行了两次(24老鼠总)。
对所有实验中,动物被处理根据波兰法律保护动物和NIH的标准。所有的实验都被当地伦理委员会接受。
2.4。统计分析
统计评估结果是由单向方差分析,和团体之间的差异的重要性是验证Bonferroni多重比较后测试(图垫棱镜软件包)。
3所示。结果
莲花28的影响(0.085或5.8毫克)补充Balb / c捐助者的脾淋巴细胞诱导的血管生成能力新形成的血管在皮肤上的F1 (Balb / c×影响)受体小鼠呈现在图1。根据单向方差分析值< 0.0001被认为是极其重要的。列之间的变化意味着显著强于预期的机会。Bonferroni多重比较检验显示,莲花28日在两个剂量高度显著刺激淋巴细胞的血管生成活性比这刺激的控制和更好的高剂量后补救(低和高剂量的比较,)。
粒细胞化学发光的结果呈现在图2。根据单向方差分析价值0.0019被认为是重要的。Bonferroni多重比较检验显示显著降低化学发光的血液白细胞从莲花28较高剂量的老鼠,比控制。
莲花的结果28喂养血粒细胞数量呈现在图3。根据单向方差分析价值0.0006被认为是非常重要的。Bonferroni测试显示高度显著统计增加血液中的血粒细胞数量从莲花28日剂量较低的老鼠相比,控制()和显著增加()相比,再辅以大剂量的补救措施。最后一组之间没有差异观察和控制老鼠。
血淋巴细胞呈现在图4。根据方差分析,价值0.0011被认为是重要的。Bonferroni测试显示高度显著增加的血液收集的血液中淋巴细胞数量较低的老鼠莲花28日剂量()相比,控制和显著增加()相比,再辅以大剂量的补救措施。最后一组之间没有差异观察和控制老鼠。
4所示。讨论
在这篇文章中,我们报告第一次刺激multiherbal补救莲花28对免疫的影响血管生成在受体小鼠的皮肤观察局部皮肤移植物抗宿主反应。在我们先前的研究获得类似的效果,当我们为供体小鼠其他草药提取物(从植物紫锥菊紫竹,pallida,angustifolia和红景天的,quadrifida,kirilowii)和补救措施Echinasal Bioaron c .31日- - - - - -35]。然而,没有刺激效应与提取物喂养供体小鼠后获得的积雪草的或多组分草药PERVIVO [31日,41]。另一方面,抑制作用观察当供体老鼠FIBS-an水溶液的生物刺激器(沿海盐湖泥浆馏分油和肉桂酸和香豆素)教授阐述了1948年的v . p . Filatov团队(42]。
在我们目前的实验中莲花28表现的强烈刺激proangiogenic因素生产在小鼠脾淋巴细胞。还有待阐明所涉及到的因素,这将是我们进一步研究的问题。重要的是莲花施加这种angiostimulatory效应也在大幅降低比生产商推荐的剂量,因为更高的推荐剂量显著抑制粒细胞呼吸突然用化学发光。它应该预期莲花28展示包含许多化合物抗氧化effects-gallic酸,丁香酚,鞣花单宁,生物黄酮素:槲皮素,毛地黄黄酮和芹黄素,其他29日]。
5。结论
莲花28的能力来增加血管生成活性淋巴细胞可以部分解释其有利影响再生/修复过程,但对于这个目的应该使用这种疗法剂量明显低于这些推荐的生产商,为避免粒细胞功能的恶化。
利益冲突
作者证明没有利益冲突与任何金融组织关于讨论的材料。