白细胞介素-22和白细胞介素-23在口腔和皮肤扁平苔藓病变中免疫表达的初步研究

摘要

白细胞介素 - （IL-）22是T-辅助（TH）22细胞的特征细胞因子，IL-23的产生需要IL-23。本研究的目的是检查IL-22和IL-23中的IL-22和IL-23中的口腔LP中的前链烷烃 - 嵌入的活组织检查标本（）和皮肤LP（)对正常对照组织。结果显示，LP中表达IL-22和IL-23的细胞百分比分别显著高于对照组（两者均为正常））.IL-22和IL-23表达相关性显著(）.此外，在口腔LP中表达IL-22和IL-23的细胞的百分比显着高于皮肤LP（）.综上所述，我们的研究结果表明，IL-22和IL-23在LP病变中的表达增加可能在LP的发病机制中发挥作用。此外，表达IL-22和IL-23的口腔LP高于皮肤LP，这可能与Th22细胞作为口腔黏膜宿主防御口腔微生物群和组织抗原的重要组成部分有关。这可能与该疾病的两种变体的临床行为的差异有关。

1.介绍

扁平苔藓（LP）是一种相对常见的慢性炎症性皮肤粘膜病，可能是基于免疫的病因，涉及口腔和生殖器粘膜表面、皮肤、指甲和头皮。LP的特征是T细胞介导的针对上皮细胞的免疫反应，导致上皮细胞损伤和T淋巴细胞的上皮下带状浸润。这种疾病的发病机制尚不清楚[1.–3.]. 虽然口腔和皮肤LP具有相似的组织学特征，但它们的区别在于临床行为的异质性。口腔LP遵循一个慢性和顽固性的过程，可能持续很长一段时间，病情恶化和静止交替，那些萎缩、糜烂或大疱区域通常是疼痛和敏感的，而皮肤LP往往是自我限制的，无论治疗如何[4.–6.]. 免疫相关分子的局部差异可能有助于解释观察到的口腔粘膜和皮肤病变临床行为的变化，而在以前的研究中，迄今为止关于这些分子的数据有限[7.–10］．

白细胞介素（IL-22）是辅助性T细胞（Th）22的标志性细胞因子，被认为是新发现的CD4+Th亚群[11］．IL-22最近参与了自身免疫和炎症疾病的发病机制，如银屑病、红斑狼疮和类风湿性关节炎[12］．此外，Th22细胞是对粘膜宿主防御的重要贡献者，IL-22是宿主抵抗屏障网站上的细菌感染的核心[13]. 最近的研究表明，IL-23是产生IL-22所必需的，并且IL-23也被认为是炎症和自身免疫性疾病发病机制中的关键细胞因子[14,15］．此外，IL-23缺乏的小鼠无法抵抗肠道或肺部细菌病原体的感染[16］．IL-22是IL-23的下游效应细胞因子[17］．IL-22和IL-23是否与LP患者组织样本中观察到的局部免疫反应有关，目前尚不清楚。

因此，我们假设在口腔和皮肤LP病变中的IL-22和IL-23表达将会失去统计和不同的，反映其免疫病原体的潜在差异，并且IL-23 / IL-22 + TH22细胞也可能在开发中发挥作用和维护LP。在这项研究中，我们研究了IL-22和IL-23中的IL-22和IL-23的免疫表达，从80例LP（口服LP）的80例中的IL-固定的石蜡包埋（FFPE）活组织检查标本。；皮肤的资讯,），将结果与正常对照组织的结果进行比较（口腔粘膜，; 皮肤，)，并评估这两种蛋白是否与两种疾病变体的免疫病理行为差异显著相关。

2.材料和方法

2.1。受试者和组织标本

目前的研究中使用了三项试验案例控制研究。（i）第一个设置包括42例口服LP和10名性别和年龄匹配的健康个体，其被视为矫正手术作为对照。（ii）第二种设置包括38名皮肤病患者和10例性别和年龄匹配的健康个体，接受整形手术作为对照。（iii）第三种设置包括这42例口服LP患者与38例性别和年龄匹配的皮肤患者。研究受试者的特征在表中呈现1.. 5例FFPE组织标本 μ.M厚切片，常规苏木精、伊红染色进行组织病理学检查。

入选的口腔及皮肤LP患者均经临床诊断和组织病理学证实，所有病变均符合文献推荐的炎症活动程度相似[7.,18,19]. 根据前面描述的纳入和排除标准招募患者[8.］．排除糖尿病、高血压、感染性和过敏性疾病或其他自身免疫性疾病，如银屑病、类风湿性关节炎和红斑狼疮。此外，这些患者没有接受LP治疗，健康个体没有已知影响其免疫功能的疾病。本研究获得了我们当地伦理委员会(编号201202)的批准，并获得了所有受试者的知情同意。

2.2. 免疫组化分析

组织切片（5 μ.这些样品的FFPE块安装在带正电的载玻片上。免疫组化染色采用徕卡自动染色仪（徕卡Microsystems，Wetzlar，德国）和制造商的方案进行。山羊IL-22抗体（稀释15 μ.g / ml;目录号码AF782;R＆D Systems Inc.）用于检测IL-22表达，小鼠IL-23P19抗体（稀释8 μ.g / ml;目录号HLT2736;BioLegend Inc.）用于检测IL-23表达。我们分别对IL-22和IL-23的阴性和阳性对照进行免疫组化。在阴性对照中，通过相同同种型的非免疫IgG取代初生抗体以确保特异性。Sjögren综合征患者发炎的唾液腺，具有已知的IL-22免疫阳性[17]及IL-23 [20在每批分析的切片中，将之前报道的蛋白作为阳性对照。

在LP的上皮和耻骨上分别进行IL-22和IL-23表达。认为细胞细胞质和/或膜免疫反应性表示阳性表达。根据Santoro等人描述的染色强度的标准进行免疫反应的定量评估。[9,10]. 简而言之，DP 70在免疫染色切片上随机选择5幅放大400倍的高功率场数字图像 CCD摄像机（奥林巴斯，东京，日本）。然后，在本研究中，使用Image Pro Plus软件（美国加利福尼亚州媒体控制论6.0版）对阳性细胞进行计数。

２.３.统计分析

统计分析采用非配对学生量表进行-检测上皮和上皮下隔室中IL-22和IL-23阳性表达的定量变量。Spearman相关系数用于确定所有病例中IL-22和IL-23表达之间的相关性。双面的计算值，以及统计显着性接受<0.05的值。

3.结果

3.1. LP病变和正常对照中IL-22和IL-23的表达

图中显示了LP和正常对照组上皮细胞和上皮下淋巴细胞浸润标本中IL-22和IL-23的代表性阳性免疫表达1.和2.. 样本中IL-22和IL-23的定量表达水平如表所示2..

在正常对照中，表达这些分子的细胞很少或没有;少数阳性细胞位于上皮和上皮下层。在LP的上皮和上皮下区隔中，一般LP中表达IL-22的细胞百分比()明显高于正常对照组(),(分别）.在LP的上皮和上皮下区隔中，一般LP中表达IL-23的细胞百分比()也明显高于正常对照组(),(分别). 此外，IL-22和IL-23在上皮细胞中的表达呈正相关(；相关系数，0.251)和上皮下层(; 相关系数（0.370）分别显著。

另外，在口腔LP ()，IL-22在上皮细胞中的表达()和上皮下(与正常口腔粘膜相比，层显着高得多（）.同时，IL-23在上皮内的表达（)和上皮下()与正常口腔粘膜相比，粘膜层也显著增高(）.至于皮肤LP（)，IL-22在上皮细胞中的表达()和上皮下(与正常口腔粘膜相比，层显着高得多（）.同时，IL-23在上皮内的表达（)和上皮下()与正常口腔粘膜相比，粘膜层也显著增高(）.

３．２．IL-22和IL-23在口腔和皮肤LP病变中的表达

为了研究免疫分子在口腔和皮肤LP中的表达是否不同，我们比较了IL-22和IL-23在上皮和上皮下区隔中的表达。虽然IL-22在上皮层表达不明显(），其在口腔LP的耻骨层中的表达明显高（2.6倍），而不是皮肤LP（). 同时，IL-23在口腔LP上皮层的表达显著高于皮肤LP（3.6倍）()口腔LP上皮下层的表达明显高于皮肤LP（2.6倍）(）.

4。讨论

Th22细胞作为一种新发现的CD4+ T细胞的独特子集的识别，扩展了适应性免疫中的Th1/Th2范式，并在自身免疫和炎症疾病的发展中发挥作用。IL-22是Th22细胞的标志性细胞因子，IL-23是产生IL-22所必需的[11–14］．LP的特征是T细胞介导的针对上皮细胞的免疫反应，导致上皮细胞损伤和T淋巴细胞的上皮下浸润。据我们所知，目前只有Wang等研究口腔LP患者血清IL-23的英文文献。[21]. 他们报告，与健康对照组相比，口腔LP伴发慢性牙周炎患者血清IL-23的表达水平通过ELISA增加[21]. 迄今为止，几乎没有任何关于IL-22和IL-23的报道可能与LP患者组织样本中观察到的局部免疫反应有关。

在目前的研究中，我们提供了新的信息：（i）与正常对照组相比，口腔和皮肤LP病变中的IL-22表达水平增加(ii）与正常对照组相比，口腔和皮肤LP病变中的IL-23表达水平升高(iii）发现LP病变浸润中IL-22和IL-23表达之间存在显著相关性。这些结果表明，这两种主要的免疫分子可能在LP的发病机制中发挥作用，增强了我们对LP炎症反应的理解。

在这项研究中，我们进一步关注口腔和皮肤LP临床行为的差异。口腔粘膜和皮肤的大多数炎症疾病是由于T细胞介导的免疫应答。在这种情况下，介质在这些组织中反应的机制的比较研究应在这种情况下进行。LP影响口腔粘膜和皮肤在不同器官中表现出不同的临床外观，这可能是因为它们的结构和功能的变化。口腔粘膜和皮肤不同于角质化模式，对外部压力的抵抗力，湿润与干燥环境。此外，与皮肤相比，口腔粘膜暴露于大量抗原，无论是食物，细菌，病毒或真菌。该抗原载荷可能干扰其免疫活性细胞。

为了进一步探索免疫活性分子是否可以解释临床行为的异质性，我们评估了IL-22和IL-23在口腔和皮肤LP中的表达。值得注意的是，我们发现了另一个新的信息，即IL-22和IL-23在口腔LP中的表达水平明显高于皮肤LP。这表明，与皮肤相比，口腔LP中IL-23+/IL-22+ Th22细胞明显增加。Van Belle等人[13]最近建立的Th22细胞作为粘膜抗菌宿主防御的重要组成部分。IL-22在屏障部位对宿主预防细菌感染至关重要[16]而IL-22的产生严格依赖于IL-23[14]. 如上所述，口腔LP中IL-22和IL-23水平的升高可能是由于口腔微生物群和来源不确定的组织抗原的作用，它们启动和维持炎症反应。

综上所述，这些数据为IL-23/IL-22通路在两种疾病变异的临床行为中的差异提供了可能的解释，并支持了两种OLP变异可能涉及不同免疫致病机制的假设。此外，应该注意的是，这些结果不受治疗的影响，因为没有患者在活检前接受已知的影响免疫系统的治疗(如类固醇)。其他与IL-23/Th22细胞相关的慢性自身免疫性疾病[22,23]， IL-23/IL-22通路参与LP发病机制，可作为选择性治疗抑制靶点。

LP以T细胞介导的免疫应答为特征，IL-22和IL-23都是这些应答的重要介导细胞因子。IL-22是IL-23的下游效应细胞因子[17］．IL-23/IL-22在LP病变发病机制中的作用尚不清楚。基于目前的研究结果，我们简单假设IL-22可以以il -23依赖的方式在Th22细胞中表达。由新发现的CD4+ T辅助细胞亚群Th22亚群分泌的IL-22被发现通过与上皮细胞中的IL-22受体结合介导T淋巴细胞浸润和上皮细胞损伤。此外，IL-22介导了宿主对附着和消除细菌病原体的早期防御[16]. IL-22也可能参与防御口腔LP中的口腔微生物群和组织抗原。

我们意识到我们研究的局限性，因为只有免疫组织化学用于测量IL-22和IL-23的表达，部分原因是只有存档石蜡包埋活检临床标本可用。虽然口腔LP很常见，但皮肤LP并不常见。收集新的活检组织和患者外周血单个核细胞，对IL-22和IL-23进行qPCR、ELISA和FACS检测，并在进一步研究中探讨LP中IL-23/IL-22通路的免疫病理机制和治疗靶点。

综上所述，我们的研究结果表明，IL-22和IL-23在包括口腔和皮肤变异体在内的LP病变中的表达增加及其表达模式呈正相关。此外，表达IL-22和IL-23的口腔LP高于皮肤LP，这可能与Th22细胞作为口腔黏膜宿主防御口腔微生物群和组织抗原的重要组成部分有关。这可能与该疾病的两种变体的临床行为的差异有关。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

陈晨和金丘锋同样为这项工作贡献。

致谢

国家自然科学基金项目(no . 81200786, no . 81302358);上海市科委项目(no . 13401905700);上海市自然科学基金项目(no . 12ZR1417000, no . 13ZR1436100)。

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