文摘

背景。调节性T (Treg)细胞在动脉粥样硬化倾向发挥保护作用模型和相关的发病急性冠脉综合征(ACS,包括non-ST-elevation ACS (NSTEACS)和st段抬高急性心肌梗死(STEAMI))。CD4 +圈+ Treg细胞亚群的小说是一个子集已经发现改善动脉粥样硬化 老鼠,这些细胞也存在于人类。本研究旨在探讨CD4 +圈+ Treg细胞是否参与ACS的发生。方法。的频率CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞使用流仪分析发现,血浆il - 10和TGF -β1水平测量使用ELISA 29稳定心绞痛(SA)患者,30 NSTEACS患者27 STEAMI患者和对照组(30例)。结果。结果显示明显降低频率的CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞il - 10的水平和TGF -β1在ACS患者与SA和对照组相比。结论。减少频率的CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞可能在ACS发病中发挥作用。

1。介绍

自适应T-cell-driven immunoinflammatory响应参与动脉粥样硬化的发展和斑块不稳定导致急性冠脉综合征的发病(ACS,包括non-ST-elevation ACS (NSTEACS)和st段抬高急性心肌梗死(STEAMI)) (1- - - - - -3]。越来越多的证据表明,CD4 +效应T细胞(苔麸)可能会加速动脉粥样硬化的发展(4- - - - - -6]。相比之下,CD4 +调节性T (Treg)细胞在动脉粥样硬化(发挥保护作用7- - - - - -10]。实验性动脉粥样硬化的最佳描述CD4 + Treg细胞是天然CD4 + CD25 + Treg细胞已被证明是胸腺内不断产生。这些细胞在动脉粥样硬化的发展发挥保护作用通过细胞间接触,在一定程度上,抗炎细胞因子的分泌白介素- 10 (IL)和转化生长因子(TGF -β),他们的抑制功能依赖于转录因子forkhead / winged-helix转录因子盒P3(具体)。其他的CD4 + Treg细胞亚群,如辅助细胞类型3 (Th3)和1型Treg (Tr1)细胞,也显示在载脂蛋白E-knockout减弱动脉粥样硬化小鼠(8- - - - - -10]。然而,临床数据表明Treg细胞的活性是ACS患者表达下调(11- - - - - -14]。尽管Treg细胞的频率增加了先进的斑块与斑块在人类早期相比,没有先进的斑块之间的区别和病变早期,人类斑块和Treg细胞的频率显著低于在正常或炎性皮肤损伤,建议更改参加阴燃慢性炎症在动脉粥样硬化过程和ACS发病症状(15]。

CD4 +圈+ Treg细胞亚群的小说是一个子集表达latency-associated肽(圈)和aminoterminal域TGF -β前体多肽和监管独立于具体的属性(16- - - - - -21]。大量的研究表明,CD4 +圈+ Treg细胞抑制画眉草细胞反应和保护小鼠结肠炎,多发性硬化,系统性红斑狼疮,通过分泌TGF -和糖尿病β和/或il - 10 (17- - - - - -21]。最近,佐佐木等人,我们组发现CD4 +圈+ Treg细胞粘膜抗原引起的有效地抑制画眉草细胞的免疫反应和改善动脉粥样硬化 老鼠(22- - - - - -24]。然而,是否CD4 +圈+ Treg细胞的活动在ACS监管尚未研究。在这里,我们调查的变化频率的CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞在ACS患者。

2。方法

2.1。病人

总数116名患者参加本研究,其中包括四组:(1)稳定心绞痛(SA)(17男12女,平均年龄 )和入选标准是典型的劳累型胸部不适,与倾斜或水平st段抑郁> 1毫米在一次演习测试;(2)NSTEACS组(21男9女,平均年龄 )和入选标准心电图(ECG) st段抑郁或突出让反演和/或积极的生物标志物坏死(肌钙蛋白I、肌酸激酶MB) st段抬高的缺失和适当的临床(胸部不适或心绞痛的当量);(3)STEAMI组(23男4女,平均年龄 )和入选标准是心肌梗塞,证实了显著增加肌钙蛋白I和肌酸激酶MB水平和持续的心电图ST段;(4)对照组,由30名学生与正常冠状动脉(17男性和13名女性,平均年龄 )。

从每个参与者书面知情同意了。这项研究是伦理委员会批准广西壮族自治区人民医院,中国南宁。患者心脏瓣膜病、血栓栓塞、胶原病、播散性血管内凝血,先进的肝脏疾病,肾功能衰竭,恶性疾病、败血症或类固醇治疗被排除在研究之外。

2.2。血液样本

NSTEACS和STEAMI组织,血液样本尽快得到病人来了。从其他病人获得血液样本在卧位21-gauge用干净的针静脉穿刺的肘前的静脉在第二天早上空腹状态的承认。样本收集到肝素钠真空采血管(正)。外周血单核细胞(PBMCs)是由聚蔗糖密度梯度流仪结果。离心后获得的血浆储存在−80°C,直到进一步的使用。

2.3。流仪结果

这些细胞被染色与表面标记anti-LAP-APC (RD系统),其次是anti-CD4-FITC (eBioscience)和anti-CD25-PE (eBioscience)。同形像控制给出了使正确的补偿和确认抗体特异性。染色细胞分析流仪分析使用FACScan血细胞计数器配备CellQuest软件(BD生物科学Pharmingen)。

2.4。TGF - ELISA检测的水平β1和il - 10

TGF -的水平β1和il - 10测定,酶联免疫吸附试验(ELISA)后,制造商的指令(WestTang生物科技、上海、中国)。最小检测浓度是TGF - 15 pg / mLβ1和il - 10。Intraassay和inter-assay系数变化的ELISA分别为< 5%,< 10%,。所有的样品都在重复测量。

2.5。Gensini积分

患者的冠状动脉狭窄的严重程度估计Gensini冠状得分后冠状动脉造影。Gensini积分是计算分配每个冠状动脉狭窄的严重程度评分根据腔的狭窄的程度及其地理意义。减少腔直径和roentgenographic同心病灶的出现和古怪的斑块进行评估(减少25%,50%,75%,90%,和99%,完全阻塞被分配Gensini分数1,2,4,8日,16日,32岁的职责)。比分是然后乘以一个系数,病变的位置的重要性在冠状动脉树如下:左主干冠状动脉5;2.5近端冠状动脉左前降枝(小伙子)或左动脉(LCX);mid-LAD 1.5;和远端1的小伙子,右冠状动脉或middistal LCX。

3所示。统计分析

所有的数据给出了平均数±标准差。仅当比较两组学生的 以及使用。比较涉及3个或更多的团体,单向方差分析后跟Newman-Keuls事后测试使用。斯皮尔曼的相关性是用来计算两个连续变量之间的相关性。在所有测试的值 被认为是具有统计学意义。

4所示。结果

没有显著差异在年龄、性别、高血压史、糖尿病,或烟草使用在这四组。左心室射血分数(LVEF) STEAMI组低于对照组,而c反应蛋白(CRP)的水平,Gensini积分和左心室舒张末期维度(LVEDD) STEAMI组明显高于对照组。其他参数包括脂质和脂蛋白分数,空腹血糖,并送往医院之前的药物表中列出1。

表1
患者的临床特征。

如表所示2和数字1和2的频率,CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞和CD4 + CD25 +圈−STEAMI患者T细胞明显减少,NSTEACS比SA)和对照组,但没有发现明显的差异在SA组和对照组之间。总共有86 CAD患者分为单、双、和triple-vessel疾病组根据血管造影结果和没有频率的差异CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞,T细胞CD4 + CD25 +圈−3组(见表2)。此外,116名患者被分为高血压组(67例)和血压正常组(49例)或糖尿病组(20例)和nondiabetes组(96例)。结果表明,频率没有显著差异的CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞、CD4 + CD25 +圈−T细胞在高血压组和糖尿病组和之间的血压正常组或nondiabetes组(见表3)。此外,没有明显差异的频率CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞,T细胞和CD4 + CD25 +圈−基于性别、吸烟、和药物治疗(见表3和4)。

表2
循环的频率Treg细胞在冠状动脉疾病。
表3
循环的频率Treg细胞在传统危险因素。
表4
根据药物循环Treg细胞的频率。
(一)
(一)
(b)
(b)
图1
频率的CD4 +圈+及CD4 + CD25 + T细胞在每组。(一)CD4 + T细胞被流式细胞术封闭。(b)表示表面染色的CD4 +圈+及CD4 + CD25 + T细胞从每组。
(一)
(一)
(b)
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(c)
(c)
(d)
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图2
循环CD4 +圈+及CD4 + CD25 + T细胞在ACS下降。(一)CD4 +圈+ T细胞的频率明显降低患者STEAMI和NSTEACS比控制和SA组。(b)的频率CD4 + CD25−圈+ T细胞明显降低患者STEAMI和NSTEACS比控制和SA组。(c) CD4 + CD25 + T细胞的频率明显降低患者STEAMI和NSTEACS比控制和SA组。(d)的频率CD4 + CD25 +圈−STEAMI患者T细胞明显降低和NSTEACS比控制和SA组。 与控制和 与SA组。

如图3,等离子TGF -β1和il - 10水平STEAMI患者( pg / mL和 pg / mL, resp。)和NSTEACS ( pg / mL和 pg / mL, resp)与对照组相比均有显著降低( pg / mL和 pg / mL, resp)和SA组( pg / mL和 pg / mL,职责)。此外,等离子体TGF -β1和il - 10水平显示正相关的频率CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞、CD4 + CD25 +圈−T细胞(数字4和5)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图3
等离子体TGF -β1和il - 10含量分析。(一)等离子TGF -β患者1水平STEAMI、NSTEACS和SA与对照组相比均有显著下降,和等离子体TGF -β1水平STEAMI患者和NSTEACS与SA组相比均有显著下降。(b)患者血浆il - 10水平STEAMI, NSTEACS, SA显著减少控制和SA组相比。 与控制, 与SA组和 与SA组。
(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图4
等离子体TGF -β1水平显示正相关的频率CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞、CD4 + CD25 +圈−T细胞。
(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图5
il - 10水平显示正相关的频率CD4 +圈+ T细胞CD4 + CD25−圈+ T细胞CD4 + CD25 + T细胞和CD4 + CD25 +圈−T细胞。

我们评估的频率是否CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞与年龄有关,脂质和脂蛋白分数,空腹血糖、CRP, Gensini积分用来量化冠状动脉狭窄的严重程度患者的冠状动脉疾病(CAD)。如表所示5,CD4 +的频率圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞呈正相关,与总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(低密度脂蛋白),和c反应蛋白,也没有相关性随着年龄的增长,总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl - c),空腹血糖,Gensini得分。因为LVEF、LVEDD和优雅的分数在ACS患者预后相关,我们分析了ACS患者亚群与这些参数之间的相关性。如表所示5的频率,CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞与LVEF呈正相关,但与ACS患者LVEDD负相关。结果表明,CD4 +的频率之间没有相关性圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞和优雅在ACS患者。

表5
斯皮尔曼相关分析。

5。讨论

Oida所等人首次发现的新监管CD4 + T细胞表型CD25−圈+,他们发现CD4 +圈+ CD25−T细胞CD4 + CD45RB能有效地改善高全身的TGF -结肠炎β端依赖机制(17]。除了生产TGF -β,CD4 +圈+ Treg细胞通过细胞间接触和发挥他们的抑制功能的分泌il - 10 (16- - - - - -21]。CD4 +圈+ Treg细胞诱导粘膜抗原,如anti-CD3抗体,明显抑制结肠炎,多发性硬化,系统性红斑狼疮、糖尿病(17- - - - - -21]。粘膜抗原诱导CD4 +圈+及CD4 + FoxP3 + Treg细胞,和大多数的CD4 + + Treg细胞不表达FoxP3,相反,大多数的CD4 + FoxP3 + Treg细胞不表达圈(21]。此外,转移的排序CD4 +圈+ Treg细胞被证实抑制画眉草细胞体内炎症反应和减弱哮喘肺。这些结果表明,CD4 +圈+ Treg细胞可能主要Treg细胞的诱导子集,和他们的抑制功能独立于具体,而CD4 + CD25 + Treg细胞作为自然Treg细胞和FoxP3的抑制功能是至关重要的。最近,CD4 +圈+ Treg细胞在动脉粥样硬化中的作用已被广泛研究[22- - - - - -24]。佐佐木等。22)首先发现口腔anti-CD3抗体政府可以引起CD4 + + Treg细胞,因此这些细胞抑制画眉草细胞反应和减弱动脉粥样硬化 老鼠。我们还发现CD4 +圈+ Treg细胞引起鼻ox-LDL产生的TGF -β在动脉粥样硬化并可能发挥保护作用。因为我们没有CD4 +圈+ Treg细胞和CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞转移 小鼠,分别和CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞也引起鼻ox-LDL,很难确定哪种类型的Treg细胞在这一过程中是最重要的。在我们看来,CD4 +圈+及CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞起着重要的作用,和其他细胞如巨噬细胞也参与这一过程。最近,黄组的另一项研究显示,口服FTY720 CD4 +圈+ Treg细胞诱导和抑制早期病变 老鼠(24]。

值得注意的是,CD4 +圈+ Treg细胞被发现在人类和这些细胞不表达FoxP3,但他们发挥抑制作用(16]。因为Th3细胞Treg细胞的一个子集,调解他们的抑制活动通过释放TGF -β(25,26),而CD4 + CD25 + Treg细胞中表达下调ACS (11- - - - - -14),我们想调查是否CD4 +圈+ Treg细胞活性改变在ACS。

类似于其他的研究,目前的研究显示,CD4 + CD25 + Treg细胞的频率明显降低ACS患者。此外,我们第一次报道,CD4 +圈+ Treg细胞的频率在ACS患者表达下调与SA和对照组相比,表明下降的频率CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞可能与斑块不稳定和ACS的发生。此外,双阳性细胞的频率(圈/ CD25 +)是非常小的,甚至在某些ACS患者察觉。不是有争议的CAD、高血压和糖尿病是慢性炎症性疾病。Treg细胞模型中发挥保护作用的高血压和糖尿病,和CD4 + CD25 + Treg细胞的功能受到了损害在高血压和糖尿病27- - - - - -30.]。因此,我们调查是否改变可能是本研究中观察到。然而,没有差异之间的血压正常组和高血压组和糖尿病组和nondiabetes组,表明ACS的炎症反应更强比高血压和糖尿病。

越来越多的证据表明,Treg细胞的活动,包括数量和功能抑制的属性,可能与脂蛋白有关分数。的血清水平ox-LDL Treg细胞的频率呈负相关,和发现ox-LDL显著减少的数量和功能抑制属性CD4 + CD25 + Treg细胞体外(11,31日]。Ammirati的另一项研究发现,Treg细胞的频率并不是与TC, TG,和低密度,但它与高密度脂蛋白胆固醇显著负相关(13]。证据从一个队列研究没有发现脂蛋白之间的相关性分数(包括TG、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白胆固醇和LDL / HDL比率)和Treg细胞的频率32]。在目前的研究中,我们没有发现Treg细胞之间的显著相关性,在冠状动脉疾病患者高密度脂蛋白胆固醇。相比之下,CD4 +圈之间的显著相关性+及CD4 + CD25 + Treg细胞和TC和低密度是本研究中观察到。然而,造成这种差距的原因尚不清楚。受试者中可能至少部分的差异导致这种差异。例如,CAD患者的相关性评估在目前的研究中,而正常的受试者使用的队列研究。

没有差异的频率CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞中单、双、或triple-vessel疾病,和之间不存在相关性的频率CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞Gensini积分,这是一个冠状动脉狭窄的严重程度的标志。这些结果符合Ammirati的研究(13),CD4 + CD25的频率高CD127低Treg细胞与动脉粥样硬化的程度在颈动脉和冠状动脉。因为降低LVEF, LVEDD与增加心肌收缩抑郁和心肌重塑和低LVEF、LVEDD更高,恩典和更高风险评分结果在ACS患者预后差,CD4 +之间的关系圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞和LVEF, LVEDD,恩典风险评分进行评估。我们发现的频率CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞呈正相关,LVEF、LVEDD呈负相关,而不是与ACS病人的恩典风险评分。最近,基线亚群的数量在700年在心血管组群随机选择科目的马尔默饮食和癌症研究使用流式细胞仪测定,和基线的关系Treg计数和分析了心血管疾病的第一个事件经过十年跟踪(32]。结果表明,低水平的CD4 + FoxP3 + Treg细胞而不是CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞与心肌违规的风险增加有关,和CD4 + FoxP3 + Treg细胞和CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg细胞与中风有关。然而,前瞻性群组研究Treg细胞的频率和ACS患者的预后仍然缺乏,尽管许多临床调查发现Treg细胞的频率降低ACS患者。

在目前的研究有一定的局限性。首先,因为对CD4 + FoxP3不是关键圈+ Treg细胞,我们没有测量FoxP3在这项研究。第二,CD4 +圈+ Treg细胞的抑制作用没有审查的一小部分人口是参加本研究。最后,尽管我们第一次发现CD4 +圈+ Treg细胞的频率在ACS表达下调,我们未能跟进这些病人,因此低水平的这些细胞是否会被关联到一个更糟糕的ACS预后仍不确定。

总之,CD4 +圈+ Treg细胞在ACS患者表达下调,表明CD4 +圈+ Treg细胞的潜在作用在ACS的发生。由于低水平的CD4 + FoxP3 + Treg细胞被发现与心肌梗死的风险增加科目没有冠状动脉疾病的前瞻性队列研究(32)的确切含义,减少CD4 +圈+及CD4 + CD25 + Treg细胞在ACS应该进一步调查。

作者的贡献

陆Ying-zhong林、陆Shan-he Zheng-de贡献同样这项工作。

承认

这项工作是由中国国家自然科学基金(没有。81160045)。