Proteinase-Activated Receptor-1和免疫调节效应PAR1-Activating肽的前列腺炎的小鼠模型

文摘

背景。无菌前列腺炎没有确定病因。我们假设proteinase-activated receptor-1 (PAR1)在前列腺炎可以发挥的作用。因此,我们调查的影响PAR1刺激新的小鼠模型的上下文中无菌前列腺炎。方法。使用半抗原(ethanol-dinitrobenzene磺酸- (dnb))诱导小鼠与野生型和PAR1-null前列腺炎模型,我们研究了(1)的位置在鼠标PAR1前列腺癌和(2)PAR1-activating肽(TFLLR-NH的影响₂:PAR1-TF) ethanol-DNBS-induced炎症。结果。Ethanol-DNBS-induced炎症是最大2天。在组织,PAR1表示主要沿顶端的前列腺腺泡上皮。尽管PAR1-TF本身不引起炎症,其共同ethanol-DNBS减少急性前列腺炎的所有指标。此外,PAR1-TF政府前列腺白细胞介素- 10”(il - 10)的产量增加了一倍而ethanol-DNBS单独治疗。这种增强il - 10不是PAR1-null老鼠和观察到的并不是造成的相反顺序receptor-inactive肽,RLLFT-NH₂。令人惊讶的是,PAR1-TF,也减少ethanol-DNBS-induced PAR1-null小鼠炎症。结论。PAR1表达在小鼠前列腺及其激活PAR1-TF抒发ethanol-DNBS-induced前列腺炎期间免疫调节作用。然而,PAR1-TF也减少通过non-PAR1 ethanol-DNBS-induced炎症机制通过激活一个尚未未知的受体。

1。介绍

前列腺炎、细菌性和非细菌性的原因,带来的影响约2 - 14%的男性(1,2]。无菌前列腺炎,占90 - 95%的前列腺炎的情况下,提出了多样性的炎性症状包括泌尿和骨盆疼痛,尿道梗阻,和射精功能障碍(3]。不存在一个统一有效的治疗无菌前列腺炎,发病机理和病理生理学的条件还不理解。了解前列腺炎的机制,我们的实验室工作两细菌性前列腺炎,非细菌性前列腺炎大鼠模型4- - - - - -6]。传染性前列腺炎模型表明,炎症是由于毒性因子大肠杆菌和变形杆菌(7,8]。虽然机制铜绿假单胞菌全身的前列腺炎涉及功能拉斯维加斯和生殖卫生图书馆群体感应系统完整的感染和炎症的发生9),导致非传染性的前列腺炎的机制基本上是未知的。探索这些机制,我们已经开发出一种鼠hapten-induced前列腺炎模型,基于我们建立的大鼠模型(5]分析无菌前列腺炎的老鼠。这个新开发的小鼠模型,源于一种啮齿动物hapten-induced结肠炎模型(10),允许使用转基因老鼠评估无菌前列腺炎的病因。

在我们寻找潜在的非感染性前列腺炎的原因,我们的注意力被吸引到proteinase-activated受体的存在(PARs)前列腺癌(11,12),也称生产PAR-activating kallikrein-related肽酶属于前列腺特异性抗原或PSA的家庭(13]。此外,帕尔斯是调节在病理条件下,如前列腺癌(14]。

G-protein-coupled受体“PAR”家庭包括四个受体(PARs 1 - 4)。部分是由一个不寻常的丝氨酸蛋白酶机制,包括cleavage-mediated暴露一个蒙面伴受体序列(15]。这显示序列作为“拴在配体”来刺激受体信号诱导许多下游的影响。特别是PAR1裂解的trypsin-fold丝氨酸蛋白酶,包括其中,凝血酶、血纤维蛋白溶酶、组织蛋白酶G (15- - - - - -17]。此外,合成PAR-selective激活肽刺激帕尔斯被广泛使用。这些肽药理研究中是有用的,因为他们直接模拟受配体序列和旁路蛋白水解完全解理(15,18]。因此,帕尔斯可以激活合成肽评估影响enzyme-mediated PAR刺激可能在一个组织。这个策略可以避免蛋白酶本身可能有复杂的影响,如不属预定目标的衬底乳沟。我们的研究特别使用了PAR1-selective激活肽,TFLLR-NH₂的上下文中(PAR1-TF),小鼠前列腺炎。

帕尔斯扮演着一个重要角色在各种组织包括胃肠道(GI)束和中枢神经系统19,20.]。特别是,PARs 1和2可以参与炎症和抗炎过程(19]。酶调节PAR1在这样的范围从凝固组织蛋白酶,如凝血酶和因子VIIa / Xa [21,22),kallikrein-related肽酶家族(KLKs) [23]。前列腺被公认为蛋白酶的重要来源和KLKs,最广泛的公认KLK家庭成员,KLK3 /前列腺特异性抗原(PSA),作为前列腺癌的预后指标(24,25]。Prostate-derived KLKs被认为促进炎症过程不仅裂开激肽原,prourokinase-plasminogen活化剂(prouPA)和蛋白质的细胞外基质,还通过激活帕尔斯(20.,23]。由于帕尔斯是前列腺癌中表达的物种(包括人类14,25),因为前列腺可以产生丝氨酸蛋白酶,我们假设PAR激活可能在无菌前列腺炎中发挥作用。

为了验证这个假设,我们开发了一个新的hapten-induced小鼠模型的前列腺炎的影响评估intraprostatic PAR1激活在前列腺炎症。这个模型允许我们使用野生型和PAR1-null老鼠。为此,前列腺炎是引起使用ethanol-DNBS PAR-selective激活肽的存在与否,PAR1-TF,野生型或PAR1-null (PAR1^−−/老鼠)。我们的数据支持为PAR1免疫调节抗炎作用,包括抗炎细胞因子il - 10的海拔。此外,我们的工作揭示了一个意想不到的non-PAR1 TFLLR-NH目标₂通过受体,减少前列腺炎需要进一步调查。

2。材料和方法

2.1。化学物质、蛋白酶和肽

化学物质用于这项研究包括无水酒精(EtOH;商业醇)和二硝基苯磺酸(dnb;议员生物医学)。PAR-activating肽包括合成肽TFLLR-NH PAR1兴奋剂使用₂(PAR1-TF)及其反向receptor-inactive RLLFT-NH肽控制₂(RL)。通过固相肽合成肽都是合成的多肽合成卡尔加里大学的设施。成分和纯度的肽通过建立了高效液相色谱(HPLC)、质谱分析、氨基酸分析。

2.2。动物模型

雄性C57BL / 6小鼠体重大约21到28 g(4到8周大)从生活和环境科学获得动物卡尔加里大学的资源中心。PAR1-null C57BL / 6小鼠和野生型同行从内部获得繁殖集落卡尔加里大学医学院,从育种对最初提供的强生制药研发(26]。老鼠笼在聚砜鞋盒的笼子里与阿斯彭芯片层理和安置°C和%相对湿度,每天12小时的照明。动物们提供食物和水随意。小鼠随机分为组(7)与4%氟烷麻醉。虽然麻醉,老鼠经尿道的乳胶环氧乙烷消毒和润滑PE10聚乙烯喂食管(内径0.28毫米;外直径0.61毫米)附加到30.5计针。导管插入尿道1.5厘米从阴茎的底部。所有化合物都是管理的最大体积40μL虽然导管在地方举行。前列腺炎是引起使用10毫克/毫升的EtOH dnb溶解在50%和50% 0.01米pH值7.2无菌磷酸盐(PBS)。PAR肽被溶解在25毫米消息灵通的缓冲区在pH值7.4浓度4 - 5毫米,结合1:1 EtOH 50%和10毫克/毫升dnb。老鼠服用下列多肽40μL解决方案:5毫米(100 nmol)特遣部队或5毫米(100 nmol) RL。的时间直接解决方案后政府指定为0 h和老鼠牺牲颈椎错位每隔24小时,48 h和72 h后尿道导管。生命与环境科学动物保健委员会依照加拿大动物保健指导委员会批准这项研究。

2.3。宏观损伤

腹侧前列腺无菌从每个鼠标和视觉分配0 - 3分,根据前列腺炎的严重程度。两个独立观察员得分腹侧前列腺在随机顺序。前列腺是得分如下:年级0-normal外观;0.5级轻微堵塞;年级1-congestion;年级2-congestion明显水肿;与品位3-congestion,水肿和充血。

2.4。组织准备

宏观损伤分级和称重后,小鼠前列腺被拍到和组织处理。组织无菌分成三个相等的部分:一个在neutral-buffered 10%福尔马林固定的组织学分析,一个是存储在冰立即髓过氧化酶(MPO)化验,和最后一块冷冻和储存在−70°C细胞因子酶联免疫吸附试验(elisa)。小鼠前列腺重量被规范化整个身体重量和表示为一个百分比。

2.5。微观损伤

前列腺组织固定如上所述,嵌入在石蜡。五μ米得到了部分和苏木精和伊红染色根据标准协议())。前列腺炎的严重程度量化morphometrically是基于三个不同类别根据一个标准验证解剖病理学家。分数的0到3被分配到每个类别,然后加在一起的最后得分9。两个独立的观察员得了前列腺部分以随机的顺序。标准化得分类别如下:(i)上皮细胞剥离和脱落:年级0-normal架构;少1年级50%的腺泡上皮细胞显示表皮脱落;等级2 - 50%的腺泡上皮细胞显示表皮脱落;和大3年级超过50%的腺泡上皮细胞剥落;(2)上皮细胞坏死:年级0-normal架构;少1年级50%上皮细胞坏死; grade 2—50% epithelial cell necrosis; and grade 3—greater than 50% epithelial cell necrosis; (iii) inflammatory cell infiltrate: grade 0—normal architecture; grade 1—minor focal infiltrate; grade 2—severe focal and minor diffuse infiltrate; and grade 3—severe diffuse infiltrate. Slides were imaged on a Leica DMR microscope at 20x magnification and photomicrographs were taken using a Micropublisher 5.0 RTV digital camera (QImaging) and Volocity Acquisition v 4.4 imaging software (Improvision Inc.).

2.6。MPO化验

前列腺组织中均质hexadecyltrimethyl溴化铵(HTAB)缓冲区。匀浆被离心机在000×13 g 2.5分钟和上层清液混合O-dianisidine (Sigma-Aldrich)磷酸盐缓冲剂。解决方案在450 nm化验和活动记录每毫克蛋白(27]。

2.7。细胞因子elisa

组织检查包含2细胞因子的生产均质在PBSμL的蛋白酶抑制剂(Sigma-Aldrich)每毫升的匀浆。匀浆被离心机在1000 g×10分钟。浮在表面的化验了il - 10、il - 1β、il - 6、TNF -(eBiosciences)和KC / CXCL-1(研发系统)根据制造商的指示。意思是细胞因子浓度记录为pg细胞因子/毫克的蛋白质。

2.8。rt - pcr

Mouse-specific cDNA引物和随机hexameric cDNA引物合成和gel-purified卡尔加里大学的DNA服务。整个前列腺收获来自雄性C57BL / 6小鼠接受0.9% (w / v)盐水。前列腺组织均质在PBS和总RNA提取和孤立使用RNeasy工具包(试剂盒)根据制造商的指示。纯化RNA的浓度是通过测量一个决定_260年使用Nanodrop 2000技术(热科学)。RNA净化后,5μg的RNA转录和放大50°C 50分钟使用上标三世第一链合成系统(表达载体)和随机hexameric cDNA引物。一旦cDNA获得,2μL产品是结合底漆对旨在放大PAR1老鼠。引物如下:PAR1: 5′底漆,GCG GGC AGC CTT GGG ACA在;3′底漆,ATG亚美大陆煤层气有限公司GGA GGA GGC GGC GT;β肌动蛋白:5′底漆,CAC 20 CGA GCA CAG CTT CT;3′底漆,有条件现金援助CAG GGC ATC GGA ACC GC。TopTaq DNA聚合酶(试剂盒)是用于PCR扩增。35周期运行一个92°C变性步骤30秒,紧随其后的是54°C退火步骤30秒,最后1分钟72°C扩展一步最后72°C扩展步骤1分钟。PCR产物分离2.5% (w / v)琼脂糖凝胶电泳和可视化SYBR安全(表达载体)。

2.9。免疫组织化学

本研究调整和修改前所述免疫组织化学方法使用兔多克隆anti-PAR1抗血清(28,29日]。Formalin-fixed,石蜡包埋部分5μ米小鼠前列腺组织厚度(0.9%生理盐水处理)deparaffinized并使用乙醇浓度的减少水分。部分是在0.01米pH值6.0柠檬酸缓冲煮10分钟和内源性过氧化物酶活性被孵化部分0.3% H₂O₂(Sigma-Aldrich) 20分钟。阻止了非特异性结合preincubating部分10%正常山羊血清为1 / 0.5% Triton x - 100 h在室温下。检测PAR1免疫反应性,一夜之间,部分被孵化和一只兔子在室温下合成鼠标PAR1肽引起的多克隆抗体。这种肽跨越了凝血酶cleavage-activation网站(/ /),包括“拴在配体”(强调)(YATPNPR / /序列SFFLRNPSEDGGC:1/500),在PBS稀释10%正常山羊血清。Immunolabeling主要PAR1抗体检测使用一个次要的生物素化的山羊anti-rabbit抗体紧随其后avidin-biotin过氧化物酶复合物(向量实验室)在室温下1 h。过氧化物酶活性验证使用0.5毫克/毫升3,3′-diaminobenzidine四氯化(Sigma-Aldrich) 0.05米pH值7.6 Tris-HCl缓冲区包含0.03%的H₂O₂。部分被苏木精复染色实验室(向量)30分钟,脱水和安装。所有洗进行15分钟的pH值0.01米7.2 PBS。幻灯片在徕卡DMR显微镜成像在100 x放大和显微照片拍摄使用Micropublisher 5.0 RTV数码相机(打印大师)和Volocity收购v 4.4成像软件(Improvision Inc .)。

2.10。统计分析

组数据作为意味着±标准平均误差(SEM)。数据和统计检验是编译使用GraphPad棱镜v 5.00软件(GraphPad软件)。宏观和微观损伤Mann-Whitney分数进行了分析U测试或克鲁斯卡尔-沃利斯单向方差分析(方差分析)其次是邓恩的多重比较检验。MPO化验和细胞因子elisa分析学生t以及或单向方差分析其次是图基的多重比较检验。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。

3所示。结果

3.1。乙醇和dnb诱发无菌前列腺炎的老鼠

我们首先建立了一个hapten-based急性无菌前列腺炎小鼠模型基于我们以前公布的老鼠模型(5]。符合老鼠数据,管理ethanol-DNBS诱导著名的小鼠前列腺炎症反应在为期3天的时间段,在第二天(图最大1)。在那个时间点,ethanol-DNBS-treated鼠标显示前列腺炎症的特征包括宏观和微观损伤分数增加,体重增加前列腺,MPO活性升高(数字1(一),1 (b),1 (c),1 (d))。基于这些数据,一个为期两天的ethanol-DNBS时间进程用于无菌前列腺炎模型的剩余部分的研究。这些ethanol-DNBS-treated前列腺还显示显著升高il - 1β和KC炎性细胞因子的生产(数据2 (b)和2 (c))。组织学上,ethanol-DNBS-treated前列腺组织显示广泛的白细胞浸润,出血,前列腺腺泡和广泛破坏,上皮,上皮细胞坏死(图6 (b))。相反,盐水控件显示一个健康和损伤前列腺架构(图6(一))。

3.2。PAR1鼠标前列腺中表达

PAR1 PCR产品预期的大小(296个基点)发现在小鼠前列腺组织(图3)。PAR1 PCR产品是相同的一个验证了我们在小鼠结肠组织中。PAR1决心使用免疫组织化学的细胞定位。前列腺PAR1是局部突出整个顶腺泡上皮和腺泡腔以及整个基底腺泡上皮细胞和前列腺上皮细胞。有特定的染色细胞的质膜(图4(一):箭头)和弥漫性细胞内的反应。没有观察到使用多发地兔血清免疫反应性控制,和anti-PAR1抗血清并没有产生一个信号PAR1-null老鼠(图4 (b))。在其他组织如老鼠肝脏,PAR1免疫反应性也与我们的抗血清检测,先前报道(30.(数据未显示)。

3.3。TFLLR-NH PAR1-Activating肽₂(PAR1-TF)抗炎作用的上下文中Ethanol-DNBS-Mediated前列腺炎

如前所述,管理ethanol-DNBS小鼠前列腺炎症诱发明显,以宏观和微观损伤、前列腺体重增加,MPO活性和细胞因子的生产(数字1和2)。就其本身而言,PAR1-activating肽没有影响前列腺炎症的指标(数据未显示)。然而,当与ethanol-DNBS coadministered PAR1-TF明显减少随后的前列腺炎,相对于动物对待ethanol-DNBS孤单。这些PAR1-TF-treated前列腺显示显著减少微观损伤,重量、和MPO活性,相比控制前列腺治疗PAR1-inactive反向肽(ethanol-DNBS-PAR1-RL)(数据5 (b),5 (c),5 (d))。组织学检查前列腺组织对待ethanol-DNBS结合PAR1-TF显示白细胞很少招聘整个前列腺基质或腺泡,和前列腺上皮细胞损伤(图6 (c))。总的来说,部分小鼠接受ethanol-DNBS和PAR1-TF可比noninflamed部分盐水处理。相反,组织处理相反顺序,receptor-inactive PAR1-derived肽(PAR1-RL)连同ethanol-DNBS显示前列腺上皮和腺泡的破坏,仅接受ethanol-DNBS发炎的部分(数据6 (b)和6 (d))。

3.4。PAR1 TFLLR-NH₂(PAR1-TF)直接移植il - 10的上下文中生产Ethanol-DNBS-Induced前列腺炎

按照PAR1-TF如图的抗炎作用5,我们发现TFLLR-NH₂调节生产抗炎细胞因子,il - 10。ethanol-DNBS治疗导致前列腺il - 10小增产和盐水滴剂(图7(一))。这一增长略增广的除了PAR1-inactive反向肽ethanol-DNBS解决方案(EtOH + dnb + PAR1-RL:第三直方图设在,图7(一))。receptor-active肽的影响,PAR1-TF, il - 10生产管理以及ethanol-DNBS PAR1-null老鼠并没有不同的影响相反顺序receptor-inactive肽在野生型小鼠(第三和第四直方图设在,图7(一))。引人注目的是,在PAR1野生型小鼠,共同receptor-active PAR1-TF ethanol-DNBS-treated野生型前列腺导致显著增加il - 10的生产和所有其他治疗组(图7(一)第五个直方图,设在)。正如已经指出的那样,这标志着海拔由于PAR1-null PAR1-TF没有观察到的动物和没有被观察到在野生型小鼠接受ethanol-DNBS随着相反顺序PAR1-inactive肽,PAR1-RL(图7(一)、第三和第四直方图设在)。显著差异在血清il - 10的水平(相对于组织提取物)没有发现之间的不同的治疗组,表明PAR1-TF没有影响系统性il - 10水平(图7 (b))。

3.5。TFLLR-NH PAR1-Activating肽₂(PAR1-TF)的上下文中PAR1-Deficient小鼠抗炎Ethanol-DNBS-Induced前列腺炎

抗炎作用的观察receptor-selective PAR1-TF受体激动剂,抗炎作用的缺失的相反顺序PAR-inactive肽PAR1-RL, PAR1强烈指出药物抗炎作用。我们希望评估这一假定的抗炎作用PAR1进一步通过分析PAR1-null肽的小鼠的影响。intraprostatic ethanol-DNBS管理局PAR1-null小鼠诱导炎症反应与观察野生型小鼠的前列腺。在PAR1-null老鼠,具体地说,在野生动物,ethanol-DNBS显著增加宏观损伤分数,前列腺体重增加,MPO活性,消息灵通的控件(相比,数字8(一个),8 (c),8 (d))。令我们吃惊的是,在PAR1-null老鼠,共同服用PAR1-activating肽的连同ethanol-DNBS大幅减少炎症多数指数。组织学检查这些PAR1-null小鼠接受ethanol-DNBS连同PAR1-TF显示白细胞浸润,健康的前列腺腺泡,基质,和上皮(数据没有显示)和显著的减毒组织学组织损伤和MPO活动,类似于PAR1-activating肽的影响在野生型小鼠(图8 (d))。然而,共同的PAR1-TF ethanol-DNBS没有减少前列腺重量PAR1-null老鼠(图8 (c))。因此,在这方面,PAR1-active肽不活跃在PAR1-null老鼠。这些数据表明PAR1-dependent和惊人的PAR1-independent PAR1-activating肽的抗炎作用小鼠前列腺炎模型。

4所示。讨论

我们发现,小鼠ethanol-DNBS前列腺炎模型准确反映我们的以前的工作与大鼠模型(5),最大的炎症指标观察到第二天。感兴趣的注意,微观损伤分数大幅下降从第二天第三天治疗后(图1 (b))。这可能表明炎症决议发生在微观层面之间会谈的第二天或第三天后处理。尽管如此,第二天显示最大微观损伤和前列腺癌研究中使用的实验时间点。除了造成的所有指标的增加炎症组织,ethanol-DNBS-induced前列腺炎导致的海拔组织促炎细胞因子il - 6、il - 1β,KC但不是TNF -(图2)。组织学检查,它可以建议固定过程可能改变了前列腺腺泡和/或上皮细胞的形态。Saline-treated控制,然而,以相同的方式处理,没有任何破坏的腺泡上皮,反对fixation-induced构件的组织学标本。

我们主要使用的小鼠模型来评估一个潜在的角色PAR1小鼠非感染性前列腺炎。显然,PAR1小鼠前列腺中,可以看出,我们的rt - pcr和免疫组织化学数据。这些发现符合PARs人类正常和癌变的检测前列腺上皮细胞在体外(25,31日),在前列腺癌组织中在活的有机体内(14]。我们观察到PAR1老鼠前列腺局部顶腺泡上皮和腔,并表示从一个较小的程度上沿基底腺泡上皮和上皮细胞。此外,我们发现细胞内PAR1免疫反应性在其他作品中发现。因此,PAR1存在于鼠标前列腺癌和原则上可以随时在小鼠前列腺功能中发挥作用。值得注意的是,尽管PAR3和标准杆4杆都是人类前列腺组织中表达,数据关于PAR3和标准杆4杆表达小鼠前列腺组织是有限的。基于我们的PAR1结果,我们假设PAR3和标准杆4杆是小鼠前列腺中表达。的receptor-selective PAR1-activating肽,明确不激活PAR3或标准杆4杆,其氨基酸序列PAR1是拴在特定的配体。可能是调节凝血酶或其他酶PAR1-null老鼠可能激活PAR3,标准杆4杆,从而替代PAR1函数。需要进一步调查完全阐明PAR3的参与和标准杆4杆PAR1-null老鼠。

在这项研究中,ethanol-DNBS和PAR1-activating肽同时注射到老鼠前列腺。因此,PAR1在急性损伤的影响,我们的研究结果表明,PAR1-activating肽抑制ethanol-DNBS引发的炎症反应。特别是,我们的工作处理的主要发现PAR1 PAR1-activating肽在前列腺炎模型,TFLLR-NH₂可能导致PAR1-dependent和PAR1-independent抗炎效果。在这方面,使用PAR1-null老鼠和肽结构活性信息PAR1-active和PAR1-inactive肽是必须确定哪些PAR1-activating肽是由于PAR1本身的影响,影响是PAR1独立。我们的数据表明,相反顺序PAR1肽,RLLFT-NH₂,没能产生抗炎效应在野生型或PAR1-null老鼠,表明一些PAR1-TF肽(TFLLR-NH的影响₂)PAR1依赖。此外,TFLLR-NH PAR1-active肽₂没能提高il - 10或抑制组织水肿(反映在增加前列腺重量)PAR1-null老鼠。因此,至少部分的抗炎作用PAR1-TF相关细胞因子il - 10 PAR1-dependent生产和肿胀。因为il - 10是一个pleiotrophic细胞因子与抗炎和免疫抑制特性,这些数据支持直接PAR1-mediated抗炎作用也被描述在以前的报告。例如,PAR1受体激动剂促进了il - 10的释放而抑制肿瘤坏死因子-的生产和il - 6在老鼠的小胶质细胞32]。除了PAR1受体激动剂增加il - 10的产量在休息和激活外周血单核细胞(33]。这些数据支持的假设PAR1激活可能在无菌前列腺炎调解抗炎作用。

令我们吃惊的是,然而,TFLLR-NH receptor-active肽₂,能够减少许多ethanol-DNBS-triggered炎症的指标这两个PAR1-null和PAR1-wild-type老鼠。因此,我们的工作,像其他的研究,展示了谨慎的PAR-activating肽必须用于阐明PAR激活组织的潜在影响。先前的研究已经表明,non-PAR-mediated效果与其他PAR-selective肽受体激动剂可能发生。例如,它已经证明PAR1 PAR2受体激动剂可能会引起肥大细胞中介发布通过non-PAR1和non-PAR2机制(34]。此外,一个相对有效和选择性PAR2-activating肽,trans-cinnamoyl-LIGRL-NH₂,会有脱靶non-PAR2效应在某些血管准备而不是其他人(35]。因此,使用PAR1-null老鼠对我们来说是一个关键解决PAR1-dependent与PAR1-independent TFLLR-NH的行动₂。与PAR1-null小鼠获得的数据显示一种新型抗炎non-PAR1 TFLLR-NH的效果₂(但不是它的相反顺序肽)小鼠模型的无菌前列腺炎。受体负责这些PAR1-independent TFLLR-NH的抗炎作用₂还有待确定。

5。结论

使用新开发的乙醇/ DNBS-mediated前列腺炎小鼠模型,我们能够评估一个潜在的角色proteinase-activated receptor-1 (PAR1)在调节炎性反应。使用PAR1-activating肽,TFLLR-NH₂,其receptor-inactive相反顺序肽,RLLFT-NH₂,连同PAR1-null小鼠实验,我们不仅建立了(1)PAR1可以发挥抗炎作用的非感染性前列腺炎提升抗炎细胞因子il - 10和减少肿胀而且(2)PAR1-activating肽(但不是它的相反顺序受体激动剂),通过non-PAR1机制,表现出大量抗炎行动。因此,基于TFLLR-NH peptidomimetic受体激动剂₂结构可能被证明是有价值的作为治疗非感染性前列腺炎的治疗药物。这些药物会减少前列腺炎的“双重”受体机制至今未涉及PAR1和的受体。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢黎明马丁博士Koichiro历经甲级,卡罗Stremick,马哈茂德•Saifeddine凯文•查普曼和特洛伊因技术支持。m .马克斯坦顿是由加拿大自然科学和工程研究理事会(NSERC),加拿大研究生奖学金(CGSM)和阿尔伯塔省创新健康解决方案(AIHS)奖学金奖。莫理d Hollenberg持有操作由加拿大健康研究所(CIHR)和安德烈·g·滴定管和霍华德·赛举行NSERC操作赠款。卡尔加里大学的执行这项工作,AB、加拿大的卡尔加里。

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