文摘
本研究的目的是评估的影响绿茶茶树提取促炎的分子和分解脂肪的蛋白质含量在食源性肥胖小鼠脂肪组织。动物被随机分为四组:连续波(chow饮食和水);CG (chow饮食和水+绿茶提取物);HW(高脂肪饮食和水);HG(高脂肪饮食和水+绿茶提取物)。老鼠被喂食随意与食物或高脂肪的饮食和与此同时补充(口服填喂法)和400毫克/公斤体重/天的绿茶提取物(CG和HG, resp)。治疗进行了8周。UPLC显示在10毫克/毫升绿茶提取物,有15μ95年g / mg儿茶素μ20.8 g / mg儿茶素μ4.9 g / mg表儿茶素没食子酸盐,μg / mg儿茶素没食子酸盐。绿茶管理与高脂肪饮食增加高速逻辑,ABHD5,和perilipin肠系膜脂肪组织,这是与减少体重和脂肪组织增加有关。此外,我们观察到绿茶补充减少炎性细胞因子TNFα水平,以及TLR4、MYD88 TRAF6炎性信号。我们的研究结果表明,绿茶增加分解脂肪的途径,减少脂肪组织,这也许可以解释慢性炎症在肥胖老鼠的衰减。
1。介绍
肥胖是一个严重的健康问题在发达国家,和肥胖的患病率急剧增加几十年。遗传和环境因素都与肥胖的发展,特别是食物过度消费。严重超重或肥胖等主要健康风险与心血管疾病、糖尿病、非酒精性脂肪肝病和癌症(1]。肥胖的一个重要特性是它与慢性低度炎症。脂肪组织是体内最大的内分泌器官,特点是细胞因子和趋化因子的生产和急性期炎症信号(2- - - - - -4]。作为一个成立于3 t3-l1脂肪细胞细胞组成主要特点与先天免疫(5];这一阶段也被涉及toll样受体(通常)[6- - - - - -9]。的刺激通常会导致立即防御性反应,包括生产抗菌肽的数组和细胞因子(10];这种反应包括适配器分子,如骨髓分化主要响应基因88 (MyD88)和肿瘤坏死因子receptor-associated因子6 (TRAF6) [11]。
脂肪组织参与的代谢、生理和免疫调节包括细胞因子。脂肪组织脂肪储存主要取决于脂肪酸(FA)供应,FA酯化甘油三酯(TG),和TG破裂或脂类分解。脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和荷尔蒙脂肪酶(高速逻辑)有能力降低TG裂开的酯键,从而调节脂类分解途径在脂肪组织12]。脂肪组织脂解作用在过去十年已获得了高度的关注,因为它改变了监管肥胖。因此,预防和治疗肥胖应该专注于抗炎作用,出现了各种治疗,包括phytoterapic疗法。
绿茶含有高含量的多酚类物质,这可能有许多与生活方式相关的疾病预防的积极健康的影响(13]。茶是全球最受欢迎的饮料之一。习惯性消费的绿茶(茶树),一个受欢迎的饮料用于中药、有关肥胖与降低风险(14)、糖尿病(15)、高血压(16),血脂异常(17),和心血管疾病的死亡率(18在几个流行病学研究)。补充在选定的临床试验,绿茶被证明能显著改善代谢综合征的特点,如减少腹壁多脂的腰围表示肥胖受试者(19]。
茶和茶叶组件已报告拥有各种生物和药理作用,如抗菌操作(20.和降低血脂和血糖水平21,22]。绿茶儿茶素是有效的在细胞和动物模型的肥胖、行动和提议的模式包括:减少脂肪细胞的分化和脂肪生成;增加机会;和减少脂质吸收(23]。然而,相对很少有人知道底层的作用机制,调节体重,分解脂肪的作用及其与炎症的关系状态。本研究的目的是检查的影响绿茶提取物对身体脂肪量和分解脂肪的酶高脂肪饮食的老鼠的脂肪组织,观察是否减少脂肪量与减少慢性炎症有关。
2。实验方法
2.1。动物,饮食,补充和绿茶
实验研究委员会圣保罗联邦大学(没有批准。1673/07)中使用的所有程序和照顾动物。共有24个男性瑞士小鼠年龄在8周。他们被安置四个每笼,接受食物的饮食和水随意下,在动物的房间12 h光暗周期°C和%的湿度。适应时间(1周)后,动物被随机分为四组:控制老鼠(CW)美联储补充食物饮食和安慰剂(0.1毫升水/天);(CG)补充食物的饮食和绿茶绿茶提取物(0.1毫升水+ 400毫克/公斤体重/天);(3)补充(HW)高脂肪饮食和安慰剂(0.1毫升水/天)为2个月;(4)(HG)高脂肪饮食补充和绿茶(0.1毫升水+ 400毫克绿茶商业提取/公斤体重/天)。周润发的脂肪酸成分或高脂肪的饮食饮食是详细的在以前的研究从我们组(表1)[24]。
2.2。绿茶的成分超高效液相色谱(UPLC)
我们评估构成商业绿茶提取物的超高效液相色谱-质谱分析。一个Acquity UPLC系统(美国水域,米尔福德,MA)组成的二元溶剂经理和一个示例经理被耦合到一个Acquity TQD质谱仪(Micromass水域,米尔福德,妈,美国)。分析在一个桥接乙烯混合(本·)C18分析柱(50毫米×2.1毫米,1.7μm,在温度25°C,注射5μL的提取和标准。一个梯度应用流量0.2毫升的最小值−1使用两个移动阶段——(一)纯净水0.1%甲酸;和(B) methanol-starting 5% B, B在8分钟增加到100%,保持直到8.50分钟,回到初始条件。检测是在负离子模式下用ESI源在下列条件:毛细管−3000 V,锥−30伏,温度150°C;m / z 100 - 1000之间不等。数据采集是由MassLynx软件。我们的数据表明,在绿茶提取物,有15μ95年g / mg儿茶素μ20.8 g / mg儿茶素μ4.9 g / mg表儿茶素没食子酸盐,μg / mg儿茶素没食子酸盐。
2.3。生化测量
18小时后过去12小时后口服填喂法的绿茶提取物和快,动物被斩首,血液收集,收集血清样本后允许血液凝块冰上。血清冷冻贮藏在−80°C进行分析。实验室测试工具被用来评估空腹总胆固醇、高密度脂蛋白(hdl - c)、三酰甘油(TG)水平。样本分析使用一个酶的方法。低密度和VLDL-c根据Friedewald方程计算((低密度=总胆固醇(高密度脂蛋白胆固醇)——(TG / 5))和(VLDL = TG / 5)) (25]。Zen-Bio工具包被用来评估游离脂肪酸。
2.4。肿瘤坏死因子-α蛋白质、脂联素、il - 10水平由ELISA测定
斩首后,肠系膜脂肪组织被移除,解剖,看和离心机在4°C 12000 g 40分钟;上层清液得救了,蛋白质含量是决定使用BCA化验(Bio-Rad,赫拉克勒斯,加州)与牛血清白蛋白(BSA)作为参考。脂联素的定量评估,TNF -α,il - 10的蛋白质是由ELISA (DuoSet ELISA, R和D系统,明尼阿波利斯,MN)后,制造商的建议。所有样本作为重复运行,平均值是报道。
2.5。蛋白质免疫印迹分析
安乐死之后,附睾的、腹膜后、肠系膜脂肪组织解剖和体重。肠系膜脂肪组织是看在1.0毫升溶液化缓冲在4°C (Triton x - 100年1%,100毫米Tris-HCl (pH值7.4),焦磷酸钠100毫米,100毫米氟化钠,10毫米EDTA,原钒酸钠10毫米,2.0毫米phenylmethylsulphonyl氟化物(PMSF),抑肽酶和0.1毫克/毫升)Polytron(模型713吨;Fisatom Equipamentos Cientificos、圣保罗、SP、巴西)。不溶性材料被离心9000 g在70年30分钟。Ti转子(美国贝克曼,富勒顿,CA)在4°C。上层清液的蛋白质浓度测定BCA化验。蛋白质变性的沸腾(5分钟)Laemmli样品缓冲(26德勤]包含100毫米,8日,10日,或12% sds - page凝胶Bio-Rad微型板胶装置。蛋白质凝胶的electrotransfer硝化纤维膜进行了在15 V ~ 1.30 h / 4凝胶(常数)Bio-Rad半干的传输装置。非特异性蛋白质绑定硝基降低了预孵化2 h 22°C的阻断缓冲区(1%牛血清albumine, 10毫米三,150毫米氯化钠,和0.02%渐变20)。硝化纤维膜是孵化一夜之间在4°C抗体TLR4、骨髓分化主要响应基因(88)(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF6),激素敏感脂肪酶(高速逻辑),脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL),比较基因identification-58 (CGI-58或ABHD5), perilipin,和alpha-tubulin获得圣克鲁斯生物技术(美国圣克鲁斯,CA)稀释1:1000年与阻断缓冲区补充1% BSA然后洗30分钟没有BSA在阻断缓冲区。这些墨迹随后被孵化与peroxidase-conjugated二级抗体1 h 22°C。评价蛋白质加载、被膜和reblotted anti-alpha-tubulin抗体。特定的乐队是由化学发光检测和可视化/捕获膜是由接触RX的电影。带强度量化的光学测密度术发达放射能照像(Scion software-Scion公司形象,弗雷德里克,医学博士,美国)。
2.6。统计分析
使用GraphPad棱镜的统计分析进行统计软件包5.0版本Windows (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。数据表示为±SEM手段。实施Kolmogorov-Smirnov测试显示,实验的结果分布正常。使用方差分析两种方法对数据进行分析对比四组。的值被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。身体质量和组织的重量
相对重量(组织重量/体重)附睾的脂肪组织增加HW组相比GW组和减少汞组相比HW组。肠系膜脂肪组织显示组相比HW GW组的增加和减少汞组相比HW组。在腹膜后脂肪组织,只有CG组下降较GW组。肝脏和腓肠肌组织显示组间无显著差异(表2)。
3.2。血脂和血清脂联素
血清甘油三酯和总胆固醇的任何组之间没有差别。HW组的血清低密度脂蛋白的浓度增加而GW。HG组的血清高密度脂蛋白的浓度显示相比HW组增加。血清FFA浓度的四组没有差异。血清脂联素在CG集团GW组相比,增加和HG组相比HW组(表增加3)。
3.3。细胞因子在脂肪组织中
肠系膜脂肪组织中的细胞因子浓度的脂联素在CG组相比GW组增加,和HG组相比HW组增加。il - 10的内容有显著提高组相比CG GW组。肿瘤坏死因子-α水平的肠系膜脂肪垫HW组相比有显著提高连续波组。然而,补充的绿茶降低这种影响(HG和硬件组;表4)。
3.4。量化分解脂肪的蛋白质
激光冲徊化蛋白水平显示增加老鼠与食物的饮食补充绿茶(CG集团)相比,没有补充(CW组)。没有区别观察食物和高脂肪饮食没有补充。然而,蛋白质含量有增加奥软HG组(绿茶补充)相比HW组(;图1(一))。ATGL蛋白水平只显示增加老鼠与食物的饮食和补充绿茶(图1 (b))。HW组,ABHD5(或CGI-58)蛋白质含量减少相比GW组。然而,与绿茶惊人地增加了ABHD5补充蛋白质含量在肥胖小鼠(HG组)相比,硬件组。没有观察到显著差异饮食组(图1 (c))。perilipin蛋白水平增加老鼠与食物的饮食补充绿茶(CG集团)相比,没有补充(CW组)。没有区别是观察之间的食物和高脂肪饮食没有补充。然而,绿茶perilipin增加蛋白质含量汞组相比HW组(图1 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.5。量化的炎症蛋白
食源性肥胖老鼠的TLR4蛋白质含量(HW集团)明显大于饮食小鼠(CW组)。绿茶的治疗降低这种影响显著(HG对HW组,;图2(一个))。HW组MyD88蛋白水平增加相比连续波组。然而,当肥胖老鼠补充与绿茶(HG组),这种效果是减毒(图2 (b))。TRAF6蛋白水平食源性肥胖老鼠(HW组)明显大于饮食小鼠(CW组)。绿茶的治疗显著降低这种影响(HG对HW组,;图2 (c))。
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
人们进行了无数次研究,增加我们对肥胖的病因和治疗的认识。从这个意义上说,另外一个策略是必要的,如植物疗法治疗。慢性系统性炎症的发展直接导致肥胖(27]。例如,超重和肥胖的妇女通常有血清炎性细胞因子水平升高,如肿瘤坏死因子-α(28,29日]。因此,抑制慢性炎症可能是一个好的策略来预防和/或治疗肥胖。有趣的是,之前的研究表明绿茶多酚的积极影响可能是通过抑制慢性炎症的能力(30.,31日]。此外,饮用绿茶对减肥的影响在临床已报告(32- - - - - -36和实验室研究37]。绿茶的抗肥胖可能是由于其能力提升生热作用和脂肪氧化38,39]。因此,我们假设绿茶补充减少其体内脂肪含量的质量通过调节脂解的pathway-related基因;这种变化的差别会导致对这些生产和促炎细胞因子分子蛋白质含量。
在这项研究中,我们测量体重的动物在研究的开始和结束。我们的研究结果表明,高脂饮食诱导体重增加(如观察到三角洲重量)和附睾的肠系膜脂肪组织垫。然而,绿茶提升降低三角洲体重和脂肪组织垫。此外,绿茶提取物导致分解脂肪的途径蛋白质含量增加,脂联素和抗炎细胞因子il - 10和减少促炎细胞因子TNF -α。
茶的治疗用途仅限于替代医学。虽然抗癌、抗炎和抗菌性的茶已经知道多年,临床医学在治疗不包括它的使用,几乎可以肯定,由于缺乏知识对其行动的确切机制21,22]。在人类实验中,急性摄入绿茶提取物,主要由儿茶素,据报道,增加全身脂肪的比例利用率增加氧化和脂解作用[23,38,39]。李等人。40)在体外研究证明EGCG调节脂类分解的增加通过直接增加奥软的基因表达,展示其重要的脂质代谢作用。习惯性消费绿茶提取物已被报道减少体重和体脂(32- - - - - -36];这可能通过增加脂类分解脂肪组织发生,和我们的数据支持。
绿茶的抗炎效应归因于多酚含量(30.,31日]。在亚洲国家,绿茶,它包含一个类的多酚类物质被称为茶儿茶素,已经习惯性消费是最受欢迎的饮料之一。茶多酚可以抑制蛋白酶体功能,从而终止炎症。虽然茶多酚自称是最有效的成分的茶,有越来越多的证据表明,这些化合物并不是唯一的选民负责从茶有益的影响41]。
我们的研究结果表明,绿茶可以降低TNF的蛋白质含量α在脂肪组织和刺激分解脂肪的酶。这些条件可能有利于降低体重和脂肪组织。此外,我们发现绿茶TLR4表达减少,阻断促炎的效果。只要et al。(42]表明,EGCG在培养细胞免疫系统的抗炎效应,这在一定程度上解释了TLR的抑制。总之,我们的研究结果表明,绿茶提取物的摄入增加的脂酶的表达,减少脂肪的脂肪量,同时减少炎症分子和细胞因子。期货研究需要更好地理解所涉及的机制由摄入绿茶提取物推动的有利影响,尤其是在高脂肪饮食的老鼠。
利益冲突
所有作者声明没有利益冲突。
确认
这项工作是支持的慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq), Fundacao德帕罗尽管做Estado de圣保罗(FAPESP)必须占州政府和Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(披肩)。作者要感谢保罗Mazzafera (BIOEN-FAPESP 08/58035-6)使用UPLC-MS设备。