文摘

客观的。proapoptotic蛋白,granzyme B (GZB型),被认定为动脉粥样硬化斑块不稳定因素和在炎症激活。我们研究的释放动力学GZB型和其他炎症标记物,如灵敏度高C反应蛋白(hsCRP)、白介素18(地震)和fractalkine (FKN)后早期急性心脏事件不同的ACS组。方法。36个非糖尿病的ACS患者相比,12个对照组。根据ACS的诊断,患者分为22患者ST段心肌梗死患者肝素)和14 non-ST海拔心肌梗死或不稳定心绞痛(UA / NSTEMI)。采集的血液样本在第一天(天发作)和第三天测量hsCRP,地震,FKN,通过ELISA GZB型。结果。ACS患者显示明显高于GZB型、地震和FKN水平比控制。STEMI组显示GZB型水平显著高于NSTEMI / UA组。3天,显示FKN水平明显降低,而GZB型水平显著提高。地震水平或多或少不变。与地震GZB型水平呈正相关(,)和FKN (,)。结论。不像地震和FKN,等离子体GZB型可能是ACS疾病严重程度的一个标志。

1。介绍

急性冠脉综合征(ACS)仍然是一个死亡率和发病率的主要原因(1]。它的特点是急性炎症反应导致冠状动脉斑块破裂和随后的血栓形成(2]。越来越多的证据表明,炎症和免疫细胞激活胶原蛋白流失起到关键作用的纤维帽是一个前奏纤维帽破裂(3,4]。心脏损害由于炎症反应的程度反映在周边的炎症标志物水平参与斑块不稳定性的过程(5]。此外,标记和斑块不稳定斑块破裂等灵敏度高c反应蛋白(hsCRP)可以用来预测未来心血管事件不仅在看似健康的主题,而且在ACS患者(6]。

Granzyme B (GZB型)是一种丝氨酸蛋白酶释放细胞毒性T淋巴细胞(ctl)和自然杀伤(NK)细胞,细胞凋亡中起着重要的作用,激活细胞内还存在(7]。此外,GZB也确定为一个细胞外蛋白酶降解特定纤连蛋白等细胞外基质,vitronectin,和层粘连蛋白,这意味着GZB型的角色在细胞外基质(ECM)改造(8]。因此,GZB型可能导致斑块不稳定的机制可能包括ECM降解和/或诱导巨噬细胞或平滑肌细胞凋亡在纤维帽9]。

白介素18(地震),以前称为移行细胞(IFN -γ)诱导因子,il - 1的促炎成员总科,扮演一个角色在动脉粥样硬化的发生和发展10]。临床和实验研究都支持它在动脉粥样硬化斑块进展中的作用和不稳定11,12]。然而,它被描述为一个独立的预测未来的ACS患者不良事件(13]。

另一个因素的形成动脉粥样硬化斑块,可能参与他们的不稳定是趋化因子(14]。在这方面,fractalkine (FKN)或CX3CL1是一个独特的双重职能趋化因子存在于两种形式;可溶性形式作为化学引诱物和膜结合的形式作为粘附分子(15]。FKN最近被确定为一个独立的关键因素斑块易损性和随后的斑块破裂的发病机制(16]。

因此,当前的研究是为了确定GZB型ACS患者的循环水平与健康对照组相比。此外,GZB型之间的关联标记的炎症和斑块不稳定(hsCRP、地震和FKN)以及其他代谢,人体测量,评估风险因素。

2。对象和方法

2.1。主题

共有48个科目(36男性和绝经后妇女12日)参加这项研究,其中36个非糖尿病的ACS患者相比,12岁,和sex-matched显然健康者作为对照组。22例(61%)诊断为ST段抬高心肌梗死肝素)和14(39%)与非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)或不稳定性心绞痛(UA)。STEMI、NSTEMI和UA确诊共识文件根据标准规定的联合欧洲心脏病学会/美国心脏学院委员会重新定义的心肌梗死17]。ACS患者的基线特征和控制表1。从重症监护室患者,心脏病,El-Demerdash医院,Ain Shams大学教学医院、埃及开罗。

受试者空腹血浆葡萄糖≥7.0更易/ L或先前的糖尿病史,炎症性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、血液疾病、肝或肾脏疾病,急性或慢性感染或免疫抑制药物被排除在本研究之外。

这项研究是按照规定和《赫尔辛基宣言》的建议,批准El-Demerdash医院医学伦理委员会以及制药、学院Ain Shams大学伦理委员会和知情同意是获得所有的参与者。

2.2。方法

2.2.1。数据收集

一个详细的家庭和医疗历史和药物治疗(s)收集所有科目。收缩压(SBP)、舒张压(菲律宾)、心率(HR)、左心室射血分数(LVEF),和之前的ACS的发病率是来自医疗记录。常规血清样本对肌酸激酶(CK)以及同工酶得到承认和6 - 8个小时的间隔。CK峰值和峰值水平记录(表2)。高血压(HTN)被定义为SBP > 140 mm Hg和/或类似> 90 mm Hg和/或启动抗高血压药物。

STEMI的人口数据和生化参数和NSTEMI / UA组中演示了表2。所有患者接受阿司匹林、氯吡格雷和静脉注射肝素。此外,β-受体阻滞剂,钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂、利尿剂、硝酸盐、描述和他汀类药物是根据当前的指导方针。

2.2.2。样品制备、收集和存储

(5毫升)的外周血标本从ACS患者1天(天发作),在发病后的第三天。样品被分成2整除;第一部分对普通真空采血管管收集血清制备用于侧面图,hsCRP,地震分析。第二个整除收集EDTA GZB型和FKN化验。血浆和血清被分成数整除,被储存在−80°C后续分析。

2.2.3。实验室评估

脂质剖面测量酶方法根据工具包提供的汉诺威,德国。血清hsCRP和量化了地震-酶联免疫吸附测定(ELISA)方法使用商业可用的工具(hsCRP: Accubind Momobind Inc .)、美国;地震:武汉Eiaab科学有限公司,中国)。等离子体GZB化验使用Wkea医疗物资公司,纽约,美国酶联免疫试剂盒和等离子FKN酶联免疫试剂盒研发系统,提供的是公司,明尼阿波利斯,MN,美国。ELISA程序都是由Hyprep自动ELISA系统(亥伯龙神公司、迈阿密、FL)根据制造商的指示。

2.3。统计分析

IBM为社会科学统计软件包(SPSS)统计(V.19.0, IBM公司,美国,2010)是用于数据分析。提出了连续变量均值±SEM和分类的实际数字和百分比。用卡方检验比较分类变量之间进行。对比两个独立正态分布意味着组使用independent-samples完成以及。Mann-Whiteny倾斜的数据进行了分析测试。血清或血浆水平的变化与配对炎症标记物的评估以及或Wilcoxon配对测试。标记之间的相关性和排名确定斯皮尔曼测试。多元逐步回归分析是识别风险因素导致等离子体GZB型的水平。

3所示。结果

3.1。研究群体的基本特征

血清hsCRP, GZB型、地震和FKN显示显著的海拔在ACS组与健康对照组相比(表1)。逐步在NSTEMI / UA和STEMI组,hsCRP和GZB型显著增加后组相比,前者(表2)。

3.2。hsCRP的变化,GZB型、地震和FKN在ACS组水平

hsCRP之间比较,GZB型、地震和FKN水平在第一天和第三天相比对照组水平表3。STEMI和NSTEMI / UA组显示相同的动态测量生物标志物但有不同程度的变化。第一天相比,hsCRP水平显著降低在NSTEMI / UA或第三天STEMI组74%和65%,分别。此外,等离子体GZB型在NSTEMI / UA水平显著增加118%,126%在STEMI组相比,第三天第一天两组,分别。血清的地震水平两组仍或多或少不变。然而,等离子体FKN在NSTEMI 3天显著降低8% / UA和11%在STEMI组第一天相比,其水平。

3.3。地震之间的相关性,GZB型和FKN在彼此和ACS病人的临床参数

如图1GZB型之间显著正相关,是观察和FKN (,)。此外,地震水平显著正相关,显示FKN (,)和GZB型(,)。

ACS病人的临床参数,如表中所示4、相关分析也揭示了重要的之间的相关性GZB型和SBP,类似CK峰值,峰值水平。然而,血清的地震并没有显示出显著相关性与任何ACS病人的人体测量或临床参数组。另一方面,FKN水平与BMI和峰值水平表现出明显的正相关性。

3.4。心血管疾病危险因素的影响在ACS患者血浆GZB型水平

接下来,我们进行了多元回归分析研究心血管疾病的风险因素导致等离子体granzyme B的水平。我们组血浆granzyme B水平作为因变量,年龄、性别、体重指数、HTN,高胆固醇血症,当前吸烟者和病人的历史之前的ACS作为独立的变量。如表中所描绘的一样5、HTN及病历是独立危险因素显著影响ACS患者血浆granzyme B水平。

4所示。讨论

增加系统性炎症介质稳定动脉粥样硬化斑块患者血小板破坏的主要驱动力,因此ACS综合症的发病率(18]。然而,其他炎症性疾病如糖尿病会影响循环水平的生物标记物(19,20.]。因此,需要在ACS患者炎症状态的评估缺乏这种干扰条件一直在上涨。

从细胞外GZB型被发现,几个在体外研究已经完成验证它的作用机理,但只有数量有限的临床研究评价其作用作为心血管疾病的生物标志物循环(21- - - - - -23]。这些研究将GZB型水平上升归因于其自然proapoptotic促炎标记蛋白质而不是小说。

因此,我们的研究评估之间的联系等已知的炎性细胞因子的血液水平hsCRP,地震,FKN GZB型非糖尿病的患者急性心脏事件。我们也关注时间的变化水平的生物标志物STEMI患者和NSTEMI / UA强调鉴别炎症反应在不同类型的ACS而且解释样本时间的影响(1和3)记录结果。

目前的研究表明显著增加血液中的hsCRP, GZB型,地震,FKN在ACS患者与对照组相比。发现了高浓度的GZB型患者动脉粥样硬化的血浆,水平最高的患者中发现不稳定的斑块,贷款支持的假设granzyme B影响斑块不稳定(23]。此外,granzyme B水平升高的后果可能超越斑块破裂。Satio手机等人描述了小说的作用水平升高在第14天GZB型急性心肌梗死(AMI)后心室重构(dt -24]。此外,作者发现GZB型蛋白表达增加心肌梗塞在AMI后从3到17天。

在动脉粥样硬化斑块,GZB型表达式不仅限于ctl和NK细胞。巨噬细胞、泡沫细胞和平滑肌细胞(smc)也表达GZB型以及它还可以检测到细胞外9,25]。有趣的是,GZB型表达在动脉粥样硬化斑块被发现与疾病严重程度增加26]。最近,Hendel等人也发现,GZB型的表达减少内源性抑制剂,蛋白酶抑制剂,在血管smc与疾病进展,可能会增加smc易感性GZB-induced斑块内细胞凋亡(27]。因此,我们发现GZB型水平显著增加在STEMI组相比NSTEMI / UA组。

虽然近藤和同事已经证明等离子GZB AMI患者升高[22),然而,鹤等。无法评估UA患者的血浆GZB型浓度的变化,只有少数患者显示检测结果(28]。这可能也支持我们的等离子GZB型水平的显著差异STEMI和NSTEMI / UA之间可能可能是由于proapoptotic GZB型的性质与程度明显高于心脏坏死,反映在重大的CK峰值和峰值水平,和炎症(hsCRP)观察相比,STEMI NSTEMI / UA组。

没有表达FKN在正常冠状动脉;然而,FKN及其在动脉粥样硬化病变中表达的受体CX3CR1高度29日]。一样在我们的研究中,李等人发现FKN水平较高ACS患者与对照组相比,甚至稳定性心绞痛患者相比(16]。

Ziakas等人发现更高的高峰值STEMI患者急性期反应物和NSTEMI / UA [30.]。hsCRP,先前的研究表明显著高于入学和高峰值相比,主题与STEMI NSTEMI和AMI UA[相比31日,32]。这是符合我们发现hsCRP STEMI患者相比,水平显著高于NSTEMI / UA患者。对于地震,我们发现是由Brunetti等人报道证实,血清水平的地震不受ACS的诊断33]。此外,最近的一项研究显示,FKN在统计学上没有不同的循环水平AMI和UA组(16]。

GZB发布ACS显示一个与时间有关的动力学。一个在体外研究发现,GZB型的生产从培养外周血单核细胞是依赖于时间,GZB型水平在文化媒体逐渐增加了孵化后48小时(28]。此外,GZB型显示峰值等离子体水平在AMI后7天(22]。这是与我们的结果一致,血浆GZB型水平显著增加3天比第一天在STEMI和NSTEMI / UA组。

研究由Ghanavatian等人hsCRP水平下降NSTEMI患者在入院12小时(34]。在我们的研究中hsCRP下降3天后比较两组第一天。我们所知,这是第一个研究比较等离子FKN在ACS后安排样品的水平。另一方面,ACS患者的炎性细胞因子失衡的一项研究显示,地震水平相当高的入院时和12和24小时后保持不变33]。这是在我们的研究中,血清的地震没有显著变化在两组从第一天到第三天。

相关性分析显示FKN水平和GZB型之间存在显著正相关。这种联系可以解释在上下文的觉和同事的结果得出结论,CD8 + T淋巴细胞,最丰富的炎症细胞在先进的动脉粥样硬化病变,促进斑块易损性通过GZB-mediated巨噬细胞凋亡,smc,内皮细胞(35]。以前,这是表明FKN及其受体之间的相互作用是主要的播放器等走私GZB型生产CD8 + T淋巴细胞在血管病变(36)表明一个强大FKN和GZB型水平之间的关系是在我们的结果。

GZB型的细胞外作用表明GZB可能间接诱发细胞因子释放的机制。最近,这是表明,il - 1 B granzyme流程α到一个更强有力的促炎的片段(37]。此外,地震之间的直接关系和GZB型是被Omoto等人发现GZB型为丝氨酸蛋白酶裂解活性pro-IL-18同时残留催化剂caspase-1裂解的记录;因此GZB型可以被视为一种新型活化剂的促炎的地震38]。因此,积累的细胞外GZB型的血清水平地震可能导致海拔与我们的研究结果是一致的。

我们所知,据报道FKN和地震之间没有直接关系。然而,先前的研究表明,干扰素-γ刺激FKN表达血管内皮细胞(39,40]。此外,其他成员的il - 1总科如il - 1β也参与FKN感应(41]。这些关系可能说明了积极FKN和地震之间的显著相关性研究。

5。结论

可能有某种GZB型之间的相互作用,地震,FKN在ACS的发病机理。目前的研究也证实了不同的炎症反应在STEMI患者NSTEMI / UA患者的尊重。的确,还需要进一步的大规模前瞻性研究证明可能使用等离子GZB型心肌缺血后危险分层。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

承认

Granzyme B设备是由生物化学部门捐赠的,学院制药、Ain Shams大学。