文摘

Postoperative-fluid保留是一种严重的并发症在接受大手术的患者。分子的复杂网络参与这样一个严重surgery-induced条件仍然知之甚少。炎症中提出了液体潴留的各种原因。自TNF -α最初的主要促炎细胞因子释放大手术之后,它是合理的假设参与流体过载。在这里,我们表明,TNF -α选择性地调节关键分子参与体液平衡,如利钠肽(NPs)和水通道蛋白在人类支气管上皮细胞BEAS-2B。特别是,我们发现,肿瘤坏死因子-α诱导减少arial利钠肽、利钠肽receptor-1 aquaporin-1 aquaporin-5和增加脑利钠肽与不同的核转录因子,参与κB和增殖蛋白激酶信号通路激活。此外,观察到的NPs变化的表达式,证明炎症作为额外引起脑利钠肽的高度,增加了小说的一个重要的信息关于NPs和炎症的研究领域。最后,我们表明,炎症是Aquaporin-1和aquaporin-5表达调节的机制。因此,在这个探索性研究,我们推测,TNF -α可能参与postoperative-fluid保留相关重大手术。

1。介绍

体重增加和水肿形成经常在接受大手术的患者,发病率高达40% (1]。术后体重增加和液体超负荷与贫穷有关生存(2)和并发症(3,4]。液体潴留的原因是多方面的,而不是完全清楚。其中一个可能与手术引起的系统性反应压力和手术创伤,受内分泌的复杂网络,神经和免疫机制(5- - - - - -7]。这样surgery-induced反应导致早期hyperinflammatory状态对组织修复和宿主防御至关重要5]。细胞因子被认为手术创伤的发病机制中发挥关键作用。他们当地的中介效应和维护组织损伤的炎症反应,也可以发起一些系统性变化的发生8- - - - - -10]。大手术之后, 最初的主要促炎细胞因子释放的受损组织,刺激生产和释放细胞因子,负责诱导系统性变化称为急性期反应(5,10]。因此,它是合理的假设 参与的各种原因中液体潴留,因此这将是非常重要的理解机制的参与。

在最近的一项研究中,患者肺段切除,显示体重显著增加,与液体潴留,和早期增加血浆脑利钠肽(BNP)浓度,利钠肽(NPs)家族的一员(11]。特别是,一个重要的体重被发现与大量液体积累在术后第二天,尽管负面的术中液体平衡和peroperative严格限制液体(11]。此外,病人,没有人开发心脏衰竭的迹象或症状在术后期间,立即显示,手术后(第一天)显著增加法国血浆浓度(11]。NPs激素/旁分泌因子释放的心脏心肌伸展和过载,调节体液内稳态(12,13]。法国巴黎,从心脏心室分泌和心房利钠肽(ANP),从心脏心房分泌,激活相同的跨膜guanylyl cyclase-A /利钠肽受体(NPR-A或中性)(14- - - - - -17]。除了血管舒张,心血管体内平衡,钠排泄,并抑制醛固酮分泌,越来越认识到,NPs拥有更广泛的生物活性,包括对内皮功能和炎症的影响(18,19]。基因表达和分泌ANP、BNP的上下文中主要研究了心脏疾病相关的神经内分泌和血液动力学的变化(12,13,20.];然而它也指出,法国巴黎的变化发生在急性炎症过程的上下文(19,21- - - - - -24]。

另一个家庭的蛋白质,水通道蛋白(aqp),深入参与的生理反应的流体体积和渗透性的变化(25,26]。aqp广泛分布于各种组织在整个身体和促进osmotically驱动水细胞跨膜运输(25- - - - - -27]。最近,aqp参与水肿发展已经指出。特别是,它已经表明,AQP4的形成和吸收是一个重要的中介从脑实质水肿液28),AQP1和AQP5在肺部水肿可能发挥重要作用[29日]。此外,AQP1和AQP5表达减少肺部炎症(30.,31日]。

我们工作的目的是探讨潜在的肿瘤坏死因子-参与α在ANP的规定,法国巴黎,受体中性蛋白酶,AQP1和AQP5,关键分子参与体液内稳态。为了排除任何血流动力学改变能够调节NPs表达式,我们进行了一项在体外研究中,在人类支气管上皮细胞BEAS-2B。

2。材料和方法

2.1。试剂

人类肿瘤坏死因子-α是来自ImmunoTools GmbH是一家(Friesoythe,德国)。核因子- B (NF - B)抑制剂,湾11 - 7082和QNZ,以及p38增殖蛋白激酶抑制剂(p38 MAPK)某人203580年c-Jun n端激酶1/2物1/2)抑制剂SP 600125和extracellular-signal-regulated激酶1/2 (ERK 1/2)抑制剂u - 0126,是来自圣克鲁斯生物技术有限公司(德国海德堡),溶解在二甲亚砜(DMSO)。人类获得了法国从凤凰欧洲GmbH(德国卡尔斯鲁厄)。地塞米松(DEX)从Sigma-Aldrich(意大利米兰)。兔多克隆抗体对ANP (Abs),中性蛋白酶,AQP1和AQP5以及鼠标单克隆Abβ肌动蛋白和适当的HRP-conjugated二级Abs,买来圣克鲁斯生物技术有限公司(德国海德堡)。针对Phospho-I兔单克隆Abs B -α和Phospho-p38 MAPK购买从细胞信号技术,Inc .(丹弗斯,MA)。

2.2。细胞培养和药物治疗

人类支气管上皮细胞系BEAS-2B从美国购买类型文化集合(写明ATCC)和总是维持在37°C公司5%2在RPMI 1640,补充10%热灭活(1 h 56°C)胎牛血清,1 x Lglutamine,丙酮酸钠1毫米,1 x不必要的氨基酸,青霉素100单位/毫升,0.1毫克/毫升的链霉素(表达载体、米兰、意大利)。48小时之前的研究中,细胞被播种到six-well文化菜300.000 /。肿瘤坏死因子-α是溶解在蒸馏水和使用浓度的10、20、40 ng / mL 24 h。抑制剂,湾11 - 7082、QNZ某人203580 SP 600125和u - 0126 DMSO溶液溶解在0.5%。抗炎糖皮质激素敏捷甲醇溶解在0.1%。独立实验,湾11 - 7082,QNZ,某人203580 SP 600125和u - 0126,敏捷被添加到细胞肿瘤坏死因子-前60分钟α政府在1的浓度μ米湾11 - 7082或敏捷和10μSP 600125 M QNZ,某人203580年,或u - 0126。DMSO溶液或甲醇最终浓度在每一个试验分别为0.005%和0.001%,分别。控制细胞DMSO溶液或甲醇没有任何明显的差异对控制细胞RPMI 1640介质;因此所有这些后者相对治疗比较控制。

2.3。细胞生存能力

肿瘤坏死因子的影响α湾11 - 7082、QNZ某人203580 SP 600125 u - 0126,敏捷,和法国治疗测量标准锥虫蓝吸收试验。细胞培养也通过光学显微镜形态学检查。

2.4。RNA隔离和互补脱氧核糖核酸的合成

细胞总RNA分离使用试剂盒试剂(表达载体、米兰、意大利)根据制造商的指示和1 使用RevertAid H - g是反向转录合成第一链cDNA工具包(Fermentas、汉诺威、MD)和随机引物系统(表达载体、米兰、意大利),根据制造商的指示。

2.5。实时定量SYBR绿色PCR分析

我们采用定量实时SYBR绿色PCR分析(存在)Mx3000P QPCR系统(安捷伦科技、米兰、意大利)评估ANP的表达式(NM_006172),法国(NM_002521),中性蛋白酶(NM_000906), AQP1 (NM_198098)和AQP5 (NM_001651)与ACTB (NM_001101)。序列的寡核苷酸引物用于存在和总结了热循环条件表1。所有的引物设计使用设计师4灯塔软件(Stratagene拉霍亚,CA),从NCBI数据库提供的序列数据公布。反应进行的总量25μ包含250 ng或500 L ng的cDNA、1 x试剂的II SYBR绿色QPCR大师混合,和适当的特定的引物浓度(医疗、意大利米兰)。基因表达数据的比较分析,得到使用ΔΔCt的方法,所述的ABI棱镜7000序列检测系统用户指南32]。琼脂糖凝胶电泳分析被用来检查预测大小扩增子的ANP(160个基点),法国(148个基点),中性蛋白酶(151个基点),AQP1(98个基点),和AQP5(180个基点)。

表1
引物序列,引物浓度,和中存在循环条件。

2.6。免疫印迹分析

总蛋白提取(40μg)分离12%钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和涂抹在硝化纤维膜,使用iBlot印迹干燥系统(表达载体、米兰、意大利)。非特异性结合位点被封锁在Roti-Block(罗斯GmbH,卡尔斯鲁厄,德国)在室温下2 h。一夜之间,细胞膜被涂抹在4°C 1: 100稀释的主要具体Abs和TBST洗。antigen-Ab复杂被孵化的膜在室温下2 h的拨款HRP-conjugated二级Abs和显示使用增强化学发光(ECL)系统由Amersham法玛西亚生物技术(乌普萨拉,瑞典)。

作为蛋白表达内部加载控制和规范化的目的,所有膜随后被剥夺了第一抗体剥离缓冲区(100毫米我,2% SDS, 62.5毫米Tris-HCl, pH值6.8)为30分钟50°C与TBST洗液紧随其后。然后reprobed反膜β肌动蛋白抗体,其次是孵化HRP-conjugated Ab。

2.7。法国巴黎蛋白质浓度培养基

法国巴黎蛋白质浓度测定培养基使用化学发光酶免疫分析法工具包分流BNP(美国圣地亚哥Biosite合并)。人类BNP与该系统检测到的最小数量是1.0 pg / mL。intraassay和interassay变异系数分别为3.1%和4.5%,分别。

2.8。统计分析

结果表示为 三个独立的实验。统计学意义的差异处理和未经处理的细胞被学生的评估t以及。组之间的差异被认为是重要的时候 。

3所示。结果

3.1。肿瘤坏死因子-α有选择地调节ANP、BNP在BEAS-2B细胞中性蛋白酶- 1及其受体表达

我们首先证明BEAS-2B细胞系表达ANP、BNP,中性蛋白酶,AQP1和AQP5。中存在的分析,预测分子大小的片段(图生成1)。确定ANP的表达,法国巴黎,中性蛋白酶影响TNF -αBEAS-2B细胞治疗10、20或40 ng / mL TNF -α24 h。ANP mRNA明显减少,约75% ( ),约40% ( )的控制、治疗后10和20 ng / mL TNF -α,分别。四十ng / mL TNF -α诱导一个upregulation(控制)约20%的ANP的表情,即使不是统计学意义( )(图2(一个))。类似的趋势也观察到蛋白质水平(图2 (b))。法国巴黎mRNA表达明显( 控制的)增加(62%)以来10 ng / mL TNF -α治疗,最大刺激控制(80%)与40 ng / mL(获得 )(图2 (c))。治疗与肿瘤坏死因子-α在上述描述的浓度,也增加了法国巴黎蛋白质分泌培养基( )(图2 (d))。中性蛋白酶- 1基因表达水平显著下降(70 - 80%的控制)后TNF -α暴露在所有使用剂量( )(图2 (e)),平行的减少蛋白表达(图2 (f))。


图1
识别ANP、BNP中性蛋白酶,在BEAS-2B细胞AQP1和AQP5成绩单。qReal-Time使用基因特定的引物进行PCR ANP(巷2),法国(巷3),中性蛋白酶(巷4),AQP1(巷5),砂AQP5在BEAS-2B细胞(巷6)。单波段预测分子大小的ANP(160个基点),法国(148个基点),中性蛋白酶(151个基点),AQP1(98个基点),和AQP5(180个基点)发现了成绩单。莱恩M: DNA分子标记。
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图2
肿瘤坏死因子-α选择性地调节ANP、BNP和中性的表情。BEAS-2B细胞治疗10、20和40 ng / mL TNF -α24 h。ANP ((a)、(b)), ((c)、(d))法国巴黎,和((e)、(f))中性蛋白酶基因表达在mRNA ((a)、(c)和(e)和蛋白质水平((b)、(d)和(f))。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , , , 对未经处理的细胞)。
3.2。NPs, TNF -中性调制α可能需要激活NF - B在BEAS-2B细胞信号通路

众所周知,肿瘤坏死因子-α调节许多基因必不可少的炎症过程,通过多种信号转导途径的激活,包括NF - B (33]。因此,探讨可能的参与NF - B信号通路在肿瘤坏死因子-α介导NPs和中性的监管,我们使用的特定NF-kB抑制剂湾11 - 7082,这减少了NF -的激活 B,通过防止磷酸化的抑制 B -α蛋白质。如图3(一个)肿瘤坏死因子-αANP是完全恢复的差别全身对这些湾11 - 7082(图mRNA和蛋白水平3 (b)),这表明该反应需要NF - 激活途径。关于肿瘤坏死因子-α法国巴黎upregulation全身,这只是部分恢复了湾(图11 - 7082在mRNA水平3 (c)),而在蛋白质水平(图完全恢复3 (d))。相反,肿瘤坏死因子-α全身的减量中性蛋白酶表达不受湾11 - 7082在信使核糖核酸或蛋白质水平(数字3 (e)和3 (f))。

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图3
肿瘤坏死因子-α调制的NPs和NF -中性蛋白酶可能需要激活 B通路。BEAS-2B细胞治疗10、20和40 ng / mL TNF -α单独或结合NF - B抑制剂湾11 - 7082 (1μ米),24 h。ANP ((a)、(b)), ((c)、(d)) BNP ((e)、(f))中性蛋白酶基因表达在mRNA ((a)、(c)和(e)和蛋白质水平((b)、(d) (f)),和(g) Phospho-I B -α蛋白质水平。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆和单克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , , 和控制)。( , , 对湾)。C:控制(未经处理的细胞)。

Ser的免疫印迹分析32磷酸化我 B -α蛋白质的生物化学抑制作用的证据证明湾11 - 7082在NF - B活动(图3 (g))。进一步调查NF -的作用 B在法国巴黎的调制和中性蛋白酶在BEAS-2B细胞后,肿瘤坏死因子-α治疗,我们雇用了NF - 抑制剂QNZ B-DNA绑定,防止免费NF - B从绑定到DNA (34]。获得的结果与这些额外抑制剂,证实了以前的发现获得与湾11 - 7082。特别是,TNF -α全身的巴黎银行上调不是由QNZ恢复在mRNA水平(图4(一)),而它在蛋白质水平(图完全恢复4 (b))。也因此,TNF -α全身的减量中性蛋白酶的表达不受QNZ,要么在信使核糖核酸或蛋白质水平(数字4 (c)和4 (d))。Ser的免疫印迹分析32磷酸化我 B -α蛋白质是生物化学的证据QNZ NF -的抑制作用 B活动(图4 (e))。

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图4
肿瘤坏死因子-α调制的蛋白质水平的法国巴黎和NF -中性蛋白酶可能需要激活 B通路。BEAS-2B细胞治疗10 ng / mL TNF -α单独或结合抑制剂QNZ (10μ米),24 h。((a)、(b)) BNP ((c)、(d))中性蛋白酶基因表达在mRNA((一),(c))和蛋白质((b)、(d))水平,以及(e) Phospho-I B -α蛋白质水平。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆和单克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , 和控制)。( 对QNZ)。C:控制(未经处理的细胞)。
3.3。法国巴黎,TNF -中性调制α可能需要激活MAPKs BEAS-2B细胞信号通路

因为肿瘤坏死因子-α能够激活多种信号转导途径,包括MAPKs,因为p38 MAPK和物的活化参与炎症过程的规定在支气管上皮细胞(35,36),然后我们调查MAPKs途径参与肿瘤坏死因子-α调制的法国巴黎银行和中性的表情。肿瘤坏死因子-α介导老年病法国巴黎没有受到某人的203580或600125 SP, p38 MAPK、物1/2抑制剂,分别时完全恢复的ERK抑制剂半u - 0126(数字5(一个)和5 (b)),这表明ERK 1/2 BNP TNF -需要激活途径α介导的调制。对于中性蛋白酶,TNF -α介导下调完全恢复了所有抑制剂(数据的使用5 (c)和5 (d))。免疫印迹分析用力推180年/用力推182年磷酸化形式- 38 MAPK被证明某人的抑制作用的生物化学证据p38 MAPK活性(图2035805 (e))。

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图5
肿瘤坏死因子-α法国巴黎和中性蛋白酶表达的调制可能需要激活MAPKs通路。BEAS-2B细胞治疗10 ng / mL TNF -α单独或结合10μ某人203580 (p38 MAPK抑制剂)、SP 600125物1/2抑制剂),或u - 0126 (ERK抑制剂1/2),24 h。面板显示:((a)、(b)) BNP ((c)、(d))中性蛋白酶基因表达在mRNA((一),(c))和蛋白质((b)、(d))的水平,和(e) Phospho-p38 MAPK蛋白质水平。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆和单克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,表示为百分比的控制。( , , 与控制)( 与某人)( , 对SP) ( , 对u - 0126)。C:控制(未经处理的细胞)。
3.4。肿瘤坏死因子-α降低AQP1和AQP5表达比阿斯2 b细胞

我们发现,肿瘤坏死因子-α诱导剂量依赖AQP1的表达下调( 在mRNA(图)6(一)(图)和蛋白质水平6 (b)的急剧减少)和AQP5基因表达水平(大约80%的控制)的使用剂量( )(图6 (c)),平行可比趋势在蛋白质水平(图6 (d))。

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图6
肿瘤坏死因子-α降低AQP1和AQP5表达比阿斯2 b细胞。BEAS-2B细胞治疗10、20和40 ng / mL TNF -α24 h。AQP1基因表达((a)、(b))和AQP5 ((c), (d)) mRNA((一),(c))和蛋白质((b)、(d))的水平。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , , 对未经处理的细胞)。
3.5。肿瘤坏死因子-降低AQP1和AQP5表达α不需要激活NF - B在BEAS-2B细胞信号通路

检查可能的参与NF - B在肿瘤坏死因子-α介导下调AQP1和AQP5 BEAS-2B细胞孵化与湾11 - 7082。Cotreatment NF - B抑制剂与TNF -α导致降低AQP1的表达,这是类似于观察TNF -α独自一人(数据7(一)和7 (b)),这表明观察到的反应不需要NF - B激活。相反,co-treatment湾11 - 7082与TNF -α只影响AQP5在蛋白质水平(数字7 (c)和7 (d))。

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肿瘤坏死因子-αdownregulation AQP1和AQP5表达可能需要激活的NF - B通路。BEAS-2B细胞治疗10、20和40 ng / mL TNF -α单独或结合NF - B抑制剂湾11 - 7082 (1μ米),24 h。AQP1基因表达((a)、(b))和AQP5 ((c), (d)) mRNA((一),(c))和蛋白质((b)、(d))的水平。西方墨迹了通过使用特定的兔多克隆Abs。这些墨迹被绑定的Ab和reprobed鼠标反β肌动蛋白,确认装载。西方的屁股代表三个独立的实验。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , , 与控制;和 对湾)。C:控制(未经处理的细胞)。
3.6。法国影响ANP、中性和AQP1和AQP5在BEAS-2B细胞信使rna表达

为了确定一个可能直接参与法国巴黎ANP的基因表达,中性蛋白酶和AQP1或AQP5 BEAS-2B细胞处理0.01 nM BNP。这个浓度以前发现积累在培养基40 ng / mL TNF -α治疗,剂量诱导的最大影响的研究基因的表达。法国政府诱导显著( 控制)增加(100%)(图ANP mRNA水平8(一个)(图),不影响中性表达式8 (b)),而诱导显著降低AQP1 mRNA水平(控制)的45% ( )(图8 (c))。AQP5的趋势减少也观察到的基因表达,即使不是统计学意义( )(图8 (d))。

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法国影响ANP,中性蛋白酶,AQP1和AQP5表达。BEAS-2B细胞治疗0.01 nM法国24 h。直方图显示ANP(一),(b)中性蛋白酶,(c) AQP1和(d) AQP5在mRNA水平基因表达。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( 对未经处理的细胞)。
3.7。地塞米松(DEX)对法国信使rna和蛋白质水平BEAS-2B细胞

为了研究抗炎药敏捷的能力影响TNF -α介导老年病的法国信使rna和蛋白质水平,BEAS-2B细胞治疗1μM敏捷。如图9,敏捷诱导下调法国和蛋白质表达水平,单独或结合40 ng / mL TNF -α( ),证明这糖皮质激素恢复TNF -的能力α效果。


图9
地塞米松对BNP表达的影响。BEAS-2B细胞治疗1μ地塞米松(DEX)和40 ng / mL TNF -α单独或结合敏捷,24 h。直方图显示法国基因表达在mRNA(灰条)和蛋白质(黑条)水平。所有柱状图显示 三种不同的文化的每一个测试一式四份,并表示百分比的控制( , , 和控制)。C:控制(未经处理的细胞)。

4所示。讨论

Postoperative-fluid保留是一种严重的并发症在接受大手术的患者(1- - - - - -4]。分子的复杂网络参与这样一个严重surgery-induced条件仍然知之甚少。大手术之后, 最初的主要促炎细胞因子释放的受损组织,刺激生产和释放细胞因子,负责诱导系统性变化称为急性期反应(5,10]。因此,它是合理的假设 参与的各种原因中液体潴留和非常重要的理解机制参与这样一个范围。在目前的研究中我们展示了,据我们所知,第一次,TNF -α调节的表达ANP、BNP中性蛋白酶,AQP1、和AQP5在人类支气管上皮细胞,BEAS-2B,通过不同的参与NF - B和MAPKs信号通路激活。这里,我们也提供了第一个证明人类支气管上皮细胞表达ANP、BNP,中性蛋白酶,AQP1和BNP能够调节AQP1的表达。

NPs和中性的观察表达表明这些分子的自分泌和/或旁分泌功能和显示重要作用NPs在一些生物功能,包括流体运动在气道上皮细胞,调节支气管松弛(37)、血管舒张和肺血管通透性。前的过程中,角色ANP、BNP可能类似于虚拟的NPs transepithelial离子通量在脉络丛38肾脏],[39),结肠(40),和视网膜41]。

观察到的肿瘤坏死因子-α选择性地调节能力ANP、BNP和中性蛋白酶基因表达BEAS-2B细胞系是特别感兴趣的,因为它表明炎症改变NPs表达水平。特别是,法国巴黎表达显著上调,TNF -后蛋白质的分泌α独立处理表明,该调制可能发生炎症的血流动力学影响和应该考虑一个extracardiac BNP海拔的原因。除此之外,在体外在大鼠心肌细胞进行的研究表明不仅血流动力学因素,而且神经体液因素,激活在心力衰竭,如血管紧张素ⅱ、内皮素和细胞因子,导致法国分泌42- - - - - -44]。此外,在心血管疾病患者血浆BNP水平也被证明是受慢性炎症(24)和法国巴黎等离子体水平提出了选择性增加炎症的一般特征(19]。没有任何明显的肿瘤坏死因子-αdose-depending BNP基因表达增加,我们观察到在我们的系统可能是由于自分泌的负反馈行动由法国巴黎本身,在BEAS-2B绑定中性蛋白酶- 1受体表达细胞。

肿瘤坏死因子-后BNPup-regulation的生物学作用α治疗仍有待阐明。然而,因为它已经证明了法国调节生产的主要炎性分子,如il - 12、il - 10,白三烯B,前列腺素E2在人类巨噬细胞(45)和BEAS-2B能够释放炎性分子(46],它可以合理假设观察到法国巴黎的增加,后TNF -α治疗,可能刺激生产和释放的细胞因子也从人类上皮支气管细胞。此外,在在体外研究中,一个强有力的法国巴黎抑制作用在生产的糖皮质激素抗炎激素皮质醇被描述47]。因此,法国可以被认为是一种促炎的分子靶细胞的诱导细胞因子的表达,抑制抗炎激素的分泌。因此,观察到法国后上调TNF -α治疗可能赞成其余炎症状态。增加生产和释放特定的细胞因子,导致系统性变化称为急性期反应(5,8,10引起的, 通过法国巴黎老年病也可能因此发生。

最近,一位法国崛起一直在观察肺癌患者肺叶切除术(11]。特别是病人,没有人开发心脏衰竭的迹象或症状在术后期间,显示早期显著增加,1天,后立即手术,之后的血浆BNP浓度在术后第二天明显体重增加与大量液体积累,尽管负面的术中液体平衡和peroperative严格限制液体(11]。我们建议这样可以增加,至少部分解释了促炎细胞因子的能力,如肿瘤坏死因子-α上调BNP基因表达和分泌,和这老年病可以提高主要14日早hyperinflammatory响应,对于组织修复和宿主防御(5]。

观察地塞米松能力完全恢复TNF -α全身的法国老年病表明这种抗糖皮质激素可能防止BNP-related效果。

关于ANP,观察到的重要信使rna和蛋白质水平的下调后10日20 ng / mL TNF -α治疗也表明,这种情况可能影响炎症状态。事实上,ANP政府决定抗炎作用在气道上皮细胞48在调节炎症反应方面,扮演重要的角色。ANP抗炎等考虑行动,我们推测,观察TNF -α全身的ANP下调可能同意提高炎症状态。不同于上述报道剂量,40 ng / mL TNF -α政府诱导ANP老年病,即使没有统计学意义。我们认为,这一结果可能是由于直接巴黎银行参与。事实上,明显ANP上调剂量累积的法国治疗后观察培养基后40 ng / mL TNF -α治疗。

观察到的选择性调制ANP、BNP基因表达在肿瘤坏死因子-α治疗,符合其他的研究在不同的细胞模型19,49,50)可能与不同的监管机制在转录水平,建议由我们观察在不同的NF -参与 B和MAPKs信号通路。特别是,我们表明,ANP下调,TNF -α通过NF -介导的,发生 B激活途径,而法国调制要求ERK 1/2激活途径。NF - B参与TNF -α全身的ANP下调并不反对这种转录因子的促炎作用,ANP分子产生抗炎效应在气道上皮细胞(48]。关于NF -的关联机制 B ANP的差别,对这些基因的基因表达,我们建议可以是类似于最近提出了纤维母细胞生长因子10 (FGF-10),在NF -κB激活可能导致基因表达降低,通过招募抑制性因素特定基因启动子(51]。

ANP、BNP生物功能发生通过绑定到相同的中性(13]。在这里,我们表明,据我们所知,第一次TNF -α能力表达下调中性mRNA和蛋白表达BEAS-2B细胞和通过MAPKs信号通路激活这一条例的发生。复杂的后果TNF -α全身的NPs和中性观察调制,在BEAS-2B绑定到相同的受体细胞,很难预测会产生网络效应在体外和在活的有机体内,之间的关系也存在NPs可能自分泌调节和/或不同的细胞因子激活的影响由法国巴黎和TNF -α。我们假设TNF -α中性蛋白酶,差别全身对这些平行的老年病法国巴黎,也可能导致这种肽的旁分泌作用,可能在肺微血管内皮细胞,中性蛋白酶是人口表示18]。在这种背景下,我们推测,当地修改在法国巴黎的感应或ANP TNF -α在人类支气管上皮细胞的屏障通透性可能会改变肺微循环。因此,肿瘤坏死因子-α作用于上皮细胞,也可能间接导致内皮细胞屏障功能障碍和渗透率,提高当地生产的促炎BNP和显示抗炎ANP的表情。此外,外生合成ANP已被证明保护内皮屏障功能障碍的在活的有机体内和在体外肺损伤模型(18),这些实验观察的治疗相关性已被证明在重症监护的病人没有心脏病,在静脉ANP灌注减少肺血管通透性和肺水肿(18]。

关于aqp,我们证明了BEAS-2B细胞AQP1和AQP5表达TNF -α直接会使他们在mRNA和蛋白表达水平。关于AQP1,还额外BNP-mediated TNF -α参与可以提出。事实上,AQP1下调观察法国治疗剂量累积的培养基后40 ng / mL TNF -α治疗。背后的机制aqp监管是相当大的兴趣。几个aqp最近展示了接受复杂的监管(27]。我们的结果表明AQP1和APQ5受到炎症调节,添加一个重要的信息在这个上下文。与其他研究结果一致,描述显著降低AQP1的表达水平和AQP5在小鼠肺(30.和老鼠的肺上皮细胞31日]。观察TNF -的生物学意义α全身AQP1和AQP5下调,目前不清楚。它最近建议减少aqp可能发挥重要作用的发展肺部水肿(52),这是与液体潴留有关。因此,我们推测,TNF -α全身AQP1和AQP5下调可能发挥作用在流体积累过剩,有关重大手术。

5。结论

总之,我们的研究结果提供的证据表明,在人类支气管上皮细胞BEAS-2B, TNF -α有选择地调节mRNA和蛋白表达水平不同的分子参与体液内稳态:ANP、BNP及其受体中性蛋白酶,AQP1和AQP5。此外,我们的数据指出,改变,特别是影响NPs表达式,独立于发生血流动力学的影响,应该考虑炎症extracardiac BNP海拔的原因,添加小说中一个重要的信息关于NPs和炎症的研究领域。此外,我们证明了这种调制发生通过参与不同的NK - B和MAPKs信号通路。最后,我们建议炎症中AQP1和AQP5的监管机制。因此,在这个探索性研究,我们推测 可能参与postoperative-fluid保留相关重大手术。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

承认

作者感谢罗伯塔Frosini太太出色的技术援助。