文摘

之间的密切关系TLR-2表达增加血液单核细胞和胰岛素抵抗在RA患者显示在这项研究中。传统代谢紊乱的风险因素,包括腰部情况,身体质量指数(BMI)、甘油三酯(TG)和TG比高密度脂蛋白(HDL)胆固醇与HOMA密切相关(自稳态模型评估)指数在非糖尿病的RA患者。在外周血单核细胞表达TLR2,刺激与肽聚糖称为TLR2受体激动剂,与HOMA指数密切相关,肿瘤坏死因子-α和il - 6的浓度。因此,TLR-2受体及其相关炎性细胞因子可能是潜在的治疗目标在管理RA患者的胰岛素抵抗。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种复杂的疾病,其发病机理仍然未知。RA患者全身炎症,以及从心血管疾病发病率和死亡率的增加1,2]。各种风险因素已确定导致RA患者的动脉粥样硬化(3,4]。胰岛素抵抗是其中最重要的危险因素。近年来关注增加炎症相关的胰岛素抵抗[5]。越来越多的研究阐明几个可能的机制,包括先天免疫系统的激活。

toll样受体(通常),先天免疫系统的关键分子组件,是中央对先天系统相关的胰岛素抵抗。十二个成员通常已确定在哺乳动物6]。主要的网站通常表现为细胞的先天免疫系统,特别是在单核细胞(7]。单核细胞参与炎症和胰岛素抵抗的发展(8- - - - - -10]。tlr识别大量配体;例如,TLR2和TLR4假设识别组件等细菌细胞壁的肽聚糖和脂多糖,分别与lipid-containing分子(11]。通常参与胰岛素抵抗的发病机制在动物模型(12,13)和调节血管炎症和胰岛素抵抗在食源性肥胖14]。另外,通常可以链接先天免疫和脂肪段胰岛素抵抗[12]。激活脂肪细胞通常是与胰岛素抵抗的发生在肥胖和2型糖尿病15]。提高TLR表达和信号也观察到在胰岛素抵抗个体肌肉(16]。高葡萄糖能促使TLR2和TLR4的表达,活动,通过核转录因子(NF)和炎症κB (17]。Dasu Jialal进一步报道,游离脂肪酸的高葡萄糖可能增强单核细胞炎症通过通常18]。饱和脂肪酸可能作为配体数TLR家族成员(19,20.]。此外,TLR2,结扎后与特定的配体,可以激活信号转导,促进白介素6 (IL)生产,以及调节初始事件相关的脂肪段肌肉中胰岛素抵抗[21]。肿瘤坏死因子-α(TNF -α)刺激也建议干扰胰岛素信号转导和诱导胰岛素抵抗[22]。此外,炎症激酶I-kappa-B激酶-β(本土知识κβ)有助于胰岛素抵抗通过激活NF -κB和诱发生产各种炎性细胞因子,包括TNF -α和il - 6 (23,24]。通常这样可能调节炎症和胰岛素抵抗后结扎与特定的配体。尽管许多研究都表明,TLR2, TLR4-dependent信号参与胰岛素抵抗的发展,数据在一个类似的机制在RA患者胰岛素抵抗的发病机制仍缺乏。

通常被描述为激活参与了RA的发病机制,TLR2和TLR4可能炎症的重要受体在启动及延续周期关节炎(25]。通常存在组织synoviocytes和血液单核细胞被雇来的炎症和参与滑膜炎症的发病机制(26- - - - - -29日]。因此,TLRs-inducing炎症级联可能有助于RA患者的胰岛素抵抗的发病机制。然而,通常与胰岛素抵抗之间的关系的证据在RA患者还是很少见的。这次调查测试的假设TLR2和TLR4的表达单核细胞和相关的炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子-α和il - 6,可能与RA患者的胰岛素抵抗相关。值得注意的是,这项研究排除了RA患者糖尿病。TLR2仍然扮演了一个角色在RA患者胰岛素抵抗的发展甚至在没有高血糖的情况下,这是一个众所周知的代谢综合征的危险因素。

2。材料和方法

2.1。研究设计和主题

研究人口包括连续30 RA患者,满足美国风湿病学院(ACR) 1987分类标准30.)和10个健康志愿者。与糖尿病患者和正常对照组被排除在外。书面通知同意之前从患者获得注册。这项研究是在人类研究同意批准的指导方针在我们医院伦理委员会。人口数据、临床特点和现有药物的患者记录的两个独立的观察者。

2.2。评估

腰围测量脐水平。隔夜空腹血液样本被送往确定血糖、血清胰岛素水平,甘油三酯(TG)、胆固醇和概要文件包括总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇。灵敏度高c反应蛋白和魏氏红细胞沉降率测定E-DA医院临床实验室。RA疾病活动测量使用在28个关节疾病活动评分。测量胰岛素抵抗,自稳态模型评估(HOMA)所描述的马修斯et al。31日),是使用公式计算:([空腹血浆葡萄糖(更易/ L)×空腹血浆胰岛素(μU /毫升)]/ 22.5)。单核细胞染色TLR2和TLR4表达进行全血的RA患者和健康对照组与肽聚糖前和刺激金黄色葡萄球菌(10μ美国密苏里州g / mL, Sigma-Aldrich)或脂多糖大肠杆菌O26: B6 (10 ng / mL, Sigma-Aldrich)作为TLR2和TLR4的配体。全血标本孵化与抗体TLR2(美国CA eBioscience)或TLR4 (PE标记,BioLegend)和anti-CD14共轭和FITC (BD生物科学、钙、美国)在室温下30分钟的聚苯乙烯圆底猎鹰管(BD生物科学)。适当的同形像也被控制。两毫升工作1 x BD FACSTM赖氨酸的解决方案是添加到反应管10分钟在室温下裂解红细胞,然后多余的游离抗体用PBS(磷酸盐缓冲剂盐水)。在PBS和分析细胞终于resuspended流式细胞分析仪(becton dickinson Immunocytometry系统,圣何塞,CA,美国)通过计算10000个细胞。表达式的计算通常意味着荧光强度(MFI)和CD14的百分比⁺单核细胞TLR2和TLR4表达使用WinMDI98软件(BD生物科学)。全血样品收集来自RA患者和健康志愿者通过静脉穿刺到肝素包含与1 x hbs缓冲管和稀释1:1的比例。血液样本孵化公司的5%₂在37°C 24-well板使用10μg / mL肽聚糖或1 ng / mL脂多糖或媒介。通过离心细胞被颗粒状(400 g×2分钟),和上层清液游离储存在细胞因子测定−70°C。il - 6和TNF -的浓度α细胞上清液测定使用ELISA试剂盒(Bender MedSystems、钙、美国)。

2.3。统计分析

所有使用SPSS统计分析软件(版本15.0;美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。卡方检验或确切概率法,必要时,是用来分类值和Wilcoxon排名为连续变量和测试。斯皮尔曼等级相关的计算评估变量之间的关系。只有值小于0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。人口和正常对照组和RA患者的临床特征

RA患者共30岁(女性和5男性25日)36到82年入学和10个健康对照组51岁到64岁也招募了。人口学特征、血脂、心血管危险因素,RA患者和正常对照组和HOMA指数展示在表1。年龄、性别、收缩压、舒张压、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯、体重指数和血糖组之间没有显著差异。在RA患者HOMA指数明显高于健康受试者(RA患者和健康者,图1)。百分之八十三的RA患者当前用户的皮质类固醇,但累积剂量的类固醇与胰岛素抵抗患者无显著相关性()。数据表明,或许更好地控制炎症接受类固醇治疗后可能会抵消有害糖皮质激素对葡萄糖代谢的影响。此外,正如所预期的那样,HSCRP(灵敏度高c反应蛋白)和ESR(红细胞沉降率)显示浓度明显高于在RA患者与正常对照组相比和、职责)。

3.2。HOMA指数和腰之间的关系,BMI, TG, TG比非糖尿病的RA患者高密度脂蛋白胆固醇

HOMA与腰指数显著相关()、体重指数(,)、TG (,)和TG与高密度脂蛋白胆固醇的比值(,)在非糖尿病的RA患者(图2)。然而,HOMA指数不相关与总胆固醇(,)和低密度脂蛋白胆固醇(,在RA患者。这些结果暗示监控传统危险因素也可能是重要的管理RA患者的胰岛素抵抗,即使没有高血糖。

3.3。HOMA指数和TLR2表达式之间的关系在正常对照组和RA患者单核细胞

如图3与TLR2表达式,HOMA指数显著相关(CD14的百分比计算⁺单核细胞表达TLR2)刺激后10μ克/毫升的肽聚糖(,,图3(一个)),但不是TLR2表达式之前刺激由肽聚糖(,)。相比之下,HOMA指数没有明显与TLR2表达单核细胞刺激后10μ克/毫升的肽聚糖在正常对照组(,,图3 (b))。实验结果显示HOMA指数相关性不显著,在单核细胞TLR4表达(,)或刺激10 ng / mL脂多糖(,,图3 (c))。

如图4HOMA指数显著相关的褶皱增加TLR2表达式计算(MFI)在RA患者单核细胞刺激后10μg / mL肽聚糖(,,图4(一)),而未能显示在正常对照组显著相关(,,图4 (b))。此外,之间没有显著相关性HOMA指数和TLR4的表达(MFI)计算与10 ng / mL脂多糖刺激后(,,图4 (c))。

3.4。肿瘤坏死因子之间的关系,α浓度和TLR2表达单核细胞与肽聚糖刺激后在正常控制和RA患者

如图5TLR2表达式(CD14的百分比计算⁺单核细胞表达与肿瘤坏死因子- TLR2)显著相关α与10浓度后刺激μ克/毫升的肽聚糖(,),而未能显示在正常对照组显著相关()。此外,HOMA指数与TNF -的浓度显著相关α(在RA患者。

3.5。在单核细胞il - 6浓度和TLR2表达式之间的关系与肽聚糖刺激后在正常控制和RA患者

如图6TLR2表达式(CD14的百分比计算⁺单核细胞表达TLR2)与il - 6浓度与10刺激后显著相关μ克/毫升的肽聚糖(在RA患者),但没有显著的健康志愿者()。此外,HOMA指数与il - 6的浓度显著相关(在RA患者。

4所示。讨论

本研究的主要发现是,TLR2表达式,与肽聚糖刺激后,显示与RA患者的胰岛素抵抗显著相关高血糖的缺失。类风湿性关节炎是一种最常见的自身免疫性疾病,影响约0.5 -1%的成年人口。RA的标志是持久polyarticular主要影响小关节滑膜炎。RA患者增加了动脉粥样硬化等心血管疾病发病率和死亡率比没有RA患者(1]。系统性炎症和胰岛素抵抗都是据报道重要的球员在动脉粥样硬化的发展32]。胰岛素抵抗被认为有助于增加心血管风险一般人群(33,34]。炎症已被确定为基本在RA患者胰岛素抵抗[5,35]。炎症通路可以集成导致胰岛素抵抗通过激活膜受体如通常(12,36,37]。通常是至关重要的入侵病原体的识别和激活后续的免疫反应。刺激,通常诱导激活NF -κB和增殖蛋白激酶(MAPK)和炎性细胞因子的表达36,38]。棕榈酸酯治疗分化C2C12肌管,通过TLR2激活,导致时间insulin-activated抑制信号转导(21]。TLR2表达式可以拯救细胞的抑制活化的MAPK8和改善胰岛素抵抗39]。TLR2食源性代谢综合征是至关重要的,因为老鼠缺乏TLR2大大防止食源性肥胖及胰岛素抵抗[40]。此外,在TLR2受体基因多态性与2型糖尿病高危人群(41,42]。总的来说,TLR2可能是一个关键炎症通路之间的调制器和胰岛素抵抗等代谢紊乱。

许多因素参与TLR2的表达和激活。肥胖和2型糖尿病与增加TLR2的表达式(43]。肥胖会诱发c-Jun n端激酶(物)活动增加(44,45)这是激活炎性细胞因子,游离脂肪酸(22),激活NF -κB,炎症介质,包括TNF -α和il - 6,可能导致胰岛素抵抗[23,24]。此外,在肥胖个体中游离脂肪酸和TG和动物可能是重要的胰岛素抵抗的病因46]。高葡萄糖诱导炎性细胞因子,趋化因子,p38 MAPK, NF -κB活动(47- - - - - -52],TLR2表达式(17]。最近,Dasu Jialal进一步表明,游离脂肪酸的高葡萄糖增强单核细胞炎症通过通常(18]。总的来说,通常诱导炎症通路可能大大加剧胰岛素抵抗,特别是肥胖相关疾病的存在或高血糖。然而,罕见的数据存在描述的角色通常在胰岛素抵抗的发展缺乏提高RA患者的血糖。目前的研究发现,TLR2在循环CD14表达⁺单核细胞,与肽聚糖刺激后,在非糖尿病的RA患者与HOMA指数显著相关。此外,TLR2的表达,在刺激与肽聚糖,TNF -与水平α和il - 6。HOMA指数也显著与il - 6和TNF -的浓度α在RA患者。这些数据暗示TLR2可能导致胰岛素抵抗的形成在RA患者并发高血糖。此外,HOMA指数的显著相关性与TG和TG与RA患者高密度脂蛋白的比值与先前文献相一致。腰情况和BMI作为参数测量,评估肥胖,显示本研究与HOMA指数显著相关。控制肥胖的因此也可能是治疗RA患者的关键在高胰岛素抵抗的风险。进一步的研究需要阐明的详细作用肽聚糖或其他TLR2配体在胰岛素抵抗的发生。这项研究表明体重指数、腰,TG, TG高密度脂蛋白比非糖尿病的RA患者的HOMA指数显著相关。这些发现符合先前的调查显示,胰岛素抵抗与低高密度脂蛋白胆固醇和高TG在类风湿性关节炎患者53,54]。因此,所谓的传统危险因素也需要密切关注和认真对待。

5。结论

结果表明之间的密切关系HOMA指数和TLR2表达单核细胞和炎性细胞因子如TNF -α和il - 6可以提供治疗干预措施对非糖尿病的RA患者的胰岛素抵抗。治疗等传统因素BMI、腰围、TG、和TG与高密度脂蛋白胆固醇的比值是至关重要的减少胰岛素抵抗的形成在RA患者中,即使没有高血糖。这项研究可能会导致更好的理解之间的关系TLR2表达和RA患者的胰岛素抵抗。进一步的研究需要阐明TLR2的角色在活的有机体内。

缩写

ESR:	红细胞沉降率
5:	自稳态模型评估
HSCRP:	灵敏度高c反应蛋白
本土知识κβ:	炎症激酶I-kappa-B激酶-β
il - 6:	白细胞介素- 6
物:	小君n端激酶
MAPK:	增殖蛋白激酶
小额信贷机构:	平均荧光强度
NF -κB:	核因子-κB
PBS:	磷酸盐缓冲剂盐水
类风湿性关节炎:	类风湿性关节炎
TG:	甘油三酸酯
TLR:	toll样受体
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

S.-W。小王进行大部分的实验和数据分析。T.-M。林和学术界。王做的一些实验。h。刘翔参加了研究设计。J.-Y。Houng监督的研究。所有作者阅读和批准了期末论文。

确认

作者想感谢所有参与者的合作,以及在E-DA医院门诊部门的员工对他们的援助。本研究支持的科研补助金(EDAHP98018) E-DA医院。