文摘

本研究的目的是评估的贡献过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR -β/δ)在牙周炎动物模型。男性Sprague-Dawley老鼠轻麻醉与pentobarbitone(35毫克/公斤)。无菌,2:0黑色丝线编织的子宫颈周围放置左下角第一摩尔和打结内侧。动物收到GW0742(0.3毫克/公斤,10% DMSO,结扎后ip位置和每日八天)。在第八天,gingivomucosal组织环绕下颌第一磨牙是删除。一个第八天放置结扎后,我们评估(1)NF -κB表达;(2)细胞因子表达式,表达式(3)进气阀打开,(5)酪氨酸硝化,(6)细胞凋亡,(8)gingivomucosal组织损伤的程度。管理GW0742显著降低炎症的所有参数如上所述。总的来说,这些结果说明GW0742施加在实验性牙周炎的抗炎作用,能改善组织损伤。

1。介绍

牙周疾病是一个炎症过程涉及进步、情景性牙周附着装置的损失,导致最终在易感病人的牙齿脱落。

牙周病的发生和发展取决于病原菌的存在,主机响应和危险因素。这些危险因素包括系统性影响(如控制不佳或不受控制的糖尿病),外部影响(如吸烟),内在因素,以及当地的因素。它们包括口腔卫生、性别、种族、社会经济地位、年龄、全身健康状况,使用药物,吸烟、酒精和药物滥用。

牙周疾病的炎症反应包括激活白细胞,中性粒细胞,T淋巴细胞,浆细胞和抗体和化学炎症介质的释放,包括细胞因子、趋化因子、c反应蛋白(1]。

最初的增加存在中性粒细胞的网站是紧随其后的是中性粒细胞和巨噬细胞释放的细胞因子。化学介质释放包括肿瘤坏死因子-α(TNF -α),(il - 1)及前列腺素(2]。炎症过程包括刺激成纤维细胞的il - 1的分泌基质金属蛋白酶(mmp,胶原酶是最突出的)多形核中性粒细胞。基质金属蛋白酶是负责胶原蛋白分解增加,TNF -α主要负责增加破骨细胞活动导致骨吸收(3]。核因子的T淋巴细胞分泌受体激活kappa-B配体(RANKL),参与破骨细胞活动和,因此,骨吸收(4]。

转录因子家族称为过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs)最近对自己感兴趣的焦点可能参与调节炎症和免疫反应(5]。特别是,PPARα和PPARγ抑制炎症基因表达的激活,会干扰促炎的转录因子信号通路在血管和炎症细胞。相比之下,PPAR的角色β/δ炎症和免疫调节才刚刚新兴(6]。

一般来说,PPARs必须由配体激活来刺激他们的目标基因的表达。这些受体激动剂可以合成分子,如药物用于治疗高甘油三酯血症和胰岛素抵抗,或自然生理配体,如脂肪酸、类花生酸(7]。GW0742,可以作为配体的PPAR -β/δ。特别是,据报道,PPAR -β/δ配体可以抑制多种促炎细胞因子的表达,如肿瘤坏死因子-α和il - 1β、血管细胞粘附molecule-1 platelet-activating因子(PAF)参谋长受体,和环氧合酶(COX) 2代(8]。

在这项研究中,我们想调查的灯是否牙周炎的炎症过程可能会限制发展的影响分析GW0742合成的高亲和性PPAR -配体β/δ。特别是,获得更好的洞察(s)的作用机制,我们研究了PPAR -的影响β/δ炎症反应的受体激动剂第二端点:(1)组织学损伤,(2)骨质疏松(摄影),(3)细胞因子表达式(4)硝基酪氨酸和诱导一氧化氮合酶(间接宾语)表达式,和(5)细胞凋亡。

2。材料和方法

2.1。外科手术

男性Sprague-Dawley老鼠(280 - 400 g)轻与手术麻醉剂量的钠pentobarbitone(35毫克/公斤)。无菌,2:0黑色丝线编织的子宫颈周围放置左下角第一摩尔和打结内侧如前所述[9]。老鼠从麻醉中苏醒过来后,他们被允许吃商业实验室食品和饮料自来水随意。动物保健和协议是符合意大利法规保护动物用于实验和其他科学(D.M. 116192)以及欧洲经济共同体规则(O.J.。L 12/18/1986 358/1)。动物和动物保健和研究协议被批准的机构用户委员会大学的墨西拿,意大利墨西拿。

2.2。实验小组

老鼠被随机分配到下面的组织。(我)结扎+车辆组:大鼠受到ligature-induced牙周炎,和动物收到车辆i.p。(10% DMSO 1 h结扎后放置和日常治疗八天)。(2)结扎+ GW0742组:大鼠受到ligature-induced牙周炎,和动物收到GW0742(0.3毫克/公斤,10% DMSO,结扎后ip位置和每日八天)。

在牙周炎的结扎诱导后8天,老鼠( 从每组每个参数)牺牲为了评估复合在急性损伤的影响。不受结扎右侧是用作控制。

在另一组实验中包括一个剂量反应为了评估GW0742治疗的不同影响。以下组用于这一目的。(我)结扎+车辆组:大鼠受到ligature-induced牙周炎,和动物收到车辆i.p。(10% DMSO 1 h结扎后放置和日常治疗八天)。(2)结扎+ GW0742组:大鼠受到ligature-induced牙周炎,和动物收到GW0742(0.1毫克/公斤,10% DMSO,结扎后ip位置和每日八天)。(3)结扎+ GW0742组:大鼠受到ligature-induced牙周炎,和动物收到GW0742(0.03毫克/公斤,10% DMSO,结扎后ip位置和每日八天)。

2.3。组织学检查

组织病理学检查、活检齿龈和粘膜组织从口腔和牙齿的舌方面被结扎诱导后的8天牙周炎。组织切片在neutral-buffered 10%甲醛固定为5天,嵌入在石蜡和分段。面向部分,纵向从牙冠,与三色的染色和haematoxylin-eosin污渍。gingivomucosal部分沾三色的染色,浸润白细胞的总数(如中性粒细胞和单核细胞)在皮质间隙空间从齿龈和粘膜组织定量评估通过计算在20大功率领域浸润白细胞的数量。

2.4。射线照相法

影像学检查在结扎后第八天位置是决定性如前所述9]。下颚放在一个射线照相框在x射线源的90厘米的距离。射线分析正常和结扎的下颚是由x光机(飞利浦X12德国)与40 kW曝光,持续0.01秒。

2.5。测量血管渗透性的伊文思蓝外渗

血管通透性是决定性如前所述10]。简单,动物收到伊文思蓝(2.5%生理盐水溶解,50毫克/公斤)的剂量通过股静脉导管。在切除,伊文思蓝gingivomucosal组织样本提取1毫升甲酰胺48 h在室温下进行光度测定620海里,表示为μg / g gingivomucosal组织(10]。

2.6。牙槽骨丧失的测量

的距离cementoenamel结的第一磨牙的牙槽嵴测量低的改性方法。录音是沿着轴的中位数的舌表面中央的和mediolingulal根源的第一左和右臼齿如前所述。这些测量是由一个独立的侦探不知道治疗方案。牙槽骨丧失结扎诱导是表示为一个左派和右派的区别。

2.7。髓过氧化物酶活性

髓过氧化物酶活动,多形核白细胞(中性粒细胞)积累的一个指标,决心在gingivomucosal组织,如前所述11]。髓过氧化物酶活动被定义为酶降解的数量1μ摩尔/分钟37°C和表达的过氧化milliunits / g湿组织。

2.8。免疫组织化学定位il - 1β,进气阀打开,硝基酪氨酸,Fas-L、伯灵顿和bcl - 2

在实验的最后,组织固定在10% (w / v) PBS-buffered甲醛、和8μ部分从石蜡包埋组织准备。deparaffinization之后,内源性过氧化物酶就熄了0.3% (v / v)过氧化氢在60% (v / v)甲醇为30分钟。部分是permeabilized 0.1% (w / v)特里同x - 100在PBS为20分钟。非特异性吸附被孵化最小化的部分在2% (v / v)正常山羊血清在PBS为20分钟。内源性生物素-抗生物素蛋白-结合位点被顺序孵化15分钟与生物素亲和素(DBA,意大利米兰),分别。一夜之间,部分被孵化与antinitrotyrosine兔多克隆抗体(1:500年PBS, v / v)或anti-iNOS抗体(1:500年PBS, v / v)或5),anti-IL-1β多克隆抗体(圣克鲁斯生物技术,1:500在PBS, v / v),与anti-Fas-L多克隆抗体(圣克鲁斯生物技术,1:500年在PBS, v / v),与anti-Bax多克隆抗体(圣克鲁斯生物技术,1:500年在PBS, v / v),或与anti-Bcl-2多克隆抗体(圣克鲁斯生物技术,1:500年在PBS, v / v)。部分是用PBS和孵化二级抗体。特定的标签是发现biotin-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白和avidin-biotin过氧化物酶复杂(DBA、米兰、意大利)。为了确认硝基酪氨酸是特定的免疫反应,部分也主要抗体孵育(antinitrotyrosine)存在过剩的硝基酪氨酸(10毫米)来验证绑定特异性。验证伯灵顿的结合特异性,bcl - 2,进气阀打开,il - 1β,部分也只有主孵化抗体(无二次)或只有二级抗体(无主)。在这些情况下,没有发现阳性染色的部分表明在所有实验进行免疫反应是积极的。免疫细胞化学(照片 从每个样本收集的所有照片在每个实验组大鼠)评估光密度分析通过使用Optilab Graftek软件Macintosh个人电脑。

2.9。免疫印迹分析IkB -αNF -κB,进气阀打开,伯灵顿和bcl - 2

总之,gingivomucosal组织从每个老鼠都悬浮在提取缓冲包含0.2毫米phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF), 0.15μ20 M抑肽素,μM亮抑酶肽,1μ米原钒酸钠,均质最高设置为2分钟,和离心机在4°C 1000 g 10分钟。浮在表面的胞质分数表示。包含丰富的颗粒,核,在缓冲resuspended包含1% Triton x - 100 B, 150毫米氯化钠,10毫米Tris-HCl, pH值7.4,1毫米EGTA, EDTA 1毫米,0.2毫米PMSF, 20米亮抑酶肽,0.2毫米原钒酸钠。在15000 g离心后30分钟在4°C,包含核蛋白质的上层清液储存在−80°C进行进一步分析。蛋白质浓度测定的生物,Rad蛋白质化验(Bio-Rad、米兰、意大利)。德国产业投资银行——的水平α,进气阀打开,伯灵顿,和bcl - 2在胞质量化分数,NF -κB p65水平量化在核分数。硝基被封锁的膜1 x PBS, 5% (w / v)脱脂奶粉40分钟在室温下,他们随后探测与特定的抗体IkB -α(1:1000;圣克鲁斯生物技术有限公司),anti-iNOS(1: 1000)信号转导,anti-Bax(圣克鲁斯生物技术,1:500),和anti-Bcl-2(圣克鲁斯生物技术,1:500)或反NF -κB p65 (1: 1000;圣克鲁斯生物技术)在1 x PBS, 5% (w / v)脱脂奶粉,一夜之间在4°C和0.1%渐变20。膜是孵化peroxidase-conjugated牛antimouse免疫球蛋白二次抗体或peroxidase-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白g (1: 2000;杰克逊免疫研究实验室Inc .)、西树林,Pa,美国)在室温下1 h。确定的屁股是含有等量的蛋白质溶解产物,他们也孵化抗体的存在β肌动蛋白(1:10000 Sigma-Aldrich corp .)。蛋白质的相对表达我的乐队κB -α(~ 37 kDa),伊诺(~ 130 kDa), NF -κB p65 (65 kDa),伯灵顿(~ 23 kDa)、bcl - 2 (~ 29 kDa)量化的光密度扫描x射线与gs - 700电影成像密度计(gs - 700、Bio-Rad实验室、意大利米兰)和一个计算机程序(分子分析师,IBM)。

2.10。细胞因子的测定

Gingivomucosal组织均质在PBS包含2更易/ L的苯基甲基磺酰氟(σ化工有限公司,意大利米兰)和组织水平的TNF -α和il - 1β进行了评估。进行了分析通过使用比色,商业工具(美国Calbiochem-Novabiochem公司)根据制造商的指示。细胞因子决定都是在重复执行连续稀释。结果表示为pg / 100 g湿纸巾。

2.11。材料

主要抗体针对巴克斯和bcl - 2从圣克鲁斯生物技术获得,Inc .(美国加州Santa Cruz)。二级抗体来自杰克逊ImmunoResearch实验室,Inc .(美国缅因州杰克逊,巴尔港)。除非另有说明,所有化合物都来自Sigma-Aldrich有限公司(我,意大利)。所有其他化学物质都是最高的商业级可用。股票的解决方案都是准备在nonpyrogenic盐水(0.9%氯化钠;巴克斯特,意大利、英国)。

2.12。统计评估

数据和文本中所有的值表示为平均值±标准错误(S.E.M.)的意思 观察。在体内研究中, 代表的动物数量研究。在实验中涉及组织学、免疫组织化学显示的数字代表至少三个实验(组织学和免疫组织化学染色)上执行不同的实验天组织部分收集从每组中所有的动物。结果分析了单向方差分析后跟Bonferroni因果为多个比较测试。一个 值小于0.05被认为是显著的。和个人组意味着与学生的未配对 以及。一个 值小于0.05被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。GW0742对组织损伤和骨吸收的影响

相比gingivomucosal组织部分从侧方获得vehicle-treated老鼠(图1(一)),组织学检查gingivomucosal ligature-operated老鼠的组织部分显示水肿,组织损伤,以及渗透的组织炎性细胞(图1 (b))。GW0742治疗减少gingivomucosal组织损伤的程度(图1 (c))。此外,马森的三色的染色剂,用于监控胶原纤维的增加,负在gingivomucosal组织部分被从侧方车辆相比,gingivomucosal ligature-operated老鼠(数据的组织部分1 (d)和1 (e)、职责)。GW0742治疗减少了胶原蛋白的增加(图1 (f))。

(一)
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(b)
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(d)
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图1
GW0742对组织损伤和骨吸收的影响。炎症细胞浸润和水肿gingivomucosal节观察结扎大鼠(b)与gingivomucosal相比组织切片从侧方(a)。大大减少水肿和炎症细胞浸润在gingivomucosal部分ligature-treated老鼠一直对待GW0742 (c)。此外,马森的三色的染色是负数gingivomucosal组织部分来自车辆侧的一面与gingivomucosal相比组织部分ligature-operated老鼠(d、e、职责)。GW0742治疗减少胶原蛋白(f)的增加,牙槽骨的结扎大鼠牙槽骨吸收(g)演示。GW0742治疗抑制牙槽骨吸收(h)。显著增加之间的距离cementoenamel禁令和牙槽嵴mediolingulal根ligature-treated第一摩尔是观察到的老鼠(我)。GW0742治疗显著降低之间的距离的增加cementoenamel禁令和牙槽嵴(i)。数据代表至少3实验进行不同的实验。面向组织部分,从牙冠纵向,都沾着三色的污渍。数据代表20项从gingivomucosal获得组织各治疗组。* 而nonligated。° 与结扎。

射线探伤的下颚,在第八天结扎放置后,首先在左下角显示骨基质吸收摩尔地区结扎后(图1 (g))。没有证据表明对病理学的第一摩尔(数据未显示)。GW0742明显减少骨吸收的程度在左下角第一个摩尔地区后结扎(图1 (h))。低之间的显著的牙槽骨丢失引起的第一左摩尔和右第一磨牙左侧结扎在vehicle-treated老鼠。GW0742治疗导致显著抑制牙槽骨丢失后结扎(图1(我))。数据代表均值±S.E.M.从gingivomucosal组织获得了20项每个治疗组的* 而nonligated。° 与结扎。

3.2。NF - GW0742治疗的影响κB激活牙周炎

我们评估我κB -α免疫印迹分析探讨细胞降解机制与GW0742治疗可能会减弱牙周炎的发展。基底的我κB -α中检测出gingivomucosal组织从侧获得vehicle-treated老鼠,而在gingivomucosal组织从ligature-operated老鼠吗κB -α水平大幅减少(数字2(一)和2(b))。GW0742 ligature-induced我治疗预防κB -α退化gingivomucosal组织在八天之后结扎(数字2(一)和2(b))。此外,牙周炎导致NF -显著增加κB p65水平核分数从gingivomucosal组织运营的老鼠(数字2(c)和2(d))相比gingivomucosal组织从侧方(数字2(c)和2(d))。GW0742治疗显著预防periodontitis-mediated NF -κB p65表达式(数字2(c)和2(d))。


图2
NF - GW0742治疗的影响κB在牙周炎激活。基底的我κB -α中检测出gingivomucosal组织部分从侧方(a, b)。我吗κB -α水平大幅减少(a, b) gingivomucosal ligature-operated老鼠的组织。GW0742治疗阻止了我κB -α退化,(a, b)。NF -牙周炎导致显著增加κB p65水平gingivomucosal组织从老鼠(c, d)。经营GW0742治疗显著预防NF -κB p65表达式(c, d)。一个代表污点的溶解产物从每组5动物和微分析显示了所有动物的报道。的结果(b, d)表示为均值±S.E.M.从 gingivomucosal组织为每个组。* 与nonligated组。° 与结扎组。
3.3。GW0742对细胞因子分泌的影响,在牙周炎血浆外渗,中性粒细胞浸润

测试是否GW0742调节炎症过程通过监管促炎细胞因子的分泌,我们分析了gingivomucosal促炎细胞因子肿瘤坏死因子的水平α和il - 1β。大幅提高TNF -α和il - 1β在gingivomucosal组织形成观察结扎后八天,相比与gingivomucosal组织从侧方(数字3(一)和3(b),职责)。相比之下,显著抑制这些细胞因子检测GW0742-administered动物。(数据3(一)和3(b),职责)。


图3
GW0742对细胞因子表达的影响。在结扎后8天,TNF -大幅度增加α(一)和il - 1β(b)的形成与gingivomucosal相比组织部分从侧方(a, b)。相比之下,GW0742治疗显著降低TNF -α(一)和il - 1β(b)的分泌。免疫组织化学分析gingivomucosal组织从结扎大鼠显示il - 1的阳性染色β(c),在gingivomucosal组织GW0742-treated老鼠没有观察il - 1阳性染色β(d)。微密度分析,免疫细胞化学(照片 从每个样本收集的所有照片在每个实验组小鼠)il - 1β评估(e),髓过氧化物酶活性(f),浸润白细胞的总数(g)和伊文思蓝含量(h) gingivomucosal组织被结扎侧相比显著增加。GW0742显著降低髓过氧物酶活动(f),浸润白细胞的总数(g)和伊文思蓝含量(h)。数据的均值±S.E.M.从 每组的老鼠。* 而nonligated。° 与结扎。

至于我们分析,通过免疫组织化学分析,il - 1的含量β。免疫组织化学分析gingivomucosal组织从侧获得vehicle-treated老鼠并没有透露任何il - 1的免疫反应性β(数据没有显示)。相比之下,结扎后8天,il - 1的阳性染色β被发现gingivomucosal组织从结扎大鼠(图3(c)见图微密度分析3(e))。GW0742治疗显著降低程度的促炎细胞因子il - 1阳性染色β(图3(d)见图微密度分析3(e))。髓过氧化物酶活性显著升高在结扎后的8天内(图3(f))和GW0742治疗显著降低这些水平(图3(f))。没有观察到髓过氧物酶活动的显著变化的gingivomucosal组织从侧(图3(f))。量化的多形核细胞浸润到gingivomucosal组织表明只有很少数量的多形核的细胞组织从侧(图3(g))。然而,大量的多形核细胞浸润gingivomucosal组织的观察结扎大鼠(图3(g))。GW0742政府多形核细胞浸润明显减少的数量gingivomucosal组织(图3(g))。

此外,测量前的伊文思蓝外渗,平均动脉压vehicle-treated和GW0742-treated动物被记录。与之前的研究结果相一致(12),GW0742治疗并不影响平均动脉血压(车辆处理:128 + 6毫米汞柱; 和GW0742治疗:125 + 7毫米汞柱; )。结扎显著增加的伊文思蓝外渗gingivomucosal组织相比,侧侧(图3(h))。GW0742治疗阻止伊文思蓝外渗增加但并没有改变的伊文思蓝含量侧(图3(h))。

3.4。GW0742对伊诺表达和硝基酪氨酸的影响形成牙周炎

部分gingivomucosal组织从侧没有透露任何免疫反应性对伊诺和硝基酪氨酸,在正常架构(数据未显示)。在结扎后8天,阳性染色伊诺(图4(一),见图微密度分析4(e)和硝基酪氨酸(图)4(c),请参见图微密度分析4(e)),发现gingivomucosal ligature-operated老鼠的组织。GW0742治疗废除了染色伊诺和硝基酪氨酸(数字4(b)和4(d);分别地。,see densitometry analysis Figure4(e))。此外,伊诺水平gingivomucosal组织也通过免疫印迹分析评估。伊诺水平大幅增加saline-treated gingivomucosal组织的老鼠(数字4(f)和4(g))。相比之下,GW0742治疗预防periodontitis-mediated伊诺表达式(数字4(f)和4(g))。


图4
GW0742对伊诺表达的影响。阳性染色为间接宾语(a)和硝基酪氨酸(c)在结扎后gingivomucosal组织。GW0742-treated gingivomucosal组织的老鼠,没有积极的染色观察伊诺(b)和硝基酪氨酸(d)。微密度分析的免疫细胞化学(照片 从每个样本收集的所有照片在每个实验组小鼠)伊诺和硝基酪氨酸(e)评估。此外显著增加在伊诺表达式,通过免疫印迹分析化验,检测组织ligature-treated老鼠(f, g)。治疗GW0742显著降低伊诺表达式(f, g)。这个数字是代表至少3实验进行不同的实验。代表污点的溶解产物从每组显示,5动物和微分析报告的所有的动物。的结果(g)表示为均值±S.E.M.从 gingivomucosal组织为每个组。* 与nonligated组。° 与结扎组。
3.5。GW0742对巴克斯和bcl - 2表达的影响

测试是否PPAR -β/δ基因扮演了一个角色在细胞凋亡gingivomucosal组织结扎位置后,我们测量Fas-L,伯灵顿和bcl - 2表达的免疫组织化学分析在结扎后八天。

没有积极的染色观察伯灵顿和Fas-L gingivomucosal组织从侧获得vehicle-treated老鼠(数据未显示)。免疫组织化学gingivomucosal Fas-L和伯灵顿显示阳性染色的部分结扎后(图5(一)和5(e)、职责)。阳性染色的程度Fas-L和伯灵顿在GW0742-treated老鼠(数据明显下降5(b)和5(f),职责)。检测bcl - 2表达,整个样本gingivomucosal老鼠的组织也分析了免疫组织化学分析。在免疫组织化学分析,bcl - 2阳性染色的程度明显降低在gingivomucosal部分结扎(图后获得5(c))。减少结扎引起的bcl - 2表达显著减弱gingivomucosal部分从GW0742-treated老鼠(图5(d))。正常基底的bcl - 2观察染色gingivomucosal组织从侧获得vehicle-treated老鼠(数据未显示)。


图5
GW0742对细胞凋亡的影响。免疫组织化学和伯灵顿Fas-L显示阳性染色后的gingivomucosal部分结扎(a, e)。巴克斯和Fas-L阳性染色的程度是显著减少GW0742-treated老鼠(b, f)。此外,bcl - 2阳性染色的程度明显降低在gingivomucosal部分结扎(c)后获得。减少bcl - 2表达显著减弱了GW0742治疗(d)。在免疫印迹分析、基准面的伯灵顿在场组织sham-operated老鼠(g, h)。巴克斯乐队更明显的组织ligature-treated老鼠(g, h)。巴克斯乐队消失在组织从GW0742治疗(g, h)。此外,基础水平的bcl - 2存在于组织sham-operated老鼠bcl - 2 (i, j)。带消失在老鼠的组织受到结扎(i, j)。组织的bcl - 2乐队更明显的结扎大鼠接受GW0742 (i, j)。这个数字是代表至少3实验进行不同的实验。代表污点的溶解产物从每组显示,5动物和微分析报告的所有的动物。的结果(h, j)表示为均值±S.E.M.从 gingivomucosal组织为每个组。* 与nonligated组。° 与结扎组。

此外,伯灵顿的外观和bcl - 2 gingivomucosal组织匀浆的研究通过免疫印迹分析。伯灵顿的基础水平检测均质gingivomucosal组织从sham-operated动物(数字5(g)和5(h))。伯灵顿水平大幅增加saline-treated gingivomucosal组织的老鼠(数字5(g)和5(h))。相比之下,GW0742治疗预防periodontitis-mediated伯灵顿表达式(数字5(g)和5(h))。基底的bcl - 2表达水平低中检测出gingivomucosal从组织匀浆,sham-operated老鼠(数据5(我),5(j))。bcl - 2的表达明显减少在整个提取获得gingivomucosal vehicle-treated大鼠结扎后(数据的组织5(我),5(j))。治疗大鼠与GW0742显著降低ligature-induced bcl - 2表达的抑制作用。

3.6。GW0742剂量响应对炎症的影响参数

测试是否不同剂量GW0742调节炎症的过程中,我们也分析了gingivomucosal水平的促炎细胞因子和中性粒细胞浸润在结扎后八天。大幅提高TNF -α,il - 1β在gingivomucosal组织形成和MPO活性观察结扎后八天,相比与gingivomucosal组织从侧方(数字6(一),6 (b),6 (c)、职责)。GW0742管理在不同剂量(0,03年和0,1毫克/公斤)并没有降低TNF -α,il - 1β形成和MPO活性gingivomucosal组织在结扎后8天(数字6(一),6 (b),6 (c)、职责)。

(一)
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(b)
(b)
(c)
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图6
GW0742剂量响应对炎症的影响参数。大幅提高TNF -α,il - 1β在gingivomucosal组织形成和MPO活性观察结扎后八天,相比与gingivomucosal组织从侧方(数字6(一),6 (b),6 (c)、职责)。GW0742管理在不同剂量(0,03年和0,1毫克/公斤)不会降低TNF -α,il - 1β形成和MPO活性gingivomucosal组织在结扎后8天(数字6(一),6 (b),6 (c)、职责)。

4所示。讨论

在这项研究中,我们重点关注一个潜在的抗炎活性PPAR的角色β/δ受体激动剂治疗牙周疾病。我们证明PPARβ/δ受体激动剂、GW0742施加有益的影响在牙周炎的老鼠模型衰减(1)NF -κB表达,(2)促炎细胞因子的生产,(3)伊诺和硝基酪氨酸表达,(4)细胞凋亡,(5)老鼠gingivomucosal组织的程度受到ligature-induced牙周炎。所有的这些发现支持PPAR的视图β/δ有害作用的衰减伤害与大鼠牙周炎有关。它已经知道PPARβ/δ受体激动剂有抗炎的特点(13]。

大部分的抗炎作用PPARs也许可以这样解释道。大家都知道今天激活PPARs(通过内源性或外源性配体)抑制转录因子包括核转录因子的激活κB (NF -κB),激活蛋白1 (AP-1),信号传感器和催化剂的转录(统计),和核转录因子的激活T细胞(NFAT) [14]。这随后变弱的形成细胞因子、趋化因子和粘附分子,因此,减少过度的炎症和组织损伤。

在这项工作中,我们确认PPAR -β/δ增加IkB -α表情,防止核p50 / p65 NF -κB易位和逮捕他们的核转录活动包括一氧化氮合酶表达(间接宾语),TNF -α,il - 1β等等,不一而足。

在牙周病的发生和发展,炎性细胞因子被认为扮演重要的角色。一些报告表明牙周炎的发展之间的关系和interleukin-1的表达(il - 1)、il - 6,引发和肿瘤坏死因子α在牙龈组织(15]。有充分的证据表明,il - 1β有助于传播扩展的局部或全身性炎症过程(16]。有趣的是,这促炎细胞因子的水平显著降低在接受GW0742结扎大鼠。

发现,早些时候,我们的研究也证实的一个特点炎症的迹象,伊文思蓝外渗,高的结扎一侧比另一侧的第八天。此外,我们也在目前的研究报告,ligature-induced牙周炎大鼠产生明显的炎性细胞浸润gingivomucosal组织,我们也证明了治疗GW0742减少炎症细胞浸润为评估髓过氧化酶。

中性粒细胞和巨噬细胞在宿主防御细菌感染是至关重要的。当吞噬细胞功能受损,疾病进展和严重程度都明显增加。牙周疾病是一种常见的后遗症与改变吞噬反应。

中性粒细胞在牙周疾病是重要的,因为他们控制牙周微生态学之前参与的慢性炎性细胞。相比之下,单核细胞和淋巴细胞决定组织反应牙周微生态学。它可能是简单地提议,机能减退或改变中性粒细胞单核细胞和淋巴细胞的功能或机能亢进可能导致对牙周疾病的易感性增加。尽管他们对宿主防御至关重要,这些吞噬细胞可能会导致一些健康组织损伤的旁观者效应。交界上皮尤其这种损害的风险,因为中性粒细胞分泌的酶和毒素细菌坚持它,破坏上皮细胞。

此外,我们发现,增强的形成没有伊诺可能导致炎症过程。几项研究也支持这样的结论,没有从伊诺不利影响,如对宿主组织细胞毒性作用,牙槽骨吸收由于刺激一氧化氮对破骨细胞的活动的影响(9,17]。在这项研究中,我们确定了表达式,因此,伊诺的形成,通过免疫组织化学的方法;我们的研究结果表明,GW0742治疗变弱伊诺在牙周组织的表达。因此,减少伊诺的表达,PPARβ/δ受体激动剂,可能导致该代理的衰减的形成硝基酪氨酸ligature-treated老鼠的牙周组织。增加硝基酪氨酸染色是一个指标的“增加nitrosative压力。”

细胞凋亡或程序性细胞死亡,是一种生理性细胞死亡(18]。它是增加或减少的感染,炎症,或组织重构。先前的研究表明,细胞凋亡参与炎性牙周疾病的发病机理19]。细胞凋亡是一个极其复杂的过程,涉及多种信号分子;我们有我们的注意力集中在一些有选择性的主要参与者。从结果,我们确定proapoptotic转录变化,包括upregulation proapoptotic伯灵顿的差别,对这些凋亡bcl - 2,用免疫印迹和免疫组织化学鉴定。这是第一个研究表明牙周炎的治疗与GW0742抑制和阻止凋亡通路的损失,同时,减少了proapoptotic通路的激活的,到目前为止,身份不明的机制。

5。结论

总之,这项研究提供了第一个证据,GW0742导致大幅削减ligature-induced牙周炎大鼠。保护特性的机制GW0742涉及调制基因表达的转录因子和随之改变,以上的差别导致对这些炎症。这些发现,PPAR提供支持β/δGW0742,受体激动剂可能为牙周炎的治疗提供一种很有前途的方法,降低血浆外渗和在牙周炎骨吸收的程度。

确认

作者要感谢卡梅隆拉位咨询专家为他的优秀的技术援助在这项研究中,夫人Caterina Cutrona秘书协助,和瓦伦蒂娜小姐Malvagni编辑援助的纸。