文摘
我们一直在调查一个氧气/臭氧(95%是否o2/ 5%啊3)混合物会潜在的对实验手术后的腹膜粘连的形成。在两组大鼠,一个控制腹腔注射3毫升/ O的老鼠2和一个腹腔内注射氧气/臭氧混合(3毫升/老鼠相当于300μ克/公斤臭氧),我们感应中线剖腹手术和肠切开术的回肠鼓励腹膜粘连的形成。样本取自壁腹膜组织评估的形成粘连0和10天后手术并评估泛素的水平和20 s蛋白酶体。我们发现减少手术后的腹膜粘连的形成与300年治疗后的大鼠μ克/公斤臭氧与泛素水平下降和20 s蛋白酶体亚基在坚持组织。氧气/臭氧混合是接近术后腹膜粘连可能有用的,和UPS系统参与。
1。介绍
术后粘连的发生在大约90%的患者接受腹部手术确定术后发病率和死亡率(1,2]。它们之间的连接桥梁腹膜的相邻部分(1)和发展遵循一个广泛的炎症过程中的组织涉及炎症介质。
间皮的细胞粘连承认其起源,手术创伤刺激,促进纤维蛋白原转化为纤维蛋白,释放血栓形成质。成纤维细胞胶原原纤维铺设而有纤维蛋白,因此成为粘连(3]。由于假定的分子机制手术后的腹膜粘连的深层次原因,提出了各种策略来解决这个问题。这些从使用腹腔镜手术,药物预防与药物作用于纤维蛋白溶解,干扰素和医学麻醉气体(4- - - - - -10]。除了粘连形成的一个重要组成部分是腹膜内的炎症反应发生4,11,12]。
然而,非特异性的方法使用一个氧气/臭氧气体混合物可能会导致手术后的患者腹膜粘连的临床益处。这种方法旨在减弱炎症反应(13粘连的演变过程。在这种背景下,我们的研究评估应用程序是否医疗气体混合物的氧气/臭氧在手术可以减少炎症事件的暗示,在级联导致手术后的腹膜粘连的形成。
2。方法
2.1。外科手术
本研究中使用的所有实验程序和协议批准的动物保健那不勒斯第二大学的伦理委员会。
手术进行了描述,迪菲利波等。4]。男性Sprague-Dawley老鼠()是用铅笔标记1到15,麻醉与聚氨酯(1.2 g / kg ip),受到中线剖腹手术。样本的壁腹膜组织拍摄,一个肠切开术在回肠的水平了。手术切口缝合用可吸收手术线4/0为了诱发炎症腹膜的侮辱。所有的手术结束时的缝合,和老鼠被放置在恢复室觉醒。手术后十天(时间T1)老鼠受到另一个剖腹手术有特别注意保持总是相同的老鼠编号,新组织样本,化验了腹膜粘连的发展通过定性和定量评估。分数从1到6成立,这是鉴于如下:1的存在贫穷和失误在有限的腹膜粘连区,2到贫穷的存在粘连在一个扩展区,3的几个失误向腹膜粘连,4局部致密粘连,5到扩展密集的存在与进入腹腔粘连,和6扩展致密粘连和不可能进入腹腔。做的手术,进球总是同一个人。的腹膜活检组织快速冷冻,用于确定水平和UPS系统的活动。
2.1.1。实验小组
男性Sprague-Dawley老鼠研究(4 - 6个月大,体重250克)分为以下实验组:A组()诱导与外科手术+氧(100%啊2、3毫升/鼠腹腔注射)和B组()诱导手术+氧气/臭氧混合(95%啊2/ 5%啊33毫升/鼠相当于300克/公斤臭氧在腹腔注射)。这两个团体第一次接受一半体积手术前1小时;第二次注射与另一半卷了外科手术后1小时(总量和剂量指定)。没有明显副作用注射后的A和B组。
2.1.2。生化参数评估
冰冻组织标本均质在50 mM Tris-HCl含有瘦素(pH值7.2)1米,抑肽素1200 M,苯基甲基磺酰氟化M和离心10分钟10000×g在4°C。
200年L(匀浆是用来确定总蛋白根据布拉德福德的方法。泛素的水平被量化商业酶联免疫试剂盒(武汉EIAab科技有限公司、武汉、中国)的定量测定20 s蛋白酶体,一个特定的SDS激活工具包(美国波士顿生物化学)是使用制造商的指示。
2.1.3。统计数据
数据提出了均值±S.E.连续变量之间的比较组大鼠与单向方差分析(方差分析)和克鲁斯卡尔-沃利斯检验正态分布数据的非正态的分布数据。组之间的差异被发现时,Bonferroni调整被用于制造成对比较。一个被认为是具有统计学意义。所有计算都使用SPSS2软件执行。
3所示。结果
从手术后第十天,老鼠接受3毫升/老鼠100%氧显示出高分腹膜粘连的发展(数据没有显示)。从手术后10天,7的15大鼠经氧气处理3毫升得分最高的分配了腹膜粘连的存在。他们显示致密粘连和不可能进入腹膜腔的分数分配给他们(表61)。三只老鼠被分配到5分的存在粘连腹膜内传播,但仍保持腹膜(表的访问1)。其他的老鼠显示整体失效在有限的腹膜粘连区和获得一个从1到4分(表1)。
在腹膜粘连的发展的同时,有一个泛素的水平和20年代在坚持组织蛋白酶体。对于这两个标记,这增加显著(与T0)手术后10天(T1)(数据1(一)和1 (b))。
(一)
(b)
与300年治疗的老鼠克/公斤氧气/臭氧混合前的感应手术腹膜侮辱导致分数降低手术后的腹膜粘连的形成和泛素水平降低和20年代在坚持组织蛋白酶体。腹膜粘连的评估分数,如表所示1表明,大量减少粘连的治疗组大鼠300克/公斤氧气/臭氧混合。这是伴随着显著减少泛素和蛋白酶体水平的20年代(与T0)腹膜组织手术后10天(数字1(一)和1 (b))。
4所示。讨论
直到几年前,防止粘连的形成,重点主要是提出要实现的程序在手术。值得一提的是在这方面,有相当大的共识在腹腔镜手术作为一种过程与开放手术相比减少粘连的发展在国际舞台上(4,5]。然而,近年来,许多研究都已经针对可能的药物预防手术后的粘连形成,例如,一些作者提出使用他汀类药物,因为他们被认为能够提高腹膜纤维蛋白溶解(8]。其他作者表明,移行细胞是一个可能的治疗目标,防止粘连的形成,由于其关键作用的微分PAI-1和t-PA的监管,这是参与这个过程(9]。然而,其他的建议使用antitack代理如羧甲基纤维素和透明质酸resorbable膜。最后,这也是所谓的可能使用异丙酚(10]。
在这里,我们表明,氧气/臭氧应用于大鼠的混合物诱导前腹膜损伤发挥保护行动反对手术后的腹膜粘连的形成。
实验和临床证据证明有利影响氧气/臭氧疗法在一些病理特点是细胞氧化和炎症负担,包括肾损伤、心脏病、动脉粥样硬化和脓毒性休克(14- - - - - -19]。最近的数据表明臭氧位于动脉粥样硬化,和它提出了可能是重要的额外人力炎性疾病(20.]。不是最后,氧气/臭氧管理已被证明有利于心肌组织损伤的预防或减少它遵循一个缺血性事件(21]。它保护急性心肌梗死的心脏通过一系列的当地活动,包括,在他人,以挪士活动的增加和内皮祖细胞招聘22]。治疗效果与伤口愈合和危重肢体缺血患者保肢也由于氧气/臭氧(23]。
在先前的研究中,迪菲利波等。4)发现,手术后的腹膜粘连发生在老鼠严格相关手术的时间和严重程度取决于腹膜内的炎症反应发生标本,deteriors腹膜的矩阵。白细胞在这一阶段,细胞因子、趋化因子和细胞粘附分子改变初始tissutal平衡诱发粘连的形成(4]。在目前的研究中,我们展示了一个参与tissutal ubiquitin-proteasome系统(UPS)的变化,遵循外科干预和腹膜粘连的发展。后者与粘连的严重程度;动物显示高水平的UPS活动也有严重的粘连,而动物显示低水平的UPS有中度粘连。
UPS,通常称为nonlysosomal细胞内蛋白质降解的主要途径在真核细胞中,发现了年代的戈德堡的开创性工作,Hershko,和他们的合作者,用网织红细胞溶解产物(24- - - - - -26]。UPS通常降解蛋白质在两个步骤。首先,衬底被添加polyubiquitin链共价改性,通过酶促级联,涉及三类因素:E1,泛素-(乌兰巴托)激活酶(27),E2,乌兰巴托的家庭成员航空公司(28],E3,非常大的家庭成员(几百名成员)所谓的乌兰巴托连接(29日),明确承认和新兵ubiquitylation反应的底物。第二,ubiquitylated蛋白质通常是写给和26 s蛋白酶体降解的一个巨大multisubunit和multicatalytic蛋白酶30.]。由于其多个角色,蛋白酶体是真核生物中非常重要和其功能障碍有有害影响的细胞或有机体。在人类中,UPS放松管制已经与一些疾病如癌症、自身免疫性疾病、神经退行性疾病或病毒感染。因此,蛋白酶体被视为一个潜在的治疗目标在许多病理(31日),包括炎症(32现在组织变性。
目前的研究表明UPS系统的活动,以粘膜活检,是由氧气/臭氧治疗调制的混合物。氧气/臭氧处理后,表达和该系统的活动减少。一个有趣的和富有想象力的场景表明,氧气/臭氧可能能够抑制UPS活动坚持组织,可能导致减少局部炎症刺激和粘连形成。
绝对新奇的结论,这项研究是一个氧气/臭氧混合减少腹膜粘连的降低ubiquitin-proteasome坚持组织内的系统活动。