文摘

背景。目前建议孕妇的饮食含有DHA 200 - 300毫克/天。目的。孕期和哺乳期服用DHA补充剂是否影响了婴儿的免疫反应。方法。60岁的妇女在怀孕≥3日研究;30随机分配接受DHA 400毫克/天从第12周怀孕到产后4个月。从母乳喂养的婴儿,血液获得anti-HBs抗体,免疫球蛋白,淋巴细胞表型出现子集,细胞内细胞因子的生产。结果。CD4 +淋巴细胞组没有差异,但CD4CD45RA / CD4(幼稚细胞)明显高于在婴儿DHA +组。比例的CD4和CD8细胞产生干扰素γDHA +组显著降低,没有差异IL4-producing细胞的比例。免疫球蛋白和anti-HBs水平组之间没有差别。结论。在婴儿的母亲收到补充DHA,更高比例的CD4幼稚细胞和CD4和CD8降低干扰素γ生产兼容衰减的炎性反应。

1。介绍

母乳喂养带来婴儿期抵御感染。母乳喂养的婴儿有一个当地增强体液免疫反应,导致胃肠道和呼吸道感染的患病率较低比人工喂养的宝宝(1,2]。纯母乳哺育的头几个月,也被认为是预防过敏性疾病的发展(3]。免疫球蛋白、淋巴细胞、蛋白质,如乳铁蛋白和溶菌酶,存在于母乳,发挥特定的免疫作用。另一个组件,这可能是关键的重要的成熟和功能的免疫系统,是牛奶的脂肪酸模式。母乳含有长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)(20 - 22个碳)和和w-6类构成~总脂肪酸的2%和察觉的unsupplemented公式准备从植物油。红细胞膜磷脂的母乳喂养的婴儿有一个更高的比例和脂肪酸(FA)和专门一个双重的更高层次的docosahexanoic酸(DHA) (C22:6和)比婴儿由nonsupplemented公式,水平类似的膜的花生四烯酸(AA) (C 20:4 w-6) (4,5]。花生四烯酸的比例平衡acid-derived二十烷类和那些来自w3脂肪酸已经免疫调制(建议发挥着至关重要的作用6- - - - - -8]。

在婴儿是母乳喂养,这些脂肪酸供应依赖于产妇的饮食(9]。西方饮食中包含大量的w-6 FA但在和FA相对较低。孕妇DHA地位主要取决于摄入DHA作为转换的亚麻酸(C18:3和),存在于坚果和其他植物油,DHA是低。怀孕期间孕妇DHA水平下降,进一步减少当泌乳期延长(10]。怀多胞胎的孕妇DHA水平下降;水平已被证明与初次分娩的母亲相比,多产的显著降低,当怀孕紧密间隔的。此外,母乳的DHA水平与血管DHA水平(11]。

DHA的高需求促使当前建议孕期和哺乳期DHA的平均摄入量应200 - 300毫克/天(12,13]。事实上,最近的研究已经证实西方孕妇和哺乳期妇女的饮食只包含20%和FA每日推荐摄入量的-60%。在90%的受访女性,DHA摄入远远低于推荐的要求(14,15]。

先前的研究涉及免疫系统相比,婴儿婴儿喂母乳和婴儿喂LCPUFA-supplemented或nonsupplemented公式(16,17]。在孕妇获得DHA +环保局准备,从22日妊娠周,产妇血液mRNA水平的Th1细胞因子(干扰素γ和摘要意思)下降,而在脐带血,Th2细胞因子水平(IL4和使用IL13)减少(18]。没有研究调查的影响产妇孕期服用DHA补充剂和哺乳婴儿的免疫系统。

因此我们质疑补充DHA怀孕和哺乳期间,在人口密集的多产的母亲怀孕比例高,可能会影响体液和细胞免疫反应在完全母乳喂养的婴儿4个月的年龄。

2。对象和方法

2.1。主题

婴儿的母亲研究属于一个极端宗教团体;60岁的孕妇,怀孕年龄20 - 35岁、≥3日。30岁妇女被随机分配接受DHA 400毫克/天(每个软胶囊胶囊含有100毫克DHA,由马泰克生物科学公司起,顶级新泽西州,美国)。补充DHA是每天从第12周妊娠和产后4个月一直持续到年底。母亲没有分配给补充DHA集团拒绝摄入安慰剂胶囊基于宗教的明胶胶囊不是“犹太”,但由于DHA是被社区的宗教领袖作为药物,摄入DHA胶囊是允许的。补充dha组,18岁的母亲在怀孕三号到四号,11在怀孕5 7日开出,8日和1。在对照组,17岁的母亲在怀孕三号到四号,11的5 7日开出,2≥8怀孕。

营养摄入问卷,强调使用的食用油类型,数量和类型的鱼,和/或坚果食用,填写了所有的母亲。

婴儿完全母乳喂养4个月。岁4个月,血(最大5毫升2.5毫升EDTA在肝素和2.5毫升)完整的血细胞计数(CBC)、anti-HBs抗体滴度,免疫球蛋白水平,和淋巴细胞研究。

2.2。方法
2.2.1。Anti-HBs抗体

定量地确定使用微粒酶免疫分析法9 axsymavsab,方丈诊断,德国威斯巴登。

2.2.2。免疫球蛋白水平

IgM,定量测定免疫球蛋白(IgA免疫球蛋白)通过使用BN ProSpec immunonephelometry执行系统,西门子医疗诊断、马尔堡,德国。

2.2.3。淋巴细胞的研究

单克隆抗体
下面的单克隆抗体从Immunoquality获得产品,格罗宁根,荷兰:anti-CD8, anti-CD45RO anti-CD45RA, anti-CD25。Anti-CD4和anti-CD6马伯从eBioscience购买,Inc .,加利福尼亚州圣迭戈。
马伯胞浆内细胞因子的检测得到的BD生物科学(加州圣何塞)。Fastimmune PE-labeled反人类的IL4 IL4用于检测,而Fastimmune FITC-labeled反人类的干扰素-γ(干扰素γ)是用于检测干扰素γ。

Immunofluorescent染色的外周血淋巴细胞的子集
下面的外周血淋巴细胞子集由细胞表面染色使用荧光激活细胞分选仪:CD4, CD4CD45RA(“幼稚”T辅助细胞),CD4CD45RO(“记忆”/辅助细胞激活),CD8, CD8CD45RA(“幼稚”T抑制细胞),CD8CD45R0(“记忆”/激活抑制细胞),和CD16 (NK细胞)。全血细胞、肝素、洗两次在PBS和悬浮在含有0.1% BSA和0.1%南PBS3。悬浮液在100一卷μ介绍了L,到每个试管和马伯染色。这些细胞被孵化FITC -或PE-conjugated马伯30分钟在4°C。细胞和抗体的混合物是孵化为30分钟在4°C。孵化后红细胞溶解了流式细胞仪赖氨酸溶液(正)。经过两个孵化项目的NH的血液4CL 10分钟在室温下,悬挂离心机,PBS的颗粒洗两次,和细胞resuspended在1%多聚甲醛和储存在4°C,直到他们被流式细胞术分析(19]。

2.2.4。细胞激活细胞因子生产

0.5毫升全血,肝素被引入一次性聚苯乙烯管。0.5毫升血液,0.5毫升rpmi - 1640中、谷酰胺添加2毫米。组织培养基组件购买从生物产业,拜特Haemek,以色列。暴露在有丝分裂原激活细胞,25 ng PMA和1.0μg ionomycin。10μg brefeldin (BFA)被添加到每个管;论坛抑制胞内运输,防止细胞内细胞因子的分泌。37°C的悬浮液是孵化有限公司5%2调湿大气4小时孵化。

2.2.5。细胞胞浆内Immunofluorescent染色的细胞因子激活

胞浆内immunofluorescent染色,细胞resuspended在500年μL流式细胞仪permeabilizing解决方案,正欲获得,在室温下8 - 10分钟。这些细胞被洗两次包含0.5% BSA和0.1%南PBS3。20μL荧光共轭马伯的胞浆内染色细胞因子。免疫球蛋白制备合适的同形像作为消极的控制(20.]。这些细胞被孵化30分钟在室温下,洗和固定在1%多聚甲醛在PBS溶液,并存储在4°C,直到他们被流式细胞术分析。采集和分析进行了FACScan流式细胞分析仪使用FACScan软件程序(正)。为每个测试,5000 - 10000细胞收集和获得。因为少量的血液,可以获得,这些化验是只有21个婴儿进行,每组中。

伦理委员会批准的这项研究是卡普兰医疗中心(IRB)和卫生部的审查委员会。

2.3。统计分析

统计分析评价的显著差异进行学生的使用t测试未配对数据与InStat (GraphPad软件公司,圣地亚哥,CA)。结果意味着±SEM。

3所示。结果

3.1。人口特征

母亲和婴儿的人口特征研究总结在表1。母亲的年龄和平价的母亲没有差异收到补充DHA和nonsupplemented组。婴儿出生体重、妊娠期长度和数量的传染性事件记录,直到性能的免疫学研究,4个月岁组没有差异。

表1
母亲和婴儿的特点进行了研究。
3.2。Anti-HBs抗体

(平均117.9±34.3国际单位/毫升±SEM) DHA-supplemented婴儿的母亲和111.9±56.1国际单位/毫升nonsupplemented集团( )。

3.3。免疫球蛋白

IgA水平分别为33.9±4.22毫克%(平均±SEM) DHA组和54.5±15.6毫克%在控件( )。IgM水平分别为99.7±15.0毫克% DHA组和91.8±20.8毫克%在控件( )。免疫球蛋白水平分别为593.6±70.3毫克% DHA组和745.7±162.7毫克%在控件( )。

3.4。总淋巴细胞计数

淋巴细胞总数婴儿的两组之间没有差别;6598±450 /毫米3(平均±SEM)补充婴儿的母亲和6900±650 /毫米3(平均±SEM)控制( )。

3.5。淋巴细胞亚群

w3-supplemented婴儿的母亲,CD4 +淋巴细胞的比例与对照组没有显著差异(46.9±1.61和41.0±2.75, ),但CD8 +淋巴细胞显著降低(17.7±0.98和21.25±0.09, )(表2)。中CD4 +细胞的比例CD4 + CD45RA +子集,代表天真辅助细胞明显高于w3-supplemented婴儿的母亲与对照组相比。CD45RA + CD4 +细胞的比例构成的CD4总人口87.23±0.89补充组和79.8±2.95控件( )。内存的百分比CD4细胞、CD4 + CD45RO + / CD4,两组之间没有差别(15.79±1.77和12.80±2.01 ( ))。CD8 +细胞毒性抑制细胞,尽管CD8细胞的百分比降低婴儿的母亲收到补充DHA, CD8 + CD45RO + / CD8分数,代表记忆细胞,是更高的DHA-supplemented组;34.9±5.9和16.2±5.9 ( )。两个CD8分数的总和,天真的CD8 +细胞(CD8 + CD45RA +)和激活CD8 +细胞(CD8 + CD45RO +)高于100%,表示细胞的比例都呈阳性标记,并在转换过程中观察到的现象从一个天真的激活状态。CD16 +淋巴细胞的比例在两组之间没有显著差异(14.92±9.08和14.58±5.51,在DHA-supplemented和对照组,分别地)。

表2
产妇补充DHA的影响婴儿的外周血淋巴细胞表型。
3.6。细胞因子的生产

CD4 +和CD8 +的比例产生干扰素γDHA-supplemented组显著较低(表吗3)。干扰素的比例γ生产CD4 +细胞DHA-supplemented组为0.99±0.18%和2.68±0.69控件( )。同样在CD8 +细胞,干扰素的比例γ生产细胞为0.62±0.13和1.84±0.43,分别是( )。IL4 CD4 +和CD8 +细胞生产是降低DHA-supplemented组,但差异没有达到统计学意义(表3)。

表3
产妇补充DHA对细胞因子的影响生产婴儿的外周血淋巴细胞。

4所示。讨论

母乳喂养的婴儿的外周血淋巴细胞轮廓孕期和哺乳期的母亲收到补充DHA不同于母乳喂养婴儿的母亲的饮食没有补充DHA。

婴儿DHA-supplemented组中有类似的CD4细胞的数量随着nonsupplemented集团,但是CD8细胞的数量显著降低,CD4 / CD8比值为2.6的淋巴细胞DHA-supplemented婴儿nonsupplemented组相对于1.9。CD4细胞CD45RA +细胞的比例,代表天真辅助细胞,DHA-supplemented组显著高于nonsupplemented组。尽管总人口CD8细胞低DHA-supplemented婴儿,CD8 + CD45RO +激活细胞的比例明显高于,构成35%的CD8细胞nonsupplemented组为16%。在这两个CD4和CD8细胞,干扰素的生产γ被发现在淋巴细胞显著降低婴儿DHA-supplemented组。

两组婴儿居住在同一个小区,有可能暴露在类似的环境抗原和传染性危害。淋巴细胞亚群水平的差异之间的两组婴儿因此不可以归因于不同的细菌或病毒暴露程度。

场等。16)曾研究了免疫后果添加花生四烯酸(ARA)和DHA的早产儿配方奶喂养的婴儿与人类相比逼真早产儿。人口年龄在42天,淋巴细胞子集在婴儿接受LCPUFA-fortified公式显示增加的比例CD4CD45RO +细胞和CD8CD45RO +细胞在外周血中人工喂养的宝宝,一个淋巴细胞子集模式更符合观察婴儿喂母乳。激活IL2促炎细胞因子,间接测量基于SIL-2R由外周单核细胞的数量,是指出在LCP-fed婴儿水平较低与human-milk-fed婴儿。IL2激活这个观察到的减少是在协议与其他研究体外和体内(动物和成人)已经证明LCPUFA减少IL2生产(21]。肿瘤坏死因子的生产α,另一个促炎细胞因子,从单核细胞,也已被证明能够降低成年人接受LCPUFA [22]。最近的一项研究表明减少释放干扰素γ全身蛋白质从气道上皮细胞感染鼻病毒,当孵化与DHA (23]。

在5 - 7岁儿童的研究较低的消费饮食摄入DHA,添加ARA和DHA(程度毫克/天)后一段没有导致任何CD4和CD8细胞的相对比例的变化,在non-stimulated全血。

此外,干扰素γ生产的外周血单核细胞,接触各种兴奋剂/分裂素后,没有LCPUFA-supplemented组的差异(17]。另一项研究中,在老8 - 12岁的儿童,达到不同的结论关于生产和足总对细胞因子的影响。儿童接受300毫克鱼油(+ 700毫克菜籽油)每天12周,外周血单核细胞孵化缺席或脂多糖刺激面前表现出的非特异性增强监管促炎和抗炎细胞因子的生产(24]。值得注意的是,虽然有些体外和体内研究,在动物模型和成人,也指出LCPUFA诱导肿瘤坏死因子的增加,摘要意思,IL2生产,其他并没有表现出任何效果不同剂量的鱼油生产这些细胞因子(7,25- - - - - -27]。

大多数研究化验水平的细胞因子在上层清液的分离外周血单核细胞或淋巴细胞的文化。在我们的研究中,利用细胞因子的细胞内染色技术使我们能够确定选择性的起源细胞因子,无论是CD4和CD8细胞。

补充DHA不施加影响体液免疫反应。两组婴儿没有差别在免疫球蛋白水平的免疫球蛋白,IgM, IgA类。

特定的抗体反应反映了通过测量HBsAg两剂疫苗后抗体的效价(2天,1个月的年龄)在两组相似。

所有在我们的研究中被完全母乳喂养婴儿的头4个月的年龄。对于饮食的母亲参与这项研究,他们每周至少吃两次鱼,煮熟的菜籽油,富含和FA,添加橄榄油沙拉酱。最近的共识声明关于膳食脂肪摄入对孕妇和哺乳期妇女认为“所需的平均每天至少摄入200毫克DHA的消费可以达到一到两份海每周鱼”(13]。因此,他们的饮食摄入DHA可能被认为是足够的。

我们的研究的独特之处在于,它质疑额外补充DHA母乳喂养的母亲据说吃足够的DHA含量会影响婴儿的免疫反应。

孕期和哺乳期服用DHA补充剂没有导致改变婴儿的体液免疫反应,所评估的水平anti-HBs抗体和免疫球蛋白,但影响淋巴细胞轮廓子集和细胞因子的生产。

淋巴细胞概要文件与更高的CD4幼稚细胞百分比和降低干扰素γ生产在CD4和CD8细胞可能是兼容衰减的炎性反应。

当地的促炎细胞因子的表达,尤其是干扰素γ已被证明,肿瘤坏死因子在动物模型中,恶化损害发生,例如,在缺血性中风(28]。因此,抑制促炎反应的可能会限制组织损伤在感染性和非感染性炎症情况。然而,值得注意的是尽管干扰素-γ被认为是一个重要的促炎细胞因子产生的Th1淋巴细胞和自然杀伤细胞,调节先天和适应性免疫反应,最近的观察表明,干扰素吗γ发挥抑制免疫反应和可能发挥作用诱导的宽容。

干扰素γ可以调节T细胞激活降低T细胞增殖和生存,通过增加调节性T细胞的数量(Foxp3 + Treg细胞)(29日,30.]。干扰素γ也刺激抑制B7家族分子的表达,进而可能减弱生产Th1 T细胞(31日]。因此,干扰素免疫显著减少的后果γ生产在CD4和CD8细胞不能简单预测。至于观察到更高比例的细胞毒性CD8细胞激活,这些可能发挥facilitatory作用遭遇病毒感染。

观察到变化的临床意义还投机,以及是否补充DHA的婴儿母乳喂养的母亲所带来的优势还有待阐明。

作者的贡献

e . Granot首席研究员,帮助在项目启动和设计,数据分析,和写作的手稿,其最终的责任内容。e . Jakobovich研究协调员,帮助在母亲和婴儿的临床跟踪和数据收集。r . Rabinowitz和p·利维进行淋巴细胞研究和数据分析。m·施莱辛格是淋巴细胞的实验室研究主任进行淋巴细胞,负责规划数据的研究和分析。所有作者阅读和批准了期末论文。

利益冲突

作者没有利益冲突的报告。

承认

这项研究是由来自菲利普·莫里斯公司外部资助研究项目(菲利普莫里斯美国和菲利普莫里斯国际公司)。起公司的DHA胶囊是一种礼物,以色列。