文摘

目标。细胞因子发挥重要作用在左心室重塑的心肌缺血。本研究的目的是生产和淋巴细胞凋亡与细胞因子post-ischemic左心室重构受到急性心肌梗死(AMI)患者进行皮肤原发性血管成形术(PCI)。方法。在40例,影响AMI和接受PCI,我们评估外周血单核细胞(PBMCs)、肿瘤坏死因子-α(TNF -)和白介素10 (IL10)生产和细胞凋亡在第一天,第三天,第七天、1个月和6个月后PCI。病人被分成两个子组的改造或不是由超声心动图重建标准。结果。在重建患者的子群,在每个计算TNF -产量显著增加相比,病人不重构的子群。重塑学科IL10生产统计低于不改造的1和再灌注后6个月。两组之间没有差异至于lymphomonocyte细胞凋亡。结论。我们发现增加生产的促炎细胞因子TNF -和抗炎细胞因子/监管相应减少IL10重塑患者,我们得出的结论是,这种细胞因子失衡导致促炎效应可能导致左心室重塑的进展。

1。介绍

炎症反应和细胞因子细化是宿主免疫反应的固有成分组织损伤,心肌梗死后发挥积极作用。的程度的炎症反应是一个重要的决定因素主人的结果,因为它会导致愈合和恢复功能,心脏破裂,急性或慢性扩张(1]。

心肌重构可以被定义为分子、细胞、心肌内和间质变化,导致左心室大小和变化函数(2,3]:心肌重构的主要特性之一是左心室扩大(4),其发展影响生存的患者死亡率增加由于心脏衰竭5]。

Upregulation促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子白介素- 1β(摘要意思)和白细胞介素6,通常未表达的正常的心,已经清楚地显示在动物和人类在心肌梗死模型(6- - - - - -8];肿瘤坏死因子的急性心肌内的基因表达摘要意思,,白细胞介素6包括梗塞面积和noninfarcted心肌,但它开始减少对基线后1周(9]。如果梗塞尺寸大或有持续心肌压力因素,细胞因子基因表达可能居高不下或复发的第二波细胞因子激活(10];水平的细胞因子激活noninfarctual地区相关的最佳和最终的左心室舒张末期直径测量梗死[20周后1,11]。最近,它已经表明,IL10与强大的抗炎作用的多效细胞因子在许多细胞行(12),可能在某些体外缺血再灌注模型的保护作用通过抑制急性炎症过程:特别是IL10能够废除TNFα全身的血管平滑肌肉细胞(VSMC)增长13]。

这些前提的基础上,我们研究了外围的作用细胞因子在心肌重构和生产功能受到急性心肌梗塞患者接受PCI。特别是,我们评估PBMCs TNFIL10生产以及lymphomonocyte细胞凋亡在不同时间点后急性缺血性事件和我们相关的免疫激活缺血后左室重构与超声心动图评估研究。

2。材料和方法

2.1。病人

我们招收了40例患者(平均年龄64岁,范围48 - 78)受到急性st段抬高心肌梗死肝素)接受PCI在12小时内出现症状。患者先后分为两组左心室重构(R,)和左心室重构患者(NR、)显示左心室扩张的存在与否与超声心动图评估梗死后6个月标准(表1和2)。心肌梗塞患者以前的历史,以前已知的冠状动脉疾病,心力衰竭,心律失常,valvulopathies,慢性或急性炎症或传染性疾病、肿瘤、肝脏和肾脏疾病被排除在研究之外。相同条件下,尤其是急性或慢性感染,诱发排除病人随访的研究在不同的时间点。患者不认为药物能够干扰免疫细胞功能在任何阶段的研究;只是偶尔对乙酰氨基酚是由一些病人承担(3重塑患者和4不是重构对象),不超过几天而不是巧合与血液采样。15个正常人年龄和性别匹配的也学过关于细胞培养。所有患者把他们的知情同意是包括在这项研究中。过程是我们医院伦理委员会的批准,这项研究是根据道德标准进行人体实验建立了《赫尔辛基宣言》。

2.2。Echodoppler超声研究

这项研究是通过使用生动的七echocardiograph(通用电气)配备2.5 MHz传感器。二维的图像,echo-Doppler超声和彩色多普勒超声波光谱分析了使用计算机系统(Echo-Dat;医学Inc.software)。射血分数(EF)、左心室收缩末期(LVESV)和舒张末期容积(LVEDV),记录心室功能的指标。EF辛普森被修改后的计算的方法在顶端四,两院的观点(14,15]。

缺血后左心室重构被定义为左心室舒张和收缩末期容量增加20%随访结束时(6个月)与基线相比措施(第一天)16]。

2.3。细胞隔离和文化

PBMCs从患者获得和控制的肝素化全血在以下时间点:第一天,第三天,第七天、1个月和6个月后再灌注。PBMCs被密度梯度离心法分离Histopaque 1077 (Sigma-Aldrich、米兰、意大利)和培养RPMI 1640中补充了胎牛血清(10%)、谷酰胺(2毫米),penicillin-streptomycin (100 U /毫升,100g / mL, Gibco,佩斯利,英国)。

2.4。肿瘤坏死因子并通过PBMC IL10生产

PBMCs在完全培养基放在文化和与LPS刺激(E。杆菌,1g / mL,σ)24小时。

2.5。肿瘤坏死因子的量化α和IL10

细胞培养基收获是检测肿瘤坏死因子α通过ELISA和IL10生产使用ELISA微量滴定板(康宁容易洗,Celbio、米兰、意大利)涂在一夜之间2g / mL anti-TNF -或anti-IL10捕获马伯(Pharmingen) pH值在0.1 M Na2HPO4 9缓冲区阻塞和PBS /渐变。一个biotin-labeled anti-TNF或anti-IL10检测抗体(Pharmingen) 1g / mL PBS / 10%胎牛血清的使用。开发板使用avidin-HRP(美国向量,伯林盖姆,CA)和2 2 azino-bis衬底(σ)。检测下限为15.6 pg / mL。

2.6。细胞凋亡检测

文化的20小时后,淋巴细胞凋亡是评估通过绑定膜联蛋白V / propidium碘的流式细胞术(德国,Partec)使用细胞凋亡检测工具膜联蛋白V-FITC (Dako、斯特鲁普、丹麦)。向前活细胞的光散射特征被用来删除碎片的分析。对数荧光强度的膜联蛋白V-FITC是策划的荧光强度与propidium碘(π)点阴谋。数据从10.000淋巴细胞大门向前散射和散射特性分析为每个情节和膜联蛋白阳性,π阴性细胞的百分比(早期凋亡细胞)确定。象限被比较清白的估计,膜联蛋白V-FITC / PI染色样品。

2.7。统计分析

数据作为中位数±平均数标准误差。曼的惠特尼以及用于比较数据获得的患者心室重构获得的病人不发生心室重构控制。Wilcoxon测试是用来比较获得的数据在同一组患者在不同的时间点。被认为是显著的。斯皮尔曼相关系数来确定假定的线性关系可衡量的回声和生理参数的变化。

3所示。结果

3.1。左心室重构

表1显示基线和临床特征的患者分为两组患者显示左心室重构,而病人不接受左心室重构。如表所示,患者非常相似的两个子组,没有差异存在风险因素,梗塞的特点,和药物的假设。表2显示了同一组患者的超声心动图特点是用来区分重塑而不是重建左心室扩张的基础上,定义为结束舒张期容积的增加20%,作者评估(16]。

3.2。患者左心室重构显示肿瘤坏死因子的增加产量α

患者PCI后的缺血后1天左心室重构显示肿瘤坏死因子的增加产量LPS刺激后相比,患者没有接受缺血后左室重构()。他们还增加数量的TNF产生与控制(相比),而没有区别控制和患者没有接受左心室重构(图1)。肿瘤坏死因子的增加生产LPS刺激后仍可检测重塑学科相比,不是装修的3天()和第七天(PCI后),以及1个月()和6个月(这个过程(图后)2)。

患者发生左心室重塑我们找不到任何有关LPS-stimulated肿瘤坏死因子的显著性差异生产在不同的时间点;类似的结果在这些病人没有出现左心室重构(图3)。

3.3。患者左心室重构显示IL10的生产下降

第一天当我们分析LPS-induced IL10生产、再灌注后,我们没有发现任何区别左心室重构对象而不是装修主题。然而在两组IL10产量显著降低与控制(相比,图4)。第三天,第七天IL10生产改造而不是装修主题之间没有不同,但再灌注1和6个月后,IL10生产低统计学科发展中比不装修的左心室重构(,,图5)。

在我们发现患者的左室重构LPS-stimulated IL10生产增加了3天,7天与天相比1 (),但是回到水平类似于第一天,1和6个月后再灌注(图6)。相反,在不改造病人,IL10产量显著增加相比,第一天在每一个计算(再灌注后),它仍然是统计上更高的再灌注后6个月时达到值与正常对照组(图6)。

3.4。淋巴细胞凋亡并不增加患者发生左心室重构

当我们分析了自发淋巴细胞体外凋亡24小时后的文化中,我们发现annexinV +π-淋巴细胞的比例没有显著不同重建病人而不是改造的(与%),重叠在正常受试者获得的值(%)(没有显示)。

3.5。线性回归分析在整个队列

我们的发现不同的促炎/抗炎失衡的研究小组根据装修趋势经肿瘤坏死因子之间的线性回归分析、IL10 LVEDV在整个队列(图7)。的确,肿瘤坏死因子之间的直接的线性关系被发现α水平和LVEDV卷(,)和百分比变化之间的参数(,六个月(图)7)。IL10 LVEDV在第一天(水平呈负相关,)确认在6个月(,)也当分析百分比变化(,)(图7)。

4所示。讨论

缺血后左心室重构是一个复杂的过程,发生心肌梗死后在该地区受到急性缺血和邻近地区:它的特点是减少梗死面积,细胞的膨胀,纤维化和瘢痕形成、胶原蛋白溶解和过度的间质矩阵积累,增加墙压力,和肌细胞肥大17]。它导致心室几何变化和持续恶化心脏功能(4,5]。心室重构的发展涉及到许多不同的机制,包括神经激素的刺激、酶、离子通道、氧化应激、机械应力、生长因子、炎性细胞因子的生产(1]。

最近的临床和实验研究表明,炎性细胞因子,增加肿瘤坏死因子的释放可以导致左心室重构和功能障碍的进展18]。在成年大鼠,外科手术植入渗透微型泵注入肿瘤坏死因子5天以达到血浆水平与这些报道在临床心脏衰竭,发生左心室部分缩短和减少左心室舒张期结束直径增加了超过25%相比,time-matched控制(19]。在转基因小鼠模型中,心肌肿瘤坏死因子过度导致增加收缩压和舒张期左心室容量和降低在心肌胶原交联(20.]。自激活肿瘤坏死因子α受体增加基质金属蛋白酶的生产,肿瘤坏死因子的一种机制可以影响左心室重构似乎诱导心肌基质金属蛋白酶和随后的降解细胞外基质成分的20.]。

我们发现在病人接受体外缺血后的左室重构肿瘤坏死因子缺血性事件后立即生产统计增加相比,病人没有出现左心室重构。更有趣的是,6个月后心肌梗塞,在同一组患者中,肿瘤坏死因子生产持续高于病人不接受左心室重构。这一发现同意其他作者的研究评估肿瘤坏死因子的作用在心肌梗死和左心室重构;特别是,人们已经发现,后期的水平细胞因子激活noninfarctual地区关联与最终最好的左心室舒张末期直径测量在20周后梗死(7,8]。我们的数据表明,边缘细胞因子生产反映了发生在心肌细胞因子激活的持久性,以应对机械、氧化和神经激素的压力启动一个恶性循环。在二级缺血性心脏疾病患者心室重构,奥特罗等人找不到血清肿瘤坏死因子水平的增加相比与扩张型心肌病的影响,而他们发现sTNF-RI和sTNF-RII水平上升21];不同的这一研究获得的结果与我们的相比可能是由于这样的事实,我们评估肿瘤坏死因子体外生产不需要对应于血清细胞因子水平的增加。

我们还研究了IL10体外生产因为IL10抗炎细胞因子,调节基质金属蛋白酶表达和抑制促炎细胞因子的合成,如肿瘤坏死因子α(12,22]。许多最近的实验研究表明,系统性或当地IL10基因转移减弱动脉粥样化形成和影响过程与病变进展(23,24]。此外,在一大群病人受到急性冠脉综合征,IL10血清水平升高与更有利的预后相关(25]。然而,至少在动物模型中,IL10似乎并没有发挥重要作用在梗塞治疗和左心室重构,因为IL10基因中断不改变纤维组织沉积和dilatative重建的心脏梗塞的小鼠模型(26]。同样,预处理的心脏成纤维细胞IL10 TNF不抑制趋化因子合成反应[26]。在我们的研究中,IL10生产与正常人相比显著减少患者左心室重构和那些没有经历左心室重构、心肌梗死后立即。然而,在那些没有开发的病人左心室重构IL10增加正常水平将逐步达到6个月后急性事件,而那些发展中左心室重构在再灌注后3和7天增加但回到基线水平1和再灌注后6个月。因此IL10似乎发挥保护作用,因为低层次几个月后再灌注与左心室重构有关。这些发现可能的相关性,因为他们将数据添加到的证据处理更复杂的系统体内,pro - /抗炎介质之间的平衡是心脏重构操作对几个pro - /抗炎介质的单一动作如图所示(尤其是在动物模型26]。

最后我们对淋巴细胞凋亡,因为我们找到了一个持久和TNF增加产量在患者的心室重构。肿瘤坏死因子α能够诱导细胞凋亡在一些细胞类型,包括淋巴细胞,通过绑定TNFR-1包含死域(27,28]。此外,在一些人类模型,如在老化,TNF生产和肿瘤坏死因子α全身的细胞凋亡增加(29日,30.]。然而,自发淋巴细胞凋亡并不是不同的心室重塑患者,不是心室重构和控制。它还有待建立系统性肿瘤坏死因子增加生产导致心肌细胞凋亡增加,被发现在postinfarction心脏重构,特别是在最近梗塞的网站也在一定程度上影响地区31日,32]。

总之,我们的数据分析细胞因子网络的复杂流程已经证实缺血后的左室重构的重要干扰细胞的生产支持和抗炎介质;尤其是促炎细胞因子肿瘤坏死因子的增加与IL10的减少可能产生一种保护/监管职责。目前尚不清楚为什么相同的缺血性患者应激诱发更多的肿瘤坏死因子相似的特征比别人少IL10生产。然而我们可以观察到明显失衡促炎症和保护机制生成的患者发生左心室重构,我们可以表明这个重要的体内平衡机制的缺乏可能影响程度的激活和炎症反应导致心室重构和顺向心肌衰竭的进展。