文摘

探索的可行性检测唾液的干扰素-水平γ肿瘤坏死因子-α,sTNFR-2腐蚀性口腔扁平苔癣(ELP)患者临床应用,20 ELP纳入本研究的患者和20 age-sex-matched控制。从所有科目,唾液检测生物标志物的水平取决于ELISA。唾液ELP患者的资料进行评估后由ELISA与强的松治疗。更高水平的干扰素-γ( )、肿瘤坏死因子-α( )和sTNFR-2 ( )检测患者在治疗前ELP比控制。治疗后,唾液的干扰素-水平γ( )、肿瘤坏死因子-α( )和sTNFR-2 ( )预处理水平相比明显减少。本研究表明,唾液干扰素-γ肿瘤坏死因子-α可以检测,sTNFR-2 ELP病人和强的松治疗后显著降低,这可能显示使用这些疾病生物标志物的可能性诊断和监测。

1。介绍

口腔扁平苔癣(OLP)是一种慢性炎症条件涉及口腔粘膜组织(1]。尽管OLP发病机理的机制还没有完全披露,有人建议autoreactive细胞毒性CD8+t细胞触发角化细胞凋亡在OLP [2]。证据表明,一个复杂的细胞因子网络扮演着一个重要的角色在OLP的恶化及延续;因此,肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ都已经被广泛地研究过了,被许多研究者证实关键的监管角色在OLP的免疫发病机理(3,4]。Th1细胞因子、干扰素-γ参与CD8的激活吗+细胞毒性t细胞和维护角质细胞主要组织相容性类二世在OLP表达式,从而导致慢性疾病(2,5]。

细胞免疫在OLP可能受多种细胞因子及其受体(5]。肿瘤坏死因子-α是一个高度多向性的多功能细胞因子,调节多种细胞反应通过绑定到两个不同的细胞表面受体:TNF receptor-1 (TNFR-1/60 kDa)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR-2/80 kDa) (6]。细胞凋亡被认为是肿瘤坏死因子-α通过TNFR-1信号通路介导细胞毒性现象发生(7]。舒格曼et al。2)表明,CD8所使用的可能机制之一+细胞毒性t细胞触发角化细胞凋亡在OLP包括T-cell-secreted TNF -α绑定TNFR-1角化细胞表面。这个绑定可能激活角化细胞细胞凋亡蛋白酶级联导致角化细胞凋亡。

先前的研究表明,许多细胞类型coexpress TNFR-1 TNFR-2和需要之间的合作这两种受体产生TNF -α介导细胞凋亡(8,9]。此外,一些调查报道,TNFR-2可能TNFR-1-mediated诱导的细胞凋亡起着重要的作用[10,11]。因此,这将是研究感兴趣的可溶性TNFR-2 (sTNFR-2)水平在OLP患者中,鉴于我们所知,sTNFR-2概要文件只有在评估患者的血清皮肤LP (12]。

唾液有更多潜在的诊断价值,通常是赞赏,并承诺是一个帮助全身和口腔疾病的诊断在过去十年(13]。全唾液将以其独特的优势研究媒介如血清、lesional组织,lesional渗出液与适度训练,个人可以反复收集它早14]。因此,它提供了一个有效的疾病监测和筛查方法的大量人口(15]。全唾液已成功申请检测促炎细胞因子和粘附分子免疫相关疾病在几个(16,17]。

重要的是评估唾液的实际应用生物标志物的分析OLP的临床管理18]。因此,一些研究在文献中已经证明了OLP-related细胞因子监测治疗的意义(4,19]。然而,最小的研究探索潜在的细胞因子受体在OLP患者的临床应用。因此,当前的研究的目的是探讨不同疾病生物标志物检测的可能性包括TNF -α干扰素-γ,sTNFR-2唾液的腐蚀性OLP (ELP)患者和监测治疗反应通过确定水平与系统性皮质类固醇治疗前后,强的松。

2。材料和方法

2.1。研究人群

整个研究样本包含40个主题:20患有ELP(18岁女性,2男;范围40到55岁)和20名健康对照组(17岁女性,3男;41到56年不等)。患者被诊断出患有品行端正;而控制是健康正常的个人自由形式的任何系统性疾病或炎性口腔病变。受试者根据年龄和性别的分布提出了表1。

表1
学科的特点。
2.2。包含和排除标准

受试者的选择门诊诊所,口腔医学系和牙周病学,口腔和口腔医学学院,开罗大学。每个主题的详细病史根据修改的详细问卷调查获得了康奈尔医学指数(20.]。所有科目都不受任何系统性疾病,没有收到任何药物局部或系统性期间可能导致青苔状的反应前的3个月的研究。此外,疑似restoration-related反应或牙龈炎症患者被排除在本研究之外。书面同意是获得每个主体签署知情同意书制度审查委员会批准的大学。这是紧随其后的是一个解释的研究以及治疗和随访预约需要的信息。

所有患者口腔症状,每例被临床诊断为ELP。疾病的持续时间从2到3个月不等的缓解和恶化。腐蚀性损伤是双边和扩展到包括颊粘膜,唇粘膜和舌头,变化从一个病人到另一个。经病理检查证实诊断根据世界卫生组织(世卫组织)的临床病理的诊断标准为LP (21]。

根据痈等。22],ELP患者治疗系统性强的松,在40 - 60毫克/天在一个早晨剂量可变长度的时间,总之不是60天。当一个几乎病变大小减少50%,强的松的剂量是锥形通过减少10毫克每星期最后为上周5毫克/天。患者每周检查,治疗的剂量和长度进行调整后,在每种情况下临床的需要。患者要求不使用任何其他药物治疗ELP本研究期间。

2.3。收集的样本
2.3.1。唾液样本集合

收集整个如果唾液(本人)是通过使用标准技术根据Navazesh [23]。唾液收集时,病变症状。早上唾液样本获得的,受试者被要求不吃,刷牙,或者用漱口水至少2小时前唾液样本集合在那一天。请求对象获得的样本先吞下,头部向前倾斜,咳出痰10毫升唾液如果整个无菌离心管。唾液收集后,立即被离心机为2分钟10000×0.45 g,澄清了上层清液过滤μ低蛋白结合膜,分为0.5毫升整除,冻结在−80°C到化验。

2.3.2。检测唾液的干扰素-水平γ肿瘤坏死因子-α,sTNFR-2

这个研究包括了评估的评价干扰素-的水平γ肿瘤坏死因子-α,在患者的唾液sTNFR-2 ELP与强的松治疗前后。在收集所有的唾液样本,研究生物标志物评估ELISA。

2.3.3。测定干扰素-γ唾液样本中

唾液样本测定使用商用酶联免疫吸附试验(ELISA)工具包(研发系统公司,明尼阿波利斯,美国)。本试验采用定量夹心酶免疫测定技术。一个特定干扰素-多克隆抗体γ已经预镀到微型板块。标准和样品(100μL)用移液器吸取入井一式两份,以及任何IFN -γ礼物是受固定化抗体。后洗掉任何的物质,一个特定干扰素-酶联多克隆抗体γ(200μL)被添加到井2小时。洗后消除游离antibody-enzyme试剂、底物的解决方案(200μL)被添加到井开发的30分钟和颜色比例的干扰素-γ在最初的一步。黄色发展停止,蓝色的强度测量通过测量吸光度在450 nm,校正波长为540 nm和570 nm。干扰素的最小可检测剂量(MDD) -γ通常小于8.0 pg / mL。样品的浓度标准曲线的计算,和沙克的结果每毫升(pg / mL)。曲线的浓度范围从0 - 1000 pg / mL。

2.3.4。测定肿瘤坏死因子-α和sTNFR-2唾液

水平的肿瘤坏死因子-α和sTNFR-2唾液样本测定使用商用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(研发系统公司)。这些都是标准的“三明治”elisa和使用人类重组进行标准根据制造商的指示。这些化验使用定量夹心酶免疫测定技术。一个特定TNF -单克隆抗体α和sTNFR-2预镀到微型板块。标准和样品(100μL)一式两份,用移液器吸取到具体的井,任何TNF -α和/或sTNFR-2礼物是受固定化抗体。后洗掉任何的物质,酶联多克隆抗体(200μ特定TNF - L)α和sTNFR-2添加到特定的井。洗后消除游离antibody-enzyme试剂、底物的解决方案(200μL)添加到特定井和黄色发达TNF -的数量成比例α和/或sTNFR-2绑定在最初的一步。颜色开发停止,蓝色的强度测量。这些化验检测TNF -的下限α(1.6 pg / mL)和sTNFR-2 (0.6 pg / mL)。细胞因子的浓度及其可溶性受体在示例生成标准曲线测定比较,结果在pg / mL。肿瘤坏死因子-α标准曲线范围从(0 - 1000 pg / mL)而sTNFR-2范围从(0 - 500 pg / mL)

2.4。统计分析

结果表示为平均值±标准偏差(SD)和值。第一个“单向方差分析”进行展示每个生物标志物水平的差异ELP和对照组之间唾液。然后,“重复测量方差分析”是用于比较每个生物标志物的变化水平治疗前后唾液ELP组。所有与计算机数据处理统计软件包(SPSS 15.0对Windows, SPSS Inc .,芝加哥,IL)。(MedCalc软件11.4.4窗户,Mariakerke,比利时)。

3所示。结果

干扰素-γ肿瘤坏死因子-α,sTNFR-2被发现在所有从健康受试者获得的唾液样本。干扰素-的水平γ肿瘤坏死因子-α和sTNFR-2 ( ELP组)唾液增加明显比控制。最高的意义( )是观察当TNF -α和干扰素-γ在唾液浓度相应的对照组相比(表2)。系统性强的松治疗后,唾液的干扰素-水平γ( )、肿瘤坏死因子-α( )和sTNFR-2 ( )相比显著降低(表的预处理水平2和数字1,2,3)。

表2
干扰素的变化γ肿瘤坏死因子-α患者,TNFR-2唾水平ELP强的松和控制对象。

图1
唾液的干扰素-水平γ以pg / mL ELP患者相比,对照组治疗前后与强的松。

图2
唾液的TNF -水平α以pg / mL ELP患者相比,对照组治疗前后与强的松。

图3
唾液sTNFR-2水平以pg / mL ELP患者相比,对照组治疗前后与强的松。

4所示。讨论

唾液检测显示与lesional组织合作伙伴有显著相关性(24)和血清的合作伙伴在OLP患者(14]。考虑到整个唾液是一个复杂的混合物源自于唾液腺,连同观察牙龈沟液内细胞激素的贡献(GCF)和其他来源13),生化标记可以通过GCF分泌,因此,在本研究的受试者选择没有任何牙龈炎症可能混淆使用唾液为研究媒体目前的结果。作为增强疾病相关细胞因子的表达及其可溶性受体已经被先前的报道证明为OLP的发病机制(4,5,16),它是合理的临床医生关注这些生物标记物检测的临床应用。因此,目前的研究集中在唾液的正-γ肿瘤坏死因子-α,sTNFR-2 ELP病人对治疗的反应与强的松,试图揭示其使用的可能性在疾病诊断和监测。由于系统性皮质类固醇表示严重的腐蚀性或萎缩性OLP患者(22和广泛病变25)由于其抗炎和免疫抑制效应(26,27选择),强的松在这项研究中被使用最广泛的系统性皮质类固醇治疗OLP的高功效(80 - 100%)22]。

目前的研究表明唾液TNF含量显著升高的情况α和正γ在OLP样品相比正常控制。这些数据符合他们增强表达不同媒体之前报道OLP患者支持重要的角色在OLP的发病机制3,5,28,29日]。我们的研究结果也支持其他研究调查唾液的TNF -水平α在OLP患者(14,16,18]。此外,Pezelj-Ribaric et al。30.]证明显著大量的唾液TNF -αOLP患者与健康对照组甚至显示相关性疾病严重程度是明显高于腐蚀性/萎缩性类型的网状OLP的类型。NF -κB-dependent细胞因子TNF -α,il - 1、il - 6和显著水平升高引发也发现三种类型的口服液体,包括来自OLP患者的唾液,(16]。Zhang et al。14]甚至提出,唾液分析可能是一个更敏感的方法,以反映增强疾病相关生产相比,血清细胞因子。

到目前为止,干扰素——的结果γ在OLP一致。本研究中给出的数据是由最近的一项调查显示,红斑的/溃烂OLP患者显著更高层次的干扰素-γ在病变和唾液比控制24]。另一方面,刘等人。15)最近发布了干扰素-的低表达γOLP患者的唾液counter-regulation声称它可能导致的病态Th2-derived升高细胞因子il - 4等,参与细胞免疫抑制。相比之下,汗et al。5)不能检测体外分泌il - 4在任何OLP lesional t细胞行;因此,这个建议仍需要进一步的研究。

唾液ELP患者细胞因子的增加在这项研究中观察到,也许是因为当地生产炎性细胞的浸润和/或角化细胞本身(14]。还建议,t细胞活化和细胞因子生产行为在当地并没有反映在外周血31日]。此外,OLP的上皮细胞病变之前可以产生TNF -α10 - 20倍大于那些角质细胞从正常齿龈(32]。

当前的研究说明显著减少唾液的TNF -水平α和干扰素-γ与强的松治疗后主张的事实,他们在炎症过程中发挥重要作用,OLP的免疫发病机理。因此,据报道,TNF -的数量α艾滋病患者单核细胞在腐蚀性或萎缩性OLP患者治疗后显著降低0.1%氟轻松醋酸酯(4]。最近,Youngnak-Piboonratanakit et al。19)也证明了原位表达干扰素-γ在OLP患者明显升高,治疗后下降0.1%氟轻松。我们的研究结果也符合Rhodus et al。18]发现显著减少唾液的NF -水平κB-dependent ELP患者细胞因子与地塞米松治疗后漱口。作者表示,与疾病相关的细胞因子检测唾液中确实有一些临床监测治疗反应和疾病活动的潜在OLP的状态,这是强烈支持的数据提出了研究。

考虑到肿瘤坏死因子-α有致癌作用,ELP有更大的恶性发展,这对唾液诊断与预后的潜在压力TNF -α及其受体在OLP患者(30.,33]。我们的分析,我们所知,首次表明,唾液sTNFR-2水平明显升高ELP患者比健康对照组与强的松治疗后明显下降。

肿瘤坏死因子-α可能会引发细胞凋亡在OLP CD8的诱导分化和激活吗+细胞毒性t细胞(2]。史密斯和约翰斯通34)提供了另一种观点,TNF -α积极推动lymphoproliferation通过TNFR-2信号。这一结论是由早期的研究表明TNFR-2传输信号重要的细胞毒性t细胞的增殖和排除绝对要求的coexpression TNFR-1 TNFR-2信号(35,36]。而很明显,肿瘤坏死因子-α全身的细胞凋亡需要TNFR-1信号(6),然而,大量研究描述了协同行动的TNFR-2和TNFR-1增强作用的细胞死亡(37- - - - - -40]。据报道,过度的TNFR-2可以赋予细胞有能力接受TNF -α全身的细胞凋亡。提出了几种机制来解释这个观察,包括TNFR-2担任高亲和力陷阱TNF -α提供肿瘤坏死因子-αTNFR-1“ligand-passing”(41),TNFR-2协助TNFR-1-mediated内生TNF -间接诱导的细胞凋亡α(11,42],TNFR-2增强和放大的凋亡细胞死亡信号转导TNFR-1通过促进细胞凋亡蛋白酶激活信号(43]。

根据上述数据,这项研究表明TNF -α可能触发角化细胞凋亡在OLP TNFR-1和TNFR-2。目前的研究中,作者适时承认样本量相对较小,提出了一些初步结果显著相关的表达唾液sTNFR-2 ELP患者可能给一些新见解OLP的发病机制。虽然进一步的结论从这些数据必须被谨慎,额外的研究建议评估TNFR-1 / TNFR-2比率和更好地理解sTNFR-2在OLP的发病机制中的作用。

5。结论

目前的研究表明,唾液的绝对浓度干扰素-γ肿瘤坏死因子-α可以检测,sTNFR-2 ELP病人和强的松治疗后显著降低。这项研究的结果从唾液ELP的患者提供一个潜在的标本很容易获得和无创,以及疾病生物标志物可能揭示他们在诊断和监测使用的可能性。

利益冲突

作者没有利益冲突相关的研究报告。

确认

作者要感谢太太Aziza Abd El-Aziz专家统计,国家社会和犯罪学的研究中心,开罗,埃及,她帮助的统计分析工作。研究由个人资源退还之后的高等教育,埃及开罗国际出版。