文摘

变量数组模式受体表达的不同细胞的先天免疫系统的感应不同的花生四烯酸(AA)代谢模式。肽聚糖和甘露聚糖强劲刺激中性粒细胞,而真菌中提取酵母聚糖是最强有力的刺激monocyte-derived树突细胞自诱导的生产,和一些细胞因子,包括一个健壮的il - 10的回应。酵母聚糖激活B-binding活动,但抑制NF -B与增强il - 10的生产。相比之下,治疗作用于分子(CRE结合蛋白),包括显示,活化分子之间的直接相关性和il - 10生产。因此,在酵母聚糖诱导树突状细胞il10由CRE-dependent转录机制,包括自分泌分泌类二十烷酸,从而解开一个功能性合作生产和细胞因子的生产。

1。多形核白细胞和类二十烷酸生产

髓细胞是唯一的细胞类型关于其内容的大量的酯化花生四烯酸(AA)和必要的酶代谢自由通过环氧酶和脂氧合酶途径AA成不同的产品。但是,与肥大细胞,容易对交联足球俱乐部εRI受体,和血小板释放AA经典聚合剂,减少信息的多形核白细胞(中性粒细胞)和生理有关刺激巨噬细胞,因为大多数实验进行了与外源性物质或化学引诱物与化学相结合并启动代理。第一次设置的一个例子是使用钙离子载体。第二种情况的一个例子是使用甲酰化肽结合细胞松弛素B和thapsigargin,延长钙瞬变的时间跨度和允许的发生依赖于胞质磷脂酶的活动,比如易位(从胞质脂质影响()<一个href="#B1">1- - - - - -<一个href="#B4">4]。然而,这种情况与新出现的突然改变看法的功能免疫系统基于微生物的识别模式。

1.1。多形核白细胞释放花生四烯酸的反应模式识别受体的配体

中性粒细胞是第一个血液细胞类型能够迁移到组织后微生物入侵。中性粒细胞应对大量的刺激,包括炎症介质和微生物产品。这组刺激是最相关的,因为微生物具有独特的分子,称为其分子模式(pamp),以模式识别受体识别(PRRs)宿主先天免疫系统。toll样受体家族(审查,请参阅[<一个href="#B5">5,<一个href="#B6">6])和nucleotide-binding寡聚化域家族蛋白质(点头)(审查,请参阅[<一个href="#B7">7,<一个href="#B8">8])是代表Janeway第一所谓PRR [<一个href="#B9">9]。C-lectin类型受体也PRR可能与结构性签名表示微生物。实验在人类中性粒细胞作为刺激使用一组PAMP时签名包括甘露糖聚合物甘露聚糖和肽聚糖(PGN),糖和氨基酸的聚合物形成一层是因为细菌的质膜外,显示出强劲的释放AA(图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(一)和<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(b))和生产白三烯(LT)和前列腺素(PG)(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(c)和<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(d))。的释放AA观察到在这些条件下被calpeptin不钝化,微泡的形成的抑制剂,但被治疗抑制抑制剂pyrrolidine-1。发布的产品被确认为真正unesterified AA通过薄层色谱分析,由于放射性检测浮层显示明显的相关甘油三酯和磷脂,只观察到的细胞球。AA获得在这些条件下的释放相媲美,迄今为止被认为是参考刺激引起的如甲酰化肽结合thapsigargin或细胞松弛素B和complement-coated酵母聚糖颗粒。与此形成鲜明对比的是,刺激模仿其他细菌PAMP时,也就是说,lipoteichoic酸,细菌脂多糖(LPS), muramyldipeptide (MDP),和TLR2受体激动剂不诱导AA释放(<一个href="#B10">10]。

PGN的效果观察与PGN金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,从而表明PGN显示的结构特点克+和克−细菌也同样活跃。预培养的中性粒细胞anti-TLR2马伯前添加PGN没有抑制AA释放,从而表明TLR2受体没有参与PGN的响应。与这个结果一致,巴雷特et al。<一个href="#B11">11]报道TLR2-independent cysteinyl-LT释放与PGN小鼠骨髓树突状细胞刺激,因为反应是完好无损的老鼠。PGN的生物效应的分配明确PRR一直是一个有争议的问题(<一个href="#B12">12,<一个href="#B13">13]。toll样受体,不住的点头都涉及的争议源于作业PGN聚合物或生物属性块元素MDP和D-glutamic酸-内消旋二氨基庚二酸。分子量的分馏金黄色葡萄球菌PGN显示AA-releasing协会活动与分子量的分数30 kDa,而没有检测到的活动30 kDa超滤液,这是一致的可溶性PGN。脂质介质释放的生物意义的中性粒细胞反应TLR配体是最近在一个强调在体外通过单层内皮细胞迁移模型。在此系统中,中性粒细胞迁移被抑制受体拮抗剂和platelet-activating因子(PAF)参谋长受体拮抗剂和与生产有关的介质<一个href="#B14">14]。

1.2。在人类中性粒细胞Cyclooxygenase-2表达诱导机制

当前的理解中性粒细胞生物学被修改了最近的研究结果表明,中性粒细胞的寿命可以延长促炎的受体激动剂(<一个href="#B15">15],也描绘的转化机制控制特定蛋白质的表达赋予潜力快速蛋白质合成的中性粒细胞从本构mRNA,不会生成新记录<一个href="#B16">16- - - - - -<一个href="#B18">18]。这种机制可以有效的可能性PAMP-dependent反应和可能会影响AA代谢通过cox - 2的表达,是一个具有挑战性的假说。

自是一个主要的产品造成AA在中性粒细胞(数据吗<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(c)和<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig1/" target="_blank">1(d))可以产生由COX-1本构同种型环氧酶、和cox - 2诱导同种型,一组PAMP时签名的效果对cox - 2的表达。出人意料地,预成型的信使rna编码对cox - 2在休息中发现中性粒细胞,而cox - 2蛋白刺激后才可检测与甘露聚糖或PGN [<一个href="#B19">19]。COX-1蛋白质显示相同的表达水平没有,存在一些刺激,但在血小板低于检测水平,COX-1的原型来源。显示更少的强大效果和lipoteichoic酸,兴奋剂的TLR2 / TLR6形成,没有引起cox - 2蛋白诱导。NOD2 MDP,这是典型的配体,也未能引起cox - 2的表达。NOD2之间的相互作用和具体的TLR通路以来报告的合作机制的协同激活先天免疫反应导致宿主细胞(<一个href="#B20">20.- - - - - -<一个href="#B22">22),结合的效果的金黄色葡萄球菌PGN MDP评估。这种组合PGN受体激动剂没有修改效应引起的。观察cox - 2蛋白的诱导PGN只要30分钟后刺激和从1到18个小时几乎保持不变。类似的趋势的观察C3bi-coated酵母聚糖、甘露聚糖,尽管下降趋势观察18个小时左右在回应这些配体。这些结果表明,PGN包含一个结构性签名不作用于NOD2也由lipoteichoic酸和模仿通过TLR,行动路线结合额外追赶受体(s)和/或由一个还不明确TLR2-independent路线。

由于中性粒细胞是终末分化细胞转录控制和显示包含监管机构的相互依赖激活mRNA翻译(<一个href="#B17">17,<一个href="#B18">18),cox - 2 mRNA的假设可能是其中一个信使rna控制提出了以同样的方式。与这种观点相反,可以说的计算预测二级结构的能量-untraslated区域(UTR) cox - 2 mRNA王者文化/摩尔,从RNAfold的应用软件(<一个href="#B23">23,<一个href="#B24">24银行(图)中可用的序列数据<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig2/" target="_blank">2(一个))。这个值低于通常与转录相关规定(千卡每摩尔);然而,它非常适合那些报道许多成绩单发现使用cDNA库数组是人类单核细胞附着在转录水平调节P-selectin (<一个href="#B25">25]。此外,四个连续的5 - 8嘧啶基地的存在是一个额外的特性强烈暗示的可能性转化控制哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)。的存在utr cox - 2记录在人类中性粒细胞与一组经rt - PCR引物跨越外显子1的前20个核苷酸和cox - 2的第2外显子,使类似的结果使用引物PCR反应选择从外显子5和7(图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig2/" target="_blank">2 (b))。预培养的中性粒细胞与100 nM雷帕霉素抑制cox - 2引起的感应complement-coated酵母聚糖,PGN,和甘露聚糖,从而表明mTOR路线与cox - 2蛋白诱导的平移监管。鉴于mTOR集成信号级联,近端组件是phosphoinositide-3激酶(PI3K), PI3K抑制剂渥曼青霉素的效果是解决。显著抑制cox - 2诱导由渥曼青霉素以及翻译抑制剂放线菌酮。PGN也诱导时间苏氨酸磷酸化eIF4E结合蛋白。这提供了进一步证据的介入mTOR的路线,因为这个翻译的磷酸化抑制剂对eIF4E mTOR扰乱其绑定并激活帽依赖翻译(<一个href="#B26">26]。

额外的cox - 2 mRNA监管机制使用转录抑制剂进行了探讨。放线菌素D不影响感应甘露聚糖和PGN cox - 2蛋白引起的,而它完全抑制LPS的响应。自从cox - 2 mRNA稳定在一些细胞类型规范utr,中性粒细胞的存在和缺席1中孵化g / ml放线菌素D 30分钟前添加PGN解决cox - 2 mRNA的半衰期。在缺少放线菌素D的情况下,%的开始发现cox - 2 mRNA和控制细胞% (,与PGN)在细胞治疗后2小时之外的刺激。放线菌素D治疗诱发进一步下跌的mRNA在车辆处理细胞,而这些额外PGN-treated几乎没有观察到中性粒细胞下降。进一步评估cox - 2表达的转录调控是通过观察2-hydroxy-4-trifluoromethylbenzoic酸的影响,一种抑制剂的NF -B和NF-AT [<一个href="#B27">27,<一个href="#B28">28),这是一个有用的工具,以解决在单步转录调控以来两个转录因子参与了cox - 2规定在不同的细胞类型<一个href="#B29">29日,<一个href="#B30">30.]。Hydroxy-4-trifluoromethylbenzoic酸缺乏一个重要的对cox - 2蛋白表达的影响,以应对所有的刺激进行测试。总的来说,这些数据表明,转录调控不是主要机制cox - 2表达是人类中性粒细胞的监管。

确定上述描述的机制是中性粒细胞的独特属性或在其他髓细胞也有效,cox - 2蛋白表达在单核细胞化验;然而,时间进程有点不同于观察中性粒细胞,cox - 2蛋白以来稳步增加了4 - 8小时。与中性粒细胞,雷帕霉素并不影响cox - 2蛋白表达在单核细胞和巨噬细胞,而放线菌素D明显阻塞cox - 2蛋白诱导表达酵母聚糖,甘露聚糖,PGN,可溶性葡聚糖海带多糖。这些结果表明,不同的机制可以参与中性粒细胞和单核吞噬细胞cox - 2的监管。

2。巨噬细胞和树突细胞系统

吸收phagocytosable粒子的强烈依赖于受体的表达参与血清蛋白质的识别显示调理素的补充因素和抗体等功能。这是相关的真菌和细菌的吞没,因为这些微生物可以通过补充因素3衍生蛋白涂层C3b和调理素的免疫球蛋白类抗体。的显示在不同的细胞类型包括Fc受体R受体,受体,补充和PRR确定炎症和吞噬反应的关键因素,它可以广泛的不同在不同的细胞类型(图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig3/" target="_blank">3)。此外,绑定后信号引起同源受体的配体可以平衡伴随相关PAMP时引起的信号或环境,甚至表达的特异性适配器(<一个href="#B31">31日]。这是特别相关的单核吞噬细胞的不同模式的分化他们可能接受由于存在炎性细胞因子和生长因子的环境。

2.1。对立的效果C3bi-Coating AA的免疫复合物和酵母聚糖颗粒释放

AA代谢评估在单核吞噬细胞与抗原/抗体免疫复合物和酵母聚糖刺激,酵母的细胞壁中提取酿酒酵母。以来形成的免疫复合物(IC)包含补充液体的共价键C3bi到Ab和因为C3bi酵母聚糖被涂料增加炎症反应(<一个href="#B32">32和AA在白细胞释放<一个href="#B33">33),实验用的集成电路处理正常的人类血清免疫球蛋白g之间允许加合物的形成链和C3b -链,这一过程与IC的间隙与炎症反应有限。值得注意的是,公布的AA C3bi-IC明显低于由集成电路包含类似的大量的免疫球蛋白,因此建议的反应与C3bi IC产生IC点阵显示不同的信号受体相互作用的能力。最可能的解释这些发现的能力C3bi-IC与补体受体3 (CR3)减弱Fc / FcR交互和随之而来的AA释放与俱乐部联系在一起R交联。治疗的C3bi-IC anti-C3免疫球蛋白,但不是无关紧要的兔免疫球蛋白,允许AA-releasing的恢复能力,从而表明掩蔽C3bi半个C3bi-IC晶格的免疫球蛋白,使得这些复合物形成类似没有补充(<一个href="#B34">34]。相反,anti-OVA IgG的Fc部分切除,保留F的能力片段共价结合C3bi ser - 132的CH1域(<一个href="#B35">35),废除AA-releasing活动,从而表明Fc-FcR交互至关重要通过C3bi IC-induced AA释放,刺激不引起生产力绑定在这个系统。

2.2。甘露糖受体在人类单核细胞的作用

甘露糖受体(MR),首先描述了斯塔尔et al。<一个href="#B36">36)已经详细分析的对象有关于其能力,与终端甘露糖化分子的吸收,海藻糖,或N乙酰氨基葡萄糖半个。其配体识别的能力让这个受体合适的吞噬白色念珠菌,杜氏利什曼虫,和Pneumocytis carinni等微生物(<一个href="#B37">37- - - - - -<一个href="#B39">39]。先生是一个同名的家庭的元素被c型凝集素受体,包括分泌磷脂酶斜受体,树突细胞受体- 205年12月,Endo180 /尿激酶plasminogen-activated receptor-associated蛋白质。这些受体包含碳水化合物识别领域,尽管配体相互作用的化学结构与域显示广泛的差异。肺泡巨噬细胞表达的主要是先生,腹膜巨噬细胞,巨噬细胞来源于血液单核细胞(<一个href="#B40">40),似乎在早期免疫反应中发挥作用对入侵的病原体。虽然先生被证明参与细胞内信号导致目标基因表达的缺失在其细胞内信号图案的尾巴使其必要的其他受体的援助以触发任何信号级联。先生已经发现施加影响的诱导效应细胞混合白细胞数量(<一个href="#B41">41)和绑定的甘露糖聚合物甘露聚糖诱导先生温和cox - 2蛋白的表达高于基础水平,而海带多糖治疗、酵母聚糖颗粒,和预制IC未能这样做。值得注意的是,monocyte-derived巨噬细胞获得两周后的文化表现出突出的感应cox - 2蛋白与甘露聚糖浓度低至0.1毫克/毫升,因此建议承认mannose-based分子模式诱导的巨噬细胞可能发挥核心作用的先天免疫反应<一个href="#B42">42]。

2.3。AA Monocyte-Derived树突细胞的新陈代谢

树突状细胞(DC)的主要功能是检测病原体和宿主的起始反应微生物入侵。到目前为止,很少有研究专门生产AA代谢物的分析<一个href="#B43">43),尽管二十烷类的相关作用在直流功能和脂质代谢的突出变化引起csf和il - 4的单核细胞分化的过程(<一个href="#B44">44]。此外,是人类所需的直流偏移对趋化因子(<一个href="#B45">45,<一个href="#B46">46,符合这个关键函数,直流产生的失败一直被视为成功应用的一个主要障碍DC在治疗<一个href="#B47">47,<一个href="#B48">48]。PG由不同的酶催化合成涉及到几个步骤,但这主要取决于自由AA的可用性有选择地从磷脂释放。cox - 2参与前列腺素类的持续生产,所需的活动是强烈的Ab反应后接种疫苗(<一个href="#B49">49]。除了为AA新陈代谢,cox - 2的路线有路径依赖持续表达5-lipoxygenase COX-1,引发细胞激活后不久。至于5-lipoxygenase产品,缺乏细胞外的出口与迁徙直流响应[下降<一个href="#B50">50),而cysteinyl-LT il - 10的生产增加骨髓直流(<一个href="#B51">51]。最近的研究披露lipoxins作为一个独特的类脂氧合酶的交互代谢物具有强烈抑制il - 12的生产能力和DC的功能<一个href="#B52">52]。

符合功能参数的变化观察DC分化,AA代谢在成熟和未成熟DC直流显示不同的模式。而AA的释放引起酵母聚糖和其他不成熟和肿瘤坏死因子配体没有区别成熟细胞,cox - 2表达的增加只是不成熟的树突细胞中观察到。与中性粒细胞和单核细胞、酵母聚糖颗粒对AA发布的最有力的刺激,这是观察到浓度低至0.1毫克/毫升。相比之下,甘露聚糖诱导AA释放到一个较低的程度。与单核细胞中观察到的结果,无论是C3bi涂料还是调理素作用与兔免疫球蛋白修改这些刺激的能力释放AA (<一个href="#B53">53]。这对识别提出了重要的问题葡聚糖颗粒和耦合信号机制在不同的细胞类型。事实上,主要的受体参与葡聚糖识别dectin-1,表达在细胞表面的中性粒细胞,单核细胞,和直流;然而,直流显示一个独特的响应酵母聚糖颗粒。乍一看,两种机制可以解释不同的反应:(i)表达在某些骨髓细胞类型的抑制剂,例如,tetraspanin CD37,限制dectin-1-CARD9信号(<一个href="#B31">31日),或(ii)的直流增益函数differentiation-induced受体的表达与dectin-1合作。

Zymosan-induced AA释放抑制了海带多糖、甘露聚糖和anti-dectin-1 anti-DC-SIGN马伯,特别当抑制剂结合使用。这些数据表明合作dectin-1和DC-SIGN zymosan-induced AA释放和同意上述假说直流选择性表达的受体不是表现在其他类型的骨髓细胞。获得进一步了解类型的受体参与酵母聚糖的认可,488年Alexa-Fluor绑定酵母聚糖,研究了在不同的抑制剂。甘露聚糖、海带多糖anti-DC-SIGN马伯,anti-dectin-1马伯阻塞酵母聚糖绑定,但是这些抑制剂的结合增强约束力的封锁。综上所述,这些数据显示的存在AA在直流端依赖途径引发的绑定的酵母聚糖dectin-1 DC-SIGN。

2.4。麦克米兰活动参与AA释放

蛋白质酪氨酸磷酸化反应发挥核心作用在细胞信号通过FcR和dectin-1在小鼠直流<一个href="#B54">54,<一个href="#B55">55]。由于这些受体不具备内在酶活性,其信号转导途径必须依靠nonreceptor酪氨酸激酶的活化。这就解释了为什么麦克米兰/ Zap70家人麦克米兰已经发现链接的关键受体参与许多早期下游事件包括钙动员和激活Ras /增殖作用的蛋白激酶途径。麦克米兰的参与在AA释放和cox - 2诱导小鼠巨噬细胞被首次报道Suram et al。<一个href="#B56">56),他还表明,AA和释放生产酵母聚糖和刺激白色念珠菌TLR2-independent。研究在人类直流得到解决通过检查酪氨酸磷酸化的激酶(衡量麦克米兰激活),麦克米兰抑制剂的影响。IC和酵母聚糖诱导的酪氨酸磷酸化激活循环麦克米兰和麦克米兰抑制剂显著钝化AA释放。然而,麦克米兰抑制剂zymosan-induced只是部分影响磷酸化(<一个href="#B53">53),麦克米兰抑制剂piceatannol钝化AA的释放了96%和54%,以应对IC和酵母聚糖,分别。R406,一个非常具体的麦克米兰抑制剂,也抑制完全响应IC和zymosan-induced AA释放减少了30%。Zymosan-induced麦克米兰磷酸化也抑制的海带多糖,但不是通过anti-DC-SIGN马伯,总的来说,这些结果一致认为麦克米兰对IC-induced AA发布的活动是完全必要的,但仅仅是部分参与信号机制酵母聚糖抒发AA释放在华盛顿。

2.5。与Dectin-1 DC-SIGN Coimmunoprecipitates

海带多糖的抑制AA释放组合/ anti-dectin-1和anti-DC-SIGN马伯DC-SIGN和dectin-1建议合作。证实了这表明dectin-1 coimmunoprecipitated DC-SIGN,尤其是在直流的刺激与酵母聚糖(图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig4/" target="_blank">4)。额外的实验在HEK293细胞转染和向量编码DC-SIGN Myc-dectin-1显示一个健壮的coimmunoprecipitation C-lectin受体的免疫沉淀反应进行时anti-DC-SIGN马伯或anti-Myc马伯,这些结果符合酵母聚糖识别系统在直流dectin-1和DC-SIGN之间的交互。共焦显微镜的研究证实了这些发现通过展示DC-SIGN集群区域的接触酵母聚糖颗粒,但不是在吞噬颗粒从10分钟后拍摄的图像的分析,在吸收颗粒没有被DC-SIGN染色(图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig5/" target="_blank">5)。这一发现同意最近的报告表明DC-SIGN是mannan-inhibitable酵母聚糖受体,但不调解吞噬作用[<一个href="#B57">57,<一个href="#B58">58]。相比之下,吞没了酵母聚糖颗粒明显dectin-1包围。总的来说,这些数据表明,人类单核细胞的分化为DC伴随着DC-SIGN的感应,受体配合AA dectin-1引出一个活跃的新陈代谢。进一步支持相关的所扮演的角色的变化在AA DC分化的过程代谢增强的dectin-1-mediated AA肺泡巨噬细胞释放的gm - csf,用来促进DC分化细胞因子(<一个href="#B59">59]。与此形成鲜明对比的是,鼠腹膜巨噬细胞对酵母聚糖颗粒通过促进IIA磷脂酶的动员和到时间在缺乏生长因子和细胞因子(<一个href="#B60">60,<一个href="#B61">61年]。采取集体,这些发现强调环境因素的重要性在单核吞噬细胞的能力调节磷脂酶的催化性质。图的信号途径参与AA代谢与真菌DC刺激刺激如图<一个href="//www.newsama.com/journals/mi/2010/201929/fig6/" target="_blank">6。

2.6。AA代谢物和细胞因子的释放

真菌PAMP时代理通过dectin-1 DC-SIGN诱导细胞因子反应的特点是高生产的il - 10和IL-23,和低分泌白介素p70 [<一个href="#B55">55,<一个href="#B62">62年,<一个href="#B63">63年),而影响il - 12 p70原型TLR4受体激动剂的生产。这一事实可能病理生理学后果的持续感染,引发了一个问题所涉及的信号通路主要il - 10的回应。il - 10的规定生产一直强烈的主题研究TLR4-dependent模型和转录和转录后的机制已报告。至于转录调控,许多转录因子被认为是主监管机构,即Stat3 (<一个href="#B64">64年- - - - - -<一个href="#B67">67年],Sp1和Sp3 [<一个href="#B68">68年,<一个href="#B69">69年],c-Maf [<一个href="#B70">70年],NF-Y [<一个href="#B71">71年),NF -B (<一个href="#B72">72年- - - - - -<一个href="#B74">74年),Pbx1b(前b细胞白血病转录factor-1b) (<一个href="#B75">75年],c / EBP [<一个href="#B76">76年],NFAT [<一个href="#B77">77年,<一个href="#B78">78年],[分子<一个href="#B79">79年,<一个href="#B80">80年]。此外,转录后的调控il - 10的消息也被提出,因为高AU-rich元素的数量utr il - 10的信使rna (<一个href="#B81">81年rna结合蛋白tristetraprolin)和绑定,它撼动了消息(<一个href="#B82">82年]。解决后il - 10的稳定mRNA在放线菌素D的存在,这是得出结论,il - 10表达的调控转录机制[很好地解释了<一个href="#B83">83年]。人类和小鼠的计算机分析il10启动子进行了使用MatInspector程序和TRANSFAC数据库检测转录因子的结合位点。此外,DNA序列都与块对准器软件定义守恒的地区,因为这些地区更有可能代表功能相关的元素。几个网站发现以前与转录相关的监管il10,但有一些差异对其功能相关性和研究fungus-related刺激尚未报道。第一种方法是搜索字符串绑定活动共识的存在在人类发现的转录因子il10启动子。没有绑定活动统计和C / EBP共识序列核提取物中可观察到的细胞处理酵母聚糖,而绑定活动Stat1和Stat3被干扰素-引起。本构绑定活动Sp网站兼容Sp1和Sp3检测,以及绑定活动CRE共识序列。NF -B是激活酵母聚糖和有关的规定il10在小鼠巨噬细胞(<一个href="#B72">72年- - - - - -<一个href="#B74">74年)和cox - 2的规定。考虑到cox - 2的表达与il - 10感应,使用探针包含实验B从人类的网站子,发现功能的相关性。酵母聚糖和有限合伙人是强烈的NF -活化剂B绑定活动cox2网站。对酵母聚糖剂量依赖性和绑定是竞争的标记序列。然而,随着参与NF -序列B-dependent的监管il10表达在鼠标不是守恒的人类il10启动子的外观核提取物在酵母聚糖B-binding活动参与的挑战不是证明NF -B在il - 10表达在人类的规定。,上述结果不支持Stat1的参与,Stat3和c / EBP il - 10的规定进一步归纳和实验关注的可能参与NF -B和分子。

2.7。的影响和NF -分子的药理调制il - 10 B活动生产

因为和NF -分子的活动B可以通过药理工具、调制与8-Br-cAMP实验,细胞渗透性模拟环腺苷酸,,蛋白激酶抑制剂h - 89。环腺苷酸的细胞内水平的高度自己和8-Br-cAMP il - 10的生产影响有限,而与酵母聚糖刺激这些化合物的存在产生了协同增加il - 10的生产。值得注意的是,相反的效果观察存在的蛋白激酶抑制剂h - 89。与化工生产的影响相比分子活动的抑制,NF -的封锁B活动由两个结构无关的抑制剂是伴随着增加il - 10的生产。分子活动的监管以来有关钙/钙调蛋白激酶和CRE辅活化因子,既取决于传感器的活动和环腺苷酸水平(<一个href="#B84">84年),依赖的il - 10生产解决。生产,削弱了il - 10螯合。Ionomycin诱导生产有限的il - 10,从而表明细胞内生产决定il - 10水平并不是唯一的因素。此外,低浓度微摩尔的环孢菌素诱导明显降低il - 10的生产,因此指向钙调磷酸酶参与il - 10的规定生产。由于E前列腺素类受体类型2和4是参与调节细胞内的环腺苷酸水平和cox - 2和酵母聚糖是一个很强的诱导物生产的影响与特定抑制剂抑制COX-1 SC560, cox - 2与特定抑制剂NS398加以解决。这个孤立的这些化合物的浓度 M保留他们的选择性,对il - 10生产没有任何明显的影响。值得注意的是,组合产生了显著的抑制作用,因此建议考克斯亚型可能参与的自分泌生产调节细胞内的环腺苷酸水平和zymosan-induced il - 10的生产。总的来说,这些结果表明,DC细胞因子反应的极化和il - 10生产针对真菌替代酵母聚糖NF -取决于调整平衡B和活性分子,在这个过程中发挥作用的平衡。

2.8。不同的转录因子il - 10的角色归纳

解决直接的参与不同的转录因子il - 10监管,染色质免疫沉淀反应(芯片)进行了化验使用抗体活性P-CREB, CBP, c-Maf, NF-YA, Sp1和Pbx1。重要的P-CREB的绑定il10启动子在DC刺激酵母聚糖,但不是在控制细胞也在样品处理一个无关紧要的抗体。值得注意的是,这是与64倍增加CBP的数量相关il10子,从而表明酵母聚糖诱导的绑定P-CREB共激活剂CBP的CRE网站和招聘。芯片是负数时使用的引物进行PCR反应IL12p35区域启动子,不包含CRE网站。P-CREB绑定也检测到cox2启动子在酵母聚糖刺激,同意两CRE网站启动子的存在,这些网站的功能相关性cox2转录调节(<一个href="#B85">85年,<一个href="#B86">86年]。绑定P-CREB和CBP推动者是巧合的检测TORC2监管活动分子(换能器),共激活剂分子也称为CREB-regulated转录共激活剂(CRTC),在核提取物。此外,TORC2被发现与P-CREB coimmunoprecipitate。

mRNA的表达编码长和短形式的c-Maf在直流检测到,因此同意报告的这个因素诱导由有限合伙人和il - 4在单核细胞(<一个href="#B70">70年),但绑定il10启动子并没有检测到芯片分析。至于Sp1和Sp3,绑定活动的检测静息细胞并不是伴随着绑定的il10启动子,同意转录因子的概念,这个家庭行为的本构激活看家基因和TATA-less基因。Stat3与有关il10转录激活,尤其是应对TLR4的配体,不同酵母聚糖因其能力激活Jak / Stat通路TRIF (TIR-domain-containing adapter-inducing干扰素-)端依赖机制。Stat绑定活动和酪氨酸磷酸化Stat1没有检测到核提取物zymosan-stimulated直流,而他们在LPS诱导和干扰素-治疗(<一个href="#B87">87年]。这些结果显示了重要作用的转录调控分子il10对真菌的刺激酵母聚糖。

2.9。朗格汉斯细胞和响应

的反应直流真菌葡聚糖的特点是高IL-23的生产和发展响应。这是感兴趣的,因为细胞都牵连到许多炎症和自身免疫性疾病,包括多发性硬化症、炎症性肠病、哮喘和牛皮癣。到目前为止,只有初步数据表明,脂质介质参与的扩张细胞。拥堵的磷脂中介发布针对酵母聚糖发现在许多细胞类型和浓度升高的炎症病变。空军却被证明能够诱导il - 6的生产和发展细胞浓度picomolar添加时monocyte-derived朗格汉斯细胞和角化细胞。此外,当拥堵的朗格汉斯细胞(LC)使用然后cocultured anti-CD3 anti-CD28-activated T细胞,后者了表型,三倍增加转录监管机构ROR的表达t和增强生产IL-17 IL-21和il - 22生成。PAF-induced发展预防PAF受体拮抗剂WEB2086参谋长和中和抗体IL-23和il - 6。它也是依赖LC-T细胞接触所示Transwell实验(<一个href="#B88">88年]。这些数据表明,脂质介质,它的生物合成相关类二十烷酸级联,可以刺激LC产生il - 6和IL-23,,接触TCR-activated T细胞可以诱导分化细胞。这可能构成一个前所未知的刺激炎症过程的发展和持久性,可以适合药理学干预。

3所示。结束语

释放AA和连续生产类二十烷酸是一种明目张胆的同源配体PRR绑定的结果。释放的大量类花生酸在这些条件下使PAMP时最有效的和生理有关刺激AA在骨髓细胞的新陈代谢。然而,有许多方面的显著差异的影响PRR配体在不同的细胞类型,即使同一类型的受体可能是表达。这引发了有关问题不同的受体信号途径耦合,同时表达的作用受体识别相同或其他PAMP时出现在相同的配体,和监管机构积极和消极的影响。特别感兴趣的是PGN在中性粒细胞最相关的刺激,从而凸显出这些细胞中发挥的重要作用产生的化脓性感染。补充涂层PAMP时似乎必不可少的中性粒细胞和单核细胞的激活粒子模拟真菌细胞壁,而monocyte-derived DC细胞类型特别赋予响应真菌模式,即使没有调理素。这个属性取决于特定受体表达的膜,它认识到合作葡聚糖和mannose-containing模式。引发的信号网络结合绑定dectin-1和DC-SIGN直流特别适合细胞因子的转录监管模式的特点是低生产白介素p70和高il - 10的生产。这可以解释为激活的转录因子通过分子机制涉及辅活化因子CBP和TORC2 / CRTC2和自分泌前列腺素E的生产₂。这些发现强调需要进一步研究这些机械的数据转换成有价值的工具来治疗感染和自身免疫性疾病。

缩写

AA:	花生四烯酸
芯片:	染色质免疫沉淀反应
DC:	树突细胞
DC-SIGN:	树突特异性细胞间粘附molecule-3-grabbing non-integrin
集成电路:	免疫复合物
先生:	甘露糖受体
MDP:	Muramyldipeptide
点头:	Nucleotide-binding寡聚化域家族蛋白质
LC:	朗格汉斯细胞
有限合伙人:	脂多糖
LT:	白三烯
mTor:	哺乳动物雷帕霉素靶
:	Palmitoyl-3-cysteine-serine-lysine-4
PAMP时:	其分子模式
答:	前列腺素
改善:	Platelet-activating因素
PGN:	肽聚糖
PI3K:	Phosphoinositide-3激酶
PRR:	模式识别受体
TLR:	toll样受体
UTR:	Untraslated地区。

确认

作者感谢Drs。菲利普·泰勒和Marek Rola-Pleszczynski论文的评论。这项工作是支持由计划Nacional de Salud y Farmacia(批准saf2007 - 60446),军政府de卡斯蒂利亚y莱昂(Grupo de Excelencia GR230),和红色Tematica de Investigacion心血管de Salud卡洛斯三世从网页。作者感谢Olimpio博士蒙特罗的质谱分析和工作人员Centro de Hemoterapia Hemodonacion de卡斯蒂利亚y莱昂与白细胞分离他们的帮助。