文摘

对戒烟的纵向影响痰炎症细胞。我们旨在探讨痰炎症细胞和早期亚种群的变化后6 - 12个月戒烟。诱导痰从68年获得健康吸烟者之前和之后6个月()和1年(戒烟,从十不吸烟者的健康。炎症细胞通过形态,并通过流式细胞术早期亚种群内。12个月后痰巨噬细胞减少戒烟与基线相比,而中性粒细胞增加。此外,t细胞是减少吸烟者在戒烟后,吸烟者与不吸烟者相比,增加了6个月戒烟相比基线;结果经过1年的维护戒烟。这些新发现表明,戒烟可以平衡吸烟者与不吸烟者的某些炎症细胞,6个月内戒烟。

1。介绍

吸烟是主要的危险因素的发展大量的慢性肺部疾病,如慢性阻塞性肺疾病(COPD)和肺癌,和科学证据确凿的作用倾向和其他几个人的结果1]。尽管如上所述,主动吸烟是肺癌的主要原因,戒烟可以显著减少肺癌的风险在10年2 - 3次(2]。此外,持续禁欲从吸烟减少肺功能下降的速率不吸烟者的水平和降低开发临床上重要的慢性阻塞性肺病的风险2]。这些发现表明,吸烟的负面影响在戒烟后肺部分逆转。

香烟烟雾诱发肺损伤的机制尚未完全阐明。然而,它已经表明,早期的炎症反应香烟烟雾对后续的发展至关重要易感个体的组织损伤和疾病。此外,研究表明,它可能导致局部反应和封存的中性粒细胞在肺微脉管系统,导致组织损伤释放的有毒和趋化现象的介质,从而进一步使肺部疾病和炎症(1- - - - - -4]。淋巴细胞、CD4传播⁺已经提出t细胞淋巴细胞作为靶细胞吸烟。尤其是CD4记忆⁺发现了t细胞淋巴细胞选择性和剂量依赖性增加了主动吸烟,这是刺激通过习惯性吸烟的慢性过程5]。支持,炎症细胞的数量恢复到支气管肺泡灌洗液(BALF)中增加吸烟者与不吸烟者相比,主要是由于增加BALF巨噬细胞(6- - - - - -8]。类似BALF中,有一个显著增加痰和小气道巨噬细胞在吸烟者9- - - - - -12]。此外,一些报道表明,中性粒细胞和淋巴细胞增加了吸烟者(6- - - - - -9,12- - - - - -16]。CD4⁺t细胞在BALF减少吸烟者已报告(15,17)和CD8⁺t细胞增加,导致CD4细胞明显减少⁺/ CD8⁺比不吸烟者相比,(18,19]。同样,在小气道黏膜下层,CD4细胞减少的趋势⁺CD8 t细胞,增加⁺CD4 t细胞和明显降低⁺/ CD8⁺在吸烟者比不吸烟者(t细胞比例13]。

不太了解戒烟的效果。两个相对旧的横断面研究发现吸烟者和exsmokers[之间没有炎症细胞的差异20.,21),而另一些则表明,BALF巨噬细胞,但不是中性粒细胞数量减少exsmokers相比,吸烟者(22]。此外,值得注意的是,在COPD患者中,一个横断面研究诱导痰细胞概要文件没有发现差异和巨噬细胞表型抽过烟的吸烟者进行比较时23],可能表明持续的炎症变化在慢性阻塞性肺病患者倾向于航空公司。纵向研究表明,BALF巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞痰减少到不吸烟者戒烟后的水平(7,24- - - - - -26]。报告痰中性粒细胞是有争议的,要么减少(25]或[增加26]。只有一个纵向研究在“健康”吸烟者支气管活检中评估早期的细胞亚群,本研究发现CD8的病例中没有区别⁺和CD4⁺t淋巴球戒烟后(26]。没有报告的纵向研究戒烟的效果在“健康”痰早期亚种群内吸烟者。我们已经进行了一项纵向研究检测T淋巴细胞亚群的变化是否与气道炎症细胞逆转后6个月和12个月在“健康”吸烟者戒烟。

2。材料和方法

2.1。主题

伊拉克里翁的大学医院,克里特岛,诱导痰是获得68吸烟者戒烟诊所招募,在他们进入戒烟协议。所有科目提供书面知情同意和伦理提供的大学医院伦理委员会批准。入学后,所有吸烟者参与同一行为疗法项目,根据其程度的依赖(Fagerstrom测试)他们收到尼古丁替代疗法和/或安非他酮作为他们的戒烟治疗的一部分。十不吸烟者被广告和对照组。所有受试者免费的呼吸道感染时的研究或在月前研究和后续的6和12个月。受试者没有遭受任何疾病和没有收到任何药物第一次访问的时候,虽然有慢性支气管炎的症状。此外,基线肺功能测试在正常范围内,他们的胸部是正常的。参与对象的特征描述在表1。

2.2。痰收集、归纳和流式细胞术

痰标本成功收集所有基线的控制和68烟民,而足够的痰液质量好是由16个21成功的戒烟者在基线后6个月的随访中,在18日的21日没有复发(86%收集率)和12个月后的14戒烟者戒烟(收集率65%)。在每个后续确认吸烟的状态评估通过呼出的CO和尿液可替宁的水平。戒烟的进步和痰液收集在图中进行了描述1。

痰是诱导和加工如前所述在[27]。受试者吸入高渗盐水三分钟会话。吸入生理盐水的浓度是连续每个会话从3%增加到4%和5%。总是之间的会话吸入过程被打断,受试者被要求吹鼻子,嘴洗净,并试着咯血痰消毒盒。通过这种方式唾液样本的污染最小化和鳞状细胞样本的百分比减少。痰在接下来的30分钟或处理不超过两个小时,与样品一直保存在冰。痰液的体积测量和痰液样本的体积至少2 mL被认为足够了。痰(插头)越粘质的比例的选择和权衡。二硫苏糖醇(Calbiochem,达姆施塔特,德国)补充说,紧随其后的是磷酸缓冲盐(PBS)。然后,混合物过滤,离心。 The cell pellet was resuspended with PBS, a total cell count of the sample was performed, and viability was tested by means of trypan blue exclusion method. If cell viability was less than 50% and/or squamous cell contamination more than 20%, the sample was not processed further. Sputum cytospin slides were stained using May-Grunwald Giemsa for differential cell count. Cell counting was performed by one investigator (IB), blind to the origin of the samples. At least 400 cells were counted. Cytospins with50%的鳞状细胞400年nonsquamous细胞质量合格。细胞微分项表示为痰nonsquamous细胞总数的%。

大约10⁶痰白细胞被标记流式细胞术与单克隆抗体在老鼠对人类(从Immunotech所有;法国马赛的):phycoerythrin-cyanine (PECy-5)共轭anti-CD8,异硫氰酸荧光素(FITC)共轭anti-CD4和藻红蛋白(PE)共轭anti-CD45 30分钟或同形像匹配控制30分钟。使用精英COULTER血细胞计数器。在列表模式下数据获得和分析使用史诗精英。下面的控制策略应用:第一个死细胞,碎片和上皮细胞被排斥在SS-CD45散点图,然后淋巴细胞被封闭在一个FS-SS散点图基于它们的大小和粒度属性。最后CD4和CD8阳性细胞枚举表示为百分比%痰在CD4 / CD8淋巴细胞散点图(图2)。一些样品不够充分(10⁶痰液白细胞)标记流式细胞术和这偶尔错过病例占一些细胞计数(图1)。

2.3。统计分析

Shapiro-Wilk正常测试的测试。变量非正态的分布。组的受试者成功地设法戒烟,吸烟者的差异之前和之后的6 - 12个月的戒烟是测试使用弗里德曼测试后通过魏克森讯号等级测试看到成对的差异。吸烟者和对照组之间的差异使用Mann-Whitney进行测试测试。软件StatsDirect (Camcode·英国剑桥)使用。的概率值. 05被视为具有统计学意义。

3所示。结果

痰特征在吸烟者戒烟之前和之后都还在控制人口是在表中2。所描述的一般特征样本(即。,weight, total cell count, total cell count per gram, and sample viability) remained the same during the whole study, regardless of sampling time and subgroup. Moreover when comparing the samples of smokers at baseline with those of nonsmokers, the latter were found to have a higher percentage of sputum CD8⁺随后低CD4淋巴细胞的细胞亚群⁺/ CD8⁺比(22.3和13.9,和2.3和3.8,、职责)。炎症细胞的百分比(痰中性粒细胞、巨噬细胞)并没有发现吸烟者和非吸烟者之间的不同基线,并没有发现改变吸烟者戒烟后6个月。然而,经过12个月的戒烟,中性粒细胞的百分比较高(61和55岁,)和巨噬细胞的比例较低(34.5和40.6,)相比基线测量。

此外,如图3,CD4细胞的百分比⁺t淋巴球不吸烟者和控制之间的不同。然而,CD4细胞的数量⁺痰液淋巴细胞t细胞(表示为一个%)不存在改变后停止后6个月和1年随访。如上所述,CD8的比例显著降低⁺t细胞在吸烟者相比,控制。此外,CD8的百分比⁺t细胞增加后6个月戒烟者戒烟,并达到控制的水平(图4)。月的月期间6和1年的随访中,CD8的百分比⁺t细胞没有明显不同。当CD4⁺/ CD8⁺比率计算,发现更增加了吸烟者比控制在基线(图5)。此外,它显著减少吸烟的6个月之内,而与CD8的百分比⁺细胞、CD4⁺/ CD8⁺比例不存在改变6月后停止。

4所示。讨论

我们的研究结果表明,吸烟者显示CD8的比例较低⁺t细胞和CD4的增加⁺/ CD8⁺比不吸烟者相比,在基线。感兴趣的不过是CD8大幅上升⁺CD4 t淋巴球和减少⁺/ CD8⁺比观察6个月内戒烟的达到控制的水平。传统上,CD8的主要活动⁺T淋巴细胞被认为是便利的快速解决急性病毒感染,CD8的比例越低⁺t细胞表明吸烟者有一个赤字在肺细胞介导免疫性,一个网站的关键一线防御感染,并可解释吸烟者对病毒感染的易感性增加。此外,以前我们组表明痰树突状细胞成熟标志的表达在吸烟者减少,这可能会严重影响有效树突状细胞诱导免疫应答的能力,改变人口,因此呈现淋巴细胞子集吸烟者更容易呼吸道感染(28]。此外,12个月后戒烟痰巨噬细胞和中性粒细胞减少显著增加已经戒烟的人之一。

最好的我们的知识非常有限的证据表明,戒烟后评估早期亚种群内的变更。目前的研究是第一个纵向研究,调查戒烟的效果在早期亚种群内诱导痰的吸烟者没有并发疾病或肺功能障碍。

我们的研究结果似乎与之前报道的CD8增长矛盾⁺t细胞和CD4的减少⁺/ CD8⁺比吸烟者与不吸烟者相比,BALF和支气管活检(13,17- - - - - -19]。此外,一项研究在CD8支气管活检显示没有区别⁺和CD4⁺t淋巴球戒烟(之前和之后26]。这些差异可能反映了不同的炎症微环境之间气道腔采样和痰的气道上皮和粘膜采样支气管活检(29日]。另一个可能的解释是,吸烟会抑制CD8的trans-epithelial迁移⁺淋巴细胞,增加他们的数量在大气道壁,同时减少他们的数量在气道腔(30.]。因此,它可能是在吸烟者中,由于异常trans-epithelial迁移机制,CD8⁺t细胞是增加支气管活检和减少气道腔,通过诱导痰液样本。戒烟后,trans-epithelial CD8的迁移⁺t细胞恢复,因此更高的数字是诱导痰中发现(30.]。

本研究在痰液CD4没有任何区别⁺吸烟者和不吸烟者之间的t细胞数量,正如前面所示(8,16,19,26,31日]。此外,没有明显的炎症细胞的百分比的变化(neutrophis,巨噬细胞)在痰中发现吸烟者与不吸烟者相比。然而,与之前的研究结果相一致,巨噬细胞在戒烟后痰液减少的百分比(7,22,24- - - - - -27]。此外,中性粒细胞的百分比显著增加在12个月内戒烟,这是同意一项研究在痰26]。这可能指出痰中性粒细胞百分比的增加可能是由于细胞凋亡增加,transepithelial迁移和实际上可能代表一个保护机制将激活中性粒细胞从气道壁进入气道腔(29日]。然而,科学证据是不确定的其他研究表明,BALF中性粒细胞减少到不吸烟者的水平在6日,9和15个月后戒烟7在12个月),而痰中性粒细胞减少戒烟的25]。

本研究虽然小说和纵向,因此能够调查因果确实有一些局限性值得评论。首先,痰液样本细胞主要来自中央航空和痰腔炎症细胞和t细胞的变化不一定反映气道壁的变化。然而,常见的方法来研究组织,如支气管活检或手术标本的考试不能很容易应用于纵向研究。其次,正如痰是均质流式细胞术之前,可能会影响二硫苏糖醇(DTT)治疗淋巴细胞抗原必须被考虑。还原剂德勤可能改变了CD8抗原和抗体的干扰识别。在目前研究的影响的详细分析德勤在适当的表面标记没有执行。然而,Loppow等人研究外周血白细胞作为诱导痰细胞模型表明,CD8的荧光强度并没有被德勤改变,而有统计学意义(),虽然小,CD8 +淋巴细胞的百分比的变化。作者得出结论,关于淋巴细胞表面标记样本之间的相似性是保存,建议治疗的痰样本二硫苏糖醇不失效的采用免疫分析淋巴细胞(32]。此外,吸烟者的组的平均年龄大于对照组,可以认为,吸烟者和不吸烟者之间的淋巴细胞亚群的差异是由于年龄差距。然而,它已被证明,年龄主要减少CD4的数量⁺CD8 t细胞,而我们发现只有一个区别⁺t细胞(33,34]。此外,我们所有的受试者低于65年,t细胞的变化主要是在上面的主题报道,年龄。此外,它是可能的,性别因素可能发挥作用,作为数据提出了主要是基于男性受试者。这项研究的另一个局限性是相对较少的主题,特别是在一年后成功的戒烟者戒烟。这是由于增加吸烟1年内的复发率。考虑到上面的,进一步的研究,使用大量的吸烟者,需要调查的确切机制。

5。结论

最后,我们的结果表明,戒烟CD8的比例增加⁺CD4 t细胞,减少⁺/ CD8⁺比率在6个月内戒烟,不吸烟者的水平,并保持在这一水平的节制在12个月。这些结果表明,某些方面的炎症和免疫过程发生在吸烟者的航空公司没有现有的肺损伤或并发呼吸道疾病在这些受试者能够逆转成功戒烟。

承认

c . i Vardavas目前由一名空姐医学研究所(FAMRI)授予临床研究员奖(072058年)。