文摘
客观的。观察的效果鼠尾草miltiorrhizae注入炎性介质水平和肠系膜淋巴结在重症急性胰腺炎(SAP)和阻塞性黄疸(OJ)老鼠和探索的保护机制鼠尾草miltiorrhizae这些老鼠的淋巴结。方法。共有288个老鼠用于SAP-associated和OJ-associated实验。老鼠被随机分为sham-operated组,模型对照组和治疗组。在不同时间点操作后,肠系膜淋巴结的病理变化观察每组大鼠,分别。结果。淋巴结的病理严重程度得分SAP大鼠治疗组明显低于模型对照组(),而淋巴结的病理变化橙汁治疗组大鼠也表现出不同程度的缓解。结论。鼠尾草miltiorrhizae可以起到保护作用的淋巴结SAP或橙汁的老鼠通过机制与减少炎症介质的内容相关联的血液。
1。介绍
重症急性胰腺炎(SAP)和阻塞性黄疸(OJ),多个并发症和死亡率高的特点,已经成为一种重要的健康问题需要克服。两种不同疾病的发病机制非常复杂。近年来,人们已经发现,主要原因在SAP和橙汁多器官功能障碍的发生包括大量的各种炎症介质的释放,促炎和抗炎效果之间的平衡的失调,和免疫功能的紊乱1- - - - - -3]。
因此,重要的是要抑制炎症介质的过度释放(4,5和恢复免疫系统的功能6在治疗SAP或橙汁。一些临床研究已经表明鼠尾草miltiorrhizae作为一个辅助药物,有一定的治疗效果在SAP和橙汁。鼠尾草miltiorrhizae是一种常见的中草药(7,8];它能够显著改善SAP患者的临床症状和缩短恢复时间尿淀粉酶和肝功能损害,缓解腹痛、持续时间以及住院治疗的持续时间(9,10]。
此外,鼠尾草miltiorrhizae还可以保护肠粘膜,减少细菌易位和木糖醇,增强免疫力,提高手术安全性,缩短恢复时间在橙汁病人11]。在先前的报道中,我们发现一些炎症介质在SAP的血清内容和橙汁的老鼠(包括内毒素,解放军2和肿瘤坏死因子-)[10,12- - - - - -14),发现他们在模型对照组大鼠显著增加。在这项研究中,我们观察到肠系膜淋巴结的病理变化SAP和橙汁的老鼠,的保护作用和机制进行了探讨鼠尾草miltiorrhizae注射在淋巴结,进一步阐明炎症介质的治疗意义在SAP和橙汁。本研究是我们系列先前的报道密切相关。
2。材料和方法
2.1。材料
288名健康清洁级雄性SD大鼠,体重270至330克,提供的实验动物研究中心浙江中医药大学(杭州);牛磺胆酸盐和戊巴比妥钠钠从西格玛有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国);鼠尾草miltiorrhizae注射(每10毫升瓶含有活性成分相当于15克的原始医学)购买从正大青春宝药业有限公司有限公司(杭州)。
2.2。方法
2.2.1。动物分组
108只老鼠被用于SAP-associated实验,随机分为sham-operated模型controlgroup,治疗组(随机),进一步细分为3小时,6小时和12小时组(根据术后时间点);180个老鼠用于OJ-associated试验和随机分为sham-operated组,模型对照组和治疗组(随机),进一步细分为7天,14天、21天、28天组(根据术后时间)。
2.2.2。制备SAP模型和相关的治疗方案
大鼠麻醉的腹腔内注射2.5%戊巴比妥钠(0.2毫升/ 100克)。在无菌条件下,大腿皮肤切开暴露股静脉输血通道成立,通过连续输液维持使用microinfusion泵(1毫升/小时/ 100克)。随后,平均腹壁切口暴露十二指肠乳头,和一个5号注射器针头是用来刺破一个小洞在肠系膜无血管的地区。第一次插入硬膜外导管十二指肠腔通过孔,然后放入bile-pancreatic管对乳头的方向。导管头暂时使用微血管夹夹,和另一个微血管夹是用来挡住交汇的胆总管肝管,防止药物注入肝脏的回流。连接后的硬膜外导管一端输血转换器,3.5%牛磺胆酸盐钠(0.1毫升/ 100 g)输血在0.2毫升/分钟的流量使用显微镜下注射泵(由浙江大学、杭州、中国)。完成输血后,微血管钳和硬膜外导管为进一步维护4分钟,然后删除。检查然后进行胆汁是否泄漏。缝合后十二指肠的侧壁上的洞,腹腔是封闭的传统。Sham-operated集团执行只是通过移动打开腹腔后胰腺和十二指肠。 Fifteen minutes after successful operation, a single dose of鼠尾草miltiorrhizae注入(0.4毫升/ 100克体重)是经股静脉治疗组的大鼠,相同体积的生理盐水的解决方案是使用sham-operated和模型对照组(10- - - - - -16]。使用显微镜下注射泵连续注入生理盐水溶液保持在年底前3小时,6小时和12小时的观测时间在相应的组。
2.2.3。橙汁的制备模型和相关的治疗方案
大鼠麻醉后腹腔内注射2.5%戊巴比妥钠(0.2毫升/ 100克),腹腔开放识别和分离沿着肝十二指肠韧带胆总管。的老鼠模型对照组和治疗组,胆总管的近端与外科double-ligated线程,胆总管被切断,分层缝合腹壁的执行关闭腹腔。sham-operated组对老鼠而言,胆总管只是分离但不结扎,和分层缝合腹壁也执行关闭腹腔。的腹腔内注射鼠尾草miltiorrhizae注射剂量为0.2毫升/ 100 g / d给治疗组大鼠在同等体积的生理盐水溶液中使用sham-operated和模型对照组10- - - - - -16]。注入维持到7天,14天、21天、28天观察时间在相应的组。
2.2.4。标本收集
在相应的时间点操作后,SAP或橙汁老鼠与2.5%戊巴比妥钠麻醉和仁慈杀死。肠系膜淋巴结组织标本的收集,然后观察病理变化以及病理严重程度评分,分别。在12小时后在SAP操作实验,从每组两只老鼠被随机选中,肠系膜淋巴结的超微结构改变电子显微镜下观察。
2.2.5。统计分析
编译后的数据首先输入Excel表,然后读入SPSS15.0进行进一步分析。正常的数据表示为手段(标准偏差),而非正态的数据表示为中位数(四分位范围)。方差分析及两两比较用于正常的数据,而非正态的数据受到非参数测试,其中克鲁斯卡尔-沃利斯测试是用于成对比较和Mann-Whitney测试多个比较。耶茨卡方检验()是用于组间比较的死亡率。
3所示。结果
3.1。SAP-Associated实验
3.1.1。淋巴结的病理变化
(1)Sham-Operated组
严重,淋巴结的形态是正常的。在光学显微镜下,淋巴结的形态和结构都大致正常。扩大淋巴窦,窦细胞的增生以及过滤一些淋巴细胞,观察和嗜酸性粒细胞鼻窦在一些老鼠。在电子显微镜下,淋巴结的形态和结构都大致正常。
(2)模型对照组
严重,淋巴结的形态大致正常。在光学显微镜下,轻微的扩大和拥堵的间质毛细血管被观察到。消失在电子显微镜下,线粒体肿胀,空泡形成,以及淋巴细胞坏死和细胞凋亡;参见图1和2。
(3)治疗组
严重,淋巴结的形态大致正常。在光学显微镜下,病理变化略有减轻与模型对照组相比。在电子显微镜下,肿胀消失,线粒体空泡形成的一些被认为;参见图3。
3.1.2。淋巴结病理严重程度评分的比较
淋巴结的病理评分是根据标准进行报道文献[17]。在所有时间点操作,无显著差异在淋巴结病理严重程度得分之间指出sham-operated组和模型对照组();在6小时后手术,病理评分在治疗组显著高于sham-operated集团();在术后3 - 6小时,病理严重程度评分在治疗组明显低于模型对照组();见表1。
3.2。OJ-Associated实验
3.2.1之上。淋巴结的病理变化
(1)Sham-Operated组
严重,淋巴结的形态是正常的。在光学显微镜下,观察病理变化没有显著差异在每个时间点后操作;淋巴结的形态和结构都大致正常;滤泡生发中心的扩大和窦细胞的增生中看到一些老鼠。
(2)模型对照组
严重,淋巴结成为黄色在一半的大鼠手术后7天内,在大多数老鼠14日,21日和28天后操作;淋巴结的结构没有改变后各时间点操作。在光学显微镜下,观察病理变化没有显著差异在每个时间点后操作;术后7天,增大滤泡生发中心和窦细胞的增生被认为在大多数老鼠,和一些老鼠显示没有明显的病变淋巴结;在术后14天,滤泡生发中心的扩大和窦细胞的增生;21日,术后28天,滤泡生发中心的扩大和窦细胞的增生在大多数老鼠,在地幔和参差不齐的坏死区和生发中心;参见图4。
治疗组
严重,病变显示相比无显著差异在术后7天与模型对照组;在术后14天,淋巴结成为黄色但显示与模型对照组相比无显著差异;21日和28天后手术,病理变化显示与模型对照组相比无显著差异。在光学显微镜下,观察病理变化没有显著差异在每个时间点后操作;在所有时间点操作后,在淋巴结滤泡生发中心的边界是清晰;滤泡生发中心的扩大和窦细胞的增生在大多数老鼠;和一些老鼠显示没有明显的病变淋巴结;参见图5。
3.2.2。淋巴结病理严重程度评分的比较
淋巴结的病理评分是根据标准进行报道文献[17]。14日,21日,术后28天,淋巴结的病理严重程度评分模型对照组明显高于sham-operated集团();在所有时间点操作后,病理严重程度评分在治疗组明显高于sham-operated集团(),发现无显著差异治疗组和模型对照组();见表2。
4所示。讨论
虽然SAP和橙汁的发病机制非常复杂,最终的结果总是本地和系统性炎症反应(18),最终将引发插件(多器官功能障碍综合征)和财政部(多器官功能衰竭)。除了参与感染和炎症损伤继发于SAP或橙汁,肠道细菌易位的也密切相关的防御功能下降肠系膜淋巴结(19- - - - - -22]。因此,它具有重要意义,以保护肠系膜淋巴结的治疗SAP和橙汁。鼠尾草miltiorrhizae低成本的优势,广泛的药理作用,和更少的副作用,并能防止钙超载,清除氧自由基,预防炎症,改善微循环。一些动物实验结果显示(23- - - - - -25),鼠尾草miltiorrhizae能够显著降低胆红素和内毒素的含量过高,对抗SAP -或OJ-induced肠道通透性增加和肠道细菌易位,有效抑制炎症介质的产生,从而保护多个器官。我们之前研究的结果表明,SAP和橙汁的老鼠的存活率治疗组高于模型对照组(10- - - - - -16),这表明鼠尾草miltiorrhizae有一些疗效SAP或橙汁的老鼠。然而,在大鼠的生存率无统计学差异治疗组和模型对照组之间指出。我们推测,这可能是由于样本量太小了。
在这项研究中,我们发现,14日,21日,术后28天,淋巴结的病理严重程度评分的橙汁的老鼠模型对照组明显高于sham-operated集团(),表明橙汁可以引起淋巴结病理损伤的老鼠。在电子显微镜下,淋巴细胞的坏死和凋亡以及肿胀,线粒体嵴观察淋巴结的SAP大鼠模型对照组,表明SAP也能导致淋巴结病理损伤的老鼠。因为SAP和橙汁能引起淋巴结受伤,他们可能会威胁到人体的免疫功能的稳定性。因此,它是保护淋巴结用药物具有重要意义。
内毒素,其中最重要的炎症介质参与SAP的发病机制和橙汁,可能扮演重要角色的起始先生们/国防部和美联社的恶化26]。它可以直接刺激枯氏细胞释放炎症介质,包括氧自由基,TNF -、il - 6和引发,从而加重身体的炎症反应(27,28]。肿瘤坏死因子-是最重要的因素产生的内毒素的毒性作用。的过度释放肿瘤坏死因子-可能引起各种病理损伤。中国人民解放军2是一个Ca2 +端依赖酶(29日]。在SAP和橙汁,解放军2被激活,大量释放到血液。通过血液循环达到各种器官后,人民解放军2会破坏细胞的脂质膜,导致直接细胞毒性。一些研究表明,在SAP复杂的插件,解放军2可能引起严重的肺损伤和功能障碍,肝脏,肾脏和心脏30.)而其拮抗剂能改善SAP的病理变化(31日]。我们之前研究的结果表明,炎症介质的内容如内毒素、TNF -和中国人民解放军2在模型对照组明显高于sham-operated集团(10,12- - - - - -14),这表明炎症介质在SAP和橙汁大量释放。这些结果表明,鼠尾草miltiorrhizae能够显著降低内毒素水平,TNF -和中国人民解放军2老鼠在SAP和橙汁。这可能是因为鼠尾草miltiorrhizae能有效抑制内毒素的释放,从而减少生产其他炎症介质如TNF -、il - 6和引发。伴随炎症介质水平的下降,在手术后3 - 6小时,淋巴结的病理评分SAP大鼠治疗组明显低于模型对照组()。在光学显微镜下,我们发现在淋巴结滤泡生发中心的边界的橙汁治疗组大鼠很清楚,和一些淋巴结并没有发现异常。与模型对照组相比,治疗组的病理变化改善。因此,我们相信,炎性介质水平与病变的严重程度在SAP和橙汁的老鼠的淋巴结。换句话说,炎症介质能引起淋巴结病理损伤的老鼠,而鼠尾草miltiorrhizae可以起到保护作用的淋巴结老鼠通过减少炎症介质的水平。一些研究已经证明了这一点鼠尾草miltiorrhizae可以对抗endotoxin-induced效应(32]。我们认为鼠尾草miltiorrhizae发挥其保护作用淋巴结主要通过以下两个方面。
抗炎效果
在SAP中产生的炎症介质和橙汁可以导致肠道粘膜损伤。内毒素和肿瘤坏死因子-可以直接诱导局部缺血和肠黏膜的渗透性增加,调节细胞因子和炎性反应的大规模生产,从而诱导细胞的坏死和凋亡以及多器官功能障碍(33- - - - - -37]。通过抑制内毒素的生产和阻断炎性细胞因子产生的途径,鼠尾草miltiorrhizae能够有效地调节肠道微环境,保护肠系膜淋巴结,恢复肠道屏障功能。我们的一系列研究,或将在其他报纸报道,已经证明了这一点鼠尾草miltiorrhizae能够保护肠道黏膜,提供进一步的依据这一假设。
提高人体的免疫功能
它已经在一些研究指出38)内毒素可以影响人体的免疫功能通过诱导炎症介质的产生。免疫功能的下降会削弱人体的antiinfection能力,增加肠道细菌易位和木糖醇,加重炎症反应和组织损伤。因此,抑制炎症介质的产生,如内毒素、TNF -,中国人民解放军2,可以阻止炎症mediator-induced损害的免疫防御系统,这是重要的稳定身体的免疫系统。自鼠尾草miltiorrhizae也许有这样的效果,是值得深入研究在未来对免疫功能的影响。
简而言之,鼠尾草miltiorrhizae能够保护SAP和橙汁的肠系膜淋巴结大鼠通过减少炎症介质水平的血液。这种效应发挥了积极作用在稳定身体的免疫功能,保护肠黏膜屏障,减少细菌的易位。的药理作用鼠尾草miltiorrhizae进一步澄清,鼠尾草miltiorrhizae将更广泛地用于治疗SAP和橙汁。
请注意
我们声称这篇文章是原创,没有任何经济利益的公司或其竞争对手,所有作者作者符合标准。我们遵守了道德在这个动物实验研究。我们医院的伦理委员会批准了在动物研究中报道,和所有的老鼠没有被滥用和执行仁慈杀死观察时间在这项研究结束后进行。
确认
这项工作是支持的技术基础项目浙江省中医药科学(没有。2003 c130;不。2004 c142),为浙江省医学科学和技术基础项目(没有。2003 b134),严重的基础技术和项目开发杭州(没有。2003123 b19),强化基础项目杭州(没有的技术。2004 z006),基础医学科技项目杭州(没有。杭州2003 a004)和基础工程技术(没有。2005224)。