文摘

执行本研究探讨南沙参提取物的抑制效应(RAE) ovalbumin-induced哮喘小鼠模型。研究抗炎平喘药雷的影响,我们研究了肺嗜酸性粒细胞的炎症反应和抑制效应的发展在小鼠T细胞通过雷和环孢霉素(CsA)。我们检查确定,气道高反应流仪分析(流式细胞仪)、酶联免疫吸附试验(ELISA),实时定量(PCR), hematoxylin-eosin染色,马森和三色的染色在肺组织中,肺重量,总细胞和嗜酸性粒细胞数量的肺部组织。我们演示了如何RAE抑制炎症发展和降低气道损伤。

1。介绍

南沙参是伞形科的干燥根adenophora triphilla var.粳稻Hara。南沙参的行动加强巨细胞吞噬作用,白细胞增加,调节体液和细胞免疫,突变,减轻抑制腺癌的细胞,加强心脏功能,缓解发烧,和缓解疼痛和咳嗽1]。研究,南沙参乙酸cycloartenyl等化学物质,羽扇烯酮,谷甾醇、taraxerone二十八酸,praeruptorin [2]。这些化学物质具有抗炎和免疫调节活动3- - - - - -7]。

在现代临床医学中,它可以治疗萎缩性胃炎,肺炎,画眉,肺癌,pharyngolaryngitis,传染性气管和肺嗜酸性粒细胞的炎症反应,炎症和支气管高反应性8]。和哮喘是一种慢性炎症性疾病的粘膜和与生产过剩Th2细胞因子(il - 4, lL-5 IL-13)在肺嗜酸性粒细胞浸润。

Th2细胞发挥重要作用在过敏和哮喘的发病机制9)和嗜酸性粒细胞有至关重要的作用在过敏性疾病的发病机理和产生因素如CCR3 CCR5, EOTAXIN 2, TGF -1,TARC。疾病的炎症方面是复杂的肥大细胞,树突状细胞,T和B淋巴细胞和嗜酸性粒细胞扮演重要的角色。嗜酸性粒细胞增加和T淋巴细胞在支气管粘膜和支气管肺泡灌洗液(BALF)特色的炎症反应在哮喘患者和与疾病的严重程度(10- - - - - -12]。

临床上南沙参在韩国已被用于治疗哮喘。但研究尚未完成。为了阐明南沙参的抗炎平喘药效果(RAE)和环孢霉素(CsA),我们检查了雷的影响和CsA的发展在小鼠哮喘模型肺嗜酸性粒细胞的炎症反应。

因此,我们决定调查南沙参的影响总肺气流在老鼠身上,嗜酸性粒细胞,涌入总白细胞数,细胞表面标记流式细胞仪,通过ELISA测定BALF中细胞因子的生产。

2。材料和方法

植物材料和南沙参提取物。南沙参的样品购买从东方医学医院(2007年大田、韩国)。核电站被Young-Bae Seo教授和保证标本(Adenophorae)存入我们的实验室。植物材料(200克)和蒸馏提取三次H₂O(或蒸馏水)。然后,提取过滤和蒸发在旋转蒸发器(BUCHI、瑞士),干的冷冻干燥机(EYELA fdu - 540,东京,日本)产生的提取Adenophorae基数(20 g)。收益率提取的约10%。

动物
七十八周的女性C57bl / 6小鼠获得Daehan Biolink有限公司(Eumsung、韩国)。所有动物进行了程序依照制度动物保健和使用委员会的指导方针,韩国研究所生物科学和生物技术(大田、韩国)。我们被分成5组,每组有六个老鼠。

隔离CD4T细胞
从天真的C57bl / 6小鼠脾细胞分离。细胞CD4的丰富细胞群先染色的细胞anti-CD4(美国加州BD PharMingen)。cd25细胞被孤立的从这个人口首次与异硫氰酸荧光素染色(FITC)共轭anti-CD25马伯(BD PharMingen)其次是孵化magnetic-activated细胞排序anti-FITC珠子(Miltenyi研究,奥本大学,加州,美国。CD4T细胞(CS)列被选中,CD4和材料收集T细胞。一夜之间,孤立的细胞被激活孵化24-well板上涂上1g / mL anti-CD3(数据表:MCA500GA;描述:老鼠antimouse CD3;特异性:CD3;格式:净化;产品类型:单克隆抗体;克隆:KT3;同形像统计图:IgG2a;数量:0.25毫克,AbD Serotec), 1g / mL anti-CD28(数据表:MCA1363;描述:仓鼠antimouse CD28;特异性:CD28;格式:净化;产品类型:单克隆抗体;克隆:37.51.1;同形像统计图:免疫球蛋白;数量:0.2毫克)和雷(100年,50岁,10g / mL)添加到RPMI中补充一个单位/毫升青霉素、1g / mL链霉素,20毫米谷酰胺,50 mM-mercaptoethanol, 5%的边后卫刺激后48小时。

细胞因子的测量
后48小时内文化、样本在2 000转离心10分钟,和上层的存储80年^°c .小鼠il - 4 IL-5、IL-13和干扰素-量化使用ELISA试剂盒(美国加州BioSource国际,贝)根据制造商的协议。

肺组织和细胞的消化准备
单细胞悬浮体从肺组织和BALF被机械破坏孤立RPMI 1640中补充了2毫米谷酰胺,100 U /毫升青霉素,链霉素100毫升、50 mM 2-mercaptoethanol,消息灵通的20毫米,heat-inactivated 2%胎牛血清(美国纽约的边后卫,GIBCO大岛)。简而言之,肺从胸腔随后被删除。切碎后用无菌解剖刀,包含1组织在PBS孵化g / mL胶原酶IV和2g / mL dispase II 40分钟37^°C在无菌聚丙烯管。孵化后,肺组织大力用移液器吸取上下进一步溶解剩余组织团,然后过滤使用70m cellstrainer (Le Pont de Claix猎鹰,法国)。总细胞数手动在血细胞计数器室(费舍尔)。大量的细胞被旋转到玻片(Cytospin离心机、Cellspin Hanil,韩国)(400 xg 4分钟)。微分计算是根据标准形态的标准。

卵子敏感和吸入
通过修改协议(如前所述)(13,14),卵巢(500g / mL)在PBS和相同量的10% (w / v)硫酸铝钾(明矾;在蒸馏水Sigma-Aldrich)。培养后60分钟RT调整pH值6.5使用10 N氢氧化钠和离心机750 Xg 5分钟。卵子/矾丸resuspened原始体积的蒸馏水。实验动物是由腹腔致敏(i.p)注入卵子/明矾alum-precipitated Ag)包含100克的卵子(Sigma-Aldrich,首尔,韩国)绑定到4毫克的氢氧化铝在PBS (Sigma-Aldrich)与200年的数量g 0天,在天7和14日100毫升。和老鼠的挑战与气管内的(电脑)注射100毫升卵子/明矾(500g / mL) 21天,经历了一个气溶胶挑战与卵子/明矾30分钟/天,5天/周,8周(250升/分钟的流量,2.5%卵清蛋白在正常生理盐水)。七天第二次致敏后,小鼠暴露于雾化卵白蛋白为30分钟/天,5天/一周8周(250升/分钟的流量,2.5%卵清蛋白在正常生理盐水)。雷(450,45毫克/公斤)在溶液中形成口头管理五次一个星期,CsA(10毫克/公斤)在过去的8周每周注射三次一次0.1毫升。最后的卵子的暴露之后的一天,样品(BALF、肺细胞和血液)收集。

BALF
评估气道炎症,我们尝试BALF中嗜酸性粒细胞的积累。老鼠牺牲的腹腔内注射pentoparbitone钠(100毫克/公斤)。气管插管,左侧支气管并列组织学实验。

后立即牺牲,细胞在肺部被冲洗1毫升BALF恢复(1毫米EDTA, 10%的边后卫,PBS)通过气管进入肺部。总细胞数确定和100毫升的液体被cytospin到玻璃幻灯片使用cytospin离心机(Cellspin Hanil,韩国)(g为4分钟)。微分染色后细胞计数进行Diff-Quik染色组(百特医疗公司,迈阿密,佛罗里达州,美国)。BALF的上层清液储存在-25年^°C细胞因子的测定。

测定气道高反应性
总肺气流在老鼠估计方法的修改(15,16]。Buxco系统(生物系统XA;特洛伊Buxco电子有限公司,美国康涅狄格州)被用来评估气道收缩的程度在不同组的老鼠先前描述的协议。
金边等于暂停x论坛/ PEF,/ Tr(论坛:吸气流峰值;PEF:呼气流量峰值;Te:呼气时间;Tr:弛豫时间)。在这个实验中,小鼠雾化卵白蛋白3天,每天30分钟/天/一周12周。二十四小时最后吸入后,老鼠给雾化生理盐水,50克/毫升醋甲胆碱(Sigma-Aldrich)。然后气道反应性监测1、3、10和30分钟,连续。不同组之间的金边的价值通过学生的评估t以及。

抗体和流仪分析
所有抗体(CD3, CD4, CD8、CD69、CCR3 CD11b, Gr-1, IgE,和B220)购买的流量仪分析(BD)正欲从PharMingen(美国加州圣地亚哥)。细胞肺癌组织和BALF沾表示抗体染色缓冲区(包含1%的边后卫和0.01%南PBS₃在冰)10分钟,分析了双色流式细胞术在FACScan使用CellQuest软件(美国BD生物科学,加州山景城)。

酶联immimosorbent试验
白介素(il - 4、IL-5 IL-13 IL-I0), IgE生产从BALF和组胺释放表明小鼠的血清通过ELISA测定根据制造商的指示在单克隆抗体类老鼠酶联免疫试剂盒。代表所有数据的标准差至少三个不同的决定因素,并使用学生的比较t以及。

定量实时聚合酶链反应
研究平喘药南沙参提取物对细胞因子基因表达的影响从肺细胞,定量实时PCR定量标准化后进行微使用每个基因肌动蛋白基因的表达。短暂,总细胞RNA被phenol-chloroform-based从肺中提取方法(RNAsolB: Tel-Test Co . Inc .) Friendswood,特克斯,美国)根据制造商的指示。3的互补脱氧核糖核酸合成克总RNA进行了使用ReverTraAce-a-cDNA合成装备(Toyobo有限公司,日本大阪)根据制造商的指示。实时定量PCR进行使用应用生物系统公司7500快速实时PCR系统(美国应用生物系统公司,加州福斯特城)与以下引物。
引物序列如下:鼠标eotaxin 2 5^′-CCTGGACCAAAAACTCCAAA-3^′和5^′-GCGACTGGTGCTGATATTC-3^′CCR3 5^′-CCCGAACTGTGACITTTGCT-3^′和5^′-CCTCTGTATAGCGAGGACTG-3^′IL-13 5^′-ATGCCCAACAAAGCAGAGAC-3^′和5^′-TGAGAGAACCAGGGAGCTGT-3^′肿瘤坏死因子-,5^′-TGGGAGGAAGGGGTCTAAG-3^′和5^′-ACCTACGACGTGGGCTACAG-3^′il - 10、5^′-AAGCAGCCTTGCAGAAAAGA-3^′和5^′-TGGGAAGTGGGTGCAGTTAT-3^′TGF -1、5^′-TGGAGCAACATGTGGAACTC-3^′和5^′-CTGCCGTACAACTCCAGTGA-3^′TARC 5^′-CAGGGATGCCATCGTGTTTCT-3^′和5^′-GGTCACAGGCCGCTTTATGTT-3^′ 肌动蛋白5^′-TGGAATCCTGGTCCATGAAAC-3^′和5^′-GTCACAGTCAGCTGTATAGGG-3^′。

促炎基因表达分析SYBR绿色PCR Mastermix (ABl)和最后的200海里引物的浓度,使用肌动蛋白的内部标准。以下使用PCR概要:2分钟50^°在94 C, 10分钟^°40 C, 1分钟94周期^°在60 C, 1分钟^°c . SYBR绿色测量的数量在每个周期。的周期数样品的发射强度高于基线被称为相对定量(RQ)和目标浓度成正比。实时PCR是应用生物系统公司7500年在重复执行和分析的快速实时PCR系统手册(阈值:0.05;基线:6 - 15周期)。为促炎细胞因子生成的标准曲线肌动蛋白,连续稀释cDNA(1/1-1/16)准备和实时PCR进行如上所述。RQ-PCR②相对定量评估的表达在不同的样本。

)和m - t染色鼠OVA-induced哮喘肺组织
三个实验组,每组不同浓度的处理RAE五次一个星期,CsA后8周的每周3次。在实验结束时,小鼠肺部分沾)和m - t组织学上以修改后的协议如前所述和分析(17,18]。

统计结果分析
统计分析的数据,P使用学生的价值观进行了分析t以及软件程序(Startview 5.1;Abacus概念,伯克利,加州,美国。结果被认为是显著时值是,,。

3所示。结果与讨论

首先,我们研究了雷是如何对CD4产生影响T细胞在体外。从天真的C57bl / 6小鼠脾细胞分离。CD4T细胞在CS列被选中,CD4和材料收集T细胞。一夜之间,孤立的细胞被激活孵化24-well板上涂上1g / mL anti-CD3, 1g / mL anti-CD28,雷(100年,50岁,1010 g / mL)和CsA(环孢霉素g / mL)添加到RPMI中补充一个单位/毫升青霉素、1g / mL链霉素,20毫米谷酰胺,50 mM-mercaptoethanol, 5%的边后卫刺激后48小时。48小时后文化,样品在2 000转离心10分钟。鼠标il - 4、IL-5 IL-13和干扰素-。细胞因子的水平量化使用ELISA包根据制造商的协议。如你所见表1RAE降低il - 4、IL-5 IL-13细胞因子,它已经表明,雷可能抑制CD4活动T细胞,嗜酸性粒细胞诱导哮喘炎症。

结果表达的意思东南部。与对照组相比,数据统计上显著的价值t以及。

评估雷和CsA气道高反应性的影响,总肺气流在小鼠哮喘模型小鼠估计。金边是衡量Buxco系统最终吸入后1天,然后立即样本收集。接触动物雾化卵子导致气道高反应性的增加(AHR)与动物相比只接收PBS(图1)。如图1相对于动物致敏与卵子(对照组),RAE -(450毫克/公斤)和CsA(10毫克/公斤)治疗组显示显著降低气道高反应性methacholine-induced。但雷(45毫克/公斤)集团在金边价值下降不显著。这是伴随着肺癌和BAL总细胞数的变化(图4)。因此,以上结果表明,雷(450毫克/公斤)和CsA抑制气道高反应性的影响。

统计学意义、价值与控制t以及。

澄清的功效RAE在小鼠哮喘模型肺细胞,左肺组织学检查后24小时内最后抗原的挑战。的肺组织学分析PBS-exposed致敏小鼠显示正常的肺组织学(数字2(一),3(一个))。相比之下,类似于BALF研究中,组织学部分OVA-exposed小鼠气道炎症和肺组织的浸润嗜酸性粒细胞是主要观察肺支气管旁地区(数字2(b),2(c),3 (b),3 (c))。而另一方面,展览的气道炎症减少肺组织的组织学部分从雷和CsA(数字2(d),3 (d)),雷450毫克/公斤(数字2(e),3 (e)),RAE 45毫克/ kg-treated老鼠(数字2(f),3 (f))。CsA和RAE治疗对小鼠的肺组织组显示更少的嗜酸性粒细胞,白细胞,胶原蛋白积累而OVA-induced小鼠组。

BAL嗜酸性粒细胞的数量是按顺序连续两年或三天后增加卵子曝光。评估雷的效果和CsA气道细胞的招聘,我们调查了肺重量,总肺细胞,BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞。雷和CsA-treated组,肺总重量与OVA-exposed对照组相比显著降低,BALF的总白细胞数量,总肺细胞,嗜酸性粒细胞也比对照组显著降低(图4)。

C57BL / 6小鼠注射、吸入和喷洒卵白蛋白(OVA)为8周(每周5次)哮喘感应。两组不同浓度的处理南沙参提取物(RAE)后8周(每周5次)。在实验的最后,小鼠的肺被移除和加权。

细胞表面表达的CCR3被流式细胞术分析。检测CCR3表情肺、淋巴结、BALF、执行和脾细胞,双色immune-staining使用FITC-conjugated anti-CCR3与PE-conjugated anti-CD3马伯中描述的材料和方法。

评估雷和CsA治疗的疗效在粒细胞人口和CCR3表达式,我们比较雷和CsA的影响细胞内CCR3表达OVA-induced哮喘肺细胞用流式细胞术。CCR3-positive细胞的百分比与对照组相比降低(,图5)。结果与流式细胞仪也证实了实时PCR、mRNA表达的相对quantitiveness RQ肺细胞表达CCR3显著减少细胞接受RAE和CsA与对照组相比(表3)。此外,雷和CsA组与治疗卵巢导致Gr-1的显著减少/ CD11b细胞肺癌(图6)。

C57BL / 6小鼠注射、吸入和喷洒卵子为8周(每周5次)哮喘感应。两组不同浓度处理的雷后8周(每周5次)。在实验的最后,小鼠的肺被移除和分析流式细胞分析仪。

雷对白细胞的影响在肺部和BALF子集标有CD4的数量的变化/ CD8T细胞(Th2细胞)。CD3/ CD69IgE(早期激活T细胞)/ B220B细胞在小鼠哮喘模型对照组相比,和CD4的赤字/ CD8T细胞是伴随着并发乳糜泻的绝对数量的减少/ CD69,IgE/ B220B细胞(表2,图6)。雷和CsA组治疗卵巢导致进一步的CD4细胞显著减少/ CD8T细胞和IgE/ B220B细胞在BALF和肺组织明显降低,CD4细胞/ CD8T细胞和CD3/ CD69细胞在肺癌组织中显著下降(表2,图6)。

每个点代表均值±S。E 6老鼠。统计学意义、价值与控制t以及(LN¹:淋巴结;英航²:支气管肺泡灌洗)。

研究RAE是否与炎症相关细胞因子的生产、BALF上层的收集,和il - 4的作品,IL-5, il - 10, IL-13, IgE,组胺被ELISA分析。在图所示7、il - 4、IL-5 IL-13, IgE作品BALF和血清所抑制组胺生产雷和CsA。il - 4和IL-13水平都显著降低RAE -和CsA-treated组的老鼠。

因为IgE水平取决于BALF中il - 4, IL-5, IL-13,可能被视为一种额外的Th2细胞因子分泌指数,我们测量IgE BALF中所有组的老鼠。我们发现从OVA-induced小鼠哮喘模型BALF的IgE水平与正常组相比均有显著增加。雷和治疗CsA的这些老鼠明显抑制IgE的生产。这些结果支持这样的结论,雷和CsA镇压的一代th2型肥大细胞的免疫反应和活动的哮喘动物模型。

调查的影响RAE在肺组织的mRNA表达,细胞总RNA提取肺细胞治疗有或没有RAE卵子存在与否的敏感和吸入。如表所示3的mRNA eotaxin2、CCR3 IL-13, il - 10, TARC, TNF -中检测到肺细胞治疗PBS (NM),卵子(CT), CsA(10毫克/公斤),和雷(450年,45毫克/公斤),分别为(表吗3)。

C57BL / 6小鼠注射,吸入,喷洒卵子为8周(每周5次)哮喘感应。两组不同浓度的处理南沙参提取物(RAE)后8周(每周5次)。在实验的最后,小鼠的肺被切除和分析实时PCR。

PCR产品eotaxin2、CCR3 IL-13 TARC, TNF -放大从肺细胞RNA准备减少RAE-treated组与对照组相比。此外,雷没有影响il - 10在肺细胞(表mRNA的表达3)。结果表明,雷和CsA显著影响eotaxin2, CCR3 IL-13 TARC, TNF -mrna表达而不是其他细胞因子在肺细胞。这是伴有嗜酸性粒细胞涌入(图的变化5),平衡细胞因子(IL-13)生产(图7在某种程度上。

C57BL / 6小鼠注射、吸入和喷洒卵子为8周(每周5次)哮喘感应。两组不同浓度的处理南沙参提取物(RAE)后8周(每周5次)。在实验的最后,BALF被ELISA分析了收集和细胞因子产品。

支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病,其特征是变量气道阻塞气道嗜酸性炎症、气道高反应性和(19]。持续的支气管粘膜的炎症,主要表现为嗜酸性渗透,被认为是一个重要的过程在哮喘的发病机制20.,21]。

哮喘是一种慢性肺疾病,其特征是allergen-induced气道炎症和策划的Th2细胞(22]。雷是一个众所周知的草药在东方医学用于治疗抗炎和许多过敏性疾病。

抗炎作用的雷的发展OVA-induced嗜酸性粒细胞和高反应性在小鼠哮喘模型尚未全面调查体内。

免疫调制剂如环孢霉素(CsA)抑制单allergen-induced过敏性炎症,如嗜酸性淋巴细胞浸润,mRNA表达il - 4和IL-5 [23]。在这项研究中,研究评审工作可以调节BALF细胞和肺细胞的免疫反应OVA-induced小鼠哮喘模型。因此,雷和CsA炎性细胞因子的抑制活动产品可能有重要意义对RAE在哮喘和肺部炎症治疗活动。需要解决的主要问题是RAE参与气道炎症和哮喘的病理。在目前的研究中,我们检查了肺细胞炎症和BALF分析。

气道过敏原挑战导致气道炎症细胞,这是由人类和小鼠嗜酸性粒细胞(24]。有人建议,嗜酸性粒细胞导致一些过敏性哮喘的临床特征,包括组织损伤和(气道高反应性25]。

我们测量了RAE methacholine-induced AHR的敏化的影响。如图1,相对于动物致敏与卵子(对照组),RAE -(450毫克/公斤)和CsA(10毫克/公斤)治疗组明显下降methacholine-induced大战。这是伴随着肺癌和BAL总细胞数的变化(图4)。因此,以上结果表明,雷(450毫克/公斤)和CsA产生抑制性的影响气道高反应性。

组织学分析方面的部分从OVA-induced哮喘模型小鼠,CsA和RAE治疗小鼠的肺组织组显示更少的嗜酸性粒细胞,白细胞,胶原蛋白积累与OVA-induced老鼠相比集团(数字2,3)。

评估雷的效果和CsA气道细胞的招聘,我们调查了肺重量,总肺细胞,BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞。与雷和CsA,治疗组肺总重量与OVA-exposed对照组相比显著降低,BALF的总白细胞数量,总肺细胞,嗜酸性粒细胞也比对照组显著降低(图4)。这些结果表明,雷(450毫克/公斤)和CsA抑制嗜曙红细胞和白细胞的影响渗透进入肺部。

Antigen-activated CD4T细胞已被证明诱发哮喘的许多特征,包括细胞因子的分泌il - 4、IL-5, IL-13,调节粘液生产,炎症,和粘附分子(26- - - - - -28]。

高水平的interleukin-4 interleukin-5临床相关疾病严重程度的措施(29日,30.];IL-5已被证明调解嗜酸性粒细胞的招聘31日]。减少BAL IL-13水平建议有益疗效通过减少粘液生产(32]。

评估雷和CsA治疗的疗效在粒细胞人口和CCR3表达式,我们比较雷和CsA的影响细胞内CCR3表达OVA-induced哮喘肺细胞用流式细胞术。CCR3-positive细胞的百分比降低与对照组相比(图5)。结果与流式细胞仪也证实了实时PCR,相对quantitiveness RQ的mRNA在肺细胞表达CCR3基因表达显著减少细胞接受RAE和CsA与对照组相比(表3)。我们的结果表明,雷可以减少CCR3的表达BALF细胞(尤其是嗜酸性粒细胞),数据的兼容气道嗜酸性粒细胞涌入和高反应性。

循环eosino-phils CD11b表面表达显著升高在各种过敏性疾病,包括过敏性皮炎和支气管哮喘33]。我们观察到吸入挑战雷和CsA管理导致气道CD11b减少巨噬细胞,Gr-1粒细胞与卵子后,观察到的挑战相比。雷和CsA组治疗卵巢导致Gr-1的显著减少/ CD11b细胞在肺和淋巴结(表2,图6)。我们的结果表明,雷和CsA下调和CD4 CCR3表达式CD8T细胞、CD3CD69,IgEB220B细胞在BALF和肺细胞(表2,图6)。

在研究中,各种细胞因子的生产从OVA-induced BALF细胞对照组已经增强,但雷——CsA-treated主题显著降低。我们建议雷的抑制机制和CsA il - 4, IL-5, il - 10,和IL-13生产可能涉及降低il - 4的生产,IL-5, IL-13 IgE,这将抑制在气道嗜酸性粒细胞涌入,然后更多的因素合成雷和治疗CsA BALF IgE等降低(图7)。这是伴随着BAL嗜酸性粒细胞计数(图的变化4)在肺组织(表和mRNA表达3)。

RAE降低il - 4、IL-5 IL-13 BALF和血清中组胺释放显著(图7),信使rna表达的IL-13肺(表3)。肺组织学的研究数据2,3)表明,RAE减少肺组织中嗜酸性粒细胞,这个结果可能是由于降低il - 4水平导致减少轧制和嗜酸性粒细胞的附着力。基于这些结果,推断,RAE可能有抗过敏药通过抑制il - 4分泌,对过敏性支气管哮喘的影响和后果,从B细胞抑制IgE分泌,降低il - 4可以减少嗜酸性粒细胞浸润到肺部通过减少和粘附的滚动循环内皮细胞嗜酸性粒细胞。

IL-5 th2型细胞因子,促进招聘和嗜酸性粒细胞的活化。IL-5刺激释放化学介质的嗜酸性粒细胞(34]。因此,IL-5一直牵连在过敏性疾病的发病机理35,许多研究都集中IL-5是一个可行的目标治疗哮喘和过敏性疾病(36]。

在我们的研究中,RAE显著降低BALF IL-5水平(图7)以及mRNA的表达IL-13肺(表3)。像这样,雷在OVA-induced哮喘小鼠减少嗜酸性粒细胞浸润和激活。我们认为这一行动可能是由于抑制IL-13, IL-5 Th2细胞分泌物。

这些结果表明,雷可能抑制T细胞的过度活动和Th2细胞因子,参与过敏性哮喘的发病机制,从而调节Th1 / Th2免疫系统的失衡过敏性哮喘。从这些结果,我们假设RAE Th1、Th2之间具有免疫调节功能,并对过度Th2细胞因子抑制的影响。

Th2细胞因子以及IgE水平升高与气道代的发展。尤其是IL-13已经证明调解在几项研究[过敏肺气道高反应37]。

此外,这些细胞因子在肺mRNA的表达显著减少了雷(表2)。从这些结果,我们推测RAE可能抑制这些细胞因子通过降低气道高反应。

支气管上皮细胞产生的细胞因子和趋化因子包括il - 6,引发,g - csf, gm - csf,咆哮,eotaxin, TARC。促炎细胞因子il - 1、tnf一般调控的表达和释放这些细胞因子/趋化因子(38]。

哮喘患者的支气管上皮细胞和正常受试者表示TARC蛋白质,和哮喘患者比正常人更强烈的表达。和tnf和il - 4 TARC蛋白的诱导表达。此外,TARC蛋白质和mRNA的表达几乎完全抑制了糖皮质激素。气道上皮细胞代表TARC的重要来源,它可能扮演了一个角色通过旁分泌机制发展的过敏性呼吸道疾病(39]。

我们的研究表明,eotaxin2 TNF -线粒体dna, TARC基因表达在细胞治疗肺细胞明显减少雷和CsA与对照组相比(表3)。我们的研究结果表明,RAE antibronchial受伤的可能影响,数据的兼容气道嗜酸性粒细胞涌入和高反应性。所以组织学分析部分从OVA-induced哮喘模型小鼠,CsA和RAE治疗小鼠的肺组织组显示更少的嗜酸性粒细胞,白细胞,胶原蛋白积累与OVA-induced老鼠相比集团(数字2,3)。

总之,雷和CsA对气道炎症产生深远的影响,通过抑制小鼠哮喘模型的气道高反应性IL-13, IL-5, IgE,嗜酸性粒细胞CCR3表达式,CD11b细胞表达。RAE在东方医学哮喘的治疗活动可能是部分相关。(a)中包含的免疫调节药物RAE减少Th2细胞免疫反应。(b)减产的IgE将显著降低哮喘发生在个人。(c) RAE可能抑制嗜酸性粒细胞活动产生影响,降低气道损伤。