文摘

在两个体外研究中,我们检测了免疫(途径)的影响柑橘/干尼亚的房价,分别健康和过敏捐赠;外周血单核细胞(PBMCs)是孤立的外周血和分析多克隆后体外刺激t细胞。分化能力和影响Th1 (IFN - )和Th2细胞(IL-5)检查。柑橘类/干尼亚的房价有一个选择性影响t细胞的分化产生相对比白介素il - 10。,它似乎也影响监管生产(il - 10)的诱导t细胞的子集。在体外能够中和(某种程度上)变化,过敏性鼻炎的特点,对成熟,分化,免疫系统的活动。因此,柑橘/干尼亚的房价可能会恢复鼻炎患者的免疫状态干扰,基本上可以永久足以让过敏症状消失。

1。介绍

过敏性鼻炎是一种状态,其特征是打喷嚏,水样鼻涕,鼻塞和瘙痒。条件是越来越普遍,尤其是在西方世界,它会影响成年人口的20%左右。过敏性鼻炎分为季节性过敏性鼻炎(花粉症),这是由花粉和霉菌引起的,和常年性过敏性鼻炎屋尘螨和宠物毛发是主要诱因。严重的频谱宽,包括相当数量的患者有严重症状与常规药物治疗耐药治疗(抗组胺药和局部鼻腔糖皮质激素)1]。过敏性鼻炎在几个西方国家的平均患病率为12% (2]。

季节性过敏性鼻炎或花粉热是一种我立即过敏反应由特定的IgE抗体季节性过敏原,导致粘膜炎症表现为打喷嚏、瘙痒,rhinorrhoea,鼻腔阻塞。花粉(6-40 米直径)从风媒传粉草、树木、野草,和孢子真菌是最常见的高空过敏症。草花粉是最常见的季节性过敏性鼻炎的原因。最高水平的花粉atmosphereare发现5月至7月,花粉浓度的50粒/毫米3在所有易感人群与症状相关。治疗季节性过敏性鼻炎症状治疗的选择与当地或口服抗组胺药和/或局部皮质类固醇。免疫疗法,包括舌下免疫调节治疗,表示分组人口有限的患者(3]。

柑橘类/干尼亚的房价是一个人智学医学,它包含提取柠檬柑橘柠檬和柑橘(干尼亚延髓)(4]。八十多年了,这药“柑橘/干尼亚comp。”规定为皮下注射或鼻喷雾剂对病人患有季节性过敏性鼻炎。开展了一项调查临床经验,一群39活跃荷兰全科医生(4),表明皮下柑橘类/治疗干尼亚房价安瓶是极其有效的。首先,一个永久的效果从柑橘治疗/干尼亚的房价往往是经验丰富的,这表明问题的病人声称持久地承担更少的花粉热,甚至他们没有抱怨。其次,在两周内效应发生,后三个月,实际的治疗。第三,效果最佳的治疗后数年。此外,调查指出,预防管理花粉季节开始前与柑橘/干尼亚的房价可能更有效的病人的问题。最近,积极影响柑橘/干尼亚的房价是一群中获得13以下特点:患者(a)对草过敏花粉,(b)患有花粉热,平均9年,(c)的使用抗组胺药的必要性关于投诉的性质(5]。此外,前瞻性观察性研究的影响柑橘/干尼亚房价鼻喷雾剂花粉症症状的报道积极的结果在140例没有副作用(6]。我们现在进行体外研究研究可能的免疫(途径)的影响柑橘/干尼亚comp。

2。材料和方法

2.1。献血者

从健康和过敏的个体,8毫升的血液收集钠heparinate-coated真空采血管(美国加州圣地亚哥BD生物科学)。桦树花粉过敏的个体是敏化(拉斯特6 +)和草花粉(拉斯特4 +),与一个积极的和他也是食物过敏皮肤针刺试验苹果和樱桃。血液被稀释1:1与IMDM包含GlutaMAX (IMDM;Gibco-BRL、佩斯利、苏格兰)在密度梯度离心法Ficoll-Paque + (Amersham生物科学,乌普萨拉,瑞典)。PBMC层洗两次IMDM和细胞生存能力和细胞浓度测定台盼蓝排斥。之前获得知情同意执行的样本收集和实验经当地伦理委员会批准。

2.2。培养条件

PBMCs Yssel的培养基培养 在湿润的气氛中为5% 的密度 可行的细胞/毫升。Yssel的媒介包括IMDM补充1% Penicillin-Streptomycin (Gibco BRL),额外添加根据Yssel et al。[1984],和1%人类AB血清(Gibco BRL)。细胞被镀在48孔板的浓度 细胞/毫升和培养 。经过五个小时的适应文化条件下,介质的各种刺激或匹配的体积是补充道。文化与150 ng / mL anti-CD3刺激+ 100 ng / mL anti-CD28monoclonal抗体(美国加州圣地亚哥BD Pharmingen)或在培养基培养(7]。

2.3。柑橘类/干尼亚Comp。刺激

两种情况下(正面和负面的控制)发生在柑橘的存在/干尼亚comp。100 L / 1毫升文化两个稀释培养基稀释(稀释和1:3)。提取(Gencydo)来自(Weleda Zoetermeer,荷兰)。

2.4。细胞生存能力

一百万PBMCs冲洗,随后孵化了2 200年L膜联蛋白V-APC (BD生物科学) L膜联蛋白V缓冲区根据制造商的协议。15分钟在冰上的潜伏期后,这些细胞被剥离下来10分钟(400克),并在200年resuspended L膜联蛋白V缓冲和2 Lπ(1毫克/毫升;σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。细胞流式细胞分析仪上进行分析(流式细胞仪数组,BD生物科学)。

2.5。免疫表型

PBMC子集的免疫表型是由染色与以下两个表面抗原单克隆抗体( )混合物:(1) -hCD3 (PE-Cy7), -hCD4 (PE), -hCD8 (APC), -hCD25 (APC-Cy7);(2) -hCD3 (PE-Cy7), -hCD14 (APC), -hCD16 (PE), -hCD19 (APC-Cy7) -hCD56 (PE)。所有抗体都购买了BD生物科学。

每口井, 细胞被旋转96井U-bottom板。染色的细胞被孵化缓冲区(1% FCS和0.1米 在PBS)包含表面标记或匹配的同形像控制在黑暗中30分钟在冰上。这些细胞被洗一次PBS和resuspended PBS流式细胞术。四色流仪收购进行流式细胞仪数组,使用BD FACS-array软件。电子门是排除碎片和至少10 000事件/样本。阳性细胞的百分比是同形像控制纠正。

2.6。增殖能力

PBMC的扩散能力研究了细胞内表达的核ki - 67抗原(ki - 67;BD Pharmingen)。ki - 67在休息的细胞核抗原缺席,但出现在所有其他细胞分裂周期的阶段以及在有丝分裂阶段(8]。在每一个好了, 100年PBMCs孵化了 L Cytofix / Cytoperm (BD Pharmingen) 15 - 20分钟在冰上修复和permeabilize细胞。细胞被洗烫/洗两次缓冲区(BD Pharmingen)和孵化与反- ki - 67 PE抗体,或同形像匹配控制,稀释在烫/洗缓冲区在黑暗中30分钟在冰上。以后,这些细胞被洗烫/洗缓冲区,在PBS resuspended,流式细胞分析仪测量。值表示为细胞阳性ki - 67 mAb纠正同形像的控制。

2.7。细胞因子

PBMC文化上层清液il - 1进行了分析 白介素、干扰素- 肿瘤坏死因子- il - 4, IL-5、il - 10和IL-13内容。细胞因子的生产与仪测量珠化验Flex集(BD Pharmingen)。这个协议中使用的所有缓冲区得到从BD CBA可溶性蛋白质主缓冲区工具包(BD Pharmingen)。上层清液收集,储存在−20 2周内,和测试。执行的过程是根据制造商的协议。流式细胞仪上的样本测量数组,使用FCAP软件。定量测定的灵敏度的限制,根据制造商,为il - 1 1.1 pg / mL ,为il - 4和干扰素- 0.3 pg / mL IL-5 0.5 pg / mL, 2.3 pg / mL il - 10、il - 12 2.2 pg / mL, IL-13 0.6 pg / mL, TNF - 0.7 pg / mL 。

3所示。结果

3.1。影响柑橘/干尼亚的房价在健康的捐赠者PBMC

PBMCS成分分离和分析的子集。PBMC子集的百分比是63% CD3 + t细胞(CD4 + CD8 + Tc-cells Th-cells和12.6%)50.4%,8% CD19 + B细胞CD14 +单核细胞,5%和12% CD16 / CD56 + NK细胞。后一天(表1(表)和四天2文化的),结果表明,柑橘/干尼亚的房价不仅直接诱导t细胞增殖,但也激活单核细胞产生选择性细胞因子(TNF -生产 ,il - 1 、il - 10、il - 12)。然而,柑橘/干尼亚房价诱导il - 10比白介素生产最有可能来源于单核细胞,从而刺激免疫调节的产物(il - 10)单核细胞比单核细胞的免疫反应(il - 12)的子集。这些monocyte-related柑橘的影响/干尼亚的房价是一天内可检测和被发现在文化正常治疗剂量。随后,t细胞的激活和增殖是由柑橘suprastimulated /干尼亚的房价在多克隆刺激。柑橘类/干尼亚的房价没有影响细胞的生存,也似乎有毒的PBMC细胞亚群。

表1
平均分数后一天(健康的捐赠者)。
表2
平均分数四天后(健康的捐赠者)。
3.2。影响柑橘/干尼亚的房价在过敏捐赠PBMC

后四天(表3),结果表明,柑橘/干尼亚的房价能够恢复降低il - 10在PBMC文化生产的过敏的人。较强的免疫调节平衡(il - 10)和抑制增强Th2反应(减少il - 4和IL-5生产)是伴随着il - 12的增加产量和减少生产干扰素- 。即使在4天之后,单核细胞刺激柑橘/干尼亚的房价是肿瘤坏死因子的生产——发现的 和il - 10。

表3
平均分数四天后(过敏捐赠)。

4所示。讨论

在这里,我们表明,柑橘/干尼亚的房价有选择性影响t细胞的分化与细胞因子的生产;il - 10的生产相对比il - 12。,柑橘/干尼亚的房价似乎也影响监管生产(il - 10)的诱导t细胞的子集。因此,因此,柑橘/干尼亚的房价可能会产生过敏降低效应,它并不关心Th1感应和有浓度过敏原特异性Th2反应,减少轴承的风险归纳的慢性炎症,甚至很有可能增加患自身免疫。

最近的进展主要关注的领域有浓度过敏原特异性免疫治疗协议。该免疫疗法被广泛认为发生,通过恢复干扰Th1-Th2平衡(9- - - - - -12],要么与感应有浓度过敏原特异性(阻塞)IgG4抗体,或诱导调节性t细胞的子集。调节t细胞的确切作用子集玩这些机制方面还没有模糊。关于这些免疫治疗协议的发展,特殊的过敏原准备,获得纯化天然或重组过敏原,是必要的,需要被开发。

柑橘类/干尼亚的房价可能会诱导更多的调控t细胞,CD4 + CD25 + Fosp3 +自然还是antigen-induced il - 10和/或TGF-b生产Tr-cells,,因此,免疫抑制,这能够减少过敏原专门Th2细胞激活。我们的研究结果暗示柑橘/干尼亚的房价不会产生一个完整的免疫抑制状态,导致减少抵抗感染和减少预防肿瘤。这是符合长期临床经验和实证研究的结果的使用柑橘/干尼亚comp。

基于这些体外的调查,我们假设柑橘/干尼亚的房价能够中和(某种程度上)变化,过敏性鼻炎的特点,在建设方面,成熟,分化,免疫系统的活性。,它可以解释对过敏性鼻炎患者治疗积极作用与柑橘/干尼亚的房价在先前的研究和临床实践发现。

基于本研究的结论是非常重要的,因为过敏性鼻炎的标准治疗是基于长期使用抗组胺药,可能结合本地应用糖皮质激素,在坚持和/或严重的症状。这些治疗倾向于减少症状,但他们自己不拥有任何免疫治疗效力。这意味着它是强制性的个别病人继续使用这种药物多年。根据我们的试验数据,表明体外柑橘/干尼亚的房价能够调节Th1-Th2平衡,我们期望柑橘/干尼亚的房价有一个免疫治疗效能。这增加了临床治疗效果从柑橘/干尼亚comp,注射,局部应用程序。这意味着长期治疗与柑橘/干尼亚在几年房价注射,在花粉季开始之前,可以恢复鼻炎患者的免疫状态干扰,这可能足以让过敏投诉消失。

承认

作者要感谢Weleda荷兰提供研究药物。