文摘

环氧合酶(COX)催化前列腺素的形成,导致动脉粥样硬化的炎症。我们的目的是研究功能是否C的变体 在人类cox - 2基因多态性与冠状动脉粥样硬化的严重程度测量冠状动脉水平。赫尔辛基猝死研究尸体解剖材料(n= 300)由芬兰男人突然去世。冠状动脉粥样硬化病变的面积是估计的数量,和冠状动脉狭窄测量。发生心肌梗死(MI)评估。基因分型是通过限制酶分析。男人带着小C等位基因有更大领域的复杂的病变(P= .024)和更多的冠状动脉狭窄50%以上(P= .036)代表共同GG基因型与男性相比。cox - 2多态性与MI无关。我们的数据表明,cox - 2可能参与斑块的增长。

1。介绍

环氧合酶(COX)催化花生四烯酸的前列腺素类生产前两个步骤,许多前列腺素包括环前列腺素和血栓素。酶有三个亚型。COX-1持续表达的最基础条件下的人体组织。cox - 2的表达主要是由生长因子诱导针对炎症刺激,有丝分裂原,细胞因子(1]。COX-3 COX-1派生的同工酶。其功能作用仍然知之甚少(2]。

cox - 2水平在慢性炎性疾病,包括动脉粥样硬化。发现cox - 2表达内皮细胞、平滑肌细胞、单核细胞和巨噬细胞在人类动脉粥样硬化病变(3,4]。许多前列腺素由cox - 2的路线包括凝血恶烷刺激血管收缩,血小板聚集,leukocyte-endothelial细胞粘附,导致动脉粥样硬化和血栓形成5- - - - - -7]。然而,前列腺素主要由内皮细胞内皮(PGI2),它充当一个血管舒张药,抑制血小板聚集,白细胞激活,和附着力8]。

函数G C多态性位于765完全上游的转录起始站点(−765 g C)已被确定在人类cox - 2基因与C等位基因导致减少启动子活性体外(9]。之前的研究表明,C等位基因可能会提供保护作用对临床事件,例如,心肌梗死(MI),中风(10和脑血管缺血11]。C等位基因也可能与低水平的炎症标记物,如C反应蛋白和有氧/脑血管和hypercholesterolemic患者的白细胞介素- 6 (9- - - - - -12]。然而,相比这些数据之前,Hegener等人发现没有证据表明cox - 2的一个协会多态性/单体型与MI的风险事件和缺血性中风(13]。此外,Kohsaka等人最近报道,cox - 2 - 765 g C多态性实际上是事件发生中风的危险因素在非洲裔美国人14]。

之前的矛盾的观察表明,额外的评估是必要的调查之间的关联cox - 2 765克 C多态性和心血管疾病。我们有检查了一基因多态性与动脉粥样硬化的严重程度的风险在冠状动脉水平以前收集解剖系列基因同质性的芬兰的男人突然从医院就去世了。

2。对象和方法

2.1。主题

hsd是为了调查因素诱发猝死在芬兰的中年男人住在赫尔辛基和它的环境15]。解剖系列收集1991 - 1992年在12个月的法医学在赫尔辛基大学。解剖的迹象是心脏死亡的一个原本健康的人,意外死亡,疑似中毒,自杀,死亡与治疗。原始研究33岁的男性人口由一系列潜在的300 - 70年(平均53年)。本系列解剖覆盖28%的所有死亡的男性在这个年龄段在赫尔辛基的面积在研究期间。死因是心脏病(冠心病(CHD)、心肌病、肥厚,心脏扩张)的38.3% (n= 115),其他疾病的20.3% ( )和暴力死亡(自杀事件和事故)41.4% ( )。男性冠状动脉事件(MI、AMI与冠状动脉血栓或冠状动脉血栓)(n= 72)也与男性相比无冠状动脉事件(n= 228)。

2.2。测量冠状动脉疾病

尸检,冠状动脉造影进行使用硫化液体硅橡胶与氧化铅混合作为对比剂(16]。近、中、远端缩小左冠状动脉前降的主要树干(小伙子),右冠状动脉(RCA)和左动脉(LCX)是用千分尺测量橡胶模型。冠状动脉狭窄的百分比除以直径(毫米)获得了最大的狭窄的最近的近端影响铸造模型的一部分相同的动脉。基于50%以上狭窄的存在在一个,两个,三个主要的冠状动脉,研究人口分为子组根据病变血管的数量。

LCX的近端部分的小伙子,RCA免费切割,开了,附加到一个卡,然后缓冲福尔马林固定在10%。脂肪的血管壁随后彩色苏丹IV的方法。动脉粥样硬化改变评估如下:脂肪,纤维斑块,复杂的病变,钙化的面积。持平或引起内膜的损伤明显染色的苏丹IV和没有显示更复杂的变化分为脂质条纹。升高没有显示溃疡病变,出血、坏死或血栓形成被认为是纤维斑块。一个区域被认为是复杂的病变,如果表示一个或多个修改上面提到的,有或没有钙沉积。主动脉的一部分显示强烈X-ray-positive信号的收音机被认为是钙化的一个领域。动脉粥样硬化病变和冠状动脉段进行评估的总区域使用标准的平面技术(15]。发散粥样的比例变化的总表面积计算基于冠状动脉(15]。发生心肌梗死的系列宏观和组织学检查证实了心肌。冠状动脉血栓的存在被记录在解剖冠状动脉解剖时纵向。

解剖和cox - 2基因型数据300年可用的情况下,这些由最终的研究人群。

2.3。底层冠状动脉疾病的风险因素

配偶、亲属或亲密的朋友死者尸检后两周内接受了。除了问题属于猝死的风险(即。,arterial hypertension, diabetes), additional questions were included to define the smoking habits of the deceased. The relative/friend was asked whether the person had smoked during his life and how many cigarettes he had smoked daily. Data on smoking habits were obtained in 148 cases. In addition to COX-2 genotype and autopsy data, complete data on all risk factors were available in 118 cases.

2.4。cox - 2的基因

周围的人类cox - 2基因启动子区域−765 g C多态性是聚合酶链反应(PCR)扩增使用从心肌中提取的dna作为模板。DNA扩增的引物设计基于发表的人类cox - 2基因序列(NCBI / U04636 gi: 496975)使用Primer3软件(http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)。25μl-reaction由50 pmol每个引物(标签哥本哈根,丹麦哥本哈根)(前进 -CATTAACTATTTACAGGGTAACTGCTT - ;反向 -TGCAGCACATACATACATAGCTTTT - ),200μ每个核苷酸和2米5 U HotStarTaq DNA聚合酶在1 PCR缓冲(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)。PCR条件包括15分钟的初始聚合酶激活在94步°C 35变性的三步循环94紧随其后°在56 C 30秒,退火°在72 C为30秒,扩展°C 30秒,最终扩展为72°C 5分钟。

228个基点的引物生成的片段被SsiI基因分型(Fermentas维尔纽斯,立陶宛)限制性内切核酸酶。PCR产物被裂解成碎片的168基点和60个基点,如果G等位基因。消化产品解决了2%的比喻(Cambrex东卢瑟福,新泽西,美国)琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色可视化。

2.5。统计分析

结果分析了SPSS为Windows软件,版本14.0(美国SPSS,芝加哥,IL)。平均值±标准误差(SE)是连续变量的报道。使用正态分布连续变量,one-way-ANCOVA随着年龄的增长,身体质量指数(BMI)、吸烟状态(yes / no)、高血压(yes / no)和糖尿病(yes / no)作为协变量。因为变量测量动脉粥样硬化改变不是正态分布,用于脂肪条纹值的对数转换,纤维斑块、钙化,和复杂的病变,但结果显示在原油的形式。

3所示。结果

人口的研究中,cox - 2基因型频率GG 74.4%, GC 24.3%, CC 1.3%。因为只有代表CC基因型4例,男性携带C等位基因混合在一起作为统计分析的一组。

男人带着C等位基因明显较大的地区比男性复杂冠状动脉病变的GG基因型(P调整年龄和体重指数= .024)。经过进一步的调整与吸烟、高血压和糖尿病,基因型和钙化(有显著区别P= .031)和基因型和复杂的病变(P= .017)(表1,图1)。cox - 2基因型之间不存在显著差异,纤维斑块的地区或脂质条纹。C等位基因携带者有较高的狭窄50%以上,两个或三个主要冠状动脉(P= .036)与GG基因型相比,调整年龄和体重指数。经过进一步的调整与吸烟、高血压和糖尿病,这种差异更显著(P= .008)(表1,图1)。没有统计上显著的基因型之间的联系和发生MI(急性、老,或任何MI)年龄、体重指数、吸烟、高血压和糖尿病作为协变量(表1)。

表1
结合cox - 2基因型与冠状动脉粥样硬化性改变,协会的主要冠状动脉狭窄超过50%,和心肌梗死。
(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图1
协会的cox - 2基因型与动脉粥样硬化改变。P值与年龄、BMI ANCOVA作为协变量。误差线代表SE。

男性冠状动脉事件(MI、AMI与冠状动脉血栓或冠状动脉血栓)(n= 72)也与男性相比无冠状动脉事件(n= 228)。在冠状动脉事件组,男人带着C等位基因明显更大的领域比男性复杂冠状动脉病变的GG基因型与调整年龄和体重指数(P= .040)之后,进一步调整与吸烟,高血压,糖尿病(P= .015)。在冠状动脉事件组,C等位基因携带者有较高的狭窄50%以上,两个或三个主要冠状动脉与GG基因型相比,调整年龄和体重指数(P= .040)之后,进一步调整与吸烟,高血压,糖尿病(P= .050)(表1)。cox - 2基因型之间没有显著差异的存在和纤维斑块的地区或脂肪条纹的冠状动脉事件组(数据没有显示)。基因型没有不同组中无冠状动脉事件(表1)。

4所示。讨论

这项研究的结果提出,芬兰的中年男子与猝死,罕见的cox - 2 C等位基因765 g C多态性有更多先进的冠状动脉斑块,以更广泛的地区复杂的病变,与男性相比GG基因型。本协会最为明显与冠状动脉事件对象。cox - 2启动子基因型的变化没有显示出与早期冠状动脉粥样硬化的特点是高脂肪条纹和纤维斑块。一项研究表明,765克 对心肌梗死[C等位基因可能会提供保护效应10]。C等位基因也可能与低水平的炎症标记物,如C反应蛋白和有氧/脑血管和hypercholesterolemic患者的白细胞介素- 6 (9,12]。对比这些数据之前,Hegener等人发现没有证据表明协会的多态性与MI的风险事件(13]。此外,Kohsaka等人最近报道,765克 C等位基因实际上是事件发生中风的危险因素在非洲裔美国人14]。我们没有观察到这种多态性MI的协会,但是更大的样本量比我们的材料是需要解决的问题。然而,我们的观察复杂的动脉粥样硬化的冠状动脉水平表明,765克 C等位基因实际上是冠心病的一个危险因素。我们的研究的主要局限是只有118例有完整的数据底层冠状动脉疾病的风险因素。然而,这进一步调整统计加强而不是削弱我们的发现在最初的300人,根据年龄和体重指数进行调整。然而,有必要研究一个更大的样品确认目前调查的结果。

男人带着C等位基因有更高的数量超过50%的冠状动脉狭窄,而人GG纯合子。相比之下,C等位基因和动脉粥样硬化的严重程度之间的关系曾被研究过在冠状动脉血管造影术在意大利人口,但没有发现协会(10]。下的多态性研究似乎是相对罕见的芬兰人口GG的频率为74.4%,GC 24.3%,频率和CC 1.3%而在意大利人口GG 50.7%, GC 43.3%, CC (6.4%10]。

狭窄的发现经常观察到男性拥有C等位基因比男性代表GG基因型可能提供支持的假设C等位基因可能导致更广泛的斑块的增长。事实上,由于C等位基因会导致降低了启动子活动(9),它可以导致lower-prostaglandin生产。基质金属蛋白酶(MMPs)和细胞外基质(ECM)降解酶在一定程度上是由铂族元素2这是通过cox - 2产生的路线。由于减少铂族元素2生物合成,降低MMP-9表达式可以效仿[17),导致积累的细胞外基质,平滑肌细胞。与我们的结果一致,Cipollone et al。10)报道,C等位基因携带者的颈动脉斑块相比有更多的间质胶原蛋白斑块的GG比如可能导致斑块的增长18,19]。

总之,罕见的cox - 2基因C等位基因与复杂的斑块和严重的冠状动脉狭窄程度。这表明cox - 2可能参与斑块的增长。没有见过对MI的保护作用。

确认

本研究从医学研究基金由基金支持坦佩雷大学医院,毕卡地区芬兰文化基金会的基金,芬兰心血管研究基金会,Yrjo Jahnsson基础。