文摘
最近的研究在一群德国患者SSc牵连MCP-1基因的SNP (A到G)易感性SSc的因素。反映了需要复制的遗传关联研究,我们研究了如果这个SNP与SSc在另一个白人人口有关。MCP-1A / G基因型测定使用PCR-SSP 46 SSc患者和449名健康受试者,所有无关和斯洛伐克(斯拉夫语)的起源。MCP-1的分布A / G基因型符合哈迪温伯格平衡患者和健康对照组。在MCP-1没有差别SSc病人和健康受试者之间G等位基因频率(例:0.23;控制:0.24;)。此外,MCP-1GG比如也代表SSc患者和健康者()。MCP-1协会A / G SNP SSc最初观察到在德国人口不是斯洛伐克复制的人口。
1。介绍
系统性硬化症(SSc)是一个复杂的自身免疫性疾病的特点是纤维结缔组织的皮肤和内脏器官的变化(1]。病因学的SSc迄今为止还不清楚,然而,基因多态性对炎症介质,tissue-matrix蛋白质和生长因子最近在SSc(自身免疫性和纤维化过程中涉及1- - - - - -4]。
特别是,趋化因子(碳碳主题)配体2 (CCL2)已被确定在流通和SSc的病变患者(5- - - - - -10]。这个趋化因子,也称为MCP(单核细胞化学引诱物蛋白质)1,对单核细胞/巨噬细胞化学引诱物,也是一种诱导物胶原蛋白的生物合成(1,10,11]。因此,一直猜测MCP-1 upregulation可能导致细胞积累SSc病变(7,8),也可能是负责大量的细胞外基质蛋白沉积SSc皮肤(1,10,11]。
最近,一个单核苷酸多态性(SNP) MCP-1基因的启动子区域(−2518 a / G),而G变异可能与增加MCP-1基因转录活动(12),考察了德国SSc患者(13]。群体中MCP-1−2518 GG该病人中涉及运输MCP-1 G等位基因作为SSc的风险因素(13]。然而,迄今为止,这一观点还没有被确认在其他群体或群体。同意执行规则关联研究[14),本研究旨在复制之间的关联MCP-1−2518 A / G SNP和系统性硬化症在另一个病人高加索血统的人占多数,即在斯拉夫语斯洛伐克人口。
2。材料和方法
2.1。病人和控制
系统性硬化患者46 (SSc)被包括在研究中(表1)。符合基本要求复制的遗传关联研究[14],SSc病人参与本研究的分类,特点,分组根据美国风湿病学院的标准15];运用类似的方法也在研究复制(13]。患者不相关个体的斯洛伐克起源和招募了一个三级转诊中心(国家风湿性疾病研究所、Piestany斯洛伐克共和国)。无关的控制人口由449名健康志愿者招募在附近的伯拉第斯拉瓦(284 / 165,平均年龄±SD, 49±10年),没有任何的自身免疫性疾病排除了健康问卷和访谈。
匿名使用的DNA研究的知情同意,本研究的目的是获得所有的科目。研究进行的相关伦理委员会批准国家风湿性疾病研究所,Piestany和医疗能力在伯拉第斯拉瓦和奥洛。
2.2。评估MCP-1−2518单核苷酸多态性
从外周血白细胞基因组DNA提取标准盐析法。SNP MCP-1−2518 (rs1024611)基因分型与特定序列引物聚合酶链反应(PCR-SSP)所描述的其他地方16]。简单地说,标准和突变等位基因在两个独立的放大反应。常量反向引物(5′TGA GTG TTC ACA标签GCT TC 3′)用于放大转发特定引物为标准的等位基因(5′GTG GGA GGC AGA CAG CTA 3′(5)或突变的等位基因G′GTG GGA GGC AGA CAG CTG 3′)。在这两种情况下,扩增子的大小是175个基点。内部控制的反应条件和使用,采用原型方法方法,在别处也有描述(16]。
2.3。统计数据
哈迪温伯格平衡测试使用试验观察到的和预期的基因型频率。不同等位基因、基因型和表现型(马车)频率在病人和对照组进行了评估测试使用Woolf-Haldane修正在少量的情况下。P值<。05年被认为是重要的。本研究复制主要结果的统计力量从最初的德国研究[13](不同的比例MCP-1−2518年SSc GG该患者和对照组)决心根据其它地方描述的协议(17]。
3所示。结果
等位基因的分布、基因型和表型的MCP-1−2518 A / G SNP SSc和控制患者人口呈现在表2。的分布MCP-1−2518基因型是符合哈迪温伯格平衡病人和对照组()。从最初公布的统计力量复制本研究观察德国人口(13)达到99%。
没有显著的差异分布MCP-1−2518*G等位基因之间的观察SSc患者和健康对照组()。此外,MCP-1−2518和MCP-1 GG该等位基因2518年*G等位基因携带者也代表SSc患者和健康对照组()。
因为不同表型的SSc最近觉得不必然有共同的遗传背景(4],我们进一步的兴趣如果MCP-1−2518 A / G变异可能与内脏器官参与或有限/扩散形式的SSc在我们的病人。GG基因型与胃肠道苦难(),当分配MCP-1−2518 A / G SNP是胃肠道参与患者和健康对照组之间相比。等位基因和表型频率患者胃肠道苦难或分散形式的SSc没有不同于那些在健康对照组()。当患者胃肠道参与比较患者没有痛苦,我们没有发现差异的分布MCP-1−2518 SNP (、表3)。此外,等位基因、基因型和表型频率有限的患者SSc类似分散形式的SSc(表中观察到3)。同样,MCP-1−2518 SNP与肺(、表3)或肾参与我们的SSc病人(数据未显示)。
4所示。讨论
尽管一个适当的系统的方法,目前的研究并没有显示之间的关联MCP-1−2518 A / G单核苷酸多态性和系统性硬化症在斯洛伐克人口。因此,我们的数据不确认这些发现从德国人口(13),不支持假设MCP-1−2518 A / G SNP是直接参与SSc的遗传易感性。
探索协会MCP-1−2518 A / G SNP对SSc易感性,我们的病例对照研究使用相同的方法策略与原始报告13),但重要的是大小的情况下在我们的研究中是2.5折比原来(46和18)。此外,当前的研究的统计力量复制初始观察达到99%。这个值是足够高,以检测遗传协会描述在最初的研究中,因为它超过80%的阈值(17]。
你可能认为有差异的观察在北欧和东欧人口可能是由于不同的种族背景。然而,没有差异的频率MCP-1−2518 G等位基因之间的GG纯合子和德国和斯洛伐克的健康人群,进一步,这是类似于其他报道的白人人口(13,18]。斯拉夫语和德语的人口在这方面,也没有在光谱的分布差异的22个细胞因子snp坐落在1,2,4,5,6,7,12日,16日和19个染色体19,20.]。
由于病人在两个中心为根据统一的国际标准,这是不可能的,这两个研究之间的差异是由于异构疾病表型。在我们看来,最简单的解释的积极遗传协会报道,在最初的研究中,可能是非常小的样本容量的病人组(),可能不反映真实分布MCP-1−2518 A / G SNP在德国患者(13]。支持这个解释,最近的一项研究调查的趋化因子多态性谱白人(韩国)人口2)包括SSc病人比原德国研究[13),类似于我们,没有MCP-1 A / G SNP和疾病之间的关系在韩国人观察2]。
尽管SSc的病人的数量在我们的研究远远高于原始报告(13),在一个特定的情况下它可能被视为“次优:”我们的研究可能不够强大来检测可能的“真正的协会”,它将大大弱于观察到初始德国研究[13]。这种情况可能发生如果这MCP-1多态性赋予风险只有特定表型的SSc overpresented德国患者(13),但小或完全没有在斯洛伐克患者组。在这方面,德国研究招募了SSc病人皮肤的参与而其他内部器官的感情没有这里报道13相比之下我们的斯洛伐克的病人。考虑到这一点,我们可以推测,MCP-1−2518 A / G SNP可能与一个特定的SSc的表型。
最后,从遗传学的角度来看,目前的研究和最初的观察之间的矛盾(13)可以解释的存在连锁不平衡(LD)。尽管MCP-1−2518 A / G一直是最常见的调查MCP-1 SNP,还有其他位于MCP-1基因的单核苷酸多态性(12]。此外,数据的功能意义MCP-1−2518 A / G SNP是不一致的13,16),研究SNP并不是唯一因素参与调节MCP-1基因转录活动(12]。因此,它可能是推测,在设定的系统性硬化症,MCP-1−2518*G等位基因标记了连锁不平衡(LD)和所谓的“随意”等位基因位于附近。在这种背景下,角色的调查MCP-1基因多态性应该针对广泛的SNPs和考虑单体型组合(12]。
总之,这个病例对照研究在斯洛伐克人口不提供进一步证据最近制定的概念,MCP-1−2518 A / G SNP参与整体系统性硬化的遗传倾向。然而,这还有待阐明MCP-1−2518 A / G SNP可能在连锁不平衡诱发变异赋予易感性SSc,这可能是位于多态CC趋化因子基因集群在17号染色体上。
确认
作者承认Onderkova和s Zachova的技术帮助。这项工作是支持在捷克共和国的拨款机构部分(GACR310/05/2614)和捷克政府(MSYCR-MSM6198959205)。本研究的结果部分的1日联合会议上提出的欧洲国家社会的免疫学和欧洲免疫学大会16日6 - 9 2006年9月,法国巴黎。