生殖毒性Theobroma可可:增加生存指数,Nongenotoxic Proimplantation潜力

文摘

不加糖的天然可可(UNCP)在大鼠生殖毒性评价。初步基因毒性可能被评估使用C57Bl / 6小鼠DNA彗星试验测试。治疗剂量(TD;900毫克/公斤)和高剂量(高清;9000毫克/公斤)UNCP。白色Wistar鼠被用于两个实验小组。雌性收到UNCP 15天前与未经治疗的男性。雄性收到UNCP 48天前与未经处理的雌性交配。亚急性毒性观察14天期间UNCP口服。观察结果表明,高尾部DNA百分比与甲磺酸甲酯政府在所有组织进行了分析。 The lowest tail DNA% value was observed in the liver (1.64 ± 0.26) and kidney (1.63 ± 0.30) during UNCP (TD) administration. UNCP did not induce observable physical congenital malformations on the pubs of treated female and male rats, lacks genotoxic potential, and did not adversely affect pregnancy index, pub weights, and survival index, but UNCP exhibited proimplantation potential ( )。

1。介绍

在加纳,草药用于医药和食品以各种形式,特别是用于增强性和生殖功能。这种草药之一Theobroma可可的形式UNCP [1- - - - - -3]。

不加糖的天然可可粉(UNCP)是一种摧毁高档nonalkalized粉用作饮料在加纳,西非,世界的大部分地区。UNCP获得的种子Theobroma可可后,准备删除的可可脂通过发酵可可豆,粉干燥、装袋、风选、烘焙、研磨、和紧迫。提取和压缩后,获得的固体块被摧毁成细粉。的药理和健康福利UNCP之前研究[1- - - - - -3]。UNCP一直在推荐的管理简单简单的疟疾、支气管哮喘、原发性高血压、糖尿病,春药(4- - - - - -7]。

护心,王亚南、平喘药和春药UNCP势(Theobroma可可)把这个营养食品在可能的情况下,导致其消费者过度消费。此外,毒性研究营养食品是罕见的。没有记录,可见UNCP带来的不利影响。常见的概念是药物和保健品的植物来源比较安全的使用,因为他们是天生的1,4,8,9]。化学成分和植物化学的和宏观/ microelemental UNCP已经被充分研究过的组件使用各种方法[8- - - - - -13]。UNCP含有可可碱1.9%左右,0.21%的咖啡因,和微宏单元的水平元素铜、铜^{2 +}0.2984±1.71毫克每4 g,这超过了允许的极限900μg (1,9,14,15]。罗等。16- - - - - -18提倡,高浓度铜元素的增加脂质氧化损伤,蛋白质和DNA。可可豆,nonalkalized UNCP,高百分比的多酚,表儿茶素,原花青素与碱化可可粉(19]。

单(2000毫克/公斤)和重复口服治疗UNCP(300毫克/公斤,900毫克/公斤,和1500毫克/公斤,两周)对大鼠睾丸没有引起明显的毒性影响(15]。然而,现有的研究在UNCP非常稀疏的生殖毒性。

几乎没有证据表明生殖毒性的研究Theobroma可可(UNCP)。潜在的致畸性和致癌性已报告在一些研究中,同时减少身体体重增加和附睾的重量已观察到可可碱和高剂量cocoa-extract-treated动物组织(20.- - - - - -28]。同时,可可碱管理饲料严重受损的女性的生殖能力瑞士cd -老鼠,就是明证毫无生气的数量的增加每窝幼崽(29日]。

中药和保健品通常用于管理各种形式的生殖健康问题,特别是在怀孕。有增加使用这些药物的女性健康管理(30.- - - - - -32]。报告可以发现一些药用植物的种子中提取怀孕动物和一系列的不良事件(33- - - - - -36]。此外,还有其他报告生殖毒性相关的使用一些植物药物用作食品和营养食品而其他人也被证明有严重先天畸形在怀孕的老鼠24]。UNCP经常在这个实例中使用各种各样的非洲人口大量易感人群。

预计UNCP可能现在没有孕产妇和生殖毒性和动物的繁殖性能。因此,本研究旨在建立一个初步的基因毒性的潜力,建立“没有观察到的效应水平”(NOEL) /水平(科学)的UNCP没有观察到的不利影响和可能的生殖毒性UNCP对生殖功能的影响在雄性和雌性大鼠的初期发育阶段非常高剂量。

2。材料和方法

2.1。测试药物制备和剂量

布朗金^®天然可可粉获得霍德有限公司,阿克拉,加纳(批号BT620IT)和注册的加纳食品和药品管理局(FDA / dk06 - 070)悬浮在淀粉1%。新鲜UNCP总是准备UNCP之前管理解决方案。控制动物收到1%淀粉悬浮的溶剂。UNCP管理通过胃内的路线在治疗剂量(TD) 900毫克/公斤,高剂量9000毫克/公斤(10倍治疗剂量)按照新药理实验临床前研究指导原则的物质(37]。

2.2。实验动物

实验进行健康和成熟(2.5 - -3.0个月)白Wistar鼠(60名男性和120名女性;体重250 - 300克)和雄性C57Bl / 6小鼠(30 - 45 g)从实验获得Biomodeling部门,药理学和再生医学研究所(RIPRM)命名的e·d·戈德堡,俄罗斯托木斯克。

2.2.1。畜牧业

所有的动物都被安置在铝的笼子里(VELAZ, 60×30×25厘米)与消毒细刨花植物园与环境条件下20 - 240 C的空气温度、相对湿度(50±20%),空气通风通过高效微粒空气过滤器,空气exchange-12-15卷的空间环境条件的12 h光/ 12 h暗周期。动物在粒状全粒混合饲料喂养饲料质量和兽医办公室,托木斯克,俄罗斯。噪音和照明水平50 - 55分贝和300 - 350 lx,分别。的挥发性物质的浓度范围(氨和一氧化碳)由传感器是0.4 - -1.0毫克/米³。动物可以免费获得干净的自来水(无效的固体杂质,有效氯,有机物质和重金属)中可用消毒用金属nozzles-drinkers塑料瓶。实验按照规则采用欧洲公约保护脊椎动物用于实验和其他科学目的。同时,机构和特定国家法律严格坚持在进行这项研究。

实验伦理委员会批准的协议了,“委员会控制的内容和使用实验动物”命名的e·d·戈德堡P-55-G / 12.10.17俄罗斯,与协议。这些协议也依法进行经济合作和发展组织(38- - - - - -40]。

2.3。DNA彗星试验

分析碱性单细胞凝胶电泳(彗星试验)曾被用来研究chemical-induced DNA损伤的潜力在单个细胞和小鼠的基因毒性40,41]。

在这项研究中,雄性C57Bl / 6小鼠被随机分为四组中的5个动物,管理测试的单剂量口服药物如下:(我)高剂量组:UNCP 9000毫克/公斤(2)治疗剂量组:UNCP 900毫克/公斤(3)负对照组:溶剂,1%淀粉(iv)阳性对照组:甲基显示(40毫克/公斤)

治疗后,雄性C57Bl / 6小鼠安乐死颈椎脱位的单一口服后3小时测试代理。直肠、上皮细胞、肝、骨髓、肾脏和孤立尽快阻止无效的结果长期操作。

股骨的松果体被切断和骨髓细胞洗骨干使用2毫升的磷酸盐(PBS)预冷4°C包含20毫米EDTA-Na2和10% DMSO (pH值7.5)。肝脏、肾脏和直肠单一化3毫升的同一缓冲区。管道5分钟在室温下沉淀举行大的碎片,之后1.5毫升的顶层被转移到一个新管。细胞悬浊液60卷μ介绍了l与240试管μl 0.9%的低熔点琼脂糖溶液(< 42°C)在PBS加热到42°C (microthermostat“TERMIT”)和resuspended。然后,60μ琼脂糖溶液的l细胞应用于预镀1%的琼脂糖幻灯片,盖玻片,放在冰覆盖着。所有后续操作进行了在一个黑暗的房间,黄色的光。硬化后的琼脂糖(约10分钟),盖玻片的移除,很仔细,micropreparations被放置在一个玻璃试管(Schifferdecker类型)。这个准备然后倒入4°C裂解缓冲(10 nM Tris-HCl (pH值10),2.5 M氯化钠,100毫米EDTA-Na2, Triton x - 100 1%,和10% DMSO)和孵化至少1小时。溶解后,micropreparations都被转移到电泳室(子细胞GT,“Bio-Rad”)。房间充满了电泳缓冲(300毫米氢氧化钠,1毫米EDTA-Na2, pH值> 13)。准备micropreparations被孵化20分钟生产碱性不稳定的站点和碱性DNA变性。然后,电泳进行20分钟的场强1 V /厘米和电流强度∼300 mA。micropreparations被转移到一个玻璃试管和固定在70%的乙醇溶液(15分钟)。修复后,micropreparations干和我沾着绿色SYBR荧光染料(美国Sigma-Aldrich)(1: 10000年在TE缓冲甘油50%)在黑暗中20分钟和显微镜。 The analysis was carried out on a fluorescence microscope (Micromed 3 Lum, Russia) combined with a high-resolution digital camera (x200). The comet images were analysed using CASP software 8.0 (CASP, Wroclaw, Poland). The choice of this software was due to its free download availability on the Internet. As a measure of DNA damage, the percentage of tail DNA (tail DNA%) was used [38]。从每个micropreparation一百个细胞进行分析。消极的控制,2%淀粉(溶剂)使用。甲基显示(甲磺酸甲酯)40毫克/公斤,烷化剂和致癌物质,这也是生殖毒物作为积极的控制。毒性的标准是一个统计上显著的增加数量的DNA彗星,即。,意味着治疗组和对照组38]。数据统计处理的帮助下Wilcoxon-Mann-Whitney测试。值< 0.05被认为是重要的。

2.4。生殖毒理学的实验设计

实验动物在他们的初期发育阶段分组2批次的90只动物的;第一批“实验1”(60雌性和雄性30)被用来研究女性生殖毒理学和第二批“实验2”(60雌性和雄性30)被用来研究男性生殖毒理学效应在雌性(见表1)。所有处理和未经处理的小鼠分组在一起为期10天的同居的比例2女性:1男[40,42,43)如下。

2.5。UNCP对生殖功能的影响

确认怀孕的第一天的老鼠的帮助下建立了postcoitus阴道涂片细胞学评价,通过观察阴道栓的外表(44,45]。七个怀孕的女性在每组交付,其次是物理发展的后代(生存指数和体重动力学),直到28日一天的生活。利率固定在4、7、14、21、28日产后几天的生活(PND)。

由二氧化碳安乐死(有限公司₂)过量吸入46)是人道上执行其余的女性怀孕17到20天。腹部切口,和手术开放进行公开y形子宫怀孕开放确认和容易测定卵巢的黄体和植入网站和生活和死去的胎儿在子宫。基于获得的数据,肥力指数计算,以及预处理和postimplantation死亡率。120年,雌性老鼠和60雄性老鼠(见表使用1)。

2.5.1。历史对照组

胚胎植入前后死亡可能发生在哺乳动物中,和一些异常自发发展。在这项研究中,另一个对照组的动物)所谓的“历史”的控制指标的分析胚胎死亡的目的。数据从这个“历史对照组”在先前的研究在相似的条件下获得。使用这个群体的重要性手册中有详细的说明在临床前研究42,47]。

2.6。亚急性和生殖毒性的评估

减少动物的数量,我们检查了14天的潜在毒性UNCP在雄性和雌性大鼠的生殖毒性实验。因此,常见的参数(或主要标准)可能的潜在毒性的迹象在雄性和雌性老鼠UNCP评估。动物被观察到每日在整个研究期间,和临床观察toxidromes和死亡率的迹象。行为的改变(搅拌、嗜睡和多动),神经变化(抽搐、震颤、肌肉僵硬、反射亢进),和自主的迹象(流泪,立毛、瞳孔大小和不同寻常的呼吸模式)也极度观察(48,49]。

此外,繁殖力/怀孕指数降低,增加植入损失(增加雌性胚胎死亡率),和一个酒吧生存指数和体重减少后代被认为是主要标准生殖毒性。

2.7。统计数据

数据被暴露于变分统计方法使用IBM软件和均值±SEM。概率值(P)计算。两个相比值之间的差异被认为是显著的,如果他们的身份的概率小于5% ( )。对于正态分布统计特征的评价参数的学生的t以及使用。大偏差标准形式的特征分布的独立样本,用于Mann-Whitney非参数标准U测试。确定不同的定性的可靠性指标,费雪的角转换使用的标准。

3所示。结果与讨论

3.1。DNA彗星试验

从表2,很显然UNCP治疗和高剂量没有造成任何损害的DNA而积极的控制。

中给出的结果是数字1- - - - - -4。

从散点图,很明显,甲基显示出40毫克/公斤产生最多的彗星尾巴表明DNA损伤的组织分析相比,消极的控制( )。

如数据所示2- - - - - -5UNCP(900和9000毫克/公斤)没有产生显著增加尾部DNA百分比比相应的正常小鼠组织包括直肠、骨髓、肝和肾。

重要的DNA破坏(尾部DNA %) 9000毫克/公斤和900毫克/公斤UNCP发生在肾脏(2.79±0.35)和直肠上皮(2.64±0.17),分别。负控制尾部DNA百分比值,在这种情况下,对应于2.17±0.18,2.08±0.27,分别。有趣的是,最低的尾部DNA百分比值(最低DNA破坏)观察到肝脏(1.64±0.26)和肾(1.63±0.30)在900毫克/公斤UNCP管理。负控制值对应于1.95±0.22(增加21.7%)和2.08±0.27(增加16%),分别为(数字2- - - - - -5)。

非常高的尾部DNA百分比(DNA断裂)在所有器官观察甲基显示(甲磺酸甲酯)政府(图1 (d)淀粉)相比,负控制(1%)(图1 (c))。UNCP(图没有任何基因毒性的潜力2),根据Guecheva et al。17)和Chelomin et al。18),高浓度铜元素的基因毒性倾向。然而,高尾DNA %直肠上皮细胞中可观察到。毒性研究,高GIT侵蚀观测到Asiedu-Gyekye et al。15]。UNCP抗氧化剂和genoprotective活动(其清除氧自由基的能力诱导诱变剂)。因此可能防止或减少单链DNA断裂。

3.2。UNCP对雌性大鼠的生殖功能的影响:“实验1”

女性生殖功能,它成立的肥力指标控制的没有什么区别。卵巢的黄体数,植入网站,和生活在子宫和胎儿的胚胎死亡指数女性接受UNCP没有车辆和历史的不同于相应的参数控制(表3)。

3.2.1之上。15天在雌性老鼠UNCP政府对怀孕的影响指数

这项研究的结果发表在表3。

妊娠和妊娠指数没有显著变化从对待动物与控制。怀孕指数HD组对应的历史控制时高于对照组TD和车辆。

3.2.2。15天在雌性老鼠UNCP政府对植入的影响

UNCP减少胚胎植入前的损失HD-treated组和TD-treated组10.4% ( )和37% ( ),分别与车辆控制。Postimplantation损失也在HD -和TD-treated动物减少了51.7% ( )和36.5% ( ),分别与汽车相比对照组。

减少胚胎植入前的损失仅仅是观察与TD-treated组(16%, )与历史相比对照组,观察postimplantation损失只有在HD-treated组(14.4%, )相比历史对照组。所有组的动物的后代出生没有外部的病理变化。研究的结果发表在表4。

发现了一些药用植物通过各种机制调节怀孕以各种方式(51- - - - - -53]。在我们的例子中,UNCP没有显著影响怀孕也不是有害的在这两个实验1和2。女性怀孕生育能力或指数措施实现怀孕的能力,本研究中使用一般生殖毒性的指标,因为两性对待(45,54]。妊娠指数措施维持妊娠女性的能力,基于有了至少一个酒吧。在实验1和2,15天治疗女性组,能治疗男性组没有导致任何重大变化在他们同居后怀孕指数。预后与组在实验1中,然而更好的15天服用雌性。

值平均值±标准平均误差,扫描电镜(n= 9)。水平的意义建立了使用统计分析的数据是使用Mann-Whitney完成的U测试。前显著区别组和控制被执行评估学生的单侧t以及。值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3.2.3。15天在雌性老鼠UNCP政府对酒吧重量的变化

成立,在整个期间的观察,老鼠的动态权重的后代女性接受UNCP(怀孕前)没有什么区别(表控制的动物5)。

患产后抑郁症的4至28日垃圾重量增加了87.6% ( )对于女性和89.1% ( )HD-treated雄性的动物相比,记录的车辆对照组86.95% ( )对于女性和87.3% ( )为男性。

与TD-treated组,有一个增长87.2% ( )和87.83% ( )分别对男性和女性群体,在酒吧里患产后抑郁症的4和28之间权重。

3.2.4。15天在雌性老鼠UNCP政府对生存的影响指数

对待雌性的后代的生存指数提出了表6。在这里,政府的UNCP雌性老鼠并不影响他们的后代的生存。

患产后抑郁症1和4之间,生存的窝(高清增加了3.3% ( )和LD 4.1% ( ))而车辆控制。患产后抑郁症的21和患产后抑郁症的28岁的存活率为100%,意味着UNCP对后代生存没有任何不利影响。最后,平均1天、28天的评分之间患产后抑郁症,UNCP存活率提高了10.82% ( )TD-treated集团之一。

没有酒吧死亡患产后抑郁症的程度和患产后抑郁症的第21至28 HD和TD组,酒吧和病理检查显示无异常。

因此,15天行政UNCP雌老鼠并没有导致生殖功能指标的变化和后代。然而,结果没有统计学意义( )。

3.3。UNCP-Treated雄性大鼠生殖功能的影响指标:“实验2”

结果显示,完整的生育指数与治疗雄性雌性交配控件(表中没有什么区别7)。此外,没有明显的身体重量的变化反映在表8。

结果显示,完整的雌性交配的肥力指数与治疗男性控制的没有什么区别。卵巢的黄体数,植入网站,和生活在子宫和胎儿的指数在雌性胚胎死亡交叉的能满足UNCP管理男性没有不同于动物的相应参数的车辆和历史对照组证明表9。

我们想要观察生活酒吧会影响当雄性老鼠收到高清UNCP 48天。迹象通常与高剂量的口服任何有关测试药物缺席每天9000毫克/公斤UNCP管理时48天,可能表明UNCP是相对安全的营养食品。这个剂量是十倍的推荐剂量900毫克/公斤(Asiedu-Gyekye et al ., 2016)。在这个剂量,显然,精子形成没有影响,看着肥力指数和植入指数(表9和10)。UNCP政府一个可能的解释上述的影响可能是由于高含量的多酚和原花青素,具有保护对睾丸的影响通过激活Nrf2信号和防止母鸡卵巢老化56- - - - - -58]。

摘要回顾Roychoudhury et al。59)推测高铜水平的不利影响干扰男性和女性胚胎发育和生殖功能和阻碍发展的剂量依赖性的方式。进一步认为,精子和睾丸负面影响高浓度的铜。我们预期的负面影响,高剂量9000毫克/公斤在雄性和雌性大鼠生殖功能,但我们的研究结果显示UNCP在这个高剂量没有任何明显的不利影响生殖参数。

事实上,铜缺乏的元素被发现时更有害的缺陷比超过对生殖和发育的影响(60]。因此,人们应该期望一些窝形态变化,但没有明显的形态学改变生活酒吧了。Adeyina et al。3]推荐200 g / kg热可可豆壳兔子最佳的生理反应。根据Asiedu-Gyekye et al。15),4 g UNCP含有0.2984毫克元素的铜。人类的等效剂量2000毫克/公斤UNCP老鼠对应大约324.32毫克/公斤人类等效剂量相当于19686 .224毫克UNCP(约。8茶匙如果一茶匙的量UNCP = 2.5克)的平均人类体重60.7公斤。因此,铜的量中包含19686 .224毫克UNCP将对应1.469毫克(大约6毫克剂量9000毫克/公斤),价值是高于世界卫生组织指南(RDA 900股μg)值意味着; 在所有分析被认为是显著的。

3.3.1。效果能满足政府的UNCP在植入雄性老鼠

这些研究的结果发表在表9。有TD组的胚胎植入前的损失降低了10.56% ( )和HD组10.56% ( )车辆控制(21.04%, )和历史控制(8.44%, )。然而,这是一个意外增加postimplantation损失29.93% ( )(高清)发生在2大坝的窝。在同一时期,TD记录postimplantation亏损6.96% ( )而车辆控制和历史记录的损失为2.87%和8.49%,分别。

黄体(黄/粉红色的身体在卵巢)从膜的形成,postovulatory卵泡的颗粒细胞。作为一个暂时的器官,黄体数量的减少或增加预处理和/或postimplantation损失被认为是对生殖不利的影响。早期发育过程的中断可能导致受精率的减少和增加的早期胚胎死亡之前植入(45]。这是计算的胚胎植入前的损失。在我们的研究中,发现UNCP减少胚胎植入前的损失(表4和9)。此外,胚胎植入和胎儿死亡后死亡表示为postimplantation损失(46,47]。

实验1和2的关键评估植入透露,UNCP为雌性老鼠交配前15天显著降低预处理和postimplantation损失在HD -和TD-treated组相比,两个控制使用。这些植入损失1除以8中观察动物的原始数据。

类似的观察了48天的雄性老鼠UNCP对待同居女性参与。在这种情况下,两种预处理和postimplantation损失减少,一定程度上比女性治疗组。这可能支持UNCP proimplantation潜力(45- - - - - -47]。UNCP proimplantation效果的治疗女性(表4)支持的结果称为交付住酒吧,植入指标,酒吧重量、生存指数(表4,6,8,10)。从患产后抑郁症的7到14,UNCP维持生存指数100% ( )零死亡的酒吧与汽车相比对照组。生存指数是主要的端点显示后代生存的能力逐年断奶。在这项研究中,对待动物的生存指数没有不同于未经处理的。此外,在我们的研究中,低出生体重和受损的吮吸能力缺席。小狗的生存也会受到垃圾大小,大坝的哺乳的能力,母亲的忽视,急性中毒治疗期间(45)是不受UNCP管理。在后一种情况下,连续UNCP管理这些高剂量并没有伴随着toxidromes管理动物。减少实验1中观察胚胎植入前的损失。事实上,相对较高的postimplantation损失中观察到只有2大坝,情况有一个清楚的解释。因此,UNCP可能有proimplantation潜力。

根据Soffietti et al。55),1 - 1.5%的可可碱的饮食不成熟兔子造成了严重的和快速的死亡率为120天。即使在动物中,一些物种如狗和马似乎更敏感比其他人methylxanthine的不利影响。原因不完全清楚,但可能躺在种间差异的可可碱分解代谢。

也观察到在整个时期的垃圾重量变化的后代女性与男性接受UNCP交叉控制动物没有什么区别。

在这个表中,住孕体或可行的胎儿被数的减少HD组(10.25±2.24)。最高的29.93% (postimplantation损失 )观察HD-treated组比对照组(2.87%, )和历史组(8.49%, )。

胚胎植入前的损失,然而,减少HD-treated组(10.56%, )和TD组(9.55%, )车辆相比对照组(21.04%, )。然而,这些损失高于对照组观察历史,这些损失被观察到只有2 8的动物。这些观察结果可能暗示UNCP管理的雄性老鼠在TD没有明显影响精子发生。高清动物略受影响,所有组的老鼠的后代出生没有外部的病理变化。

3.3.2。效果能满足政府的UNCP在雄性老鼠生存指数

从女性交叉与男性后代的生存指数能收到UNCP展示在表10。UNCP-treated雄性老鼠没有显著影响后代的生存。有一个边际生存指数增长了6.9%,患产后抑郁症的28的剂量9000毫克/公斤,8.61%的剂量900毫克/公斤与车辆控制(相比 )。然而,患产后抑郁症的7 - 14是伴随着一个无意义的生存指数在两个剂量水平减少0.5%。

因此,UNCP能满足管理的雄性老鼠前与完整的雌性没有导致重大变化指数描述生殖系统的状态和他们的后代( )。

患产后抑郁症的酒吧没有不利影响UNCP 15天治疗女性和能治疗雄性老鼠(表6和10)。TD和高清的后代的生活由21天、28天的增加( )相比,车辆控制。这进一步证实了一个观察由Tarka et al。61年]。变化观察到这些研究可能归因于非特异性的母体毒性和可能不是完全归因于UNCP虽然对精子发生不利的影响不是排除据Tarka et al。61年]。UNCP与预期相反的积极作用单独成分和元素的不利影响可能是由于组分的协同作用,产生一个非常积极的结果在生殖过程。

3.4。亚急性毒性

胃内的管理UNCP雄性和雌性老鼠的剂量900毫克/公斤和9000毫克/公斤每天14天没有死亡率在观测期间。因此,没有观察不利影响可以进一步估计约9000毫克/公斤。这些动物有水的摄入量增加,排尿。

女性的外表和行为15天没有收到测试物质不同于在控制(老鼠活动和光滑的羊毛外套,食欲很好)。没有治疗动物的交配行为的不同表现出不同的组织和控制。一些雄性老鼠频繁阴茎勃起和鼻子嘴和肛门-生殖器区域的女性虽然有些治疗女性展示了增强摆动的耳朵,跳跃,有时就在男性。壮阳药的潜力Theobroma可可据报道这可以解释阴茎勃起的频率和频率的增加越来越多的治疗组相比,车辆控制。内啡肽的释放苯乙胺,5 -羟色胺,和锌大鼠循环系统可能是负责任的。交配行为的变化观察到在大多数的动物证实了其他研究,报道一些壮阳药和功效UNCP [1,4,50]。这是观察到经常在实验2中。

本研究试图评估和解决潜在的生殖影响的初步研究UNCP和消除任何的担忧过度消费的UNCP雄性和雌性的肥沃的年关于潜在的生殖毒性。这也形成了一个基础为进一步研究可能的发展和再生缺陷和特定的生物标志物的变化在加纳和高消耗的UNCP西非。

4所示。定义参数的生殖毒性

妊娠期指数收益率= %怀孕住窝。

妊娠期指数=(数量的女性出生的生活/数量的女性怀孕的证据)×100。

生存指数=(总住酒吧(在指定时间点)/酒吧出生)×100。

怀孕指数或多产:怀孕被研究或怀孕已经包括在这项研究中;实际上怀孕。

繁殖力=数量的怀孕女性/确认交配的雌性×100。

肥力指数决定的怀孕女性的数量比女性同居/交配与男性的数量。这是比例交配,导致怀孕。

植入指数计算植入网站的数量除以黄体的数量。

植入指数=数量的植入物/黄体数×100。

胚胎植入前的死亡率由不同数量的黄色的身体在卵巢和子宫植入网站的数量。

胚胎植入前的损失=数量的黄体−植入物的数量/黄体数×100。

Postimplantation死亡率之间的区别取决于植入网站的数量和胎儿生活的数量。

Postimplantation损失=数量的植入−数量的可行的胎儿/移植数量×100。

生存指数=总住酒吧(在指定时间点)/酒吧×100年出生。

5。结论

UNCP没有任何可观察到的临床toxidromes在亚急性毒性研究和不太可能具有基因毒性潜在从DNA彗星试验。的管理Theobroma可可的形式UNCP雌性和雄性老鼠剂量900毫克/公斤和9000毫克/公斤增加了生存指数和不影响动物的生育能力,不增加胚胎死亡,没有不良影响他们的后代。因此,UNCP,一个产品从阿克拉,加纳,不可能拥有生殖毒性的潜力和广泛的生殖安全性。

缩写

UNCP:	不加糖的天然可可粉
诺尔:	没有观察到的影响水平
科学:	没有观察到的不利影响的水平
背景:	脱氧核糖核酸
高清:	高剂量
道明:	治疗剂量
RIPRM:	药理学和再生医学研究所
PBMC:	外周血单核细胞
经合组织:	经济合作与发展组织
DMSO溶液:	二甲亚砜
EDTA:	乙二胺四乙酸。

数据可用性

原始数据是可得到的在学校的制药、加纳、大学和Goldberg生殖毒理学研究所。原材料都可以在学校的制药、加纳大学。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者非常感激Goldberg药理学和再生医学研究所的执行这项研究的支持。

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