Wistar大鼠口服和重复暴露于Fijk草药混合物后的血脂和氧化应激标记

摘要

本研究确定Fijk草本植物混合物的口服和重复施用对大鼠的生物化学和形态参数的影响。二十四Wistar大鼠分配到四组6. A组为对照，并每天接受的蒸馏水口服。The experimental groups B, C, and D were daily and orally exposed to Fijk herbal mixture at 15, 30, and 45 mg/kg, respectively. Treatments lasted for 21 days. The rats were sacrificed under mild diethyl ether anesthesia 24 hr after cessation of treatment. The blood and liver samples were collected and used for the biochemical and morphological analyses. Oral exposure to Fijk caused elevated levels of rat plasma ALT, AST, triglycerides, LDL, and MDA. In contrast, rat plasma HDL, GSH, and ALP levels were lowered by Fijk oral exposure. Also, the herbal remedy caused a dose-dependent elevation in the plasma atherogenic index. The histopathology examinations of rat liver sections revealed inimical cellular alterations caused by repeated exposure to Fijk. Study provides evidence that oral and repeated exposure to Fijk in rats raised the atherogenic index and potentiated oxidative stress as well as hepatic injury.

1.介绍

近年来，在尼日利亚草药的需求一直在上升[1]。然而，几乎没有科学数据支持这些草药配方的医学主张。这一情景加剧了人们对尼日利亚草药消费的安全担忧。

草药为他们的健康的好处后，通常要求这些已成为许多家庭的尼日利亚常用药[2]。人们认识到，从药用植物制备的草药可能有几种传统用途，特别是在尼日利亚等发展中国家，那里获得正式医疗保健的机会有限[3]。然而，越来越多的商业推广草药需要评估的安全性和有效性的医学主张。近年来，几项研究证实了滥用包装草药的毒性[1，4，五]。

此外，人们普遍认为草药是天然的、有效的、没有副作用的，这极大地促进了对草药配方的赞助。6-8]。在普遍认为，草药都没有毒性或不良影响已经但是常常被证明并非[1，五，9]。

这些和其他因素构成了发展中国家使用草药的几个问题的一部分。在尼日利亚，研究表明，经过生物活性验证筛选的尼日利亚药用植物的数量远远超过对潜在有毒化合物和污染物的评估[2，10，11]。此外，在尼日利亚推广和销售的许多草药配方缺乏科学数据来支持广受好评的药用价值，可能对众多不知情的消费者构成巨大的健康风险[1]。

Fijk是一种由多种民族药用植物制成的草药配方。在尼日利亚由Okooloyun Worldwide Nigeria Limited销售。根据Fijk的小册子，草药是由13种药用植物组成的混合物，包括桂皮，柑桔，芦荟，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，桂皮，大叶桂皮，巴戟天，花青花，西瓜，和芦荟barbaris。

Fijk草药混合物被其生产者称赞有几个药用好处。这一定促成了尼日利亚民众的广泛赞助和消费。根据Fijk的标签，这种草药用于治疗多种疾病，其中包括肥胖、糖尿病、性改善、月经疼痛、不孕症、高血压、爬行感和疟疾等。有科学报告的药用价值的个别植物成分的混合物。然而，并没有经验数据来支持Fijk的医疗效益或其他方面的主张。通过包括Cochrane、PubMed和Google-Scholar在内的在线研究图书馆的搜索，我们发现Fijk草药疗法缺乏科学数据。这种情况使得反复接触Fijk混合物可能产生的潜在毒性基本上不为人知。为了公共健康的安全，草药疗法必须有关于安全性/毒性的科学数据，以便帮助消费者知情地做出选择。本研究旨在探讨口服和反复暴露于Fijk对大鼠血浆生化指标和肝脏形态的影响。

2.材料和方法

2.1。化学药品和试剂

所使用的化学品和试剂均为分析级。用于测定碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、甘油三酯(TAG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的商用试剂盒由Randox Diagnostics, Crumlin, UK提供。

2.2。实验动物

Twenty-four male Wistar rats with weight between 190 and 200 g were obtained from the Experimental Animal Farm at the University of Ilorin, Ilorin, Nigeria. The Wistar rats were housed in animal cages in a well-ventilated experimental room. The rats were allowed to acclimatize for a period of 14 days before the commencement of treatments. The rats had free access to standard rat chow and clean water随意。作为批准用于科学研究的动物的处理是根据相关的制度和道德准则。

2.3。Fijk草药混合物

Fijk草药混合物Okooloyun环球有限公司，尼日利亚的产物。

2.4。实验设计

将动物随机分配到五个四（4）基团。分组和治疗方法的进一步细节如下。控制:接收的蒸馏水。Fijk 15毫克/kg:以每公斤体重15毫克的剂量接受Fijk。菲克30毫克/公斤:以30毫克/公斤体重的剂量接受菲克。五氯噻嗪45毫克/公斤:以45毫克/公斤体重的剂量接受五氯噻嗪。

剂量的选择是基于相应的治疗剂量，供人类消费的草药生产商推荐。每星期都给动物称重。每日治疗，持续21天。

2.5。验尸

治疗结束后，大鼠禁食一夜，在轻乙醚麻醉下处死。将血样采集到EDTA瓶中，使用冷冻离心机(Anke TDL-5000B，中国上海)5000 g旋转10分钟，获得血浆，用于生化分析。肝组织切除，称重，用缓冲中性福尔马林固定，并进行组织病理学检查。

2.6。生化检测

生化指标进行了使用UV / Vis分光光度计（Jenway，斯塔福德，英国）在适用情况下在大鼠血浆中确定。大鼠血浆总蛋白的水平（TP），天冬氨酸转氨酶（AST-EC：2.6.1.1），丙氨酸转氨酶（ALT-EC：2.6.1.2），碱性磷酸酶（ALP-EC：3.1.3.1）和脂质分布包括总胆固醇（TC），甘油三酯（TAG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），使用朗道测定试剂盒进行测定。还原型谷胱甘肽含量（GSH）通过用埃尔曼[描述的方法测定12[误译]只要稍加修改。脂质过氧化是通过使用Niehaus Jr.和Samuelsson描述的方法监测血浆上清部分的脂质过氧化物程度确定的[13]。

2.7。组织病理学检查

大鼠肝固定在10％缓冲的中性福尔马林（BNF）立即从动物切除以下。如先前所述固定的组织随后用于组织病理学检查处理[14]。对于形态变化捕获和得分由病理学家盲目的进行治疗，在病理单位，伊洛林教学医院的大学，伊洛林，尼日利亚。

2.8。数据分析

所有数据均以平均值±SEM表示。数据采用单因素方差分析(GraphPad Software Inc.， San Diego, CA)进行统计分析。组间均数差异采用杜基检验。平均值被认为在at有统计学意义。

3.结果

大鼠口服Fijk并没有对动物的平均体重产生显著的改变，尽管在接受Fijk草药混合物的组中观察到大鼠的体重逐渐下降(图)1)。各处理组间的相对器官体重比也无显著差异(图)2)。然而，两倍和三倍剂量口服Fijk混合草药与对照组相比，大鼠血浆蛋白水平显著降低。脂质谱的测定表明，与对照组相比，口服不同剂量的Fijk对大鼠的血浆总胆固醇水平没有产生显著的变化。然而，在最高剂量下暴露于Fijk会引起大鼠血浆甘油三脂水平的显著升高。脂质谱的进一步评估显示，每日给予Fijk混合物耗竭大鼠血浆HDL-C水平(图)3)。同时，随着Fijk中药剂量的增加，大鼠血浆LDL-C水平升高。此外，暴露于Fijk混合物组的致动脉粥样硬化指数显著升高(图)4)。致动脉粥样硬化指数的升高是剂量依赖性的。另一方面，大鼠血浆碱性磷酸酶水平降低()，但只有接受最高剂量Fijk的一组有显著降低。与此相反，与对照组相比，所有剂量的Fijk混合草药治疗大鼠的血浆ALT和AST水平显著升高(图)五)。

为了评估口服Fijk是否会导致大鼠脂质过氧化，我们测定了血浆MDA水平。与对照组相比，Fijk处理组大鼠血浆MDA水平显著升高(图)6)。相反地​​，Fijk对大鼠口服给药显著耗尽GSH的血浆水平与对照相比。

大鼠肝脏切片用于形态变化的光显微检查显示引起Fijk草药混合物病变（图7)。Fijk混合草药引起肝脏改变，包括低铬、血红细胞、血管通道破裂和充血。病变的严重程度随着Fijk暴露剂量的增加而增加。然而，对照组的大鼠肝脏没有发生这种细胞分裂。

4。讨论

对草药产品作为替代药物的需求日益增加。不幸的是，尼日利亚没有严格管制草药产品的使用，因此使它们可以免费获得，这种情况容易导致消费者滥用[1]。虽然草药混合物在尼日利亚很受欢迎，但人们对反复食用可能产生的毒性知之甚少。草药疗法可能具有可识别的治疗效果;它们也可能有毒副作用。更重要的是，许多草药制剂缺乏科学事实来支持广受赞誉的药用价值。目前，还没有关于Fijk草药合剂的经验数据。本研究旨在探讨口服和反复给药对大鼠生化和形态学指标的影响。在此背景下，先前的研究已经证明包装草药具有潜在的毒性[4，10，11]。

在本研究中，Fijk口腔adminsitration显示平均大鼠体重没有不利影响。尽管大鼠肝脏重量进行在治疗组降低，相对器官重量没有显著通过暴露Fijk混合物的影响。然而，口服接触Fijk降低大鼠血浆蛋白水平。这可能涉及肝脏合成降低的功能。肝脏是负责大部分血浆蛋白的合成。研究已经降低相关血浆蛋白对肝功能受损[15-17]。

对大鼠血脂的评估显示，口服Fijk混合草药没有显著改变所有治疗组的总胆固醇。然而，有剂量依赖性的增加(）至TAG和LDL-C的在口服暴露于Fijk草药混合物大鼠血浆水平。相反，血浆HDL-C的水平显著通过Fijk混合物的重复施用降低，并且效果是剂量依赖性的。血脂指数监测心血管系统的健康状况非常有用。尽管大鼠总胆固醇水平并没有受到Fijk草药混合物给药，TAG和LDL-C水平升高可能诱发心血管相关疾病[18]。LDL-C水平升高与动脉粥样硬化风险增加有关，而HDL-C水平升高与心血管疾病发生率降低有关[19，20]。随着Fijk剂量的增加，大鼠血浆HDL-C水平降低，导致动脉粥样硬化指数升高。致动脉粥样硬化指数可用于预测心血管疾病发展的风险。因此，反复口服Fijk引起的HDL-C与LDL-C比值低，可能提示动脉粥样硬化的发展趋势增加。

与对照组相比，反复给药使大鼠血浆ALT和AST水平升高。谷丙转氨酶和谷草转氨酶通常存在于红细胞、肝脏、心脏和肾脏组织中。谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平长期以来一直被用来评价肝脏功能。血浆ALT和AST水平的升高与组织毒性有关[21，22]。正常情况下，血浆中存在基本水平的酶;然而，当细胞受损时，酶就会挤压到细胞外液中，从而提高血浆中的浓度。在本研究中，大鼠血浆ALT和AST水平的显著变化可能与口服Fijk对肝脏的应激有关。血浆中谷草转氨酶与谷丙转氨酶的比值小于1(<1)，这一事实进一步支持了这一观点，这可能表明发生了急性或慢性肝损伤[23]。另一方面，最高剂量组大鼠血浆碱性磷酸酶水平显著降低。蛋白水平下降可能是由于失活或蛋白质合成减少所致[24]。先前的研究表明，草药混合物能够改变大鼠体内ALT、AST和ALP的水平[1，9]。

此外，为了评价口服和反复暴露于Fijk混合物是否能够诱发对氧化应激的，我们确定大鼠血浆MDA和GSH的水平。该MDA是脂质过氧化反应的副产物，而GSH水平可以用来评估一个蜂窝系统的抗氧化状态。大鼠血浆MDA水平的增加表明造成口服暴露于Fijk草本植物混合物的脂质过氧化的存在。增加的MDA水平大鼠可能是由于通过暴露于Fijk混合物强化自由基物质的产生。在另一方面，由Fijk的口服给药随后的氧化应激进一步通过大鼠血浆GSH的水平耗尽证实。谷胱甘肽分子是非酶的抗氧化剂能够清除自由基的，它也可以作为底物等抗氧化酶，例如谷胱甘肽过氧化物酶。GSH水平低可能是由于增加的使用，以扫气自由基物质或消耗通过抗氧化酶底物以保护功能防止氧化损伤[25]。血浆MDA水平升高和GSH水平降低使人联想到氧化应激。当促氧化剂的含量超过抗氧化剂的含量时，氧化应激就会发生。最近的研究表明，口服和反复暴露于草药混合物与脂质过氧化和氧化应激有关[1，五]。

大鼠肝脏切片的光显微镜检查，对照组显示出完整的和正常的细胞结构。然而，大鼠肝脏切片的在暴露于Fijk混合物的不同剂量实验组的检查发现形态病变的发生率。由于暴露于草药Fijk混合物中的大鼠肝改变包括haemorrahage，破裂血管通道，充血，和炎症。组织病理学的研究结果支持引起口腔和反复暴露于Fijk草药混合物中的生物化学变化和让人联想到大鼠肝损伤。这与先前的报道一致[10证明了草药制剂引起的器官毒性。

5.结论

该研究揭示造成口服和反复暴露于Fijk混合物在大鼠中升高的动脉硬化指数。此外，口服和反复暴露于大鼠Fijk草药混合物引起的脂质过氧化和强化肝损害。

利益冲突

作者声明，他们在本论文的发表上没有任何利益冲突。

承认

作者感谢尼日利亚奥穆-阿兰里程碑大学生物科学系实验室工作人员提供的技术支持。

参考文献

1. O. S. Adeyemi, M. Fambegbe, O. R. Daniyan, I. Nwajei，“Yoyo Bitters，一种多草药配方影响Wistar大鼠的一些生化参数，”基础和临床生理学和药理学杂志第23卷，no。4，第135-138页，2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. E. Obi, D. N. Akunyili, B. Ekpo，和O. E. Orisakwe，“尼日利亚草药的重金属危害，”总环境科学，第369卷，no。1-3, 35-41页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. R. Adisa和T. Fakeye，“社区药剂师对尼日利亚西南部销售的常见植物药物知识的评估”，热带医药研究杂志，第5卷，第619-625页，2006。视图:谷歌学术搜索
4. A. J. Joshua, K. S. Goudar, N. Sameera等，“草药制剂、rumbion和tyrel对白化Wistar大鼠的安全性评估”，美国药理学和毒理学杂志卷。5，没有。1期，第42-47，2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. E. B. Oyewo，A. Adetutu，J.A. Adebisi，O. S. Olorunnisola，和A. A. Adesokan，“超级FEBI苦亚慢性给药触发在雄性Wistar大鼠的炎症反应，”医学科学杂志第13卷，no。8，第692-699页，2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. L. M. Gupta和R.雷纳，“一些药用植物的副作用，”当前的科学第75卷，no。1998年，第897-900页。视图:谷歌学术搜索
7. V. P. Kamboj，《草药》当前的科学第78卷，no。1, 35-39页，2000。视图:谷歌学术搜索
8. 《中药及其囊泡载体的肝保护前景研究》，国际医药和生物医学研究杂志第2卷第1期2, 2011年360-374页。视图:谷歌学术搜索
9. M. Ekor, A. O. Odusoga, O. O. Adesina, G. B. Adewale，和S. O. Kolawole，“Yoyo清洁剂苦味剂和田地瑞典苦味剂草药制剂亚慢性给药对大鼠的毒性评估，”美国药理学和毒理学杂志，第5卷，第159-166页，2010年。视图:谷歌学术搜索
10. N. a . Ezejiofor, V. I. Onyiaorah, D. C. Hussaini，和O. E. Orisakwe，“尼日利亚草药补充剂(U & D甜苦)对雄性白化病大鼠的多器官毒性，”巴基斯坦药学杂志第21卷，no。4, 2008年426-429页。视图:谷歌学术搜索
11. S. O. Ogbonnia, G. O. Mbaka, N. H. Igbokwe, E. N. Anyika, P. Alli，和N. Nwakakwa，“利昂苦药的抗菌评估，急性和亚慢性毒性研究，一种尼日利亚草药配方，在啮齿动物，”北美农业和生物学杂志，第1卷，第366-376页，2010。视图:谷歌学术搜索
12. G. L.埃尔曼，“组织巯基”生物化学和生物物理学档案第82卷，no。1，第70-77页，1959年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. w.g. Niehaus Jr.和B. Samuelsson，“花生四烯酸磷脂在微粒体脂质过氧化过程中形成丙二醛”，欧洲生物化学杂志卷。6，没有。1，第126-130，1968。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. O. S. Adeyemi和M. A. Akanji，”Psidium guajava叶提取物:对大鼠血清稳态和组织形态的影响"比较临床病理学第21卷，no。4，第401-407页，2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. A. Bessesen, A. Smith-Kielland, G. Gadeholt, J. Morland，“乙醚麻醉降低大鼠肝脏和血浆蛋白的合成，”药理学与毒理学学报卷。54，没有。4，第241-246，1984。视图:谷歌学术搜索
16. S. F. Adenike和A. O. Stephen，“血液学指数和蛋白质浓度的变化。锥虫布氏锥虫感染homidium氯化物和diminazene aceturate处理的大鼠，”EXCLI杂志卷。9，第39-45，2010。视图:谷歌学术搜索
17. O. S. Adeyemi, M. A. Akanji，和J. T. Ekanem， <乙醇提取物的抗贫血特性>Psidium guajava在锥虫属bruceibrucei感染的老鼠。”研究药理学杂志第4卷第2期3，第74-77页，2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. O. S. Adeyemi和M. A. Akanji，“铁和一氧化氮在心血管疾病的发展中发挥关键作用，”毒理学和环境健康科学杂志第3卷，no。9，第249-253页，2011。视图:谷歌学术搜索
19. F. grove - paez和A. B. Zavalza-Gomez，“内皮功能障碍和心血管危险因素，”糖尿病研究与临床实践第84卷，no。1, 2009年1 - 10页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. O. D. Olukanni, O. T. Akande, Y. O. Alagbe, O. S. Adeyemi, A. T. Olukanni，和G. G. Daramola，“柠檬汁提高了wistar大鼠的降低谷胱甘肽水平和改善血脂水平，”美洲-欧亚农业与环境科学杂志第13卷，no。9, 1246-1251, 2013。视图:谷歌学术搜索
21. O. S. Adeyemi和M. A. Akanji，“生物化学变化在以下的乙醇提取物的给药，肾和大鼠肝Psidium guajava叶子。”人体和实验毒理学卷。30，没有。9，第1266至1274年，2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. O. S. Adeyemi和F. A. Sulaiman， <生物化学和形态变化>锥虫属brucei锥虫感染的大鼠homidium氯化物和diminazene aceturate处理，”基础和临床生理学和药理学杂志第23卷，no。4，第179-183，2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. t·j·达文和b·f·沙施密特，《肝脏生化测试》Sleisenger & Fordtran的胃肠道和肝脏疾病:病理生理学，诊断，管理M. Feldman, L. S. Friedman, M. H. Sleisenger, Eds。，pp. 1227–1238, Saunders, Philadelphia, Pa, USA, 7th edition, 2002.视图:谷歌学术搜索
24. S. O. Malomo, A. S. Daramola，和E. A. Balogun，“感染尼日利亚约氏疟原虫的小鼠在给药氟化蒽酮前后血清和组织酶的变化，”尼日利亚中国生物化学与分子生物学，第10卷，第71-77页，1995年。视图:谷歌学术搜索
25. M. A. Akanji, O. S. Adeyemi, S. O. Oguntoye, F. Sulyman，”Psidium guajava提取物可减少锥虫病相关的脂质过氧化，并提高感染动物的谷胱甘肽浓度。EXCLI杂志，第8卷，第148-154页，2009。视图:谷歌学术搜索

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