减少鸡蛔虫病理学的鼠伤寒沙门菌在肉用仔鸡

摘要

以前的研究已经报道了它们之间的相互作用沙门氏菌sp.和一些蠕虫合并感染。在这项研究中,鼠伤寒沙门菌和鸡蛔虫对合并感染进行分析，并提出治疗的后果。在第一个试验中，研究了细菌对线虫的影响，将30只42日龄肉鸡分为3组，同时感染两种寄生虫。的速度A.加利鸡蛋接种量保持在500/ml不变，而鼠伤寒沙门菌变化如下₀(500A.加利鸡蛋/毫升),T₁₀₄(500A.加利鸡蛋+ 104 /毫升鼠伤寒沙门菌以及₁₀₆(500A.加利鸡蛋/毫升+ 10^6.伤寒沙门菌（CFU）。使用麦克马斯特技术测量EPG和寄生负载，并测量蠕虫数量和长度。我们观察到T₁₀₆包含10个^6.的CFU沙门氏菌显著降低了EPG值，这一组记录了最低的蠕虫负荷，从18只到21只。同样，蠕虫的长度用T₁₀₄和T₁₀₆似乎比对照组的短(T₀）.在第2个试验中，将30只42日龄肉鸡分为3组，同时感染两种寄生虫。的速度鼠伤寒沙门菌接种量保持在10^6.CFU，而A.加利变化如下₀(10^6.CFU），T₅₀₀(500A.加利鸡蛋/毫升+ 10^6.伤寒沙门菌以及₇₅₀(750A.加利鸡蛋/毫升+ 10^6.伤寒沙门菌使用Voogt技术测量细菌载量₅₀₀增加了殖民时间，延长了鼠伤寒沙门菌分泌。沙门氏菌考虑到对人体的有害影响，似乎是一种超级寄生虫A.加利．因此，应谨慎地结合抗沙门氏菌用驱虫剂治疗，从而有效地治疗由这两种病原体引起的疾病。

1.导言

对革兰氏阴性细菌和寄生虫相互作用的研究可以追溯到几十年前[1.]暗示类圆线虫属可以拖动大肠杆菌在它们从肠道迁移到宿主其他器官的过程中旋毛虫和A.加利已被确定为沙门氏菌传输[2.,3.］.对血吸虫的实验室研究表明沙门氏菌能在动物的肠道内定植曼氏血吸虫[4.]. [5.]证明了沙门氏菌以及通过培养的血吸虫甲型副伤寒沙门氏菌从某些血吸虫病。几项实验研究已经开始证明沙门氏菌同时感染鸡蛔虫[6.].在这方面A.．加利蠕虫在活的有机体内表明鸡暂时感染了病毒鼠伤寒沙门氏菌。鉴定沙门氏菌肠道内或体表的生物体A.加利蠕虫进一步表明了这两种病原体之间的密切联系[7.]本研究为了解鸡慢性沙门氏菌病相关的常见临床症状提供了基线[8.］.

一些研究表明，这些细菌(鼠伤寒沙门菌)蠕虫呢(A.加利）.这些研究不仅关注对宿主的致病作用，还关注治疗的结果[9因为这些病原体对禽类和人类健康都是一个真正的问题。这导致了符合疾病预防和控制“一个健康”方针的综合措施。为了确保粮食安全和安全，世卫组织-粮农组织和国际兽疫局三方联盟强调有必要遏制这些病原体在动物和人之间的传播[10］.这些病原体的威胁是，它们会引起与食用家禽肉类或产品有关的人畜共患病。[的研究结果6.]透露A.加利可能在传播疾病方面发挥重要作用沙门氏菌感染，从而增加了农牧业部门的经济损失。据估计，美利坚合众国每年的总损失在1550万美元至28亿美元之间[11］.

单独沙门氏菌病的临床表现似乎与合并感染的情况有显著不同。以血吸虫为例[12),A.加利[13]，当沙门氏菌与血吸虫有关时，其治疗变得困难甚至不可能[9].细菌的传播可通过A.加利鸡蛋(13]表明它们之间可能存在相互作用。然而，关于这些相互作用的信息很少，尤其是涉及A.加利．更好地理解这些相互作用有助于解释由这两种寄生虫引起的病理。这项研究是为了探索可能存在的相互作用鼠伤寒沙门菌和A.加利以及预测治疗的意义。

2.材料和方法

2．1．研究地点

这项研究是在喀麦隆dchang大学的生物学和应用生态学实验室以及生理学和动物健康实验室进行的。

实验动物：肉鸡(劳动英亩)品种均来自喀麦隆dchang市的商业家禽供应商(喀麦隆Provender Company)。

2．2.的来源鼠伤寒沙门菌

沙门氏菌样品由德克萨斯大学健康USA.教授LoVerde Philip提供。

2．3.的来源A.加利鸡蛋和感染

本地鸡只自然感染禽流感病毒A.加利人道安乐死。将成虫从其肠道中取出，用磷酸盐缓冲盐水(PBS, pH: 7.2)冲洗两次。它们的卵从蠕虫的子宫中取出，然后在0.1 N硫酸中孵育21天，以获得胚胎卵[14].在卵子胚胎形成后，先前饲养到42天的鸡感染了禽流感病毒A.加利鸡蛋。感染后30天处死鸡，并从肠中取出成虫。

２.４.实验一:影响鼠伤寒沙门菌在A.加利宿主共同感染

为了评估细菌对线虫的影响，将30只42日龄的“Arbor acres”肉鸡分为3个相同的组，如[6.但几乎没有改变，并与两种寄生虫共同感染。的速度A.加利鸡蛋接种量保持在500/ml不变，而鼠伤寒沙门菌变化如下₀T₁₀₄, T₁₀₆（表1.）.在30^th伤害后第二天，测量EPG、寄生负荷和蠕虫长度等参数。

2．5．粪卵浓度(EPG)

为测定EPG，所有实验组每天取粪便标本，连续21 d。样品保存在10%福尔马林中，然后进行定性(浮选技术)确认感染，定量(Mc Master技术)确定EPG。取粪便标本2克，与饱和盐溶液(1l蒸馏水400g NaCl) 60ml混合。由于粪便标本保存在福尔马林中，很难从混合物中提取出2 g粪便，所以每个装有粪便标本的烧瓶的总重量(MT)，即10 ml福尔马林的重量( )，和空瓶的重量( )分别进行测量。准确的大便重量( )然后通过以下公式测定每个烧瓶内的温度：

按配方计算每个烧瓶内粪便百分比的比例(% mmf) ．

扣除大便-福尔马林混合物( )并确定用公式 , 使用Willis和Mc Master技术确定。

2.6。寄生负荷和寄生长度的测量

感染52天后对鸡实施安乐死。然后从肠中提取成虫和幼虫。取虫后，用Pierron®品牌双目环观察后半部分，将雌虫与雄虫分离。每只蠕虫的长度都用刻度尺测量，以确定发育不良的蠕虫。

2.7。实验二:影响A.加利在鼠伤寒沙门菌宿主共同感染

用于评估线虫对环境的影响鼠伤寒沙门菌，将30只42日龄的“Arbor acres”肉鸡分为3组，并与这两种寄生虫同时感染鼠伤寒沙门菌接种量保持在10^6.CFU，而A.加利变化如下₀(10^6.CFU），T₅₀₀, T₇₅₀（表2.）.感染后21天，每隔3天监测细菌载量。采用泄殖腔拭子测量细菌负荷，如[15]。获得的溶液在培养基上培养沙门氏菌-志贺菌琼脂在37°C孵育24 ~ 48 h沙门氏菌殖民地。

2.8。统计数据分析

使用R软件进行统计分析，版本3.5.3的[16，主要用于分类分析[17为了更好地理解沙门氏菌在线虫方面，通过Satterthwaite's测试报告的EPG平均值的频率 -测试，而那些长度A.加利通过Shapiro-Wilk正态性试验评估蠕虫。此外，通过应用非参数多项式回归来区分细菌负荷对数的平均值，检查线虫对细菌的影响。所有试验均在5%概率水平下进行。

3.结果

3．1.实验一:影响鼠伤寒沙门菌在A.加利宿主共同感染

数字1.显示了三种处理中EPG的变化。EPG的原始数据被转换为正态分布数据。检测到阳性粪便卵数；首次采集单个样本。EPG随时间变化，呈钟形结构，峰值出现在12周左右^th根据不同的处理，EPGs也有变化。最低值是用T₁₀₆T₀。此外A.加利同样处理组的排泄时间相对较短。T₁₀₆包含10个^6.的CFU沙门氏菌显著降低EPG值。T₁₀₄与对照和T相比产生了中间效应₁₀₆．

抛物线回归分析表明，截距、线性项和二次项随着时间的推移具有高度显著性鼠伤寒沙门菌显著差异( )从对方。浓度之间的显著差异鼠伤寒沙门菌可以从以下抛物线回归方程中清楚地观察到：

3．2.的影响鼠伤寒沙门菌在寄生负载

在实验期间，偶尔会在鸟类的粪便中发现排出的蠕虫。在实验结束时，死后记录的蠕虫数量显示在箱线图中(图)2.).在不同的组中，每个宿主的蠕虫数量有很大的差异。除此之外，没有其他胃肠道寄生虫A.加利在验尸时被看到。蠕虫在每个箱线图中的分布被划分为四个相等的区域（25%）。从这些箱线图（图2.)，中位数为28只₀．在同一组中，最低蚯蚓负荷在20 - 23只之间，最高蚯蚓负荷在32 - 40只之间。T₁₀₆组记录的最低蠕虫负荷为18到21条。10点^4.在CFUs中，蠕虫的中位数为27条，最低蠕虫负载在28到35条之间。对一般线性模型的分析表明，用T₀（表2.)与其他浓度显著不同( ）.用双寄生法获得的寄生负荷之间没有显著差异（T₁₀₄和T₁₀₆)虽然10^6.CFU（表1）2.)鼠伤寒沙门菌大大减少了蠕虫(幼虫+成虫)的数量。单寄生的效果不是加倍寄生( ）.

3.3.影响鼠伤寒沙门菌关于长度鸡蛔虫蠕虫

长度的变化A.加利作为处理的函数，如图所示3.．从图中可以看出，对照组蠕虫长度的中位数为52毫米(T₀）.在同一组中，记录到的中型虫在42 - 63 mm之间，最大虫在63 - 83 mm之间。在T₁₀₄和T₁₀₆中位数分别为42和45 这些组中蠕虫的最大长度（T₁₀₄和T₁₀₆)分别为60和62 mm。夏皮罗-威尔克正态性检验表明，虫长存在性别效应。从这项试验中观察到，雄虫明显比雌虫短( ）.在T组，鸟类幼虫的长度显著减少(0.05)₁₀₆组与对照组比较。无显著性差异( )不同处理间的交互作用在性别上的差异。同样，用T₁₀₄似乎比对照组的短，但在统计上没有显著性差异( ）.然而，用T得到的长度₁₀₆明显短于对照组( ）.

3.4.实验2：药物的作用A.加利在鼠伤寒沙门菌宿主共同感染

细菌负荷随时间的变化如图所示4.细菌负载量随接种物浓度的不同而变化。我们观察到两条钟形曲线（T₀和T₅₀₀)和倒s型(T₇₅₀).用T₀（表2.)接种物，最大值出现在11^th的一天。然而，T₀仍然相对较短。与T₇₅₀接种物中，细菌负荷较少，但分泌持续时间较长，如图所示4..在T₅₀₀浓度略高于T₇₅₀非参数多项式回归分析表明，接种物获得的细菌负荷值₀与其他浓度显著不同( ）.此外，不同组的细菌载量差异很大( ）.因此,A.加利延长鼠伤寒沙门菌分泌。

4.讨论

考虑到A.加利对照组的卵子排泄量高于共同感染组，这表明检测卵子的最佳方法是A.．加利也许是人工数粪便里的鸡蛋。只有成熟的雌性蠕虫会产卵，只有在严重感染后才有可能确诊。此外,沙门氏菌感染生殖组织，引起卵巢和睾丸脓肿，影响卵子形成，大大降低寄生虫产卵率[18］.睾丸脓肿会抑制雄虫分泌的蛔虫苷。线虫分泌蛔虫糖精作为信息素，以诱导卵的形成，并控制各种行为，包括雌虫吸引雄虫和成虫聚集[19,20.］.

寄生虫通常表现出很高的繁殖潜力，这是微生物数量呈指数增长的原因。当我们考虑每天产蛋率和寄生虫寿命时，鸡蛋产量通常很高。就蛔虫，它每天产卵约20万枚，寿命为9个月[21]。因此，我们有理由期望A.加利由于这两种寄生虫在母鸡的肠内占据相同的生态位，因此在共同感染组中的卵排泄[22].这项研究表明鼠伤寒沙门菌可能在降低鸡的产卵能力方面起重要作用A.加利，因为共感染组获得的EPG值低于对照组。这可以解释为细菌感染生殖组织（如输卵管和卵巢）的能力。这些组织是母鸡鸡蛋污染的门户[18,23］.

人们普遍认为，建立A.加利鸡小肠的感染受年龄、感染剂量、性别、宿主饮食等多种因素的影响。由[4.研究发现，某些种类的细菌，包括克雷伯菌sp.和大肠杆菌，迅速殖民曼氏血吸虫并导致蠕虫的死亡这些作者进一步指出鼠伤寒沙门菌自然存在于感染了美国曼导致所有虫子的死亡从对照组中提取的蠕虫的长度比从合并感染组中提取的蠕虫的长度要大。驱除蠕虫可能对蠕虫的平均负荷有一些影响。观察到的这种大小和寄生负荷的差异可能是争夺空间和营养物质的结果，因为两种病原体(沙门氏菌和A.加利)占据同一部位，即肠道。这些病原体还必须找到一个平衡点，以保持宿主的存活，因为宿主的死亡最终将导致寄生虫的死亡。在所有实验组中，雄性蠕虫的数量都超过雌性蠕虫。这一现象允许每只成年雌性蠕虫至少有一只雄性进行交配，以便ay可育卵，确保物种生存[21］.雌虫产卵的数量也可以解释本研究中获得的粪便卵浓度。的可能性A.加利已证明，鸡的感染率明显较高[6.］.

具体效果沙门氏菌关于蠕虫的完整性和生存能力的研究在其他研究中还没有报道。根据这项研究的发现，很明显沙门氏菌有不同的影响A.加利包括降低蠕虫的生长、产卵率和死亡。平均细菌负荷服从高斯曲线。同时感染组细菌载量的下降是由于种间竞争。对照组的细菌负荷值较大，但同时感染组这些细菌的排泄时间较长。沙门氏菌排泄物被认为是有利于A.加利当鼠伤寒沙门菌在婴儿的消化道和子宫中发现A.加利[7.]与竞争感染A.加利其他细菌也证明了这一点A.加利助长细菌感染[23]这可能与免疫反应的极化有关；已知哺乳动物的免疫反应在1型（Th1）或2型（Th2）免疫途径中极化，具体取决于遇到的病原体类型[24]。政府亦有报告类似的调查结果[25在鸡。因此，蠕虫感染可抑制Th1反应，间接促进细菌感染的建立，反之亦然。由蠕虫感染刺激的树突状细胞在肠道免疫反应的调节以及细菌发病机制的调节中发挥重要作用，如[26这是因为寄生虫感染改变了宿主对竞争性细菌感染的反应，并通过一种需要树突状细胞激活和白细胞介素-10 (IL-10)表达的新机制促进细菌肠道结合[26］.

这些结果进一步提供了抗生素治疗困难的合理原因沙门氏菌当与病毒同时感染时蛔虫一些研究人员认为，沙门氏菌病的治疗可以通过简单地驱除宿主来实现，因此表明细菌依赖于活蠕虫的存在在活的有机体内[27］.此外，其他研究人员报告说，寄生蠕虫与宿主器官的一些变化有关，这些变化有助于沙门氏菌感染[28,29]然而，宿主-细胞相互作用的潜在可变性继续使对细胞反应的理解复杂化答:背带来鼠伤寒沙门菌感染[8.]. [29比较了五种血清的沙门氏菌感染家禽(鼠伤寒沙门菌,肠炎沙门氏菌,海德堡,肯塔基沙门氏菌和美国Senftenberg)，以评估细胞的侵袭沙门氏菌在MC29病毒和HD-11转化的鸡巨噬细胞中，研究了其细胞内存活机制、肉豆素乙酸佛波酯(PMA)的调控以及一氧化氮的爆发氧化活性。肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌没有产生任何可检测到的一氧化氮[29]此外，胃肠道微生物区系、免疫系统和宿主依赖性因素（如年龄、应激水平和一般健康状况）之间相互作用的复杂性可能在宿主-病原体相互作用和减少感染方面发挥重要作用沙门氏菌排泄物[30.,31由于蠕虫感染增加了对细菌来源的肠道病原体的敏感性，可能导致使用失败沙门氏菌在蠕虫流行率高的国家接种疫苗，因为蠕虫调节免疫反应沙门氏菌-基础疫苗[32］.

5.结论

鼠伤寒沙门菌对健康有害A.加利通过减少肉鸡线虫的长度和负荷。这与其他的研究是一致的沙门氏菌当它们生活在共同的环境中时，会与胃肠道线虫相互作用。此外，这种相互作用的影响鼠伤寒沙门菌和A.加利已经证明对健康和健康都有害A.加利.这表现在病毒的致病性降低A.加利.鉴于这些细菌对人体的有害影响A.加利和沙门氏菌似乎是一种超级寄生虫。建议使用抗-沙门氏菌用驱虫剂治疗由这两种病原体引起的疾病。今后需要考虑这一点，以加强对家禽的其他控制策略。

数据可用性

本研究中生成和分析的数据集可由相应作者根据合理要求提供。

道德认同

本著作的所有作者在此声明，在研究中，遵守了非人类动物护理和使用的道德行为准则以及与动物使用和护理相关的具体国家法律。所有实验都经过相应的伦理委员会审查和批准。

利益冲突

两位作者宣称没有相互竞争的利益。

致谢

作者衷心感谢LoVerde Philip（美国圣安东尼奥德克萨斯健康大学）提供的帮助鼠伤寒沙门菌书信电报_2.-我们非常感谢Katte Bridget提供的技术援助。

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