(fish length) + 0.32 (water temperature). Next, this study has also shown the DNA sequence and parasitic morphology of Neobenedenia melleni. Nucleotide sequence for 18s ribosomal gene RNA in this study showed 99% similarity with N. melleni EU707804.1 from GenBank. Finally, all the sequence of Neobenedenia melleni in this study was deposited in GenBank with accession numbers of KU843501, KU843502, KU843503, and KU843504."> Neobenedenia melleni疟原虫红鲷鱼,Lutjanus erythropterus,与鱼的长度之间的回归统计分析,温度,在被感染的鱼和寄生强度,培养在Jerejak岛,马来西亚槟城, - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果

寄生虫学研究期刊》的研究

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寄生虫学研究期刊》的研究/2016年/文章

研究文章|开放获取

体积 2016年 |文章的ID 1946283 | https://doi.org/10.1155/2016/1946283

拉吉夫•拉维Zary Shariman Yahaya, Neobenedenia melleni红鲷鱼的寄生虫,Lutjanus erythropterus鱼长度之间的回归统计分析,温度,在被感染的鱼和寄生强度,培养在Jerejak岛,马来西亚槟城,”,寄生虫学研究期刊》的研究, 卷。2016年, 文章的ID1946283, 8 页面, 2016年 https://doi.org/10.1155/2016/1946283

Neobenedenia melleni红鲷鱼的寄生虫,Lutjanus erythropterus鱼长度之间的回归统计分析,温度,在被感染的鱼和寄生强度,培养在Jerejak岛,马来西亚槟城,

学术编辑器:伯纳德马
收到了 2016年1月15日
修改后的 2016年3月04
接受 2016年3月15日
发表 06年4月2016年

文摘

从收集到的鱼类寄生虫Lutjanus erythropterus与寄生鱼类显示相关强度,鱼的大小,和温度,并使用SPSS统计模型总结了20版,统计软件。统计模型中总结得出的结论是,变量显著预测的患病率Neobenedenia melleni寄生虫是鱼长度和水的温度,这两个重要的1%和5%。此外,增加一个单位的鱼长度,保持其他变量不变,增加了寄生虫的流行,大约1(0.7≈1)单位。同时,增加温度从32°C到33°C会积极的寄生虫数量增加约0.32个单位,保持其他变量不变。该模型可以概括为估计的数量Neobenedenia melleni寄生虫= 8.2 + 0.7 (鱼长度)+ 0.32 (水温)。接下来,本研究还显示DNA序列和寄生虫的形态Neobenedenia melleni。18 s核糖体RNA基因核苷酸序列在这项研究中显示,99%相似n melleniEU707804.1基因库。最后,所有的序列Neobenedenia melleni在这项研究中被存入基因库KU843501加入数字,KU843502 KU843503, KU843504。

1。介绍

定量数据信息和养殖鱼类在东南亚是有限的。然而,现有的数据解释了密切相似种类的鱼类养殖整个东南亚地区和发现的主要寄生虫感染每个物种的培养海洋鱼类是相似的(1- - - - - -5]。大量研究海洋鱼类的寄生动物表明每个鱼类的主要寄生虫一样不管野生或培养3,6]。之间的主要区别野生和养殖,患病的海洋鱼类的数量和种类在两组养殖鱼类寄生虫大大超过发现野生的鱼7]。

Monogenean寄生虫病原体被认为是严重的鱼在海笼水产养殖(8- - - - - -10]。单殖亚纲寄生虫没有中间宿主,主要寄生于鱼类的外部表面,并显示两个独特的饮食传统上把他们分成两个子类,血液喂食多后盘目和上皮单后盘目(11]。这些有时叫Heteronchoinea Polyonchoinea,分别12]。这些子类是美国通过各种形态synapomorphic幼虫与纤毛区,三成人,幼虫和两对色素的眼睛,一双腹锚(hamuli),和一个鸡蛋丝13]。推理对单殖亚纲寄生虫单元,几十年来一直无处不在(13- - - - - -18]。Neobenedenia melleniYamaguti (MacCallum, 1927), 1963年,一个capsalid monogenean亚科Benedeniasp是声名狼藉的广泛的病原体很多硬骨鱼类的物种在水产养殖19]。这种寄生虫提要上皮细胞粘液的主机上鱼,使增加的影响对刺激和粘液hyperproduction宿主(20.]。像大多数其他monogenean组,benedenids历来确定物种形态特征的基础上,如后hamuli的形状,前附件器官的类型,和子宫的长度,卵黄水库,类型和相对大小的睾丸21]。虽然已经说了很长一段时间,基于形态特征的识别寄生虫可以影响,在很大程度上,由外在因素如寄生虫的时代,环境温度,甚至造成工件的各种交易标本处理,所讨论的李et al。22),大多数monogeneans可以适当区分,因为他们的高水平的主机规范。然而,Neobenedenia melleni不遵守规则,因为据报道来自100多个硬骨鱼类属于全球30多个家庭分布(23]。

到目前为止,还没有参考已经完成的相关性Neobenedenia melleni寄生虫感染鱼的大小,温度和盐度因素在马来西亚。这是研究的一个重要方面,因为它有利于农民养殖行业预测任何鱼类寄生虫侵扰他们的农场和采取措施,以防止寄生虫感染。因此,本研究的目的是显示的患病率和统计分析Neobenedenia melleni寄生虫对鱼的大小和水的温度Lutjanus erythropterus鱼类样本从笼子里文化Jerejak岛,槟榔屿,马来西亚半岛。此外,我们已经成功地发现了疟原虫物种使用形态学和分子生物学方法。

2。材料和方法

2.1。取样位置和寄生虫集合

400条鱼标本的实验进行了培养Lutjanus erythropterus鱼类从Jerejak岛、槟城马来西亚半岛(100.3189185 5.320097经度,纬度)。每个鱼的长度(厘米)测量之前寄生虫检查。淡水中被用作麻醉剂减少压力以及简单的处理。鱼被麻醉后,体外寄生虫,是通过外部检查鱼的身体检查和光学显微镜下直接观察(24]。网站特异性得到寄生虫的头部,身体,和内盖的两边。

第一形态识别寄生虫是由染色乳酚解决方案的寄生虫和几滴(200毫升乳酸,200 g / L苯酚甘油400毫升、200毫升去离子水)。在染色时,幻灯片复合显微镜下观察(美国徕卡)。寄生虫发现被小心翼翼地从受感染区域,然后从每个鱼类寄生虫的数量获得记录,保存与70%乙醇溶液在通用瓶进行进一步的检查。照片后的寄生虫了,鉴定寄生虫收集是由形态学观察使用识别键所显示夸et al。25,26]。

2.2。使用扫描电子显微镜形态学方法

第二形态识别是通过使用上50副总裁LEO分析Fesem超高分辨率,扫描电子显微镜。电子显微镜样品制备是建议的协议上50副总裁LEO分析Fesem超高分辨率,扫描电子显微镜指南手册。首先,暂停在乙醇样品放入连续稀释为90%,80%,70%乙醇。然后,悬挂的液滴被放在400 -网状铜碳膜涂层网格1 - 3分钟。然后干滴用滤纸。网格被放置在滤纸的培养皿中,保存在干燥器中。最后,成像后将进行3天的保护。

2.3。分子使用DNA鉴定方法

这种寄生虫的基因组DNA提取和纯化使用试剂盒提供的程序执行DNeasy血液和组织工具包(试剂盒,Inc .,瓦伦西亚、钙、美国)。纯化基因组DNA被添加筛选了100μL缓冲AE相同的自旋列在一个新的埃普多夫管和离心机在5200克1分钟。离心机一步又重复了总共200μL样本体积。DNA样本存储在−20°C和浓度测量与ACT-Gene NanoDrop分光光度计(ASP 2680、台湾)。

核糖体RNA 18岁部分序列放大使用特定的引物从纯化基因组DNA 18科幻(5′gcg CGA GAG GTG AAA TTC 3′)底漆和18 sr (5′agt TTA CCC AGC有条件现金援助TTC GA-3′)和反向引物,所讨论的党et al。27]合成了MyTACG生物科学(马来西亚)。聚合酶链反应(PCR)进行了使用25的总量μL掌握混合解决方案(14μL (ddH2啊,2.5μL Promega PCR缓冲,3μL (Promega MgCl2解决方案1μL (Promega核苷酸,1μL的底漆和反向引物,2μL的DNA模板,和0.5μL Promega的Taq DNA聚合酶)。标准周期PCR条件设置了初始变性10分钟在95°C,紧随其后的是35周期30年代在95°C, 30年代在50°C, 60年代在72°C,和最终伸长的7分钟72°C。整个PCR在MyCycler进行热循环Bio-Rad PCR系统(美国)。纯化PCR产品使用过程和材料中提供一个执行QIAquick PCR净化设备(试剂盒,Inc .)。放大产品在两个方向测序MyTACG生物科学公司(马来西亚)。

2.4。DNA校准和系统发育分析

核酸序列的比对分析了使用ClustalW2大型5。基于距离树物种鉴定方法进行了使用大型5软件。爆炸搜索与DNA序列进行了放大。使用大型5,讨论田村et al。28),一个基于距离树物种鉴定方法是由neighbour-joining 18岁的记录序列物种从爆炸的搜索和分析研究。两两距离计算使用大型5分析工具和木村出现(29日];方法作为替代模型。此外,引导方法部署测试系统使用1000引导程序复制。最后,所有提交的序列在基因库提交协议。

2.5。统计分析和水参数记录

统计分析在这项研究使用社会科学统计软件包进行软件SPSS版本20。采用多元回归分析和在所有情况下,设置在5%显著性水平的讨论领域(30.]。水参数测量海洋笼子里使用盐水主测试装备,水族馆医药指数(API),美国。每个测试的过程是根据制造商的指示。

3所示。结果与讨论

3.1。形态分析Neobenedenia melleni

使用形态学键如Lawler所述31日)和布拉德et al。32,33]。在修改通用诊断Neobenedenia,惠廷顿和霍顿(23)指出,多种形式,超过80个标本归因于Neobenedenia melleni从不同的宿主物种。我们能够确定收集到的寄生虫Neobenedenia melleni数据显示1- - - - - -6,如:附件骨片,40岁μm;T:睾丸器官;AO:前附件器官;P:着色眼;马:雄性附腺水库;旅客:Goto的腺;V:卵黄水库;答:前钩,150年μm;后小钩,40岁μm。总长度的样品标本,Neobenedenia melleni,在这项研究中,被记录为1050年μ米,宽度长度是记录为700年μm。

3.2。DNA和系统发育分析

基于获得的结果在凝胶电泳分析DNA模板的PCR产物,清晰可见乐队被检测到大约700个基点序列,通过分析被称为强光油灯DNA标记(美国)(图1 kb7)。除此之外,光学密度(OD) DNA的比例是2.0浓度为135 (ng /μL)基因组DNA。分析了DNA序列进一步使用Clustal W, Bioedit软件。18岁的顺序是成功地进行了分析,从所有中恢复过来Neobenedenia melleni个人。核苷酸爆炸序列18 s核糖体RNA基因从这个研究显示99%相似n melleni从基因库EU707804.1数据集,如图8。与此同时,图9显示了构建系统发育树,显示了两个密切相关的物种之间的演化支。

所有的个人Neobenedenia melleni记录在本研究显示物种之间的密切关系,从NCBI被记录,Neobenedenia melleniEU707804.1引导价值96%,其次是76%的相似性Allobenedenia epinepheliEU707800.1。最相似的记录Encotyllabe chironemiAJ228774.1,Benedenia epinepheliEU707802.1,Neobenedenia girellaeAY551326。最后,所有的序列Neobenedenia melleni在这个研究是沉积与加入数字KU843501基因库,KU843502 KU843503, KU843504。所有这些序列可用基因库的公共数据库。

3.3。统计建模Neobenedenia melleni

总共379条鱼都感染了Neobenedenia melleni寄生虫的400个研究鱼类自然海洋文化笼子里的环境。表1显示了因变量的描述性统计和预测变量参与这项研究。的平均数量Neobenedenia melleni鱼类寄生虫检查中发现大约是25标准偏差为2.8。鱼长度的平均值与标准偏差为3.7 24.3厘米。与此同时,二进制编码的变量,水温(0 = 32°C, 1 = 33°C)和盐度(0 = 32 ppt, 1 = 33 ppt),都有更高比例的低温(54.4%)和盐度(59.4%)相比,它的对手。


特征 频率, 患病率(%) 的意思是 SD

因变量
Neobenedenia melleni 379年 94.8 25.24 2。8
预测变量
鱼的长度 375年 93.8 24.3 3.7
分类变量
水的温度
32.0 154年 54.4
33.0 129年 45.6
水的盐度
32.0 168年 59.4
33.0 115年 40.6

请注意。 总不是100%由于缺失值;SD:标准差。

2彼此表明变量呈正相关,显著的为1%。大0.92是观察到的相关性之间的鱼的长度和流行Neobenedenia melleni(增加鱼的长度将增加的流行Neobenedenia melleni寄生虫)和0.437之间的水盐度和流行Neobenedenia melleni寄生虫(增加水盐度增加的流行Neobenedenia melleni寄生虫)。最后,一个温和的0.3是观察水温和流行之间的相关性Neobenedenia melleni寄生虫(30.]。


变量 普遍存在的Neobenedenia melleni 鱼的长度 水的温度 水的盐度

普遍存在的Neobenedenia melleni 1
鱼的长度 0.917 1
水的温度 0.298 0.270 1
水的盐度 0.437 0.428 0.384 1

注意: 重要的为1%。

根据表3通货膨胀因素方差(VIF)值小于10.0或2.0和0.2以上的公差的统计数据30.]。公差的统计数据是VIF或1 / VIF的倒数。多重共线性问题是否定的,因为值满足超过VIF的要求,方差膨胀因子,和宽容的统计数据。


变量 公差的统计数据 方差膨胀因子(VIF)

鱼的长度 0.751 1.332
温度 0.778 1.286
盐度 0.659 1.518

4显示了多个相关系数 所有的独立变量间的相关性(温度、鱼长度和盐度)和因变量值为0.912。的 平方值显示,所有的预测占84.5%的变异寄生虫的流行。的调整 平方值(0.843)是相似的 方表示,如果这些数据收集从人口而不是样本会有相似的结果。因此,这个样例的结果推广到整个人口Neobenedenia melleni在鱼类寄生虫污染,作为讨论的领域(30.]。


复相关系数, 广场 调整 广场 估计的标准误差

0.912 0.845 0.843 1.124

5表明该模型是一个重要的健康数据,不到5%。因此,该模型是显著提高能力来预测因变量,患病率Neobenedenia melleni在鱼类寄生虫污染(34]。


平方和 df 均方 统计数据 价值

回归 1829.444 4 457.361 361.868 0.000
剩余 334.930 265年 1.264
2164.374 269年

6显示了多元回归模型的参数估计。变量的显著预测的患病率Neobenedenia melleni寄生虫长度是鱼和水的温度,同时显著的1%和5%;然而盐度不是一个重要的预测Neobenedenia melleni在这个分析。此外,增加一个单位的鱼长度,保持其他变量不变,增加了寄生虫的流行,大约1(0.7≈1)单位。同时,增加温度从32到33摄氏度寄生虫大约0.32单位的数量增加,保持其他变量不变。95%可信区间(CI)符合获得的结果通过观察鱼的长度和温度的参数估计的置信区间内,在一个积极的置信区间。


变量 参数估计,β 标准误差(SE) 95%可信区间(CI)
下界 上界

常数 8.244 0.465 7.329 9.159
鱼的长度 0.669 0.021 0.628 0.710
温度 0.319 0.156 0.013 0.625
盐度 0.124 0.172 −0.214 0.462

请注意。重要, 1%, 5%的显著性水平。

模型可以写成

10显示残差数据的直方图有钟形曲线表明残差正态分布。这是进一步验证了正常p p图在图的可视化11也表明,点沿对角线谎言表明残差正态分布。图12表明,点是随机和均匀分散在整个情节和同意线性和残差的方差齐性的假设一直是讨论的领域(30.]。

在这项研究中,我们已经部署的多元回归分析方法观察生物和非生物因素影响了寄生虫在宿主的混杂,像鱼长度、水温、寄生虫数,和盐度(9]。预计这些多个变量影响养殖鱼类和遇到利率与寄生虫和寄生虫可以忍受人口的数量。鱼之间的积极关系预计长度、温度、盐度、多样性和寄生虫感染因为大鱼代表更大的表面积为寄生殖民(34,35]。除此之外,温度主要是重要的环境因素仅仅是控制寄生桡足类的发展时期。寄生虫、增长率、鸡蛋生产、存活率,征兵据报道高水温更高[21,23]。多元回归分析是与客观生产集成模型,最好的预测最优数量的寄生虫感染基于三个独立变量的观测值是鱼的长度,平均温度和盐度。

几个monogenean物种表现出短暂的生命周期在温暖的温度(9,23]。加速寄生生命周期将会增加新陈代谢和发展速度与温暖的条件(8,14,15]。目前,不可预测的原因和不规则的本质Neobenedenia melleni感染是未知的。步骤可以减少这种快速实现寄生虫有更多关注,频繁的鱼群监测在温暖、高温水条件(36]。以前这个温度因素的重要作用已经被研究的生命周期Neobenedenia melleni。小川和Yokoyama10)解释说,Neobenedenia melleni只花了十天完成30°C而不是20天20°C在海水中。

相应的格劳et al。8),孵化的存活率Neobenedenia melleni卵孵化时不到12%盐度小于18 ppt 4天。

4所示。结论

总之,这项研究与统计分析建立了概述鱼长度和温度的相关性影响鱼类寄生虫存在的数量Lutjanus erythropterus鱼类。此外,形态和DNA序列识别被显示Neobenedenia melleni寄生虫在这个养殖鱼类从Jerejak岛,马来西亚槟城,。

相互竞争的利益

所有作者声明,没有利益冲突。

确认

资助这项研究是由马来西亚理科大学研究型大学提供资助(1001 / PBIOLOGI / 811259)。作者承认销售税集团公司允许他们进行这些实验养鱼场。此外,马来西亚MyBrain MyPhD奖学金项目是承认。先生Johari SEM单位,生物科学学院的马来西亚理科大学,被公认为协助摄影会议和女士Azirah Akbhar阿里Yanie Zain女士,女士Fatynn Amirah Firuz承认为协助鱼抽样工作。

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