短期通信：在醋酸钠甲醛保存样品上进行蠕虫蛋计数的简单方法

摘要

Kato Katz方法是对人类粪便样本进行蠕虫蛋计数的最常见方式，但必须使用新鲜收集的样品在现场进行。这使得难以在远程可接近的情况下使用。本文介绍了一种简单的鸡蛋计数对现场收集的保存样本并送到中心位置进行进一步处理的方法。

1.介绍

基线调查和持续监测和评估的粪便虫蛋计数是驱虫计划的重要组成部分[1］．卡兹法[2那3.]是对人类粪便样本进行虫卵计数最常见的方法，但它需要对现场的新鲜粪便进行检查。这使得它很难使用等领域的中央太平洋可能意味着部署一个显微镜专家团队,他们的设备,一个小岛和物资,只能通过一个不可靠的运输服务,或巴布亚新几内亚的偏远地区,访问是昂贵的航空服务,可以推迟了几天,甚至几周，由于恶劣的天气。Kato Katz方法的其他问题包括需要在30分钟内检查准备工作，以防止钩虫卵被过度清除和低估[1),无法保持样品或幻灯片复审质量控制,感染的风险从粪便样本,和最后但并非最不重要,安全处理的废弃材料,尤其是玻璃幻灯片,在小隔离环礁和岛屿的处理任何类型的垃圾是很困难的。

使用醋酸钠、醋酸、福尔马林(SAF)保存的样品可以克服上述所有问题[2]，即使在环境温度下储存也能长时间保持稳定。收集容器和防腐剂可提前送到调查地点，当地卫生工作者收集的样本可在运输时送到中心实验室进行处理。问题是要设计一种方法来计算已经被防腐剂稀释的粪便样本的鸡蛋数量。一种方法是将称重后的粪便添加到已知数量的防腐剂中，但这需要在实地收集地点提供适当的天平。新推出的" FLOTAC "方法[4.]也可用于保存的样品，但需要专门的设备。有sav保存的样本的其他优点是，它们可以用来进行更全面的寄生虫学调查，因为浓度法可以用来检测“罕见的”鸡蛋，永久染色可以用来检测原生动物。

2.材料和方法

在收集后尽快将SAF添加到粪便样本中，以近似样品的一部分与两种固定剂的比例，并使用木制的“舌压缩器”分裂宽度彻底均匀化。没有粪便物质的肿块必须留下，因为它们会阻止样品彻底固定。此时也除去了任何明显的外来物质，如石头和叶子。

到达实验室后，样本被转移到一个10毫升的塑料管中，并在足够的时间和速度下离心，将粪便材料紧紧地包装到管的底部。根据离心机的类型和粪便物质的密度和组成，需要进行一些实验。在我们的实验室中，以500克离心10分钟可得到最优结果。小心地取出上清液，尽可能少留下。仔细注意下一步是绝对关键的方法的成功。包装的粪便必须彻底和有力地混合，以确保任何虫卵均匀地分布在整个粪便材料。这是最好的完成使用一半的木制舌压加上一个漩涡混合器。

需要提供Kato Katz模板。我们的实验室使用的是由Vestergaard Frandsen制造的，因为它们是由塑料制成的，可以清洗和重复使用，但任何品牌都可以。将模板放在载玻片上，用粪便填充中间的洞，弄平，然后小心地取下模板，在载玻片上留下测量好的粪便量(通常为41.7毫克)。加入一滴水，混合好，并放置一个 mm cover slip on top. (Using a盖板将产生更薄的准备，但会持续更长时间才能检查。）计算显微镜下的鸡蛋，特别注意盖板的边缘。将24次计数的卵数乘以计算每克（EPG）的卵。

3.结果与讨论

Kato Katz与这种方法之间的正式相比尚未在该领域进行，但通过混合含有钩虫卵和另一种含有的新鲜的未验证的粪便样品来完成实验室生成的比较蛔虫和Trichuris trichiura.鸡蛋与未受感染的粪便，以产生具有一系列鸡蛋计数的样本。对每个样本进行加藤卡茨计数，然后添加SAF，并使用新方法重复计数。比较结果见表1。

由于样品数量少，因此无法单独比较三种物种所获得的结果，但是所有三种在通过新方法制备的载玻片中容易识别，视觉清晰度优异。当它们在第二天重新审视时，钩虫卵完全从由Kato Katz方法制备的载玻片中消失，但在新方法制备的幻灯片中仍然完全可见。如果通过使用新方法制备的载玻片，在具有硬干燥安装介质或指甲清漆的边缘周围密封，它们将持续数月，从而提供有价值的训练材料来源。这与Kato-Katz制剂直接对比，在干燥并变得无用之前不能保持超过一天或两天。

因为这是一种基于人工实验室的实验，使用少数“尖刺”样本，而不是使用真实参与者仔细构建的基于现场的试验，很难在比较结果上得出任何牢固的结论，但可以制定一些重要的观察结果。与Kato Katz一样，这种方法似乎在检测到100个EPG以下低密度感染时不可靠，但两种方法都检测到类似数量的正样品。非常重要，尽管这些方法之间存在鸡蛋计数的变化，但它们中的两者都是使用世界卫生组织分类的“光强感染”中的30个样本中的29个中的29个中的29分[1］．

在该方法中可以平整的批评之一是离心人为地改变流体含量，因此改变了样品的稠度。KATO KATZ方法对粪便样本的流体含量或一致性没有津贴，这被突出显示为潜在的误差来源[5.那6.］．因此，可以认为，用离心的方法压缩粪便物质将减少这种误差。还必须记住，这两种方法都可以最好地描述为“半定量”，极端的准确性是不需要或预期的。

4。结论

这种新描述的方法表现出令人遗憾的是在遥控器中进行寄生虫调查和监视驱虫计划的方式，难以触及，并且逻辑上具有挑战性的位置，其中不可能使用Kato Katz方法，但需要进行一些基于场的比较。

参考文献

1. 人类蠕虫病的预防性化疗:卫生专业人员和规划管理人员手册，世界卫生组织，日内瓦，瑞士，2006年。
2. 医学寄生虫学基本实验室方法，世界卫生组织，瑞士日内瓦，1991年。
3. N. Katz, A. Chaves和J. Pellegrino，“一种用于粪便厚度涂片定量技术的简单设备Schistosomiasis Mansoni”,Revista De Medicina Tropical de Sao Paulo，卷。14，不。6，pp。397-400,1972。视图:谷歌学术搜索
4. S. Knopp, D. Glinz, L. Rinaldi等人，“FLOTAC:检测人类粪便中蠕虫卵的一种有前途的技术，”皇家医学和卫生学会的交易第103卷第1期。12，页1190-1194,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. C. H. Teesdale，K.Fahringer和L.Chitsulo，“鸡蛋计数变异性和薄涂片技术的诊断技术曼氏裂体吸虫”,皇家医学和卫生学会的交易，第79卷，第2期。3, pp. 369-373, 1985。视图:谷歌学术搜索
6. H. Feldmeier和G. Poggensee，“血吸虫病控制的诊断技术:综述”，Acta Tropica，卷。52，没有。4，pp。205-220,1993。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

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