大豆抗疟原虫和抗疟疾活性的评价(甘氨酸最大）在籽提取物恶性疟原虫寄生虫的文化和p .鼠感染的小鼠

摘要

背景．疟原虫寄生虫对以青蒿素为基础的联合疗法(ACTs)的耐药性要求开发新的、负担得起的、安全和有效的抗疟药物。此前对大豆提取物的研究已经证实，它们具有抗菌、抗炎、抗癌和抗氧化特性。这种活动的摘录疟原虫寄生虫还没有被潜在地利用。目标．本研究的目的是确定大豆提取物的抗疟原虫活性恶性疟原虫文化，然后是在活的有机体内评价提取物的安全性和抗疟活性鼠体内安卡strain-infected老鼠。方法．水溶液，制备大豆种子的甲醇，和肽提取物。AN.在体外提取物的抗疟原虫的活动进行评价使用两个恶性疟原虫菌株:对氯喹敏感的塞拉利昂1号菌株D6和对氯喹耐药的印度支那1号菌株W2。后,在体外评估，选择两种活性提取物(肽和甲醇)在活的有机体内与感染小鼠测定p .鼠Anka菌株。测试两种提取物用于其治疗潜力（治疗试验）。进一步评估肽提取物以确定它是否可以防止建立A.p .鼠感染(预防性测试)。在治疗试验中，分别给三组(每组5人)口服甲醇和肽提取物p .鼠在800、400和200毫克/公斤/天的三种剂量水平下，对感染瑞士白化小鼠进行4天的治疗。在预防试验中，3组未感染小鼠在基线时采用相似的剂量方案，口服肽提取物4天。结果．肽和甲醇提取物与IC显示出良好的活性_50.为19.97±2.57μ.G /ml, 10.14±9.04μ.g/ml，分别抗D6菌株。的集成电路_50.多肽和甲醇提取物分别为28.61±1.32μ.G /ml, 14.87±3.43μ.微克/毫升，分别针对W2应变。Methanol and peptide extracts exhibited high parasite-suppressive (therapeutic) activity of 72.9% and 71.9%, respectively, using the 800 mg/kg dose. In the prophylactic test, the peptide extract exhibited suppressive activity of 64.7% upon use of 800 mg/kg. Notably, there was a significant decrease ( ）在低剂量的抑制中。结论．结果表明，大豆提取物具有抗疟疾的特性，其治疗活性高于预防活性。然而，还需要对这种植物进行更多的研究，以可能建立先导化合物。

1.介绍

全球每年约有3亿疟疾病例，约100万人死亡[1］．大多数的疟疾病例和死亡发生在撒哈拉以南非洲地区发现的死亡率最高的婴幼儿5岁以下[中2］．使用有效药物治疗疟疾病例是一项关键干预措施。然而，以青蒿素为基础的联合疗法等抗疟药物治疗面临耐药性的日益严重的威胁[3.］．耐药寄生虫在长期暴露于抗疟药后发展。这种药物压力有助于寄生虫菌株的出现，其具有妥协或避免药物疗效的分子机制。这种具有动作的情况恶性疟原虫该延迟寄生虫清除，并有寄生虫在东南亚已经确定。耐药性行为和其他目前下辖药物的威胁越来越大必要的新产品，为疟疾治疗的发展[4］．

大约122种药物已由94种植物通过发现民族植物学线索制成[5］．根据现有的民族医学知识，大多数传统药用植物被认为是安全的。药物是从植物中产生的，因为它们的可获得性、功效和作用方式[6］．尽管如此，需要更多的研究来发现，评估和验证来自植物来源的新药[7］．

大豆(甘氨酸最大)属于大的植物科豆科，他们生长在热带，亚热带，温带气候区。的ir seeds measure 8 to 10 mm in diameter and grow within a pod similar to that of peas [8］．它们含油量为20%，富含对健康有益的植物化学物质，因此使它们成为中性药物或功能粮食作物。[9］．传统上,甘氨酸最大叶子、根和种子被用来治疗包括疟疾在内的各种疾病[10.］．已经证明该植物具有具有显着的生物活性，如抗氧化剂[11.]， 消炎（药 [12.,抗糖尿病的13.]，抗抑郁药[14.]，和抗微生物[15.］．大豆具有抗动脉粥样硬化，骨质疏松症，和各种类型的癌症，包括那些影响前列腺癌，乳腺癌和子宫[愈合潜在15.］．它们还含有异黄酮，异黄酮被认为是豆类抗氧化活性的主要贡献者[16.］．以前对大豆脂肪乳剂抗疟性能的研究表明甘氨酸最大对3D7菌株表现出有希望的抑制活性恶性疟原虫用IC._50.values ranging from 8.07 ± 2.13 to 13.02 ± 2.35 μ.克/毫升(17.］．通过Deharo等人在这项研究中所使用的大豆类脂提取物。是Intralipid®和Ivelip®这是用于静脉类脂添加剂的商业产品。这项研究表明，即使根治不能成立大豆的抗疟潜力。目前研究的出发点，以评估除了脂质提取的大豆种子提取物抗疟原虫和抗疟疾活动。此外，毒性研究，以确定提取物的致死剂量。

2.研究设计的材料和方法概述

该研究是一种基于实验室的实验室实验研究，对大豆的潜在抗疟疾和抗疟疾活性进行了实验研究（甘氨酸最大)提取(SE)。通过评价粗硒酸酯的抗疟原虫活性来完成粗硒酸酯的抗疟原虫活性在体外)恶性疟原虫文化和一个鼠体内鼠标疟疾模型（在活的有机体内)评估。这项研究分别在肯尼亚医学研究所(KEMRI)的生物技术研究和发展中心(CBRD)和动物之家进行。

2．1．采购的甘氨酸最大种子

2018年10月，在肯尼亚内罗毕的肯尼亚农业和畜牧研究组织（Kalro）中收集和包装大豆种子品种SB 19，并在肯尼亚，在肯尼亚，在室温下在室温下空气干燥3周并使用实验室粉碎。

2.2。大豆提取物的制备

三种提取物（水，甲醇，和肽）从研磨大豆种子制备。

2.2.1。水性和甲醇提取物制剂

100g大豆粉在1升溶剂(水或甲醇)中浸渍。样品溶解后，放入培养摇床中，在37℃±2的中等温度下摇匀7天。然后将样品从振动筛中取出，首先用细布过滤，然后用Whatman #01滤纸过滤，从而得到透明溶液。然后将水和甲醇滤液置于开放水浴中，使溶剂在35°C±2下蒸发6-7小时，直到获得干燥的提取物。干燥的提取物被转移到小瓶中，并在−20°C下存储，以供进一步分析和未来使用。

2.2.2。肽提取制备

为了制备肽提取物，将10g大豆粉末加入100ml冷萃取缓冲液中（10mM Na₂HPO₄， 15mm₂宝₄， 100 m MKCl, 1.5% EDTA)， pH为5。4℃孵育3小时。沉淀通过饱和和每分钟2500转离心得到。粗肽颗粒被风干并在−20°C下储存，以供进一步分析和未来使用。制备了一种单一的提取物，用于两者在体外和在活的有机体内实验。尽管长期使用甘氨酸最大提取物个月，但仍表现出持续的活动，因此possibling保质期长。

２.３.植物化学的初步筛选

采用标准方法对大豆提取物的植物化学物质进行了筛选，并进行了一些修改[18.］．

2．4．在体外的培养恶性疟原虫

氯喹（CQ-）敏感（D6）和CQ抗性（W2）恶性疟原虫菌株被用来评估大豆提取物和红内期的级分的抗疟原虫活性在体外．在肯尼亚医学研究所(KEMRI)的生物技术研究和发展中心(CBRD)进行培养。的恶性疟原虫培养物根据Trager和Jensen [描述的方法保持18.稍作修改。恶性疟原虫(D6和W2)培养在新鲜人红细胞中维持，红细胞压积为4%，RPMI 1640 (sigma)含有0.2%碳酸氢钠，0.5%白蛋白和45μ.g / l缺氧，和50 μ.g/L庆大霉素，在37°C、5%氧气、5%二氧化碳和90%氮气的混合气体中孵育。将感染的红细胞转入新鲜的完全培养基中，每天进行培养。在恶性疟原虫（Indo菌株）培养基，Albumax被10％合并的人血清所取代。使用（Giemsa染色），通过光学显微镜测定寄生血症和定量测定。

2．5．在体外用大豆提取物进行抗疟原虫试验

目的:研究硒提取物的抗疟原虫活性在体外连续微量稀释法测定提取物对[G3H]-次黄嘌呤掺入的抑制能力恶性疟原虫使用(19.］．实验是在96孔板上进行的。首先,25μ.除了2上的那些之外，将L培养培养基加入到96孔平底微量滴定板的所有孔中^nd排。50. μ.加入三分提取液（水，甲醇，和肽）的等分试样，一式两份，向第二行的孔中。甲Titertek电动手稀释器（流量实验室，Uxbridge的UK）用于使每个大豆提取物的系列稀释液在64倍浓度范围内的两个倍。储备液（100 μ.三个大豆提取物的克/毫升）稀释2倍，直到1.56的浓度 μ.g / ml。药敏试验采用初始寄生虫血症0.4%，加200μ.1.5％血细胞比容的升恶性疟原虫96孔板上除第一行最后4孔外的每孔培养。将寄生红细胞和非寄生红细胞加入所有测试孔中，使寄生红细胞和红细胞压积保持0.4%和1.5%。在每次抗疟原虫试验之前，寄生虫培养在环期同步，这是在连续使用氯喹治疗后获得的。第一行作为阳性对照，因此不进行治疗。前4口井作为正常生长的负对照，含200口μ.l疟原虫空白的红细胞。氯喹取代的提取物作为参考药物（阳性对照）用于标准化实验。后，将板在37℃（3％CO培养₂, 5%的人啊₂92%的人不同意₂）48小时，然后向每个孔中加入无线电标记的次值（0.5 μ.我在25年 μ.L培养基）。将板进一步温育18小时以允许其寄存的寄生虫吸收。在第二次孵育后，将板在-20℃下冷冻过夜，以停止生长。在收获前将板在室温下解冻1.5小时。使用Betaplate TM Cell Harvester（华莱士，苏黎世瑞士）收获每个孔，其将红细胞转移到玻璃纤维过滤器上，在那里它们用蒸馏水洗涤。然后将干燥的过滤器插入具有10ml闪烁流体的塑料箔中，并在β基片液体闪烁计数器（Wallac，Micro Beta Trilux）中计数。结果记录为每分钟计数（每份浓度的每分钟计数（CPM）。数据被转移到MS Excel软件，并表示为未处理控制的百分比。能够抑制50％的药物浓度恶性疟原虫(集成电路_50.)，由药物浓度与每分钟放射性计数(cpm)的对数变换确定，公式如下: 在哪里Y_50.是寄生和非乳化对照培养之间的康马价值中间，X1和X2为浓度，和Y1和Y2分别为CPM中点以上和以下数据点的CPM值[20.］．坚定的SE IC_50.值在表中进行分类1根据由[21.］．

2.6。动物处理，寄生虫接种，大豆提取物的抗疟疾作用

女性瑞士白化小鼠6-8周龄老龄老龄老龄老龄于Kemri Animation Nairobi随机选择。它们被称重以达到20±2克，并在实验室中占据良好标准的标准微萝碘笼中。房间的相对湿度保持在60-70％。另外，观察到适当的通风和室温。将动物用活啮齿动物饲料喂养并提供水自由．每个笼子容纳5只老鼠每个测试样品。鼠体内安卡寄生虫在小鼠体内寄生虫减少的评价考生[21.］．寄生虫是从肯尼亚医学研究所（KEMRI）内罗毕获得的，并通过小鼠的亚毕进行维持。血液感染了p .鼠ANKA菌株从供体小鼠心脏穿刺入含1%肝素的15ml离心管中。被寄生的血液被稀释到大约10⁸寄生的红血细胞（红细胞）每毫升。的experimental animals were intraperitoneally infected with 0.2 ml (2 × 10⁷寄生红细胞)，并随机分组。

2.7。药物和管理

实验组、阴性组和阳性组分别口服大豆提取物、PBS和氯喹。在给药期间，使用了一根不锈钢的喂食套管[22.］．

2.8。大豆提取物预防活性评估

采用Ryley和Peters所描述的方法评估SE和氯喹的预防活性[23.］．小鼠随机分为5组，每组5只，笼中饲养。1 ~ 3组分别口服200、400、800 mg/kg/d的硒。第4组小鼠给予5 mg/kg/d氯喹(阳性对照)，第5组小鼠给予3%二甲基亚砜和10%吐温80组成的安慰剂(阴性对照)。SE连续给药3天，即从第0天到第3天。第四天，小鼠接种p .鼠（anka）。每次小鼠的寄生症水平被血液涂抹72小时后评估。在所有组的每天监测存活率28天的后期部门。从每只动物的尾部制备Giemsa染色血液涂片以确定寄生虫和抑制百分比。

2.9。大豆提取物的疗效评价

Tona等人所描述的评价SE在既定感染中杀裂殖子活性的方法[24.使用了。0.2毫升p .鼠一个NKA (2 × 10⁷第1天腹腔注射25只小鼠。两小时后，这些老鼠被随机分成五组，每组5只。1 ~ 3组分别以200、400、800 mg/kg剂量单剂量0.2 ml SE灌胃。阳性对照组(4组)给予氯喹5 ml/kg/d。第5组是阴性对照组，接受安慰剂(vehicle;3%二甲基亚砜，10%吐温80在PBS中)。口服SE和药物，连续3天(第0 ~ 3天)。在治疗的每一天从尾部采集的血液中制备薄涂片，以监测感染情况。4 d后(末次治疗后24小时)用显微镜检查，取小鼠尾部用10%吉氏液染色的薄血膜，每面100个红细胞，计数4个区域的寄生虫数。Tona等人计算了阴性对照组(100%)和实验组平均每次观察寄生虫数的差异，并表示为每组寄生虫血症抑制(化疗抑制)的百分比。[24.]：

在哪里一个 = mean parasitemia in negative control on day 4 andB=实验组相应的寄生虫血症。

占寄生虫百分比计算为寄生剂。每100个红细胞的红细胞，而Chemo抑制百分比被视为相对于百分比表达的对照的寄生虫倍增。在所有组的每天监测存活率28天的后期部门。假设阴性对照组中的寄生虫经历了1％的化疗抑制（药物效力以抑制寄生虫倍增）。

2.10。提取物的毒力测定

平均致死剂量(LD_50.)测定大豆提取物的急性毒性，采用Lorke方法[25.］．该方法包括给四组瑞士白化小鼠腹腔注射不同剂量(1500、2500、3500和5000 mg/kg)的SE。随后，监测小鼠可能中毒的死亡率和体征。

2.11。数据及统计分析

分析数据显示为平均值±标准偏差。在体外采用Microsoft Excel 2016对数据进行评估，并辅以非线性回归分析确定IC_50.．分析在活的有机体内采用SPSS版本25.在组达到工作，为减少原虫和生存时间对比统计学意义得到采用方差（ANOVA）的单向分析和Tukey的诚实显着差异事后检验。

2.12。道德的考虑

从科学和伦理审查单位（SERU），（研究SERU没有。3795）获得许可开展研究。实验在符合动物护理和KEMRI使用委员会（ACUC）规例进行。此外，对于实验动物的使用和护理按WHO建议的国际公认的价值随访。腹膜内注射，用压力计23针进行。实验期间死亡的端部是在随后通过焚烧碳（IV）氧化物的气体的室中进行。

结果

3.1。植物化学分析

对三种大豆提取物进行了八项定性化学测试，以确定酚类、黄酮类、单宁类、类固醇类、生物碱类、皂苷类、苷类和萜类的存在。结果表明，水提物和甲醇提物中均含有甾体、生物碱和皂苷(见表1)2）.肽类提取物中含有类黄酮、类固醇、糖苷和单宁。

3.2。急性毒性研究

急性毒性试验结果表明，在1500 ~ 5000 mg/kg的剂量范围内，提取物在最初24小时和连续14天内均无死亡。这清楚地表明所使用的剂量是安全的。没有观察到过度中毒的身体和行为迹象，如运动活动减少，身体/肢体张力下降，扭动，呼吸和死亡等。这就提出LD_50.of the extract is greater than 5000 mg/Kg.

3.3。在体外硒的抗疟原虫活性评价

三种不同提取物的活动甘氨酸最大反对的两种菌株恶性疟原虫从水提取物的无活性到甲醇和肽提取物的中等活性(见表)3.）.甲醇和多肽提取物对D6和W2菌株均有较好的活性。甲醇提取物的活性最高，其次为多肽提取物。

水提物有IC_50.> 200μ.G /ml，因此对两种菌株均无活性恶性疟原虫．

3.4。在活的有机体内甲醇和多肽提取物的抗疟治疗活性甘氨酸最大

两种大豆提取物显示活性(甲醇和肽)在体外接下来对抗疟疾活性进行了测试p .鼠anka感染瑞士白化小鼠。这是通过4天抑制甲醇和肽提取物的方法完成的。结果如表所示4．在使用SE提取物(200-800 mg/kg)进行抗疟治疗4天后，以剂量依赖的方式建立了化学抑制。甲醇处理组的平均寄生率为3.48±0.37 ~ 5.99±0.18，多肽提取物处理组的平均寄生率为3.61±0.27 ~ 5.87±0.25。阴性对照组平均寄生率为12.87±0.26。与未经治疗的对照组相比，试验组的寄生虫血症有显著的百分比差异( ）.一个t 800 mg/kg, the extracts demonstrated the highest chemosuppresion. Remarkably, there was a slight difference in chemosuppresion between the positive control and the two extracts. The extracts were able to prolong survival of the animals after treatment termination in comparison with the negative control.

3.5。在活的有机体内肽提取物的抗疟原预防活性甘氨酸最大

在预防性测定中，阴性对照组的寄生虫显着高于任何测试组（ ）.阳性组所有动物均表现出83.09%的抑制率。800、400和200 mg/kg时，肽提取物对血吸虫病的抑制率分别为64.66%、57.12%和43.14%。用多肽治疗组的平均寄生虫血症范围为3.94 + 0.46至6.35 + 0.22。结果如表所示5．与阴性对照相比，肽提取物能够在治疗终止后延长动物的存活。

4。讨论

目前市面上的许多抗疟疾药物都是从植物和天然产品中开发出来的[25.］．恶性疟原虫对现有抗疟药电阻必要改进药物干预的发展[26.］．这一挑战的最佳解决方案可能仍然是治疗性植物[27.，28.］．青蒿素衍生物长期以来一直被用于控制疟疾[29.］．广泛用于治疗疟疾的奎宁是从金鸡纳树皮ofcinalis植物(30.］．非洲的大多数人由于负担能力而极大地依赖传统的补救措施[30.］．本研究调查了大豆的抗疟疾活动和安全性能（甘氨酸最大)，以确定它们作为一种新的、更便宜的抗疟疾药物来源的潜力。

这项研究清楚地表明的潜在活性甘氨酸最大种子提取物对抗疟疾。对甲醇和多肽提取物进行植物化学分析，发现其中含有黄酮、生物碱、类固醇和糖苷，而水提取物中只有类固醇和生物碱。据报道，口服植物化学物质如皂素、单宁和酚类具有抑制细胞免疫的能力[31.］．以往的研究表明，在被检测的植物中可获得的次级代谢物的数量在药物研究中起着更大的作用。以前，生物碱、皂苷、黄酮类和单宁已被证明有助于选定的药用植物的抗菌和抗疟活性[32.］．值得注意的是，我们的结果符合arora的结果[14.]确定抗微生物作用时谁报告生物碱，类黄酮，单宁，和皂苷的存在甘氨酸最大．因此，本研究的结果可能受到粗提取物中提到的植物化学成分的单一或组合的影响，以施加对疟疾的活性。

理想的抗疟药应该是安全的，没有任何副作用。我们进行了毒性研究，以评估使用这种植物提取物的适用性。结果表明，不同浓度的提取物均能有效地抑制紫花蓟马的生长在活的有机体内实验是无害的，在最初的24小时内没有动物死亡，并且在1500-5000mg / kg剂量下连续14天。重要的是，动物在实验的整个四天内活着，表明Satayavivad等人建议的安全性。[33.在工作中。

我们的调查结果同意Deharo等人。[17.他们对大豆脂肪乳剂的抗疟原虫和抗疟疾特性进行了评价。他们记录了IC的抗疟原虫活性_50.13.02±2.35 mg·ml⁻¹使用Ivelip检测样品表明寄生虫快速抑制。在这项研究中,在体外肽和甲醇提取物的测定表现出与IC的活性_50.为19.97±2.57μ.G /ml, 10.14±9.04μ.G / ml对抗D6菌株和28.61±1.32 μ.G /ml, 14.87±3.43μ.微克/毫升抗W2应变，分别。但是，我们在不同的在活的有机体内他们报告了使用Ivelip测试样品(即3.2 g·kg)时较低的寄生虫抑制百分比⁻¹，下降35±26。结果的差异可能是由于使用的样品不同。然而，他们和我们的发现为这种植物在疟疾管理方面的潜在用途提供了清晰的画面。在我们的研究中在活的有机体内检测结果显示，与阴性对照组相比，试验组的寄生虫血症百分率显著降低( ）.体内抗疟活性分为3类:中度、良好和非常好，如果提取物显示寄生虫血症抑制率等于或大于50% [34.］．在本研究中，在治疗性测试用甲醇和肽提取物表现出超过50％的chemosuppresion得到非常好的结果。Methanol and peptide extracts exhibited high suppressive activity of 72.9% and 71.9% using 800 mg/kg dose, respectively. Notably, there was significant decrease ( ）在治疗试验中，400毫克/公斤时的剂量分别为64.7%和64.9%，200毫克/公斤时分别为53.4%和54.4%。在800 mg/kg的最高剂量和最长的存活时间下，甲醇和多肽对寄生虫的抑制率分别为72.9%和71.9%。这可能是由于对抗疟活性起作用的活性化合物大多在天然产品中低水平出现，低剂量可能无法检测到活性[35.］．Likewise, in the prophylactic test, the peptide extract exhibited suppressive activity of 64.7% at 800 mg/kg and 57.1% at 400 mg/kg and 43.1% at 200 mg/kg. Consistent with the above exhibited results, Bonkian et al. [36.]使用两种Sahelian植物提取物，显示出剂量依赖性活性。它们以100,250,500mg提取物/体重的剂量记录寄生虫减少57.5％，35.9％和44.9％Guiera senegalensis分别提取物。相反，Bauhinia Rufescens.抑虫活性分别为50.6%、22.2%和25.7%。其他地方，Menard等人[37.研究青蒿素耐药性的诱导。在连续32个药压传递周期后，他们能够分离出一种耐药表型。布拉斯科等人的插图[38.研究表明，氯喹在发现后是疟疾根除的主要支柱，直到寄生虫耐药性在短时间内破坏了它的使用，要求立即撤出。这很好地说明了，与单一化合物不同，使用粗提取物有可能延缓耐药性。此外，粗提取物是分离纯有效抗疟剂的初步步骤。之前进行的研究甘氨酸最大确实成立，它具有抗氧化作用[11.］．据报道，抗氧化活性可以抑制血红素聚合作为血红素，以在聚合前被氧化，而未聚合的血红素对疟疾非常有毒[39.］．因此，这也可以被认为是导致抗疟疾活性存在的因素之一甘氨酸最大．化学抑制数据显示，寄生虫清除在第四天更明显。这可能是由于反复给药导致血液中药物浓度过高所致。有趣的是，第4天表现出的寄生虫还原活性表明，粗提物中化学成分的生物利用度可能不受生物转化和生理因素的影响。的作用机理甘氨酸最大目前尚不清楚。然而，现有的文献研究表明，一些植物和种子通过引起红细胞氧化而表现出抗疟原虫活性[40]或通过抑制蛋白质合成[40取决于它们的植物化学成分。已知类黄酮通过与寄生虫的核酸碱基配对进行螯合来发挥抗疟原虫活性[36.］．因此，有可能呈现抗癌症活动甘氨酸最大本来是作为上述方法或结果又一个不同的未知的机制。该研究的限制是，特定化合物的鉴定负责抗疟活性没有完成，因为这超出了本研究的范围。因此，我们建议应进一步分析上进行甘氨酸最大种子以鉴定存在的特定抗疟剂化合物。

5.结论

这项研究的结果提供的证据为基础的活动甘氨酸最大对抗疟疾寄生虫。因此，该植物在上述治疗作用方面具有广阔的开发前景。

可能的可能性甘氨酸最大在醒来时应考虑在食品中掺入，以确定身体是否可以对疟疾产生免疫。指某东西的用途甘氨酸最大与其他草药结合，以获得有效治疗[41.- - - - - -48.］．

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包括在文章中。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

作者的贡献

KN和AM设计了这项研究。KN公司参与了数据收集、数据分析和手稿草稿的编写。AM, FK, KK和JO对数据的分析和解释做出了贡献。所有的作者都对这部著作做出了同样的贡献。

致谢

作者衷心感谢非洲-爱-日本项目对这项研究的资助。作者非常感谢Jomo Kenyatta农业技术大学允许这项工作取得进展。作者感谢KEMRI行政部门，特别是生物技术和研究发展中心(CBRD)主任和KEMRI动物之家为实验室提供空间。

补充材料

补充材料包括一个excel电子表格，它有所有的在活的有机体内工作数据。它包括不同提取剂量，阴性和阳性对照的摘要，以及它们如何影响小鼠中的红细胞。该数据用于确定用于测量提取物的效果，例如％寄生虫，平均寄生血症，化学疗效和平均存活日的不同参数，这些都在文章中解释。（补充材料）

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