广谱倍他酰胺酶(ESBL)和金属倍他酰胺酶(MBL)生产的流行铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌从各种临床样本中分离出来

抽象的

本研究的目的是了解广谱倍倍内酰胺酶(ESBL)和金属倍倍内酰胺酶(MBL)的流行情况铜绿假单胞菌和答:baumannii分离自各种临床样本。在2014年7月至2016年6月的两年时间里，在巴斯廷达阿德什医学科学和研究所微生物系进行了这项研究。临床标本包括尿液、脓液、血液、阴道高拭子、呼吸道样本和各种体液进行处理铜绿假单胞菌和答:baumannii分离菌株按标准方案进行鉴定。采用Kirby-Bauer纸片扩散法对所有分离株进行药敏试验。用圆盘增强试验检测这些细菌中ESBL和MBL的产生。最大ESBL阳性菌株铜绿假单胞菌在脓液样本中观察到MBL阳性菌株，在气管吸出物中检测到最大MBL阳性菌株。答:baumannii表现出ESBL和MBL生产中的最大阳性在内插分泌中。该研究由于产生扩展谱贝酰胺酶和金属酰胺酰胺酶，旨在朝着头孢菌素和肉豆蔻酸和肉豆蔻酸的高患病率发动令人惊叹的迹象。早期检测，严格的抗生素政策，以及对感染控制实践的符合是对这些生物的最佳防御。

1.介绍

对抗菌药物的耐药性很常见，并且在过去几年中在人群中有所增加铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌） 和鲍曼不动杆菌（答:baumannii）由于许多菌株现在差异几乎抵抗所有常用的抗生素。这些生物之间的多药耐药性使它们造成的感染难以和昂贵。已知这些细菌产生扩展光谱贝酰酰胺酶（ESBLS）和金属酰胺酰胺酶（MBLS）[1］．第三代头孢菌素如头孢噻肟，头孢菌和头孢他啶等第三代头孢菌素的大规模使用导致了较新的贝拉酰胺酶如ESBLS的演变。ESBLs是质粒介导的酶，其水解oxyiminoβ内酰胺和单氨酰胺（Aztreonam），但对Cephamycins（Cefoxitin，Cefotetan）和Carbapenems（Infipenem）没有影响。是质粒介导的，它们可以容易地从一个生物转移到另一个生物体[2］．由于对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、脲类青霉素类和第三代头孢菌素类药物的频繁耐药性，碳青霉烯类药物是控制此类感染的重要药物。耐碳青霉烯铜绿假单胞菌和答:baumannii是由多种原因造成的，如外膜蛋白和碳烯酶的表达减少[3.］．MBL生产铜绿假单胞菌和答:baumannii已成为全世界越来越多的治疗问题。对MBL阳性分离物的快速检测是控制感染所必需的，并防止他们的传播[4］．本研究的目的是确定ESBL和MBL在菌株之间的流行程度铜绿假单胞菌和答:baumannii从各种临床样本中获得。

2.材料和方法

2．1．研究设计与样本

本实验室前瞻性研究于2014年7月至2016年6月在Bathinda Adesh University Adesh Institute of Medical Sciences and Research (AIMSR)微生物系进行，为期两年，经Adesh University论文研究学位委员会和伦理委员会批准。在将患者纳入本研究之前，需征得患者或其监护人的书面同意。记录患者的年龄、性别、入院日期、免疫状况、抗生素治疗情况、出院日期等临床病史，并记录在患者病历中。根据患者的临床诊断，采集ICU及医院各病房患者的临床样本共2261份。这些包括尿液、脓液、血液、耳拭子、阴道拭子、痰液、气管内分泌物、气管吸出物和各种体液。所有样本均按标准微生物指引收集[5］．

2.2。实验室方法

在严格的无菌条件下，将采集的各种样品接种于血琼脂(BA)和麦康凯琼脂(MA)平板上。平板在有氧条件下37°C孵育24-48小时。临时的识别铜绿假单胞菌和答:baumannii在血琼脂和麦康凯琼脂培养基上革兰氏染色、形态学和菌落特征。进行了一系列生化测试，以确认分离物[6］．

2．3.抗菌药物敏感性试验

通过Kirby Bauer光盘扩散方法在穆勒亨顿琼脂上测定分离株的抗微生物敏感性测试[7］．头孢他啶(30μ.g)、头孢吡肟(30μ.piperacillin-tazobactam(100克)μ.克/ 10μ.g） ，亚胺培南（10 μ.Meropenem (10 g)μ.g)、庆大霉素(10μ.g)、阿米卡星(30μ.Ampicillin-sulbactam (10 g)μ.克/ 10μ.g） ，复方新诺明（25 μ.aztreonam(30克)μ.g)、环丙沙星(5μ.g），Norfloxacin（30 μ.g)(尿分离株)、多粘菌素B(300单位)和粘菌素(10μ.g） .测量获得的区域尺寸，并根据CLSI指南进行解释[8］．铜绿假单胞菌以ATCC 27853作为抗生素敏感性的对照生物。

2.4.ESBL阳性菌株的表型检测

通过椎间盘强化试验测试分离对头孢他啶和/或头孢塔的抵抗力．头孢他啶片(30μ.G)和头孢他啶+克拉维酸(30μ.克/ 10μ.g)置于Mueller Hinton琼脂平板上，间隔20 mm, 37℃孵育过夜。在头孢他啶与头孢他啶+克拉维酸周围大于或等于5mm的区带差异被解释为ESBL阳性分离物[9］．

2.5。MBL阳性分离物的表型检测

通过纸片增强试验对耐亚胺培南和/或美罗培南的菌株进行MBL产生试验μ.g)和亚胺培南+ EDTA (10μ.G / 750. μ.g)置于Mueller Hinton琼脂平板上，间隔20 mm, 37℃孵育过夜。亚胺培南和亚胺培南+ EDTA椎间盘周围大于或等于7mm的区差被解释为MBL阳性分离物[10］．

图中显示了为检查ESBL和MBL产量所进行的圆盘增强试验1和2．

2.6。统计分析

采用百分比和比率方法进行描述性统计分析，用Microsoft Excel制作条形图，表示抗菌药物敏感性、ESBL和MBL产量。

3.结果

在加工的总样品中，192铜绿假单胞菌和116年答:baumannii是孤立的。

铜绿假单胞菌分离物对多粘菌素B和Colistin敏感的敏感性，含有71.4％的敏感性，伊皮尼姆报告了中间敏感性（64.5％）被记录为Plaeracillin-Tazobactam和Meropenem。诺福克星仅针对尿液分离株进行测试，并且敏感性记录为48.4％。向头孢菌素鉴定了更少的敏感性：头孢他啶和头孢噻肟，即39.1％和42.2％。为P.获得的抗体诊断铜绿假单胞菌隔离物如图所示3.．

答:baumannii分离菌株对所检测的大多数抗生素表现出高度耐药性。96.6%的菌株答:baumannii对头孢他啶耐药，94.8%菌株耐药。对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为60.3%和68.1%。而多粘菌素B和粘菌素的敏感性分别为96.5%和97.4%。抗菌谱获得了答:baumannii如图所示4．

抗菌药物敏感性的铜绿假单胞菌和答:baumannii根据不同的采样点，见表1和2,分别。

在192个菌株中铜绿假单胞菌34株(17.7%)分离株产生ESBL, 42株(21.8%)分离株产生MBL，见表3.．116株答:baumannii32株(27.5%)分离株产生ESBL, 52株(44.8%)分离株产生MBL，见表4．

4。讨论

的情况下铜绿假单胞菌,脓液、尿液、高阴道和耳拭子对抗生素的敏感性最高，而从气管内和气管造口管中获得的分泌物/抽吸物的敏感性较低。

同样的,答:baumannii从Et分泌物和气管吸出物中获得的分离物表现出对头孢菌素，氨基糖苷类，氟喹啉，甚至CarbapeNems的易感性非常差。与呼吸位点相比，从其他位点获得的分离物相对敏感。

由于严重的头部损伤和脑血管意外导致抗生素治疗时间延长，大多数ICU患者接受机械通气。ICU患者住院时间延长、抗生素治疗时间延长以及ICU环境中的选择性压力可能也是导致这种变化的相关因素这一特殊的分离菌群产生ESBLs和MBL。

在本研究中，17.7%的分离株铜绿假单胞菌对生产ESBL有积极作用。结果类似于Senthamarai等人的研究。[11)，他们报告了ESBL的生产铜绿假单胞菌22.2%。Goel等[12和Rani等人[13已经报道了ESBL的生产铜绿假单胞菌分别为42.3%和37.2%，略高于本研究。Woodford等人[14和Lim等人[15]报道这些细菌中ESBL的产量很低，分别为3.7%和4.2%。在本研究中，21.8%的分离株铜绿假单胞菌对MBL生产有积极影响。结果与Upadhyay等人相似[16谁报道了MBL生产铜绿假单胞菌为20.8％。Sadhna等人。[10]，Madhu等人[17和Behera等人[18]已经报道了MBL的生产铜绿假单胞菌分别为41.0%、61.5%和69.5%，高于本研究。Aggarwal等人[19据报道，与本研究相比，MBL产量为11.4％。在本研究中，27.5％的分离株答:baumannii对生产ESBL有积极作用。结果与Sinha等人的结果完全相似。20.也报告了ESBL的生产答:baumannii27.5%。Vahaboglu等人[21]及乔杜里和帕亚西[22已经报道了ESBL的生产答:baumannii与本研究相比，分别为46.0％和83.6％。巴厘岛。[23]据报道，ESBL的产量为5.2%，与本研究相比要低得多。在我们的研究中，44.8%的菌株答:baumannii对MBL生产有积极影响。结果类似于Irfan等人。[24也报告了MBL的生产答:baumannii为49.0％。Hodiwala等。[4]和Kabbaj等人。[25]报道了非常高的MBL生产答:baumannii分别为96.6%和74%。Gupta等人[26]报告的MBL产量为7.5%，与本研究相比要少得多。这些差异可能是由于不同的抗生素使用和明智的选择抗生素的医院设置。

5.结论

本研究表明，ESBL和MBL的产生在铜绿假单胞菌和答:baumannii在全球范围内呈上升趋势，因此使这些感染难以治疗。早期检测ESBL和MBL的产生对于降低死亡率和多药耐药菌的传播非常重要。圆盘增强试验简单、易于实施、经济，可与常规抗生素敏感性试验一起进行此外，重要的是实施抗生素限制政策，以避免在每家医院过度和不明智地使用超广谱头孢菌素和碳青霉烯类抗生素。

数据可用性

用于支持这项研究结果的数据包括在文章中。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

工具书类

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