文摘
禽肉是感染最重要的来源之一鼠疫种虫害的人类。本研究的目的是评估的发生率鼠疫enterocolitica在鸡肉利用选择性培养基上培养法和PCR鉴定确认。此外,生化方法用于生物型。共收集100份鸡大腿肉样本随机从零售店在马什哈德,伊朗。样本丰富Peptone-Sorbitol-Bile (PSB)肉汤,然后培养Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin (CIN)琼脂含有抗生素的补充。从疑似殖民地DNA提取鼠疫种虫害,然后使用特定的引物的PCR测试16 s rRNA基因的鼠疫enterocolitica是执行。在这项研究中,30%的鸡肉是污染鼠疫种虫害的培养法和25%的鸡肉是污染鼠疫enterocolitica。生物型孤立的殖民地显示所有的隔离属于1生物型。文化和检测鼠疫种虫害从食物样本通常需要4天。由于精度高和PCR检测的速度,这是一个很好的替代方法,微生物技术。总之,禽肉的可以作为来源y enterocolitica并可能被视为公共健康危害。
1。介绍
鼠疫enterocolitica肠杆菌科家族的一员是一种革兰氏阴性non-spore-forming杆。这是psychrotrophic细菌,能够生存和繁殖在冰箱温度(1]。y enterocolitica一般的肠道病原体引起急性肠炎与发热、腹泻带血、炎症的淋巴结常常导致不必要的剖腹手术由于人类[假阑尾炎2]。
在发展中国家像伊拉克3)、伊朗(4),和尼日利亚5),胃肠道疾病的患病率是强调包括yersiniosis突出了主要的食品安全问题在低收入和中等收入国家。
儿童和婴儿是最敏感的群体,在感染的风险6]。在伊朗,关于年度感染的信息y enterocolitica。在东南亚国家,很少有报道上可用的发病率yersiniosis [7,8]。受污染的食物是人类[yersiniosis的主要来源之一9]。
y enterocolitica广泛分布在自然和动物;食品和环境中通常含有这种生物(10]。主要储层y enterocolitica是猪11]。此外,y enterocolitica已经从家禽(经常孤立12)和即食食品(13]。不过,所有的菌株y Enterocolitica不是对人类致病性但等菌株生物型1 b / O: 8、2 / O: 5日,27日,2 / O: 9日3 / O: 3和4 / O: 3是人类病原体13]。
有一个低数量的研究y Enterocolitica在伊朗和检查细菌经常没有计划。因为数量有限的研究y enterocolitica特别是在伊朗东北部,有机体的实际发病率仍然未知。因此,本研究的目的是确定污染率(i)生鸡肉y enterocolitica和(2)确定共同的生物型y enterocolitica目前在零售鸡肉。
2。材料和方法
2.1。样品收集
100生鸡肉大腿样品代表的鸡肉是通过分层随机抽样的方法从不同的超市和零售店在伊朗东北部,从2017年1月到2017年7月。样本收集在无菌袋和立即运往实验室制冷温度(3°C)。
2.2。分离和鉴定y enterocolitica
每个样本的10 g整除使用无菌剪刀和组织钳,把切成无菌兜包袋包含90毫升Peptone-Sorbitol-Bile(公安局)肉汤(Sigma-Aldrich、德国)和单一化的袋搅拌2分钟。样品稀释在公安局在25°C瓶孵化器孵化。此后,0.5毫升的浓缩样品混合4.5毫升的氢氧化钾(KOH) 0.25%,飞跑到CIN琼脂(默克公司,达姆施塔特,德国)板补充Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin抗生素(默克公司,达姆施塔特,德国)14]。后24 - 48 h(孵化30°C,小(1 - 2毫米直径)殖民地用深红色中心和锋利的边界清楚无色区域与整个边缘包围在CIN琼脂板被选中。殖民地与负面革兰氏染色法被选为生化测试包括过氧化氢酶、氧化酶和脲酶。鼠疫种虫害oxidase-negative和过氧化氢酶和urease-positive。
2.3。DNA提取、PCR检测
DNA提取纯化怀疑殖民地使用传统的煮沸法(15]。放大的16 s rRNA进行最后的20倍μl,包含1μl (10 picomol)的远期(5′-AATACCGCATAACGTCTTCG-3′)和反向(5′-CTTCTTCTGCGAGTAACGTC-3′)底漆(Macrogen,韩国),2μl DNA模板,10μl主混合(Ampliqon、丹麦),和6μl nuclease-free去离子的蒸馏水。热循环程序如下:最初的变性是在94°C 5分钟和最后在72°C扩展了7分钟。变性在94°C 45秒,退火在62°C 45秒,在72°C和扩展了45秒36个周期。
鼠疫enterocolitica(写明ATCC 9610)是用作消极的控制,积极控制和nuclease-free使用去离子水。PCR产品1.5%琼脂糖凝胶上分离由绿色观众和prestained photo-documented紫外光照下。
2.4。生物型
确定隔离的生物型、七叶灵吲哚,脂肪酶的活动进行调查。水杨苷发酵试验,海藻糖、山梨糖、鸟氨酸脱羧酶、肌醇,木糖进行(16]。
3所示。结果
根据传统培养法,100(30%)的生鸡肉样品被污染鼠疫spp。16 s rRNA基因的扩增25隔离标识鼠疫enterocolitica。换句话说,鸡肉污染的样本的25%鼠疫enterocolitica在伊朗东北部。图1显示16 s rRNA的扩增基因样本。在生物型测试中,所有的25阳性分离株属于1生物型。
4所示。讨论
检测的主要问题之一y Enterocolitica在食品的存在大量的背景细菌。使用浓缩步骤有助于检测这种细菌。不同浓缩过程用于其他研究,如冷浓缩和ITC媒介的使用。Damme et al。(2013)使用的公安局25°C获得积极的结果比寒冷的浓缩。在目前的研究中,样本丰富在公安局25°C。背景抑制微生物帮助项目之一是使用碱性治疗。y enterocolitica可以容忍弱碱性治疗,但背景植物如假单胞菌和普罗透斯将抑制(17]。在其他的研究在伊朗、印度、埃及和中国,0%到30%的鸡肉是污染y enterocolitica(16,18- - - - - -21]。
在阿根廷的一项研究报告更高的患病率 。enterocolitica-positive鸡蛋壳样品(38.65%)相比,如果我们的结果(22]。在法国,5.2%的家禽被污染y Enterocolitica和所有的隔离检测生物型1 (23]。
在西班牙进行的一项研究中,65%的死鸡都染有鼠疫的spp。和52 68隔离被确定为y enterocolitica。生物型的y enterocolitica显示,86.5%的隔离属于生物型1和3个(5.8%)生物型3 (24]。
Momtaz et al。(2013)发现的患病率较低 。enterocolitica-positive生鸡肉样品(18.33%)相比,如果我们的研究。隔离属于生物型2,3,4,5,未发现1隔离。这个结果是不同意我们的结果25]。
致病性的测定y enterocolitica压力是基于一些特定的毒力基因包括的存在苦恼,virF雅达,发票、myfA ystA, ystB,完成,hreP, fepA, fepD,菲斯,ymoA,和坐(16]。
我们的研究结果与其他研究者同意1生物型是最普遍的,甚至是唯一的孤立的生物型,在家禽和肉类16,23,26- - - - - -28]。必须指出一些研究报告,1株生物型可以偶尔充当机会致病菌,引起extraintestinal感染(29日]。事实上,生物型1两个胃肠爆发引起的。确定1株的致病性,研究者比较基因组序列的两个医院和环境压力有两个致命的菌株包括生物型1 b和4。有趣的是,生物型1有共同的基因致病生物型1 b和4。此外,1株,尽管缺乏一些古典毒性标记等苦恼附着力,ystA肠毒素,virulence-associated蛋白质C,背负着一些基因编码已知和怀疑virulence-associated蛋白质之类的ystB肠毒素,再次侵袭素,黏液状的鼠疫因素MyfA, enterochelin利用率fepBDGC/fepA/菲斯基因簇(30.]。在一项研究中,128名临床菌株y enterocolitica在瑞士的特点。这些菌株被确定为生物型2的58.6%,3或4和港口吗苦恼基因。1株也是之一苦恼艾滋病患者(31日]。
它必须考虑交叉污染的烹调和生肉可能发生从家庭冰箱的内部表面32)或通过存储容器。一些风险因素对人类yersiniosis不当的食品处理,处理和存储未煮熟的肉类或交叉污染等表面受污染的肉类或其他食品(17]。
5。结论
我们的研究表明,食用鸡肉提出了一种低致病性的风险y enterocolitica为人类。尽管所有菌株的生物型1,的发生率y enterocolitica是相对较高的,这种风险不应被忽略。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
本研究在经济上支持副总理在研究事务兽医马什哈德菲尔多斯大学学院。作者表达自己特别感谢太太Khajehnasiri技术援助。