Oxacillinases和Oxacillinases的敏感性模式和分布bla_每多药耐药基因鲍曼不动杆菌在伊朗的一家教学医院

摘要

鲍曼不动杆菌是医疗机构中重要的院内病原体。β-内酰胺酶介导的耐药是碳青霉烯耐药最常见的机制答:baumannii．本研究的目的是确定抗生素耐药性模式，检测OXAA类编码基因，并检测ISA的存在英航1.总计124答:baumannii从伊朗卡山一家教学医院的住院病人中收集的分离病毒。采用纸片扩散法测定分离菌株对不同抗生素的敏感性。采用PCR检测，，，，, ISA英航1基因。所有菌株均对头孢他啶、头孢曲松和头孢噻肟耐药。所有菌株均对多粘菌素B和粘菌素敏感。96%的分离株具有广谱耐药(XDR)、5.6%的广谱β -内酰胺酶(ESBL)和54.8%的金属- β -内酰胺酶(MBL)。所有菌株均为阳性和ISA英航1.，,分别为79.8%、25%和3.2%。的频率基因是52.4%。耐药答:baumannii在我们的环境中，分离株正在增加，这极大地限制了治疗选择。高比例存在D类碳青霉烯酶编码基因，主要是碳青霉烯酶是我们医院令人担忧和担忧的新威胁。

1.介绍

耐药答:baumannii是医院获得性感染的主要原因，并被认为会导致广泛的危及生命的疾病。这种微生物对几乎所有常见的抗生素都有耐药性，这限制了治疗选择[1］．在用药期间出现耐药性答:baumannii感染可能发生并导致发病率、死亡率和治疗费用的增加[2］．答:baumannii能够积累多种抗生素耐药基因，导致多药耐药或广泛耐药菌株的发展。获得性抗性特征是由突变或获得外源性抗性决定因素引起的，可以由不同的机制介导，包括β -内酰胺酶、细胞壁通道的改变和外排泵。最令人担忧的临床耐药机制是获得丝氨酸和金属- β -内酰胺酶，它们对碳青霉烯类具有耐药性[3.］．因此，进行这项研究是为了确定产生多药耐药的-内酰胺酶的患病率答:baumannii以及他们之间流行基因的分子特征，目的是改善治疗选择，降低伊朗卡山Beheshti医院的发病率和死亡率。

2.材料和方法

2．1．样品收集

从2013年6月至2014年11月，对从伊朗卡山的一家三级护理医院收集的各种临床样本进行了描述性研究。总计124答:baumannii从住院患者的气管插管63例(50.8%)，血液28例(22.6%)，痰液10例(8.1%)，胸膜液7例(5.6%)，尿液7例(5.6%)，脑脊液4例(3.2%)，导尿管3例(2.4%)，伤口2例(1.6%)。卡山医科大学伦理委员会批准了该研究方案。

细菌的分离．答:baumannii采用MICROGEN GNA+B (MICROGEN Bioproducts Co.， UK)鉴定。

2．2.抗生素耐药模式的测定答:baumannii

采用Mueller-Hinton琼agar (Merck, Germany)上的Kirby-Bauer纸片扩散断点法对分离菌株进行药敏试验;37℃孵育24 h。根据临床检验标准学会现行的建议，细菌被分为对抗生素敏感、中等或耐药[4］．哌拉西林(100μg), ampicillin-sulbactam (10/10μg), piperacillin-tazobactam (100/10μg)、头孢噻肟(30μg)、头孢他啶(30μg),头孢曲松(30μg)、头孢吡肟(30μimipenem (10 g)μmeropenem (10 g)μg)、阿米卡星(30μg)、庆大霉素(10μg)、环丙沙星(5μg)、左氧氟沙星(5μ四环素(30克)μG)、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(1.25/23.75 mg)、粘菌素(10μg)，多粘菌素B (300 IU)片购自英国Merseyside MAST。大肠杆菌每次药敏试验均以ATCC 25922为质控菌株。

MDR、XDR和PDR定义．多药耐药(MDR)适用于以下≥3类抗生素(包括喹诺酮类、广谱头孢菌素类、β -内酰胺酶抑制剂/ β -内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑和碳青霉烯类)中至少一种抗菌剂不敏感的菌株。广泛耐药(XDR)被定义为仅对一或两种类型敏感的细菌分离株。泛耐药(PDR)被定义为对所有抗菌药物类别中的所有药物不敏感的细菌分离株(即没有对该微生物敏感的药物试验)。因此，以XDR为特征的细菌分离物也将被归类为MDR。类似地，一个细菌分离物必须是XDR才能被进一步定义为PDR [5］．

2．3.ESBLs检测的表型试验

采用头孢噻肟双纸片扩散法检测ESBL (30μg)和头孢噻肟/克拉维酸(ctx30μg + CA 10μ每盘克)(MAST，默西塞德，英国)。根据临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的指南，在存在克拉维酸的情况下，区带直径增加≥5mm表明存在扩展谱β-内酰胺酶(ESBLs) [6］．

2．4．MBL的表型检测

筛选耐亚胺培南分离物产生金属-内酰胺酶(MBL)。采用双盘协同试验(DDST)鉴定亚胺培南(10μg)，单独或与EDTA (750μg /磁盘)(ROSCO、丹麦)。与单独使用亚胺培南片相比，亚胺培南加EDTA片周围区域直径增加≥7 mm被认为是MBL生产的积极因素[6］．

2．5．β -内酰胺酶基因的PCR扩增

通过一系列PCR反应检测不同的Ambler类bla基因。设计引物扩增碳青霉烯酶编码基因:D类:，，,；甲级:［7，9］．元素(ISA英航1)采用上述方法进行PCR扩增[8］．所有分离株均进行多重PCR检测，，,基因。用于分析的引物如表所示1．

PCR产物在1.0%琼脂糖凝胶上运行，用溴化乙酯染色，并在紫外线照明下拍照(Ingenius, Syngene)。将PCR产物的大小与100 bp DNA ladder (Bioneer，韩国)进行比较。答:baumannii以ATCC 19606为参比菌株。

测序方法．测序采用Sanger 's方法(Applied Biosystems 3730/3730xl DNA analyzer Sequencing;Bioneer)。序列分析使用ChromasPro version 1.7.5 Technelysium (http://www.technelysium.com.au/)．GenBank登录号为，，,分别为KP462887、KP462888、KP462889、KP462892。

2．6．统计分析

采用SPSS软件19版(SPSS Inc.， Chicago, IL)进行统计数据分析。本研究采用卡方检验比较抗生素耐药率。被认为具有统计学意义。

3.结果

研究患者的平均年龄为年，从23年到95年不等。大多数患者(61.3%)为男性，76例vs . 48例女性。医院不同病区分离株数及检出率分别为:ICU 69株(55.6%);内科26名(21%);急诊室23例(18.5%);儿科6例(4.8%)。

抗菌素耐药性模式．所有菌株均对头孢他啶、头孢曲松和头孢噻肟耐药，对粘菌素和多粘菌素b敏感答:baumannii隔离如图所示1．所有的答:baumannii其中81株(96%)为广泛耐药株。幸运的是，所有的分离株都不具有泛耐药(PDR)。ESBL阳性7株(5.6%)，metallo-阳性68株(54.8%)β-lactamases (MBLs)。在我们的研究中，所有的答:baumannii分离株呈阳性反应和ISA英航1.对分离株OXA编码基因的发病率分析显示，79.8%的分离株OXA编码基因呈阳性25%,， 3.2%．不同的共存对分离株的基因进行了观察，其相对数量如下:75年(60.5%);7例(5.6%);3例(2.4%);23例(18.5%)1株(0.8%)。oxacillinases基因的扩增如图所示2．Ambler A类的β65株(52.4%)分离到-内酰胺酶编码基因。表格2提出遗传和表型分析的分离。数字3.显示了不同OXA基因的多重PCR扩增产物大小的差异。

4.讨论

这项研究的结果表明，124答:baumannii分离株对大多数常见抗生素都有极耐药，令人惊讶的是，对头孢他啶、头孢曲松和头孢噻肟100%耐药。100%的分离株为MDR, 96%为XDR, 54.8%为MBL产生株。比较ESBL产生的频率答:baumannii(5.6%)在本研究中不显著。根据以前的报告，伊朗已报告对碳青霉烯类的高耐药率，范围从25%至96.1% [10- - - - - -15］．碳青霉烯类药物已成为治疗由大肠杆菌引起的医院感染的首选药物答:baumannii；然而，耐碳青霉烯菌株答:baumannii已在世界各地报道[16］．我院广泛处方碳青霉烯类药物治疗答:baumannii感染已导致出现碳青霉烯耐药菌株。第三代头孢菌素和氨曲南的过度使用加剧了碳青霉烯耐药性问题。在对广谱头孢菌素、-内酰胺/ -内酰胺酶抑制剂组合或碳青霉烯类抗生素耐药率高的医院，选择适当的抗生素至关重要。生产carbapenem-hydrolyzingβ-内酰胺酶是碳青霉烯类耐药的主要机制[17］．多粘菌素B和粘菌素是最常用的药物不动杆菌对一线药物有耐药性的分离株。结果表明，100%的分离菌株对多粘菌素敏感。我们发现百分之百答:baumannii阿尔及利亚、沙特阿拉伯、科威特和埃及对粘菌素均敏感，分别为70.9%、92.5%和95% [18］．含oxa型碳青霉烯酶(，，,在世界范围内越来越多地被描述[19］．在本研究中，79.8%的答:baumannii分离株呈阳性反应80%以上对亚胺培南和美罗培南均有抗性。还有对碳青霉烯类药敏试验的研究，其中有一株菌株对美罗培南敏感，对亚胺培南耐药，反之亦然;一些研究最近报道在耐碳青霉烯酶中，最常见的类型是碳青霉烯酶吗答:baumannii［20.］．患病率检出率从0到98.4%;和ISA英航所有分离株中均观察到1株。患病率检出率为0 ~ 85.43%，而在哥伦比亚、希腊、韩国、波兰、台湾和土耳其的发病率从0%上升至96.9% [13，18］．的比较频率基因在答:baumannii如图所示2［7，12，13，21- - - - - -23］．中检测出52.4%的吗答:baumannii隔离。它也在不动杆菌孤立于阿根廷、比利时、埃及、法国、印度、伊朗、沙特阿拉伯和韩国[18，24］．48株(48.5%)同时呈阳性和基因。经验性抗生素治疗不动杆菌分离菌株应根据当地的易感模式进行选择，这些易感模式包括广谱头孢菌素、-内酰胺/ -内酰胺酶抑制剂组合或碳青霉烯。在出现高抗菌耐药率的感染病例中，建议使用上述药物与抗假单胞嘧啶类氟喹诺酮类、氨基糖苷类或粘菌素联合使用，以阻止治疗失败的机会。考虑到一线抗菌药物的耐药率，治疗选择必须限于多粘菌素、二甲胺四环素和替加环素。

5.结论

本研究结果表明耐多药高流行率的发生答:baumannii并预示着惊人的蔓延碳青霉烯酶。总的来说，这些发现表明，筛查可以为不同人群和国家之间的MDR基因收集比较提供有用的信息，并可能支持更多的感染控制策略和化疗治疗方案。

信息披露

本文在硕士学位论文的基础上，获得了卡山大学医学科学研究基金的资助(批准号:20081010901)。92149)。资助者不参与研究设计、数据收集和分析、决定发表或论文准备。

利益冲突

作者声明不存在利益冲突。

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