普遍存在幽门螺杆菌霍普雀II基因型从伊朗患者患有胃生成症患者分离的基因型

摘要

幽门螺杆菌在慢性胃炎、消化性溃疡、非贲门性胃癌的发病机制中起重要作用。几种公认的致病因素H. Pylori.已被确定在内哈瓦那巴巴， 和工商东亚．Hopq是涉及胃粘膜的细菌粘附的外膜蛋白之一，并已建议在毒力中起作用H. Pylori.．由于普遍性的地理差异H. Pylori.毒力因子报道，本研究的主要目的是调查不同毒力因子之间的相关性H. Pylori.毒力跳跃等位基因（类型I和II）和胃生成障碍患者。存在H. Pylori.和跳跃通过特异性PCR测定鉴定了胃活组织检查标本的等位基因。H. Pylori.II型跳跃与胃癌患者显著相关(优势比:3.47,95% CI: 1.56-5.89)。关于流行率的信息H. Pylori Hopq.II型可用于确定实际殖民的高风险疾病类型H. Pylori Hopq.II型阳性菌株。存在H. Pylori Hopq.应在不同地理区域中调查II型，因为验证结果可以提供归因于某些严重消化系统疾病的发病机制的明确生物标志物。

1.介绍

幽门螺杆菌是一种成功的革兰氏阴性胃病原体，在世界人口中占50%以上[1]．感染H. Pylori.通常在生命的前几年中发生，如果未经治疗，仍坚持生命[2]．H. Pylori.感染是胃癌和十二指肠溃疡的主要原因，以及胃癌和粘膜相关组织淋巴瘤的潜在危险因素[3.]．已经提出，只有在一定数量的个人中H. Pylori.感染将进展到严重的胃生成疾病[4.]．由于经常发生的点突变，H. Pylori.感染是异质的[5.]．H. Pylori.被认为具有各种毒力因子，这些因素有助于消化疾病后遗症[6.-8.]但到目前为止，他们仍然没有定义[9.那10.]．迄今为止，可用的报告表明胃生成疾病之间的轻微关联H. Pylori.毒力因素(11]．在过去十年中，虽然不同的决定因素被报告为影响不同疾病进展的毒力因子[12-14]，研究往往是矛盾的[6.那15-18]．

测序技术和全基因组分析的快速发展使研究人员能够寻找新的毒力因子。2005年，Cao等人报道H. Pylori Hopq.基因型与消化性溃疡病的风险增加有关[19]．Hopq是涉及细菌粘附到胃粘膜的外膜蛋白[20.]．Loh等人证明了这一点H. Pylori.，在表达Hopq的菌株中略微促进对胃上皮细胞的粘附[21]但他们没有提供有关疾病特异性毒力因子的进一步数据跳跃．高发病率H. Pylori.在伊朗北部的感染和越来越多的消化疾病导致目前的研究是否存在跳跃（I型或II）可以影响疾病结果。本研究的主要目的是调查两个主要之间可能的关联H. Pylori Hopq.通过使用PCR学习从各种胃发作疾病中分离的临床样本来研究等位基因。

2。材料和方法

2.1。耐心

本研究中包含的是由于不同的消化订单，正在进行上胃内窥镜检查的患者，从中H. Pylori.获得临床分离株。该研究得到了伊朗德黑兰州塔比亚特思路大学的伦理委员会批准。书面知情同意书是从进入研究之前的所有患者获得的。参与者分为四个患者组：十二指肠溃疡，胃溃疡，胃炎和胃癌。纳入记录患者的标准H. Pylori.感染（i）阳性H. Pylori.文化，（ii）在过去5个月内没有报告抗生素或奥美拉唑消费，（iii）至少18岁。内镜观察和组织学结果用于确定每个患者的诊断H. Pylori.孤立的菌株[22]．最后的活检标本在-70℃下保持冷冻，直至进一步分析。

2.2。H. Pylori.菌株

将两种Antral活组织检查接种在无菌巯基乙醇酸酯肉汤（Merck，德国）中，并根据标准方法将寒冷温度（5°C）送到诊断实验室，以进行常规细菌培养。培养基是补充有7％绵羊血液，两性霉素B（5mg / ml），三甲双胍（5mg / L），万古霉素（10mg / ml）和多子素-B（2500单位/ ml）的植物琼脂，并孵育在10％CO的微苯化条件下₂, 85% n₂, 5%的人啊₂在37℃下10天，95％湿度[23]．有机体被确定为H. Pylori.通过革兰氏染色、菌落形态和阳性氧化酶、过氧化氢酶和脲酶反应。所有H. Pylori.单个殖民菌株储存在-80°C中，在-80°C中，在Brucella Brooth（Merck，德国），其补充有25％（FCS）（Gibco，Ca，USA）和20％甘油。H. Pylori.ATCC 43504用作本研究中的参考菌株。

2.3。PCR分析

如果单个菌落可用，或由于阳性培养和释放释放试验，则仅提取基因组DNA。根据制造商的说明，使用基因组DNA Qiaamp DNA Mini Kit（Qiagen GmbH，Hilden，Hilden）进行DNA提取。存在H. Pylori.通过PCR靶向磷光葡糖胺蛋白酶基因的PCR确认DNA，glmm.[24]．在该实验中，进行单独的PCR跳跃输入我和跳跃分别类型II使用187和160 BP引物集（表1) [25]．6. μ.每个PCR产物的L载入2%琼脂糖凝胶(Sina-Gene，德黑兰，伊朗)，用溴化乙锭染色。H. Pylori.包含菌株26695和J99作为阳性对照菌株。

2．4．统计分析

IBM SPSS统计信息版本21.0用于统计分析。一种的价值被认为具有统计学意义。

结果

从2007 - 2009年期间的300例Antrum活组织检查标本中的基因组DNA成功纯化。临床诊断的分布如下：75（25％）胃炎，48（16％），胃癌，87（29％），胃溃疡，90（30％），具有十二指肠溃疡。平均年龄为39岁（范围为21-73岁），女性的百分比为41％。

所有四组患者的年龄和性别或临床表现之间均未发现显著相关性(）.通过聚合链反应,跳跃I型存在于300（33％）菌株中存在跳跃300株菌株中156株(52%)检出II型。此外,44 (15%)H. Pylori.发现分离物是消极的Hopqi.和Hopqii.，所以他们被排除在分析之外。H. Pylori.类型II Hopq.(优势比:3.47,95% CI: 1.56-5.89)(表2）.相比之下，疾病类型和跳跃I型。

4。讨论

临床发展H. Pylori.感染既受宿主的影响，也受几种毒力因素的相互作用的影响。H. Pylori.感染是浅表性胃炎的主要致病剂，在消化性溃疡病的病因中表明了不可避免的作用[26]．关于生物学概念，实现成功和长期定植需要复杂的细菌粘附机制。因此，所有可能的细菌产物都被重点是调查细菌定植的可能贡献。H. Pylori Hopq.是细菌表面上的主要外膜蛋白之一，是观察到最大的外膜蛋白质H. Pylori.基因组。确定之间的链接H. Pylori Hopq.某些消化系统疾病可以提供回答问题的开始点H. Pylori.粘附胃细胞。本研究旨在确定频率H. Pylori Hopq.从活检标本中分离的基因型。我们的研究结果显示H. Pylori Hopq.伊朗胃癌患者II型基因型。据我们所知，这是第一份关于普遍存在的报告H. Pylori Hopq.症状性伊朗个人感染的等位基因。已经提出了基于特异性基因分型的分析H. Pylori.分离物可用于预测感染后疾病[3.那27]．最近的研究表明跳跃I型等位基因与西方国家消化性溃疡疾病（PUD）的风险增加有关[28] 然后幽门螺杆菌hopQ II经常在调查人群中发现[28]．此外，外膜蛋白H. Pylori.已经表现出强烈的潜力，以增加相关胃病的严重程度。ohno等人。[28并没有确定两者之间的任何关系跳跃I型和II型等位基因及其他毒力因素如嘉和哈瓦就临床结果而言。但是，毒力因子之间的确切关联H. Pylori.和跳跃等位基因需要进一步调查，特别是在遗传上不同的群体。在Ohno等人的调查中，[28普遍存在跳跃在胃炎和胃癌患者中，I的报告比例分别为58%和68%。然而，我们的结果表明，频率跳跃我在十二指肠溃疡和胃炎患者中相似（36％和29％，RES）。我们的研究结果表明跳跃我是较不普遍的基因型H. Pylori.孤立从伊朗人群中恢复的孤立（表1）.与来自美国的一项研究相比[20.[报告了运输之间的重大关联H. Pylori Hopq.在消化性溃疡患者中，ohno等人的I型。[28]没有识别两者之间的关系跳跃感染等位基因和临床结果（）.据报道了这一点跳跃II型菌株在远东国家的频率低（不到1％）。西方国家的数据表明普遍存在跳跃II型菌株（36％）比来自东亚的国家更常见（1％）。总之，这项研究表明跳跃II型常出现在H. Pylori.从伊朗胃癌患者分离的菌株。这是关于临床相关性的第一个报告H. Pylori Hopq.II，应进行进一步研究的基础。如果进一步研究确认我们的调查结果，这可能导致临床医生的诊断策略，以对这些国家的胃癌对抗目前的教条。

利益冲突

作者声明本论文的发表不存在利益冲突。

承认

该项目是由Tarbiat Madares University的财务支持。

参考

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