抗菌药物敏感性的大肠杆菌孤立从新鲜营销的尼罗罗非鱼（oreochromis niloticus.）

摘要

海鲜被粪便来源的细菌污染，尤指大肠杆菌，是一个广泛记录的卫生问题。本研究的目的是孤立大肠杆菌从养殖的尼罗罗非鱼的鳃、肌肉和体表(oreochromis niloticus.）在Fortaleza（Ceará，巴西）的超市新营销，以确定它们对不同家庭的抗生素的敏感性（Amikacin，庆大霉素，亚胺尼，头孢噻吩，头孢噻肟，环丙沙星，阿兹特兰喃，氨苄青霉素，萘啶酸，四环素和Sulfametoxazol-trimetopim），并通过质粒固化来确定抗性的性质。分离了四十四株菌株（体表= 25，鳃= 15，肌肉= 4），所有这些都易于Amikacin，Aztreonam，Cefotaxime，Ciphofloxacin，庆大霉素和亚胺尼。鳃和体表面样品产生11个分离株对氨苄青霉素，四环素和Sulfametoxol-trimetoplim，其中血浆性质中的4个分离物。对于从体表中分离的菌株比来自鳃分离的菌株的多种抗生素抗性指数较高。整体高抗生素易感性大肠杆菌从新鲜上市的罗非鱼中分离出的菌株令人满意，尽管偶尔发现质粒耐药性，表明需要对水产养殖、处理和销售条件进行密切的微生物监测。

1.介绍

细菌大肠杆菌被广泛用于指示食物和环境的细菌状况，因为它几乎完全来自粪便[1］．存在大肠杆菌在新鲜营销的海鲜中，表明最近的污染，通常归因于受污染的冰上的感染处理程序或储存[2］．

集约化的生产和随之而来的放养密度的增加使养鱼业更容易受到疾病的影响[3.，4］．长期看来，不加选择地使用抗生素治疗感染和促进生长是无效的，而且会对细菌种群施加选择性压力，有利于产生对公众健康有潜在危害的耐药菌株[5- - - - - -7］．

事实上，许多研究人员已经从环境样本中分离出了对不同种类抗生素具有耐药性的菌株[8- - - - - -10］．对抗生素有耐药性的食源性菌株对消费者的健康构成威胁，并有利于通过食物链将表型转移给人类[11- - - - - -13］．没有引起疾病的报道大肠杆菌在养殖鱼类中，但由于养殖环境中存在抗生素，可能会选择耐药菌株，导致对潜在致病菌具有耐药性的移动遗传元素传播[14- - - - - -17］．

由于罗非鱼养殖在巴西东北部的重要性，本研究的目的是(a)调查罗非鱼的存在大肠杆菌在巴西福塔莱萨超市购买的新鲜尼罗河罗非鱼中，(b)建立抗生素敏感性档案大肠杆菌(c)确定从尼罗罗非鱼样品中分离的菌株的潜在耐药性是染色体还是质粒，(d)确定从鳃、肌肉和体表分离的菌株的多重耐药性指数。

2.材料和方法

2.1。样品采集

尼罗罗非鱼36个样本(oreochromis niloticus.)从福塔莱萨(Ceará，巴西)的12家超市收集。标本被单独包裹在塑料薄膜中，并在冰冷的等温箱中运输到海洋科学研究所(Ceará联邦大学)的海鲜和环境微生物实验室进行即时细菌分析。

2．2.隔离大肠杆菌

的大肠杆菌调查是按照美国公共卫生协会公布的《食物微生物检验方法大纲》第四版的指引进行的[18］．分别对鳃、肌肉和体表进行推定试验。对身体表面取样，测量面积用无菌棉签在Difco脑心灌注(BHI)汤中浸泡，然后浸泡在9 mL 0.85% NaCl溶液(Vetec)中，连续稀释至10⁻⁴．取鱼鳃，取25 g匀浆于225 mL 0.85% NaCl溶液中匀浆，磁搅拌30 min，连续稀释至10⁻⁶．将25 g匀浆磨碎，在225 mL 0.85% NaCl溶液中均质，连续稀释至10⁻³．从每一种盐水稀释液中提取1 mL，并在含有10 mL硫酸十二烷基tryptose (LST, Difco)的试管中进行3次重复的种子接种。将标本置于35℃的细菌培养箱中培养48小时。从阳性LST试管中提取的等量物接种在含有EC肉汤的4 mL试管中，并在45°C的水浴中培养48小时。大肠杆菌采用伊红-亚甲基蓝琼脂平板(Difco)分离，其中3-5个疑似大肠杆菌被选中和提交给IMVIC测试。殖民地被认为是大肠杆菌当吲哚和甲基红试验阳性，Voges-Proskauer和柠檬酸试验阴性，革兰氏染色试验短棒状革兰氏阴性时[16］．

2.3。抗微生物易感性

抗磁体诊断用磁盘扩散方法进行[19使用Mueller-Hinton琼脂(Difco)。标准菌株大肠杆菌阳性对照为ATCC 25922 [18］．首先，将样品置于盐水溶液中，调整至0.5麦克法兰浊度标准，相当于CFU·毫升⁻¹(CLSI 2010)。磁化率大肠杆菌对菌株进行了与几个抗生素家族相关的检测，包括氨基糖苷家族:阿米卡星(AMI;30μg)和庆大霉素(GEN;10μg);Carbapenem家族：Imipenem（Imp; 30 μg);头孢菌素家族:头孢菌素(CET;30μg)和头孢噻肟(CTX;30μg);氟喹诺酮类:环丙沙星(CIP;5μg);monobactam家族:aztreonam (ATM;30μg);青霉素家族:氨苄青霉素(AMP;30μg);喹诺酮类:萘啶二酸(NAL;30μg);磺胺类:磺胺甲氧苄氨嘧啶(SUT;25μg);和四环素家族：四环素（Tc; 30 μg).使用无菌镊子，将市售抗生素片(Laborclin)单独置于Mueller-Hinton琼脂表面。在35°C孵育24小时后，根据CLSI推荐的抑制晕的测量，菌株被分为对每种抗生素“敏感”、“中间”或“耐药”[20.］．

2．4．3月指数

采用多重抗生素耐药指数(MAR)测定大肠杆菌从每种类型的组织取样(鳃、肌肉和体表)，使用这个公式/（ ）， 在哪里为菌株的总抗性评分，是测试的抗生素家族的总数，是从每种类型的组织取样的菌株数目[21］．

2．5．质粒固化

耐药大肠杆菌将菌株用吖啶橙染料在100℃下进行质粒固化μG·ML.⁻¹(σ)。在暴露于突变原之后，这些菌株被最初对它们产生耐药性的抗生素重新挑战[22］．

3.结果与讨论

44个分离株被确认为大肠杆菌，其中25（56.82％）从鳃，15（34.09％）中分离出来的体表，4（9.09％）的肌肉。十一大肠杆菌从鱼鳃和体表分离的菌株对AMP、SUT和TC均有抗性，特别是对鱼鳃的持久抗性；表面)．另一方面，从肌肉标本中分离出的菌株对所检测的所有抗生素均敏感(见表)1)．从鱼鳃、肌肉和体表分离的所有菌株均对AMI、ATM、CET、CTX、CIP、GEN和IMP敏感。

根据一些作者，由于它们与水直接接触，鳃具有更多样化的微生物，定性和定量，特别是在尼罗河罗非鱼等浮游生物饲养者中23- - - - - -26］．Mandal等人。[27]还发现大肠杆菌在尼罗巴皮亚肌肉样品中，但许多作者认为肌肉是相对无害的组织[28- - - - - -30.］．然而，肌肉可能在收获过程中受到污染，这是一个压力很大的过程，经常导致身体表面受伤，和/或在被污染的冰上储存[31，32］．Molinari等人。[33添加,大肠杆菌通常在罗非鱼的肠道中发现;因此，对这些作者来说，它在肌肉中的存在是不良的处理实践的迹象。

在本研究中观察到四种抗性曲线：对TC的抵抗力（)、抗AMP ()、抗SUT+TC ()，抗AMP+SUT+TC ()(表2)．SUT+TC和AMP+SUT+TC涉及不止一个药物家族，因此被认为是多种抗生素耐药性的概况[21］．体表和鳃分离菌株的MAR指数分别为0.037和0.026。

在Jiao等人的一项研究中[34发生;发生大肠杆菌在养殖的尼罗罗非鱼肠道中，分离的菌株对AMI、ATM、CTX和GEN敏感，符合我们自己的发现，并支持这些抗生素很少在水产养殖中使用的观点。大肠杆菌Ryu等也报道了对AMP、SUT和TC耐药的菌株[12］．同样，耐药菌株大肠杆菌Wang et al. [35］．作者认为，处理不当的海鲜是传播多重耐药性细菌基因的一个关键库。吖啶橙固化的11大肠杆菌抗AMP，SUT和TC的菌株揭示了在4例和7例中介导的质粒介导的抗性和7例中的染色体。

根据Lamshöft等人[36，磺胺类药物溶于水，在环境中持久存在。因此，可能在给药后10天内检测到残留，这表明有可能在相对较长的时间内检测到对SUT耐药的细菌。Gao等人[37指出四环素类和磺胺类药物在水产养殖中使用的历史悠久。

抗性的移动遗传元素的存在，尤其是质粒和整合子，对公共卫生的风险构成了公共卫生的风险，如Koo和Woo所证明的[38］．不足为奇的是，Tendencia和dela Peña [39]指出，在水产养殖中滥用抗生素的同时，从水产养殖种群中分离出耐药细菌的报告数量也显著增加。

4.结论

整体高抗生素易感性大肠杆菌从新鲜上市的尼罗罗非鱼中分离出的菌株令人满意，尽管偶尔发现质粒介导的耐药性，表明需要对水产养殖、处理和销售条件进行密切的微生物监测。然而，为了评估对消费者的潜在风险，有必要注明销售鱼类的来源。

利益冲突

作者宣布没有关于本文的出版物的利益冲突。

参考文献

1. C. A. Carson, B. L. Shear, M. R. Ellersieck, and A. Asfaw，“粪便的鉴定”大肠杆菌通过核糖体分型从人类和动物中分离出来，”应用与环境微生物学，第67卷，第5期4，第1503-1507页，2001。视图:出版商的网站|谷歌学术
2. A. Lateef, J. K. Oloke, E. B. Gueguim Kana，和E. Pacheco，“在尼日利亚西南部的Ogbomoso大都会，用于冷却饮料和食物的冰的微生物质量，”食品安全网络杂志，卷。8，pp。39-43,2004。视图:谷歌学术
3. C. A. Shoemaker, J. J. Evans, P. H. Klesius， "密度和剂量:影响死亡率的因素链球菌Iniae.感染罗非鱼（oreochromis niloticus.），“水产养殖，卷。188年，没有。3-4，第229-235,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术
4. A. M. El-Sayed，“饲养密度和饲养水平对尼罗罗非鱼生长和饲料效率的影响(oreochromis niloticus.l .)煎。”水产养殖的研究第33卷第3期8，页621-626,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术
5. D. O. Carneiro，H.C.C.P.P.Veueiredo，D. J.PereiraJúnior，A. G. Leal和P. V. R. Rapato，Perfil de Cancepibilidade A antimicrobianos debactériasisoladas eSistemas de madeo detilápia-do-nilo（oreochromis niloticus.），“Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia，第59卷，第59期4，页869-876,2007。视图:谷歌学术
6. N.肯珀，《水生和陆地环境中的兽医抗生素》，生态指标，卷。8，不。1，pp。1-13,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术
7. M. A. Akond, S. M. R. Hassan, S. Alam和M. Shirin，“抗生素耐药性大肠杆菌从孟加拉国家禽和家禽环境中分离，"美国环境科学杂志，第5卷，第5期。1，第47-52页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学术
8. E. E. van den Bogaard和E. E. Stobberingh，“抗生素耐药性的流行病学:动物和人类之间的联系”，国际抗菌药物杂志第14卷第2期4，页327-335,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术
9. S. A. El-Shafai，H.J.Gijzen，F. A. Nasr和F. A. el-Goerary，“罗非鱼的微生物品质饲养在粪便污染的池塘”中，“环境研究第95卷第1期2，页231-238,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术
10. R. M.S.Ima，P.C.H.H.H.H.C.C.C.C.Faria，R.H.P.Picolli，J.S.S.S.S.B.Fileho，以及P.V. R. Logato，DestrênciaAantimicrobianos debactériasoriundas de beiliente decriaçãoeferésdetilápiasdo nilo（oreochromis niloticus.），“Ciencia e Agrotecnologia，第30卷，第2期1, 2006年。视图:谷歌学术
11. A. Sapkota, A. R. Sapkota, M. Kucharski等人，“水产养殖做法和潜在人类健康风险:当前知识和未来优先事项，”国际环境，卷。34，不。8，pp。1215-1226,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术
12. S. Ryu, S. Park, S. Choi等人，“抗菌药物耐药性和耐药性基因大肠杆菌从商业鱼和海鲜隔离的菌株，“国际食物微生物学杂志，第152卷，第2期。1-2，第14-18页，2012。视图:谷歌学术
13. A. O. Bolarinwa, T. A. Musefiu和E. B. Obuko，“来自尼日利亚西南部伊巴丹不同水生环境鱼类的细菌菌群耐药性模式”，环境生物学进展，第5卷，第5期。8，第2039-2047页，2011。视图:谷歌学术
14. A. S. Schmidt, M. S. Bruun, I. Dalsgaard, K. Pedersen和J. L. Larsen，“在四个丹麦虹鳟鱼养殖场相关的鱼致病和环境细菌中抗菌素耐药性的发生”，应用与环境微生物学第66期11、2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术
15. M. S. Bruun, L. Madsen, and I. Dalsgaard，“土霉素处理虹鳟鱼实验感染黄杆菌属psychrophilum菌株有不同在体外抗生素药物敏感性,”水产养殖第215卷第1期1-4，页11-20,2003。视图:出版商的网站|谷歌学术
16. T. W. Alexander，G. D. Inglis，L. J. Yanke等，“农场到叉子表征大肠杆菌与具有已知抗菌用途历史的饲料牛相关联，“国际食物微生物学杂志第137卷第1期1，页40-48,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术
17. I. C. Mgbemenai, U. J. Udensi, J. Nnokwe, R. K. Obi，和E. A. Ogbonna，“从欧韦里罗非鱼养殖系统分离的细菌病原体的抗生素敏感性，Imo州，”水生科学杂志CHINESE， vol. 27, pp. 15-22, 2012。视图:谷歌学术
18. 唐斯和伊藤，食品微生物检验方法纲要，美国公共卫生协会，第四版，2001。
19. a . W. Bauer, W. M. Kirby, J. C. Sherris, M. Turck，“用标准化的单片法进行抗生素敏感性测试”，美国临床病理学杂志，卷。45，不。4，pp。493-496,1966。视图:谷歌学术
20. 美国临床及实验室标准学会抗菌药物敏感性测试性能标准，第二十次信息补充:补充M100-S20，临床和实验室标准研究所，韦恩，帕，美国，2010年。
21. P. H. Krumperman，“多重抗生素耐药性指数大肠杆菌确定食物粪便污染的高风险来源，”应用与环境微生物学第46卷，第46期1，页165-170,1983。视图:谷歌学术
22. A. Molina-Aja, A. García-Gasca, A. abru - grobois, C. Bolán-Mejía, A. Roque，和B. Gomez-Gil，“质粒分析和抗生素耐药性张楣从养殖对虾中分离的菌株《微生物学字母，第213卷，第213号1，pp。7-12,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术
23. H. H. Huss， "鲜鱼的质量和质量变化。粮食农业组织(粮农组织)渔业技术论文348，粮农组织，罗马，意大利，1995年。视图:谷歌学术
24. S.Pao，M. R. Ettinger，M.F.Khalid，A.O. Reid和B.L.L.L.Nerrie，从互联网和当地零售市场采购的原始水产养殖鱼片的微生物品质，“食品保护杂志，第71卷，第71期8, pp. 1544-1549, 2008。视图:谷歌学术
25. S. O. Yagoub， "肠杆菌科和大肠杆菌的分离假单胞菌来自喀土穆市鱼市上出售的生鱼，”细菌学研究杂志， vol. 1, pp. 85-88, 2009。视图:谷歌学术
26. T. A. Musefiu, E. B. Obuko，和A. O. Bolarinwa，“野生和培养的皮肤和胃需氧菌群的分离和鉴定claria Gariepinus和oreochromis niloticus.来自尼日利亚西南部的伊巴丹，”应用科学研究杂志，第7卷，第5期7, pp. 1047-1051, 2011。视图:谷歌学术
27. S. C. Mandal, M. Hasan, M. S. Rahman, M. H. Manik, Z. H. Mahmud，和m.d. S. Islam，“尼罗河罗非鱼的大肠菌群，oreochromis niloticus.小虾、池塘和鱼市，”世界鱼类和海洋科学杂志， vol. 1, no. 13，第160-166页，2009。视图:谷歌学术
28. L. Gram、G. Trolle和H. H. Huss，“在低(0°C)和高(20°C)温度下储存的鱼中检测特定的腐败细菌”，国际食物微生物学杂志，卷。4，不。1，pp。65-72,1987。视图:谷歌学术
29. H. H. Huss, P. Dalgaard，和L. Gram，“鱼和鱼产品的微生物学”，刊于从生产者到消费者的海鲜，质量综合方法J. B. Luten, T. Borresen和J. Oehlenschläger, Eds。，pp. 413–430, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, The Netherlands, 1997.视图:谷歌学术
30. L. Gram和P. Dalgaard，《鱼类腐败细菌——问题和解决方案》生物技术的现状，第13卷，第2期3，页262 - 266,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术
31. J. A. Ampofo和G. C. Clerk，“有机废物池塘养殖鱼类组织中细菌污染物的多样性:健康影响”，开放鱼类科学杂志，卷。3，pp。142-146，2010。视图:谷歌学术
32. L. Feliciano, J. Lee, J. A. Lopes，和M. A. Pascall，“消毒冰在减少鱼片和从融化的冰中收集的水中细菌负荷的功效，”食品科学杂志，第75卷，第5期4，pp。M231-M238，2010。视图:出版商的网站|谷歌学术
33. L. M. Molinari, D. O. Scoaris, R. B. Pedroso等人，“尼罗罗非鱼胃肠道的细菌菌群，oreochromis niloticus.，在半集约化系统中培养，”Acta Scientiarum-Biological科学，卷。25，不。2，pp。267-271,2003。视图:谷歌学术
34. S. C. jiao，R.M.L.Fami，V.A。D.Pedernal，以及E. C. Cabrera，“多种耐药性的患病率大肠杆菌鸡、猪及尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)在马尼拉的菜市场上出售的肠道，以及耐药性的结合转移性，”菲律宾农业科学家，第90卷，第5期。1，页64-70,2007。视图:谷歌学术
35. 王飞，蒋黎，杨秋青等，“进口海产品中主要食源性病原体的流行与耐药性研究”，食品保护杂志第74卷第1期9, pp. 1451-1461, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术
36. M. Lamshöft, P. Sukul, S. Zühlke，和M. Spiteller，“给猪后14c标记和非标记磺胺嘧啶的代谢，”分析和生物分析化学号，第388卷。8，页1733-1745,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术
37. P. Gao，D. Mao，Y.罗，L.Wang，B. Xu和L.Xu，“水产养殖环境中的磺胺胺和四环素抗性细菌和抗性基因的发生，”水的研究第46卷，第46期7, pp. 2355-2364, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术
38. H. J. Koo和G. J. Woo，“抗菌素耐药性的表征大肠杆菌从韩国的动物和鱼类食品中恢复过来，“防护学报，第75卷，第5期5, pp. 966-972, 2012。视图:谷歌学术
39. E. A. Tendencia和L. D. dela Peña，“对虾养殖场细菌对土霉素和恶灵酸耐药性的水平和恢复百分比”，水产养殖，第213卷，第213号1-4，页1-13,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术

版权

版权所有©2014 Rafael dos Santos Rocha et al。这是一篇发布在知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。