1。介绍
细菌
大肠杆菌 被广泛用作食品的细菌学的条件和环境指标由于其几乎完全粪便来源(
1 ]。的存在
大肠杆菌 最近在fresh-marketed海鲜表明污染,通常归因于感染处理程序或存储在受污染的冰
2 ]。
生产集约化和随之而来的放养密度的增加使鱼类养殖更容易受到疾病(
3 ,
4 ]。滥用抗生素治疗感染和促进经济增长已被证明是低效的从长远来看,给细菌种类选择性压力有利于耐药菌株对公众健康有潜在危险的发展(
5 - - - - - -
7 ]。
事实上,菌株对不同家庭的抗生素已经从环境样品中分离出的人员(
8 - - - - - -
10 ]。食源性菌株对抗生素产生抗药性,对消费者健康造成风险,有利于转移表型的人类通过食物链(
11 - - - - - -
13 ]。没有引起疾病的报道
大肠杆菌 在养殖鱼类,但耐药菌株可能选择由于文化环境中抗生素的存在,导致耐药性的传播通过移动遗传元素潜在致病菌(
14 - - - - - -
17 ]。
由于巴西东北部的罗非鱼养殖的重要性,本研究的目的是调查的存在
大肠杆菌 在福塔雷萨fresh-marketed尼罗罗非鱼来自超市中,巴西,(b)建立的抗生素敏感性特征
大肠杆菌 菌株与尼罗罗非鱼样品,(c)确定电阻可能是染色体或plasmidial和(d)确定多重抗药性菌株分离指数从鳃,肌肉,和身体表面。
2。材料和方法
2.1。样品收集
尼罗罗非鱼的36个样本(
Oreochromis niloticus )收集从十二个超市在福塔雷萨(西阿拉、巴西)。标本分别包装在塑料薄膜用冰冷的恒温箱的海鲜和环境微生物学实验室海洋科学研究所(联邦大学西阿拉)立即细菌学上的分析。
2.2。隔离的<斜体>大肠杆菌< /斜体>
的
大肠杆菌 调查后的纲要指南第四版的食品的微生物检查方法发布的美国公共卫生协会(
18 ]。假定测试分别进行鳃、肌肉和身体表面。样身体表面,面积测量
10
×
10
厘米是抚摸无菌棉拭子之前浸泡在Difco脑心浸液肉汤(BHI),随后沉浸在9毫升0.85%氯化钠溶液(Vetec)连续稀释10−4 。样本鳃,25克整除在225毫升0.85%氯化钠溶液均相,动摇了在电磁搅拌器30分钟,以稀释10−6 。样品肌肉,25 g整除地面和均质在225毫升0.85%氯化钠溶液和稀释连续10−3 。1毫升整除检索从每个生理盐水稀释和播种在试管中有三个重复包含10毫升十二烷基硫酸盐胰蛋白示(LST, Difco)。样品被放置在一个细菌学的孵化器在35°C 48小时。整除从正面LST管被播种在4毫升管包含EC肉汤和孵化在45°C水浴48小时。
大肠杆菌 孤立使用伊红美蓝琼脂板(Difco), 3 - 5个殖民地的怀疑
大肠杆菌 被提交给IMViC selectedand测试。殖民地被认为是
大肠杆菌 当积极的吲哚、甲基红试验,-柠檬酸Voges-Proskauer和测试,和革兰氏阴性短棒在革兰氏染色法测试(
16 ]。
2.3。抗菌药物敏感性
进行了抗菌谱与磁盘扩散法(
19 使用Mueller-Hinton琼脂(Difco)]。标准菌株
大肠杆菌 写明ATCC 25922是作为积极的控制(
18 ]。最初,乳剂盐溶液制备的样品调整到0.5麦克法兰浊度标准,相当于
1
×
10
8
CFU·毫升−1 (CLSI 2010)。的敏感性
大肠杆菌 压力测试与几个家庭的抗生素,包括氨基糖苷类家庭:阿米卡星(AMI);30
μ g)和庆大霉素(创;10
μ g);碳青霉烯家族:imipenem (IMP;30
μ g);家庭:头孢菌素头孢菌素(CET(中央东部东京);30
μ g)和头孢噻肟(CTX;30
μ g);氟喹诺酮类家族:环丙沙星(CIP;5
μ g);monobactam家族:aztreonam (ATM;30
μ g);青霉素家族:氨苄西林(AMP;30
μ g);家庭:喹诺酮萘啶酸(NAL;30
μ g);磺酰胺家族:sulfametoxazol-trimetoprim (SUT;25
μ g);和四环素:四环素(TC;30
μ g)。使用无菌镊子,商用抗生素磁盘(Laborclin)被单独Mueller-Hinton琼脂表面。24小时后的孵化35°C,压力得分为“敏感”,“中间,”或“耐药”每个抗生素抑制光晕的测量基础上,按照CLSI推荐(
20. ]。
2.4。3月指数
多种抗生素耐药性(MAR)指数决定的总数
大肠杆菌 菌株从每种类型的组织样本(鳃、肌肉和身体表面)使用公式
一个
/ (
b
·
c
) ,在那里
一个
的总电阻分株,
b
是抗生素的家庭总数测试,然后呢
c
是菌株的数量从每个类型的组织样本(
21 ]。
2.5。质粒固化
耐药
大肠杆菌 菌株被提交到质粒固化用吖啶橙染色,享年100岁
μ g·毫升−1 (σ)。暴露在诱变剂后,菌株被重新与他们最初的抗生素耐药
22 ]。
3所示。结果与讨论
44的隔离被证实
大肠杆菌 ,25(56.82%)鳃隔绝,15(34.09%)从身体表面,从肌肉和4 (9.09%)。11
大肠杆菌 菌株分离鳃和身体表面耐AMP, SUT, TC,尤其是去年这些(鳃
n
=
4
;表面
n
=
3
)。另一方面,菌株分离肌肉样本容易受到所有的抗生素(表进行测试
1 )。所有菌株分离鳃、肌肉和身体表面容易AMI,自动取款机,CET(中央东部东京)、CTX、CIP,创,小鬼。
表1
敏感,中间,和耐药菌株
大肠杆菌 孤立的鳃、肌肉和身体表面养殖尼罗罗非鱼(
Oreochromis niloticus 在超市)fresh-marketed福塔雷萨(西阿拉、巴西),2012年。
组织样本
抗菌药物测试
AMI
AMP
自动取款机
CET(中央东部东京)
CTX
CIP
创
小鬼
部分
SUT
TC
鳃
年代
15
12
15
11
15
15
15
15
14
14
11
我
0
1
0
4
0
0
0
0
1
0
0
R
0
2
0
0
0
0
0
0
0
1
4
身体表面
年代
25
20.
25
23
25
25
25
25
24
24
21
我
0
2
0
2
0
0
0
0
1
0
1
R
0
3
0
0
0
0
0
0
0
1
3
肌肉
年代
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
我
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
R
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
S:敏感;我:中间;R:耐药。
AMI:阿米卡星;创:庆大霉素;小鬼:imipenem;CET(中央东部东京):头孢菌素;CTX:头孢噻肟;CIP:环丙沙星;自动取款机:aztreonam;AMP:氨苄青霉素;部分:萘啶酸;SUT: sulfametoxazol-trimetoprim; TC: tetracycline.
根据一些作者,鳃有更多样化的微生物群,定性和定量,因为它们直接接触水,尤其是在浮游生物喂食器如尼罗罗非鱼(
23 - - - - - -
26 ]。Mandal et al。
27 ]还发现
大肠杆菌 在尼罗罗非鱼肌肉样本,但许多作者认为,肌肉是一种相对无害的组织(
28 - - - - - -
30. ]。然而,肌肉可能污染在收割,紧张的过程,经常引起损伤的身体表面,期间和/或存储在受污染的冰
31日 ,
32 ]。莫伦纳et al。
33 添加,
大肠杆菌 通常见于罗非鱼肠道;因此,这些作者,其在肌肉不良处理行为的象征。
四个电阻配置文件是在这项研究中观察到:TC(阻力
n
=
5
)、抗AMP (
n
=
4
),抵抗SUT + TC (
n
=
1
),抵抗AMP + SUT + TC (
n
=
1
)(表
2 )。profiles SUT + TC和音箱+ SUT + TC涉及超过一个家庭的药物,因此考虑的多个抗生素耐药性(
21 ]。3月指标对菌株分离的身体表面和鳃是0.037和0.026,分别。
表2
抗菌素耐药性的菌株
大肠杆菌 孤立的鳃、肌肉和身体表面养殖尼罗罗非鱼(
Oreochromis niloticus 在超市)fresh-marketed福塔雷萨(西阿拉、巴西),2012年。
配置文件
组织样本
身体表面(
n
=
15
)
鳃(
n
=
25
)
AMP
1
3
TC
3
2
SUT + TC
- - - - - -
1
AMP + SUT + TC
1
- - - - - -
AMP:氨苄青霉素;SUT: sulfametoxazol-trimetoprim;TC:四环素。
在交通等的研究。
34 )的发生
大肠杆菌 在养殖尼罗罗非鱼肠道,分离菌株容易AMI,自动取款机,CTX、创,匹配自己的发现和支持这些抗生素的概念用于水产养殖。
大肠杆菌 菌株耐AMP, SUT, TC也报道了Ryu et al。
12 ]。同样,耐药菌株
大肠杆菌 TC王发现了et al。
35 ]。作者认为不当处理海鲜是一个至关重要的储层为多重耐药性的细菌基因的传播。吖啶橙固化的11
大肠杆菌 菌株耐AMP, SUT, TC显示阻力在4例和潜在染色体plasmid-mediated 7。
根据Lamshoft et al。
36 ),磺胺类药是高度溶于水和持久的环境。因此,残留可能会发现政府10天后,建议检测细菌耐药的可能性SUT相对较长的一段时间。高et al。
37 )指出,四环素和磺胺类药有很长的历史,在水产养殖中使用。
移动阻力的遗传成分的存在,特别是质粒和整合子,对公众健康造成威胁,正如古和吸引
38 ]。毫不奇怪,Tendencia和菲律宾人质佩纳(
39 ]发现滥用抗生素在水产养殖一些落草为寇的数量显著增加抗药性细菌隔绝水产养殖股票的报告。