在Biovar水平的识别布鲁氏菌导致伊朗小反刍动物流产的分离物

抽象的

为了确定伊朗绵羊和山羊群体中最流行的布鲁氏菌病生物变种，根据地理和疾病流行情况在6个省份进行了为期2年的横断面研究。从引产流产的绵羊和山羊胎儿中获得的标本在其上进行培养布鲁氏菌微生物分离的选择性培养基。从265例胎儿中分离到布鲁氏菌，用标准微生物学方法进行生物鉴定。结果检出246株(92.8%)b . melitensisBiovar 1,18分离物（6.8％）是b . melitensisBiovar 2，有趣的是，从Mazandaran省获得的一个孤立（0.4％）是B. Abortus.Biovar 3.在这项研究中，b . melitensisBiovar 3在没有选定的省份中分离出来，并且只有3个省份（即Chehar-Mahal Bakhtiari，Markazi和Ilam）的所有分离株被确定为b . melitensisBiovar 1.总之，我们发现了b . melitensisBiovar 1仍然是伊朗各省中小反刍动物布鲁氏的原因。

1.介绍

布鲁克病是一个全球细菌性群体，对公共卫生的危害造成危害，并对畜牧业生产行业造成经济损失[1-3.]．动物布鲁氏症主要是经过生殖参与，导致流产和不孕症[2]，而人体布鲁氏菌病是一种发热的疾病，称为未抑制的发烧，可以导致慢性衰弱并发症[3.那4.]．该疾病从属于属的兼性细胞内细菌导致布鲁氏菌这是革兰氏阴性，非植物形成和非染色的Coccobacilli [3.那5.那6.]．目前，该属组由10种根据其宿主偏好和表型差异分类[2那7.]．三种物种也分为BiovarsB. Abortus.那B. melitensis，和B. Suis.分别有7,3和5 Biovars [3.]．

在绵羊和山羊中，布鲁氏菌病主要是由于b . melitensis这是人类最致病的物种，负责流行区域的主要比例，包括地中海和中东国家的人类病例[1那3.那8.-10.]．人类通过与受感染的动物，阴道排出和中止胎儿直接接触来捕捉该疾病;处理纯文化;和消费未经高温抑制的污染牛奶和奶制品[3.那6.那11.]．后者是其中的主要途径b . melitensis传染给流行地区的人[1那5.]．

鉴定b . melitensis涉及小反刍动物布鲁氏菌病的生物变异是流行病学调查的一个关键组成部分，这是设计适当的预防和控制策略所必需的[8.]．在伊朗，由于存在其他相关因素，包括从邻国非法进口牲畜b . melitensis同样是普遍的和不受控制的动物运动，因此认为有必要研究不同生物变种的流行病学分布的变化，以便确定新的生物变种的引进，并评价目前控制措施的成功程度。因此，本研究旨在更新我们对该病目前流行状况的认识b . melitensis导致伊朗绵羊和山羊流产的生物变异。

2.材料和方法

2.1。研究设计和取样

目前的横断面研究是从2007年到2009年进行的。根据伊朗兽医组织分类，所有国家省份分为3类，低（<2％），中级（2-3％）和高（> 3％）Brucellosis患病率。该分类基于2003年使用常规的玫瑰孟加拉，血清凝集和2-巯基乙醇试验进行的血型血汗病理学调查。然后根据省级兽医总办公室的地理和可用性，从每个类别中选择两种省，其中省兽医总办公室与熟练人员进行细菌隔离。选定的省份是克尔曼和马塔齐;ilam和khorasan拉扎维;Chehar-Mahal Bakhtiari和Mazandaran分别来自低，中级和高流行类别。所有小型反刍动物中产阶级的胎儿都提到了研究期间省级兽医总署中央实验室的胎儿培养了Brucella隔离。Brucella分离株被送到Razi疫苗和血清研究所的Brucellosis系，在物种和Biovar水平上鉴定。

2.2。嗜弹性的分离

从肝脏，肺，脾和胎儿胃含量获得的标本在含有5％（v / v）灭活马血清，2％（w / v）葡萄糖和布鲁氏菌的Brucella琼脂（Bd，USA）上培养。selective supplement (Oxoid, UK) according to the manufacturer’s instruction. Tissue specimens were first decontaminated using ethanol and flame and then homogenized in sterile normal saline by means of a grinder. For each specimen, two sets of 3 agar plates were inoculated and incubated at 37°C with one set in the air having 10% CO₂．每2天监测接种板的菌落生长情况，在没有菌落观察的情况下，最多保留35天。根据其形态特征，将疑似菌落在布鲁氏菌琼脂坡面上进行传代培养，以进行进一步评价和生物变种鉴定。

2.3。Biovar识别

经革兰氏染色显微镜鉴定和过氧化氢酶、氧化酶和脲酶试验结果确认的布鲁氏菌分离株，按照Alton等人描述的标准方法进行生物分型检查[12.]．简而言之，基于与A和M单特异性Antisera，CO和M单次抗血清凝集来鉴定Biovars₂增长要求h₂S生产，Tbilisi（TB）和伯克利裂解（BK₂)，并在含有20μ.g/mL碱性品红和硫氨酸染料[12.-15.]．

3.结果

在本调查中，培养了851个中止绵羊和山羊胎儿的总数，并分离了265个Brucellae。这些265个分离物的生物型观察显示246（92.8％）是b . melitensis生物变型1。鉴定出18株(6.8%)b . melitensisBiovar 2;有趣的是，从Mazandaran省获得的一个孤立（0.4％）被确定为B. Abortus.生物变型3。表格1说明在不同省份获得的布鲁氏菌分离菌数及其生物分型结果。

b . melitensis在研究期间，Biovar 3被孤立在六个省份中，并且b . melitensis生物变种2仅在呼罗珊、拉扎维和克尔曼这两个省分别属于中、低流行类别。

4。讨论

在世界许多地区，特别是中东和地中海地区，小反刍动物布鲁氏菌病仍然是一个主要的动物和公共卫生负担[1那6.那8.那10.]．绵羊和山羊主要被感染b . melitensis作为其优惠主持人[8.那18.]．关于公共卫生，b . melitensis是最重要的动物园病原体布鲁氏菌spp。1那3.那5.]，占世界各地的绝大多数人类病例[8.]．在流行的地区，它主要通过从绵羊和山羊的未经高温消耗的牛奶和牛奶产品的消费传播给人们[3.那5.那19.]．

b . melitensis分为三种生物磁解，使用常规实验室方法（如凝集与A和M单特异性抗血清的凝集和Brucella噬菌体的裂解）进行分化12.那13.]．参与动物布鲁氏菌病的生物糖的测定是任何国家疾病的流行病学特征的重要步骤，以及设计控制和根除计划的初步要求[8.]．此外，由于布鲁塞拉皮适应新环境的能力及其重新出现[3.那5.那6.]揭示流行病学特征的变化布鲁氏菌物种/ Biovars可以帮助揭开生物，动物和人类之间的相互作用的复杂性[5.]．

在伊朗，第一个b . melitensis1950年报道了中产绵羊胎儿的分离[16.那17.]．此后，它在全国各地被广泛隔离开来，主要来自绵羊和山羊，偶尔也来自牛、骆驼和牧羊犬[17.那20.]．所有生物变型的b . melitensis存在于伊朗中，其中生物公开1被称为最普遍的。表格2总结了伊朗的生物型化结果b . melitensis在1971年至2000年的两个时间段内分离出来。

对宿主种进行免疫b . melitensisresy rev.1是自20世纪60年代以来控制伊朗小反刍动物布鲁氏的主要策略。在1983 - 2003年期间，使用玫瑰孟加拉，血清凝集和2-巯基乙醇试验，在成人绵羊和山羊中也进行了测试和屠宰运动，而疫苗接种仅限于幼小动物。从2003年，控制程序一直基于使用全剂量的大规模疫苗（含1-3Rev.1疫苗在4-7月龄羔羊和儿童中的每剂量细菌数)，以及其减少剂量(含0.5-2每剂量的细菌）在成年女性动物中。除了大规模疫苗接种外，还实施了其他措施，包括公共教育，促进卫生畜牧业和对流产爆发的微生物评估。因此，报告的新人类病例的数量每年从2005 - 2006年的39人降至2010-2010在该国的每一个人（未发表的数据）。

我们的调查显示b . melitensisBiovar 1是省份小反刍动物群中临床安全性最常见的原因。这一发现与全国先前研究的结果一致[16.那17.]．隔离B. Abortus.Biovar 3，这是牛布鲁克病的敌人病因症[17.那21.那22.[我们研究中，来自中产绵羊胎儿表明，来自牛的病原体的交叉物种的可能性。B. Abortus.已经散发出鉴定并报告为伊朗羊布雷骨病的致病剂[17.那21.]．这表明，在流行地区，两者布鲁氏菌SPP。存在，并且牛和小反刍动物在紧密接触处升高，可能发生对非专利宿主的传输[17.那21.那23.]．实施控制措施时应考虑到这一点。

虽然疾病患病率的估计不是本研究的目的，但结果表明，尽管多年来实施疫苗接种和其他控制措施，但临床形式的小反刍动物布带仍然存在于该国的各个地区。尽管如此，需要涵盖整个目标人口的全国范围内的调查，包括传统上和游牧饲养的羊群[6.]通过地区确定不同的Buovars地区的地理分布。它还将有助于追踪潜在的爆发，特别是在邻国西部和东部边界的省份。为此目的，使用地理信息系统（GIS）将有助于分析动物和人体布鲁氏菌之间的相互作用[24.]．

结论

本研究透露b . melitensisBiovar 1仍然是伊朗各省中小反刍动物布鲁氏菌病最普遍的原因。然而，需要更多的研究来确定整个国家的疾病的现状以及对其对人体健康的影响的评估。可以实施进一步的控制和预防措施以更大程度地将人和动物疾病的发病缩减。

致谢

The authors would like to thank Dr. F. Esmaeili, S. Ghaem Maghami, M. Seyedin Ghannad, M. Rasht Bafi, M. Azadi, M. H. Moghaddasi, F. Sabbagh Kermani, M. Asadi, A. Ganji, and all personnel of Brucellosis Department at Razi Vaccine and Serum Research Institute for technical assistance.

参考

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