JPATH 病原体杂志 2090-3065. 2090 - 3057 Hindawi出版公司 357235 10.1155 / 2012/357235 357235 研究文章 在Biovar水平的识别 布鲁氏菌分离造成伊朗小反刍动物流产的分离物 Behroozikhah 阿里穆罕默德 1 阿訇内贾德 拉丁 1 阿米里 卡里姆 2 Bahonar表示 阿里雷扎 3. 黄 Hin-Chung 1 布鲁氏菌病的部门 拉兹疫苗和血清研究所 卡拉季3197619751 伊朗 rvsri.ir 2 布鲁氏菌病控制和根除办公室 伊朗兽医组织 德黑兰1595814111 伊朗 ivo.org.ir 3. 食品卫生与质量控制部 兽医学院 德黑兰大学 德黑兰1419963111 伊朗 Ut.ac.Ir. 2012年 27 11 2012年 2012年 29 08 2012年 31 10 2012年 2012年 版权所有©2012 Ali Mohammad Behroozikhah等。 这是一篇在知识共享署名许可下发布的开放获取的文章，允许在任何媒体中不受限制的使用、发布和复制，只要原始作品被正确引用。

为了确定伊朗绵羊和山羊群体中最流行的布鲁氏菌病生物变种，根据地理和疾病流行情况在6个省份进行了为期2年的横断面研究。从引产流产的绵羊和山羊胎儿中获得的标本在其上进行培养 布鲁氏菌微生物分离的选择性培养基。从265例胎儿中分离到布鲁氏菌，用标准微生物学方法进行生物鉴定。结果检出246株(92.8%) b . melitensisBiovar 1,18分离物（6.8％）是 b . melitensisBiovar 2，有趣的是，从Mazandaran省获得的一个孤立（0.4％）是 b .流产生物变型3。在这项研究中, b . melitensis生物变种3在所有选定省份均未分离到，3个省份(即Chehar-mahal Bakhtiari、Markazi和Ilam)的所有分离株均鉴定为 b . melitensis生物变型1。总之，我们发现 b . melitensis生物变种1仍然是伊朗各省小反刍动物布鲁氏菌病最普遍的原因。

 1.介绍

布鲁氏菌病是一种世界性的细菌性人畜共患疾病，对公众健康构成危害，并对畜牧业造成经济损失[ 1- 3.]．动物布鲁氏症主要是经过生殖参与，导致流产和不孕症[ 2]，而人体布鲁氏菌病是一种发热的疾病，称为未抑制的发烧，可以导致慢性衰弱并发症[ 3.那 4.]．该疾病从属于属的兼性细胞内细菌导致 布鲁氏菌是革兰氏阴性、无孢子形成和无荚膜的球菌[ 3.那 5.那 6.]．目前，该属有10个种，根据它们的宿主偏好和表型差异进行分类[ 2那 7.]．三种物种也分为Biovars b .流产那 b . melitensis和 B. Suis.分别有7个、3个和5个生物变种[ 3.]．

在绵羊和山羊中，布鲁氏菌病主要是由于 b . melitensis这是人类最具致病性的物种，在包括地中海和中东国家在内的流行地区造成了主要的人类病例比例[ 1那 3.那 8.- 10]．人类通过与受感染的动物，阴道排出和中止胎儿直接接触来捕捉该疾病;处理纯文化;和消费未经高温抑制的污染牛奶和奶制品[ 3.那 6.那 11]．后者是其中的主要途径 b . melitensis传染给流行地区的人[ 1那 5.]．

鉴定 b . melitensis涉及小反刍动物布鲁氏菌病的生物变异是流行病学调查的一个关键组成部分，这是设计适当的预防和控制策略所必需的[ 8.]．在伊朗，由于存在其他相关因素，包括从邻国非法进口牲畜 b . melitensis也是普遍的和不受控制的动物运动，被认为是研究不同BIOVARS的流行病学分布的变化，以便确定新的BIOVARS并评估持续控制措施的成功。因此，进行了本研究以更新我们关于当前流行状态的知识 b . melitensis导致伊朗绵羊和山羊流产的生物变异。

 2。材料和方法 2.1。研究设计与抽样

本研究从2007年到2009年进行横断面研究。根据伊朗兽医组织的分类，将所有国家省份分为低(<2%)、中等(2-3%)和高(>3%)3类。这种分类是基于2003年进行的一项血清流行病学调查，采用常规孟加拉玫瑰、血清凝集和2-巯基乙醇试验。然后，根据地理位置和省兽医总局有一个配有熟练人员进行细菌分离的中心实验室的情况，从每个类别中选择两个省。所选省份为Kerman和Markazi;Ilam和Khorasan Razavi;Chehar-mahal Bakhtiari和Mazandaran分别来自低、中、高流行类别。所有在研究期间转至省兽医总局中心实验室的小反刍动物流产胎儿均进行布鲁氏菌分离培养。将布鲁氏菌分离株送往拉兹疫苗和血清研究所布鲁氏菌病司，在物种和生物变种水平进行鉴定。

 2.2。隔离Brucellae

从肝脏，肺，脾和胎儿胃含量获得的标本在含有5％（v / v）灭活马血清，2％（w / v）葡萄糖和布鲁氏菌的Brucella琼脂（Bd，USA）上培养。selective supplement (Oxoid, UK) according to the manufacturer’s instruction. Tissue specimens were first decontaminated using ethanol and flame and then homogenized in sterile normal saline by means of a grinder. For each specimen, two sets of 3 agar plates were inoculated and incubated at 37°C with one set in the air having 10% CO2．每2天监测接种板的菌落生长情况，在没有菌落观察的情况下，最多保留35天。根据其形态特征，将疑似菌落在布鲁氏菌琼脂坡面上进行传代培养，以进行进一步评价和生物变种鉴定。

 2.3。生物变型识别

通过使用革兰氏染色和过氧化氢酶，氧化酶和尿素测试的显微镜表征通过微观表征证实的Brucella分离物，根据Alton等人描述的标准方法检查生物型化。[ 12]．简单地说，生物变异是基于A和M单特异性抗血清的凝集，CO2生长需求H2Tbilisi (Tb)和Berkeley (Bk2)，并在含有20 μ.g/mL碱性品红和硫氨酸染料[ 12- 15]．

 结果

本研究共对851例流产绵羊和山羊胎儿进行微生物培养，分离出265株布鲁氏菌。生物分型结果为246株(92.8%) b . melitensisBiovar 1. 18个分离株（6.8％）被确定为 b . melitensisBiovar 2;有趣的是，从Mazandaran省获得的一个孤立（0.4％）被确定为 b .流产Biovar 3.表格 1说明在不同省份获得的布鲁氏菌分离菌数及其生物分型结果。

不同省份的隔离人数。

省 流行率类别 孤立数量 不同物种/生物变种的数量
b . melitensis b . melitensis b .流产
Biovar 1. Biovar 2. Biovar 3.
Mazandaran. 高 55 54 - 1
Chehar-mahal Bakhtiari 高 58 58 - -
Khorasan哈 中间的 68 55 13 -
ilam. 中间的 10 10 - -
Markazi. 低 39 39 - -
科曼地毯 低 35 30. 5. -
总额(%) 265（100） 246（92.8） 18 (6.8) 1（0.4）

b . melitensis在研究期间，Biovar 3被孤立在六个省份中，并且 b . melitensisBiovar 2仅在两省孤立，分别是Khorasan Razavi和Kerman，分别属于中间和低患病率类别。

 4。讨论

在世界许多地区，特别是中东和地中海地区，小反刍动物布鲁氏菌病仍然是一个主要的动物和公共卫生负担[ 1那 6.那 8.那 10]．绵羊和山羊主要感染的是 b . melitensis作为其优惠主持人[ 8.那 18]．关于公共卫生， b . melitensis最重要的人畜共患病原体是什么 布鲁氏菌SPP。[ 1那 3.那 5.]，占世界各地的绝大多数人类病例[ 8.]．在流行的地区，它主要通过从绵羊和山羊的未经高温消耗的牛奶和牛奶产品的消费传播给人们[ 3.那 5.那 19]．

b . melitensis分为三种生物变种，使用传统的实验室方法如A和M单特异性抗血清凝集和布鲁氏菌噬菌体裂解来区分[ 12那 13]．测定动物布鲁氏菌病中涉及的生物变异是任何国家对该疾病进行流行病学特征的重要步骤，也是设计控制和根除计划的初步要求[ 8.]．此外，由于布鲁氏菌适应新环境的能力及其重新出现[ 3.那 5.那 6.]，揭示了该病流行病学特征的变化 布鲁氏菌物种/ Biovars可以帮助揭开生物，动物和人类之间的相互作用的复杂性[ 5.]．

在伊朗，第一个 b . melitensis1950年曾报道从一个流产的羊胎儿中分离出来[ 16那 17]．此后，它主要来自该国的不同地区，主要来自绵羊和山羊，而且偶尔也来自牛，骆驼和牧羊犬[ 17那 20.]．所有的生物之轨 b . melitensis存在于伊朗中，其中生物公开1被称为最普遍的。桌子 2总结了伊朗的生物型化结果 b . melitensis在1971年至2000年的两个时间段内分离出来。

不同的频率 b . melitensis在伊朗分离出的生物变种。

年 b . melitensis b . melitensis b . melitensis 全部的 参考
Biovar 1. Biovar 2. Biovar 3.
1971-1980 851. 242 4. 1107. [ 16]
1981-2000 2102 205 106 2413. [ 17]
全部的 2953 447 110 3510.

对宿主种进行免疫 b . melitensisRev.1株自20世纪60年代以来一直是伊朗控制小反刍动物布鲁氏菌病的主要策略。在1983-2003年期间，还使用孟加拉玫瑰、血清凝集和2-巯基乙醇试验对成年绵羊和山羊进行了试验和屠宰运动，而疫苗接种仅限于幼小动物。从2003年起，控制方案以使用全剂量(含1-3剂)的大规模疫苗接种为基础 × 10 9. 每剂量的细菌）Rev.1羊羔和儿童疫苗在4-7个月，其剂量减少（含0.5-2 × 10 6. 每剂量细菌数目)。除了大规模接种疫苗外，还采取了其他措施，包括公共教育、推广卫生畜牧业做法以及对流产暴发进行微生物评价。结果，该国每年报告的新增人间病例数从2005-2006年的每10万人39例下降到2010-2011年的每10万人15.9例(未公布的数据)。

我们的调查显示 b . melitensis生物变种1是包括各省在内的小反刍动物种群中临床布鲁氏菌病最常见的原因。这一发现与此前在该国进行的研究结果一致。 16那 17]．隔离 b .流产Biovar 3，这是牛布鲁克病的敌人病因症[ 17那 21那 22[我们研究中，来自中产绵羊胎儿表明，来自牛的病原体的交叉物种的可能性。 b .流产已经散发出鉴定并报告为伊朗羊布雷骨病的致病剂[ 17那 21]．这表明，在流行地区，两者 布鲁氏菌如果存在Spp.，且牛和小反刍动物在密切接触中饲养，则可能传播给非首选宿主[ 17那 21那 23]．实施控制措施时应考虑到这一点。

虽然疾病患病率的估计不是本研究的目的，但结果表明，尽管多年来实施疫苗接种和其他控制措施，但临床形式的小反刍动物布带仍然存在于该国的各个地区。尽管如此，需要涵盖整个目标人口的全国范围内的调查，包括传统上和游牧饲养的羊群[ 6.]按地区确定不同生物多样性的地理分布。它还将有助于追踪潜在的疫情，特别是在毗邻西部和东部边界的省份。为此，使用地理信息系统(GIS)将有助于分析动物和人类布鲁氏菌病的相互作用[ 24]．

 结论

本研究透露 b . melitensis生物变种1仍然是伊朗各省小反刍动物布鲁氏菌病临床形式的最普遍的原因。但是，还需要进行更多的研究，以确定该疾病在全国的现状，并评估其对人类健康的影响。可以采取进一步的控制和预防措施，在更大程度上减少人畜疾病的发病率。

 致谢

The authors would like to thank Dr. F. Esmaeili, S. Ghaem Maghami, M. Seyedin Ghannad, M. Rasht Bafi, M. Azadi, M. H. Moghaddasi, F. Sabbagh Kermani, M. Asadi, A. Ganji, and all personnel of Brucellosis Department at Razi Vaccine and Serum Research Institute for technical assistance.

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