血管破坏剂三氧化二砷增强Thermoradiotherapy实体肿瘤

文摘

我们先前的研究证明了三氧化二砷(ATO)诱导肿瘤血管选择性破坏和热或增加对实体肿瘤放射治疗作用。这些结果表明,trimodality方法的辐射,ATO,当地高热可能有效的对实体肿瘤治疗效果。在这里,我们报告的抗肿瘤效应hypofractionated辐射其次是ATO政府和当地42.5°C高热,顺铂和thermoradiotherapy的影响。我们发现的治疗疗效ATO-based thermoradiotherapy是等于或大于cisplatin-based thermoradiotherapy,和明显的证据在活的有机体内细胞凋亡和肿瘤坏死ATO-treated中观察到肿瘤。我们得出这样的结论:ATO-based thermoradiotherapy是一个强大的手段控制肿瘤的生长通过血管中断增加热量和放射治疗的影响。

1。介绍

作为₂O₃(ATO)已被广泛研究和使用成功作为急性早幼粒细胞白血病的治疗因素,因为它导致白血病细胞的分化和凋亡[1- - - - - -6]。这个fda批准的化合物也展示了巨大的潜力antivascular固体肿瘤,血管生成抑制剂在临床前研究。我们是第一批组发现的和选择性肿瘤血管破裂造成的这个代理(7]。随后我们演示了重大thermosensitization肿瘤和肿瘤对放射治疗的增加引起的ATO治疗(8- - - - - -10]。尽管有大量的文献中报告,明确相对较少的细胞和生理机制对实体肿瘤ATO的影响在活的有机体内,特别是对于antivascular药物的影响以及如何使用这些影响设计有效的临床治疗方案7,11- - - - - -14]。

从我们早期的发现,我们的结论是,选择性肿瘤血管关闭造成的ATO诱导大胆划定坏死区域。我们还观察到的增加意味着肿瘤或中位数氧化值ATO治疗后一周(9,10,15]。这些研究,低毒性引起的ATO在我们的经验中,建议,方案组成的辐射,ATO,当地高热已经在临床上使用的可能是更有效的比cisplatin-based联合治疗。

三期临床研究用thermoradiotherapy顺铂已开始(16]。这个临床试验扩展到多中心、国际审判对宫颈癌由于令人鼓舞的初步结果。超过15个不同阶段I, II, III研究比较顺铂/辐射的影响和热/顺铂/辐射已经在过去的20年里(17]。然而,ATO的使用,一个血管破坏剂具有不同的作用机制比传统的顺铂治疗,这可能是有效的病人耐药或不含铂方案,可能是一个更好的候选实体肿瘤的治疗。肿瘤的潜在优势和基质(即。,vascular-) targeted multimodality approach to improved cancer treatment are discussed in the context of using ATO or similar vascular disrupting agents to sensitize the tumor to thermoradiotherapy.

2。材料和方法

2.1。细胞系

FSaII肿瘤
这种纤维肉瘤小鼠的影响(杰克逊实验室)最初从赫尔曼博士获得套装(马萨诸塞州综合医院)。股票细胞存储在液态氮,新的文化建立每2 - 3个月。FSaII肿瘤细胞生长在rpmi - 1640中补充牛10%牛血清。

2.2。肿瘤诱导

FSaII肿瘤细胞在指数增长阶段收获用0.25%胰蛋白酶在Hepes-buffered介质,洗和计算。2×10的皮下注射⁵0.05毫升细胞无血清培养基是由女性的大腿后影响老鼠。

2.3。三氧化二砷

一个ip注射4 - 8毫克/公斤三氧化二砷(ATO或Trisenox^TM头肿瘤学,Inc .,弗雷泽,Pa,美国)是由使用临床等级1毫克/毫升原液为每个鼠标,和成像或治疗后在特定时间执行这个注入。控制老鼠注射同等体积的磷酸盐,pH值7.4。

2.4。顺铂

剂量的2 - 6毫克/公斤顺铂(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)管理ip在盐水的频率表示为每个ATO治疗的研究比较。

2.5。窗口腔肿瘤生长和活体的显微镜

皮褶厚度钱伯斯的阳极电镀铝框架是外科手术植入的背侧皮肤褶皱女性ν/ν老鼠。简单地说,背侧皮肤被夹在两个相同的铝阳极氧化膜轮框架。19毫米×22毫米室举行固定在鼠标三帧之间的螺丝。皮肤也附着在室与四点丝绸。皮肤被观看两岸的地区,暴露出包含微脉管系统的真皮。多余的筋膜在真皮被协助明确微脉管系统的可视化。从石英玻璃载玻片Windows研磨(美国田纳西州追逐科学玻璃,Rockwood)被用来覆盖血管区。窗口之间的距离保持在450人μ米的间隔垫片的内部框架,离开播种肿瘤生长的空间。1 - 2×10⁶基底膜基质的肿瘤细胞被添加在30 uL之前放置的玻璃窗户。治疗和成像进行肿瘤生长和治疗的描述(18]。

2.6。FLIVO试剂

FLIVO (FAM-VAD-FMK 50μ克/瓶,免疫化学技术,LLC布卢明顿,美国明尼苏达州)溶解在50μL 200年添加DMSO和稀释μL无菌PBS, pH值7.4。在30分钟静脉输液注射后的0.1毫升的FLIVO细胞渗透的探针通过尾静脉外侧,荧光图像捕获在20 x使用滨松C2400相机(日本滨松)和百老汇成像软件(美国数据转换、万宝路、质量)在一个Eclipse TE200桌上型显微镜(日本尼康)。

2.7。组织学分析

肿瘤小鼠牺牲,肿瘤治疗后在指定的时间点删除。组织在10%中性缓冲福尔马林固定,,5点处理和嵌入后,组织部分μM是准备和苏木精和伊红染色。奥林巴斯BX40显微镜用于图像在20多个字段x放大然后配合使用Adobe Photoshop。

2.8。X-Irradiation

肿瘤局部辐照与5 Gy /分数由飞利浦250千伏x光机的剂量率1.4 Gy /分钟。身体被屏蔽铅只有肿瘤和脚暴露在x射线。

2.9。高热

肿瘤加热浸泡麻醉小鼠的肿瘤腿预热水60分钟(如前所述8]。组织的水温度和温度是经常用针形测量热电偶(29日计)。thermoprofiles在肿瘤和正常组织在水浴加热已经彻底研究在我们组8]。肿瘤在水浴加热的温度持续0.3 - -0.5°C以下水温。所有引用参考水温温度在高热治疗。

2.10。评估肿瘤的生长

肿瘤体积测量用卡尺(Scienceware)和计算方程:,““是宽度和”“肿瘤的长度。

3所示。结果

如图1(一)顺铂在2毫克/公斤ip和图1 (b)ATO在8毫克/公斤ip给定每4天共三个治疗能够显著提高抗肿瘤效应的辐射结合高热对FSaII肿瘤。单一模式仅略有效,二重形式组合进一步提高了肿瘤生长延迟,但trimodality治疗显然是最有效的延缓肿瘤生长,尤其是在ATO的情况下,近似2倍增加生长延迟相比其他治疗发生(第八天的治疗起)。Cisplatin-based thermoradiotherapy只有白天明显不同于二重形式治疗16开始治疗后()。

为了更加明确地理解潜在的ATO trimodality方案的一部分,我们做了一个后续研究使用顺铂的克分子数相等的金额或ATO(4毫克/公斤ATO MW: 198和6毫克/公斤顺铂MW: 300年,职责)。在这项研究中,ATO又发现更有效的比顺铂在增加肿瘤抑制辐射和高热的影响(与cisplatin-based疗法治疗后第十天开始)。如图2ATO最大限度增加肿瘤生长延迟2.5倍倍比控制肿瘤的生长,而顺铂增加了肿瘤生长延迟响应平均约2倍倍相比,控制肿瘤的动物群体。

整个肿瘤总截面的典型合成图像从一个未经处理的肿瘤和肿瘤治疗cisplatin-based或ATO-based trimodality疗法如图2(插图)。重复辐射的影响,三氧化二砷,热处理显然是明显的标记环组织生活和死亡地区ATO-treated鼠标,而cisplatin-based治疗表明有更广泛地区可行的治疗后肿瘤残留和控制肿瘤显示了同质的活细胞染色架构变化很少。显示的图像是典型的结果从3组控制或trimodality-treated肿瘤组织学和研究做好准备。

随后我们调查了在活的有机体内细胞和生理机制ATO选择性损害实体瘤,增加高热和辐射的影响。我们采用背皮褶厚度窗口室(DSFC)肿瘤组织的活体成像技术18- - - - - -21]可视化实时变化的生理和多血管肿瘤。如图3,ATO导致实质性的和明显的血管损伤相对较大的地区的肿瘤2 h后腹腔注射小鼠肿瘤的关系。荧光pan-caspase探针(FLICA或FLIVO保利- (pan)半胱天冬酶检测)是用于在活的有机体内评估细胞死亡和生存能力,我们之前报道21]。图4显示数量的细胞凋亡的变化发生在FSaII肿瘤生长在窗外室控制肿瘤,2 h后单一剂量的ATO i.p 8毫克/公斤。,2 h after 5 Gy followed by 30 min of 42.5°C heating or 2 h after 5 Gy and 8 mg/kg ATO i.p. followed by 42.5°C heating, as detected by the polycaspase inhibitor. There appeared to be increased apoptotic activity in the representative regions of the tumor in the mouse treated with ATO alone as well as the mouse that received trimodality treatment compared to control tumor or tumor treated with heat and radiation. An intensity plot was made for each image (Figure4),总体均值像素强度计算为每个组。在统计分析的强度值,trimodality均值像素强度被发现显著增加控制相比,ATO单独或结合辐射热量()。ATO单独治疗似乎在视觉上造成更多比肿瘤细胞凋亡对热结合辐射或控制肿瘤,但这并没有发现统计学意义。

4所示。讨论

当前研究的结果表明,分离辐射与三氧化二砷和临床可行的热剂量是一个可行的选择对肿瘤可能没有充分被mono -或接受方案可能对传统cisplatin-based化疗不敏感。我们同意其他一些有趣的研究结果运用各种trimodality临近,一些与其他antivascular或抗血管新生药物(22- - - - - -30.]。鉴于这些结果和所获得的临床效益trimodality涉及更传统的治疗方法(16,17,26,31日,32),持续发展和实施这种治疗策略似乎是有前途的。

很多先前研究三联式方案不包括高热,而是一对反血管增生或其他生物的目标代理更多的标准化疗和放疗(25,33]。这些类型的研究是有趣的,但应该注意的是,它们是完全不同于研究采用热疗机制以来的行动和理由测序为每个策略可能会非常不同。与vascular-targeting代理combretastatin已经非常鼓励和支持代理商的合理使用这一目标heat-based肿瘤脉管系统的多峰性方案(29日,30.,34,35]。然而,这些临床前和临床研究的作者强调的关键需要控制临床试验的测序代理是至关重要的。这些研究和合理设计研究基于已知的ATO合作,辐射,高热强烈建议谨慎关注治疗相结合实现病人利益的最大化。

我们先前的工作已经证明增强辐射诱导生长延迟当ATO之前或之后被辐射。然而,由于我们知道肿瘤血流量迅速减少或废除在某些地区的肿瘤在ATO政府似乎逻辑之前避免缺氧诱导辐射后由管理ATO每个辐射分数。应用热后肿瘤当选是辐射和ATO注入有两个原因。首先,尽管可能会有好处在增加肿瘤氧化,因此肿瘤辐射敏感度热时辐射之前,我们观察到的一个更重要的thermosensitization当高温应用ATO注射后的最大血流关闭。其次,众所周知,辐射损伤修复辐射后被加热。因此,ATO-induced肿瘤和内皮thermosensitivity和潜在抑制DNA损伤修复将导致辐射诱导肿瘤生长延迟最伟大的进步。事实上,肿瘤生长被停职期间在一些动物治疗,建议继续治疗甚至可能获得使用此多峰性肿瘤治疗方法。有可能是其他序列和/或频率的治疗可能更有效的在这些模型。最重要的结果是,三氧化二砷,小说血管破坏剂,可以有效地添加到thermoradiotherapy方案可能有一定的优势和协同方案相比,采用传统的化疗。

我们进一步研究了ATO单独或结合热的影响和放射治疗肿瘤血流和细胞凋亡在活的有机体内采用活体的显微镜和组织学分析。目前我们组的焦点是描绘血管动力学这些治疗后细胞凋亡和肿瘤细胞凋亡。最后,细胞凋亡检测在活的有机体内可以作为一个代理在临床情况下治疗反应的标志。总的来说,我们在这里得到了明确的论证,在此之前,ATO可以是一个强大的辐射,或者thermosensitizing代理(8,9]。其他人也最近发现重大ATO疗法对肿瘤的影响控制通过热烧蚀或分次放射治疗(11,36]。新代理基于三价可能选择性地靶向肿瘤内皮偏方已经达到临床试验,;因此,我们有理由相信,接受临床剂量的砷治疗将会实现在诊所和/或更好的交付策略将有助于积极治疗结果(13,37,38]。

相等或更好的抗肿瘤活性的砷trioxide-based thermoradiotherapy观察cisplatin-based方案相比,我们的研究。这项研究与顺铂克分子数相等的比例ATO(图2)是特别的,它让我们假设ATO有可能改进目前采用trimodality对宫颈癌治疗。的几个antivascular策略目前正在测试功能型或在临床试验中,似乎至少有一个这些代理将成为一个现实的选择,临床医生想要最大化thermoradiotherapy治疗计划的影响。

5。结论

临床试验发展的arsenical-based trimodality策略可能是合理的,特别是针对临床经验的财富已经积累了砷对白血病,淋巴瘤和其他实体肿瘤。一些辐射的持续成功、化疗和hyperthermia-based试验表明,有很多与代理有选择性地获得目标和干扰固体肿瘤血管和血管生成能力不同,然而互补,ATO等机制的行动,热疗法、放射疗法。

确认

这项研究是由国家授予CA44114和中央阿肯色州放射治疗协会(CARTI)。作者感谢Radhakrishnan纳博士与Matlab分析寻求帮助。

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