在西班牙死亡率最高的特定胃癌人群中HER-2的评估

摘要

胃癌(GC)仍然是全球癌症相关死亡的第二大原因。根治性切除是早期治疗的主要方法，对晚期患者的总生存率影响不大。HER-2是最相关的生物学因素。目的．本研究旨在揭示HER-2阳性与胃癌完全切除患者生存的关系。方法．回顾性研究2003-2005年在本院确诊的胃癌患者。手术标本进行免疫组化(IHC)，病例中+/++/+++标本同时进行HER-2荧光原位杂交(FISH)分析，并根据专家共识进行分级。结果．120例案件。7.5％检测到的总体表达。检测到HER-2阳性和女性性交，晚期阶段或组织学等级或肠型之间的相关性。HER-2阳性的早期复发（66.6％对35.4％，）.c-erbB-2阳性的中位DFS为15个月(范围2-67个月)，OS为25个月(范围10-67个月)。在c-erbB-2患者中，中位DFS为27个月(范围5-67个月)，该样本的OS为47个月(范围29-67个月)。结论．这些结果强调HER-2阳性在胃癌中作为独立预后因素的相关性，并支持目前日常实践中的分析。

1.介绍

尽管胃癌的总体发生率（GC）近几十年来，但它仍然代表全球癌症相关死亡的第二次原因[1］.两种发病率和生存率都有很多地理变异[2］.日本的存活率最高，其高发病率导致在高危人群中实施筛查措施。这些措施提高了早期发现率，预后良好[3.- - - - - -5］.

西班牙的生存率高于欧洲平均水平，5岁时有23%的患者存活，但在其发病率较高的地区(Castilla和León)除外，那里的死亡率最高[6］.

如今，激进切除仍然是治疗的主要支柱，尽管手术技术的进展以及具有化疗或围手术期的新治疗策略的发展，但总存活（OS）并未显着改善[3.，7］.

近年来，GC的表示模式发生了变化[7，且近端肿瘤的发生率相对增加。尽管它们的生物学行为与远端肿瘤相比具有更强的侵袭性，但在新的预后因素方面进展甚微。因此，TNM分期仍是最相关的预后因素。因此，同一肿瘤分期的个体之间存在广泛的异质性。此时，有必要有额外的分类参数或生物标志物来识别具有不同生物学特征的患者亚组，这些亚组与预后和/或治疗反应更密切相关[8］.

在这种情况下，更好地理解GC的生物学基础将是有帮助的。近年来，许多与散发性胃癌发生有关的生物因子已经被发现，但其中大部分的临床相关性尚未得到证实[9］.HER-2蛋白是一种跨膜酪氨酸激酶受体，是表皮生长因子受体(egfr)家族的成员[8］.家庭由四名成员组成(HER-1至HER-4)。除了HER-3之外，所有HER-3都具有相同的分子结构，包括配体结合的胞外结构域、短跨膜结构域和具有酪氨酸激酶活性的胞内结构域。HER-3是这个家族的一个独特成员，因为它的激酶结构域缺乏某些已知的对其他激酶的催化活性至关重要的残基[10.］.

配体与其受体结合引发信号级联，影响肿瘤生物学的许多方面，如细胞分化、增殖和细胞存活[11.，12.］.

HER-2蛋白由位于17 Q 21的染色体上的基因编码，其用作癌中的癌基因，因为其过表达诱导细胞膜中蛋白质的扩增，因此恶性细胞对其生长性能有利。

Her-2在许多类型的癌症发展中的作用是众所周知的，特别是在侵袭性乳腺癌中，其中在10-34％中检测到细胞膜和/或基因扩增中蛋白质过度表达，与更差相关预后并成为化疗和荷尔蒙治疗的不良反应的预测因子[8］.虽然这种过度表达在其他肿瘤中也被检测到，但在内的其他肿瘤中检测到，但其预后的影响并未明确地确定[13.，14.］.曲妥珠单抗的出现增加了人们对这种生物因子的兴趣，曲妥珠单抗是一种人源化IgG1单克隆抗体，它特别结合HER-2的细胞外结构域，提高了乳腺癌早期和晚期的生存率[8］.这些结果促进了HER-2蛋白在其他类型肿瘤中的预后意义，具有高发病率和少数治疗选择，如GC。在1986年通过免疫组织化学（IHC）首先首先描述这种疾病中HER-2的过度表达[8］.几种出版的系列表明，IHC的阳性率在IHC的6.8％和34％之间，荧光原位杂交或鱼的荧光扩增基因拷贝数为7.1％至42.6％[15.- - - - - -17.］.

它们还在肠型肿瘤和近端位置（胃食管连接）中显示出较高的正性率[8］.

另一方面，Funato等人使用过表达HER-2的GC细胞株，发现这使顺铂具有敏感性，提示阳性可能是对该药物反应的一个预测因子[18.］.

虽然有几项研究已经试图证明其预后作用，但这并未明确证明[13.，14.］.一些研究表明，在激进切除后GC的过度表达和/或扩增是与胃壁侵袭，淋巴结受累，未分子肿瘤的深度有关的独立预后因素，以及减少无疾病存活（DFS）或OS [15.- - - - - -17.，19.］.

本研究试图展示在西班牙中心居住在高危地区的患者的特定患者的特定患者中患者的阳性和生存之间的关系。

2.材料和方法

2.1。研究设计和合格的人口

这被设计为在2003年至2005年期间诊断患有GC的患者的回顾性研究，该患者在Valladolid（Castilla和León，西班牙Castilla和León）的临床大学医院病理学部门分析了组织病理学。如果他们在组织学证实胃或胃果食管交界处具有组织学证实的腺癌，男性和女性有资格包含。所有这些都必须经历完整的激进切除R0，并遵循我们的制度标准随访。主要排除标准包括诊断中的诱导化疗或转移。

２.２.病理研究

分析是在组织切片上进行的，这些组织块通常用福尔马林固定并包埋在石蜡中。通过免疫组化对这些样本进行过表达分析，在有+/++/+++的情况下，这些样本还使用下面所述的技术对HER-2扩增进行了分析。

根据制造商协议，通过IHC通过IHC（Dako K5207手动过程数量）进行IHC进行肿瘤进行测试。对于IHC的评估，我们根据面板评分GC的建议，使用了4级等级的膜染色毕业：0,1 +，2+，3+ [20.]（见表1）.

我们也做了FISH。在这个过程中，我们使用了DAKO试剂盒pharmDx。HER-2的扩增率由HER-2拷贝数/着丝粒数的比值(HER-2/CEP 17(着丝粒探针17))决定。≥2为阳性，表明基因扩增。17号染色体多体定义为平均每个细胞≥3个CEP 17信号。

分析由两位经验丰富的病理学家独立进行。如果没有一致的评估，他们都会分析案件，结果是通过共识获得的。

如前所述，该技术与免疫组化常规联合应用于至少+免疫组化的所有患者，以评估一致性。

2.3。终点

主要终点为DFS和OS。DFS定义为从根治性手术到复发、除癌症以外的任何原因死亡或最后一次随访的时间。骨肉瘤被认为是根治性切除直到任何原因死亡。

次要终点包括GC中过表达和/或扩增的频率，进展时间和过表达状态与/或与其他病理，解剖学或相关人口统计学特征之间的相关性。

２.４.研究变量

我们审查了每种情况的病历，并收集了临床，人口统计和病理数据。

人口统计数据是患者，年龄和性别的原产地。

临床和病理数据是，例如肿瘤位置，内镜外观，劳伦组织学类型，内镜诊断日，自由基切除日期，TNM病理阶段，转移节点的比例/分析节点，佐剂治疗，复发日期，位置再次发生，复发类型（单/多次），提款日期或最后一次后续访问时间表，最后一次访问的患者状态，死亡日期和原因。

2.5。统计分析

数据被纳入为此目的而设计的数据库中，以便使用SPSS 8.0进行后续统计分析。

我们对病例特征进行了描述性研究，并根据HER-2状态进行了分层汇总分析。

已经使用Chi-Square测试评估了统计关联。

定量变量用中位数和极差表示。定性变量的绝对值和百分比。生存资料采用Kaplan-Meier法进行分析，log-rank检验有统计学意义。我们进行了单因素和多因素分析，以确定HER-2过表达和/或扩增等因素作为独立与DFS和OS相关的预后指标的作用。

3.结果

3.1。C-ERBB-2的阳性率和与其他临床病理因子的相关性

我们分析了120例患者接受了全面的GC完全激进的切除术。患者特征在表中描述2．

在8例中记录了IHC 3+的HER-2蛋白的高表达，并在7.5％的肿瘤中检测到总体表达（IHC 3+或IHC 2+和鱼阳性）。这些结果描述于表中3.．

的发病率c-erbB-2肿瘤主要位于逆行幽门(虽然在这一点上没有发现统计学意义)和肠型的女性阳性较高。此外，发现晚期肿瘤(pT3-4和淋巴结累及)的患者在亚组中也占较大比例c-erbB-2如表所示4．

３．２．递归式

中位随访38个月(15-67个月)后，HER-2阳性患者的复发率为66.6%(9例中6例)。

在这些情况下，复发的中值时间为9个月（2-16个月），与HER-2负患者样本中的19个月（15-38个月）相比，这些差异在统计上显着（）.

HER-2阳性肿瘤中的大部分复发处于距离或组合（招待和遥远），而其中在其中1中仅在对照内窥镜检查中检测到型型转发，尽管他不适合激进治疗。在患有肿瘤复发的患者中，在统计上显着的时间差异，根据状态c-erbB-2．因此，HER-2阳性亚组(6例患者中4例)在诊断后第一年(早期复发)的患者比例高于阴性亚组(66.6% vs 35.4%，）.

３．３．生存

在整个研究期间，由于患者亚组中的肿瘤疾病，我们记录了两种（22.3％）死亡c-erbB-2积极的。在这个亚群体中，有三个人还活着疾病。其余的正在进行姑息治疗。人口中位数DFSc-erbB-2阳性15个月(2 ~ 67个月)，阴性27个月(5 ~ 67个月)(）.HER-2阳性的OS为25个月(范围10-67个月)，但伴有c-erbB-247个月为阴性(范围29-67个月)(）.

3.4。单变量和多变量分析

我们的单因素分析显示HER-2状态、性别、晚期、淋巴结转移与生存差相关。

多变量Cox分析只确定了c-erbB-2晚期为独立预后因素(数据未包括在内)。

4.讨论

我们的研究结果发现，通过在IHC ++的情况下扩增IHC的IHC蛋白HER-2的过表达证实，并且在根治切除后，GC的独立预后因子，与早期复发相关统计学意义（在激进切除后一年中）。

在这方面，我们发现，在这个时间段出现的复发中，66.6％在HER-2阳性亚组中，相比于35.4％检测到c-erbB-2负(）.

另一方面，单变量和多变量分析还透露，它是一种与更严重的存活率相关的独立因素。这两个事实使我们的结果与其他公布的研究，前瞻性或回顾性一致，表明HER-2 / Neu基因状况的常规评估应该是规则，因为它是GC的新预后因素。

根据HER-2状态子组，该分析在中位时间进行了统计时间的统计学意义差异。通过这种方式，与HER-2阳性（中位数9个月）的患者获得了较短的时间，而与HER-2负样品（19个月）相比。类似地，DFS或OS存在差异，有利于过表达和/或扩增的那些病例c-erbB-2没有检测到。

García等人的研究表明，在Surg Incol 2003中发表，揭示了生存数据对Her-2的患者以统计上显着的方式[19.我们发现了我们的研究。

我们还发现了统计学上显著的正相关c-erbB-2女性、未分化的组织学分级肿瘤、肠道组织学类型和有无淋巴结转移，与有无6个以上淋巴结转移有有趣的相关性(）虽然具有边际意义。

相反，我们没有检测到与肿瘤位置的显着关联（绕线与其他地点），尽管大多数位于蛛网植物中。在这个主题中，我们与其他公布的研究不同，该研究已经发现阳性之间的显着相关性c-erbB-2以及在胃食管连接处存在肿瘤。Tanner等人。发现位于联盟或胃部的肿瘤或胃的其他区域的阳性率范围为24％至12％，[21.］.ToGA的试验也以同样的方式显示，结果介于32%到18%之间[22.),分别。

另一方面，关于GC中蛋白过表达与基因扩增的一致性一直存在争议。最近的研究报道了免疫组化过表达和FISH扩增之间的高度相关性。

Yano等人的研究。在IHC +++的情况下，全面的一项齐全率为87％（IHC ++的58.8％，88％）[23.］.Toga审判还发现了高总统的高速度（87％）[22.］.

所有这些研究也表明外科标本和活检标本之间的一致性很高。

对他人来说，我们的研究已经获得了较低的一致性率，与上述那些不同。我们获得的总体协议为42.8％，这意味着IHC（+至+++）只有9例21例，鱼类癌症扩增。在文献中，它认为是由于IHC 0/1 +的病例，这也是通过鱼的基因扩增。在Toga试验中，这一事实是在IHC ++和鱼阳性百分比几乎相同的百分比（23％和26％，Arch。）22.］.但我们没有对IHC为0的病例进行FISH检测。

我们通过免疫组化检测发现HER-2与+++的一致性为100%，所有患者均有FISH癌基因扩增。相比之下，在IHC ++病例中，一致性要低得多，仅在16.6%的患者中发现。

这一发现可以支持癌基因的扩增的假设c-erbB-2可能不是唯一涉及蛋白质在GC中蛋白质的过表达的机制，如图Kameda等人所示。[24.］.另一方面，好莱坞和赫斯特的作品[25.还建议通过其他基因的转录激活如转录激活，通过其他分子策略发生过表达。这种差异的另一个合理的解释可能与CG中低于Her-2过表达的事实有关。这可能涉及对原发性抗体的非特异性结合或对联合的过度定义的较高速率。总之，我们的研究表明，HER-2的阳性率低，但与文献中发表的其他系列相似，接近20世纪90年代甚至最新的GRÁVALOS和JIMENO研究中发表的初始系列[8］.这可能是由于在诊断中排除转移患者甚至考虑在我们的项目中纳入患者的延长时间延长时，这些标本的固定协议具有许多差异，可能会有所贡献假的假否定。

5。结论

CG是全世界癌症死亡的第二个主要原因，因为大多数人被诊断出在没有治愈的先进阶段。在这种情况下，全身化疗仍然是唯一的治疗方式，尽管结果不佳，所以需要新的策略。

每次有更多的证据表明，在这些患者中她-2患者的重要性，阳性与疾病的侵略性导致的存活结果差。

有实验模型显示曲妥珠单抗（抑制她-2的单克隆抗体）抑制人GC的生长。由于这些有前途的数据，已经与铂基化疗结合具有良好效果的临床试验。

我们的工作有助于强调该生物标志物在西班牙中部高危GC人群背景下的重要性。尽管这是一项有局限性的回顾性研究，这些结果使我们更好地理解了该蛋白作为预后标记物和间接作为治疗靶点的相关性，并鼓励我们继续在分子途径方面进行研究，以改善整体结果和优化临床应用。

资金

该研究得到了卫生部在卡斯蒂利亚和莱昂（西班牙）的资助（San / 1817/2008）的支持。

承认

感谢藤本大内香织博士(日本研究中心)的支持。

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