文摘

背景。小分子核糖核酸是一种小型的非编码RNA分子,已经被证明可以控制在真核生物基因表达。异常表达和microrna的变更可能负责人类疾病包括癌症。一个miR16-1( )+ 7基因突变被发现在家族性慢性淋巴细胞白血病患者中,其中一个报道乳腺癌的家族史。miR16-1规范的表达bcl - 2视网膜母细胞瘤,这是很重要的,位于一个基因组区域,经常迷失在鼻咽癌和肝细胞癌(hcc)。因此,miR16-1可能是潜在的重要的几个实体肿瘤的病因。理解的力量miR16-1( )+ 7突变作为预后和诊断风险因素,我们调查了七种不同类型的癌症患者的突变包括188年乳腺癌、卵巢、22个鼻咽癌,102 96肝癌,872年慢性粒细胞白血病(CML), 39慢性淋巴细胞白血病(CLL)和46眼癌病例从三个不同的种族和遗传和零星的病因。方法。 核酸酶TaqMan SNP基因分型检测是用来检测miR16-1基因 替换。结果。miR16-1 ( )+ 7替换没有检测到任何的组织进行了研究。结论。考虑到我们的大规模研究中,表示不同的种族和遗传风险的水平,我们得出这样的结论miR-16-1( )+ 7突变并不是一个好为癌症诊断或预后指标的风险测试。

1。介绍

小分子核糖核酸是一组小的非编码RNA (ncRNA)已确定在许多生物分子(1,2)和调节基因的表达在多种真核系统。最近的人类microRNA基因的基因位置的分析显示,50%位于癌症相关的基因区域或脆弱的网站(3,4]。最近,Calin等人发现在六个microRNA基因突变(miR-16-1、miR-27b miR-29b2/29a, miR122a, mir - 187, mir - 206)患者的慢性淋巴细胞白血病(CLL) [5];这些突变被发现在一组160个人没有癌症( )[5]。一个生殖系突变,miR16-1 ,导致减少的表达miR-16-1在体外和体内。自从miR16-1凋亡抑制bcl - 2bcl - 2, miR16-1下降将导致过度,这是一个共同的特点在慢性淋巴细胞白血病(6]。之前的数据表明miR16-1和miR15a像在慢性淋巴细胞白血病肿瘤抑制。杂合性丢失加上生殖系突变的结合在这个区域是一致的与次突变模型的肿瘤抑制基因的失活。因此,有害突变的存在miR-15a和miR-16-1表明这个新类rna可能扮演了一个重要的角色在许多零星和遗传性癌症。miR-15a和miR-16-1位于染色体13 q14.3接近吗BRCA2经常变异的遗传性乳腺癌和卵巢癌,和Rb删除或突变的眼癌和肉瘤。事实上,一个患有慢性淋巴细胞白血病的突变被发现了乳腺癌的家族史。也许,miR16-1可以与失活突变miR16-1修改临床表型(7]。一些癌症,包括鼻咽和肝癌,高频的LOH miR15a / miR16-1附近。邵等人发现,78%的鼻咽肿瘤13问[LOH8];另一组发现鼻咽癌在LOH频率最高位点D13S133 q14.3[13日(53.6%)9]。在肝细胞癌,LOH subchromosomal地区13 q12.3 - 14.1和13问明显与先进的肿瘤阶段和较大的肿瘤大小有关(10]。此外,纯合子缺失13 q12.11明显与早发性肝细胞癌(11]。最后,因为没有数据在米尔16 CML的突变,这些患者纳入本研究。我们1428生物样本包括组织和血液的DNA共有1365名患者被诊断为不同类型的癌症,包括乳腺癌和卵巢癌、肝癌,CML,慢性淋巴细胞白血病鼻咽癌,并使用的TaqMan测定视网膜母细胞瘤miR16-1基因 替换。

2。材料和方法

研究人口由188乳房癌(108例和80例乳腺癌和卵巢癌家族史),102卵巢癌(23例和79例乳腺癌或卵巢癌的家族病史),96肝癌22鼻咽癌,872 CML, 39慢性淋巴细胞白血病,和46个零星的视网膜母细胞瘤的病例。为一些零星的乳腺癌和卵巢癌病例血液和组织DNA测试(40 108零星的乳腺癌和23日23零星的卵巢癌患者)总共1428标本1365例(表1)。之间的肝癌病例招募12月,1998年和2005年7月,从一个肝癌流行地区在中国南部。从卵巢组织标本,鼻咽癌和视网膜母细胞瘤患者的血液样本CML和慢性淋巴细胞白血病患者从土耳其收集病人的肿瘤研究所,伊斯坦布尔大学在1991年和2000年之间。乳腺癌病例的样本收集在两个独立的研究;患者的土耳其(肿瘤学研究所)和美国的起源(哥伦比亚大学医学中心),收集了1991 - 2005和1995 - 2005年之间,分别。的分析miR16-1基因 替换使用 核酸酶TaqMan SNP基因分型检测。TaqMan引物和探针设计的应用生物系统公司Inc .(美国ABI,加州福斯特城)的序列数据桑格中心网站(http://www.sanger.ac.uk/Software/Rfam/mirna/)。探针的标记与家人或维克;等位基因的特定杂交和降解允许歧视突变与野生型序列。控制,两个100个基点合成寡核苷酸(美国加州表达载体,Carisbad)对应于野生型或突变序列被用来验证探针的特异性。反应是准备如下:10 L TaqMan普遍掌握混合,在20 L反应最终卷,20 ng DNA, 0.2 L TaqMan SNP基因分型检测混合(80 x)导致的最终浓度为引物900 nmol / L, 200 nmol / L的调查。热循环条件95°C 10分钟,然后40 95°C的周期为1分钟15秒和60°C。热循环是ABI-Realtime 7500系统上执行使用绝对定量程序标准与ABI SDS软件版本1.2.3。每个96孔板包含92个测试样本和四个反应控制,包括nontemplate、合成寡核苷酸的纯合子C或T等位基因和合成寡核苷酸结合杂合子。

表1
癌症患者的分布研究。

3所示。结果与讨论

小分子核糖核酸可以参与癌症的起始和进展及其表达式分析可以利用分类,人类恶性肿瘤的诊断和预后。此外,生殖系和体细胞突变在几个microrna似乎对癌症预期和发展作出贡献。要理解这一点,我们搜查了1428生物标本,包括组织和血液的DNA共有1365名患者被诊断为不同类型的癌症,包括乳腺癌和卵巢癌、肝癌,CML,慢性淋巴细胞白血病,鼻咽癌和视网膜母细胞瘤miR16-1( )+ 7突变。

我们没有发现任何突变在1428年的1365例样本进行了分析。我们的研究涵盖范围广泛的癌症类型包括实体肿瘤(乳腺癌、卵巢癌、鼻咽和HCC)、白血病(CML,慢性淋巴细胞白血病)和儿童癌症(视网膜母细胞瘤)。我们也分析了DNA样本个体代表几个种族包括美国(主要是白人),中国和土耳其,在某些情况下(乳腺癌和卵巢癌)患者和癌症家族史。

生殖系中发现的突变miR-16-1和miR15a主要前体造成低水平的microRNA表达在体外和体内,并与正常删除关联的等位基因在慢性淋巴细胞白血病(5]。然而,结果还没有一致的(12]。小分子核糖核酸miR-15a和miR-16-1位于该地区的13个q13.4删除。这个地区经常被删除或在慢性淋巴细胞白血病细胞和表达下调miR16-1( )+ 7种系突变被发现在一个家族性慢性淋巴细胞白血病患者也有乳腺癌家族史(5]。BRCA2和Rb变异的遗传性乳腺癌和卵巢癌和视网膜母细胞瘤患者,相对接近miR16-1基因,一些肿瘤如鼻咽癌、肝癌有LOH暗示miR16-1 在其他癌症突变可能是重要的。miR16-1突变 在NZB侧翼地区最近发现人类慢性淋巴细胞白血病小鼠作为模型,进一步支持一个独特的角色miR16-1在慢性淋巴细胞白血病(13),表明 替换miR16-1基因影响成熟的microrna的表达水平(5]。慢性淋巴细胞白血病的突变的比例是2.6% Calin等人的研究中,一个病人是一个遗传性慢性淋巴细胞白血病案例和家族性乳腺癌史的历史。此外,我们没有发现任何miR16-1 突变在慢性淋巴细胞白血病组的病例没有遗传性慢性淋巴细胞白血病和癌症历史在他们的家庭。我们的研究结果为miR16-1 突变在慢性淋巴细胞白血病是整合的研究Borkhardt et al .突变的频率可以为特定的人口和不同遗传背景的病人和种族会影响结果。

我们的研究结果表明,突变的microrna的结果并不像一个预后和诊断信息我们研究不同类型的癌症的危险因素。miR16-1 突变可能是重要的其他实体瘤如结肠癌和肺癌,尤其是b细胞非霍奇金淋巴瘤来自相同的慢性淋巴细胞白血病祖细胞谱系分支。

4所示。结论

在我们的大规模研究与代表来自不同种族和不同程度的遗传风险,我们没有确定任何情况下与miR-16-1 突变的癌症检测。然而,我们测试的存在只有一个类型的一个microrna基因的突变。许多microrna基因已经调查了不同类型的变异在不同类型的癌症。因此,进一步的研究是必要的,以确定的重要性分布的microrna的突变致癌作用。

确认

h . Yazici是雅芳的接收者Foundation-AACR乳腺癌研究的国际学者奖。这项工作是由国家卫生研究院的基金ES09089和CA013696支持。