文摘

背景。系统性红斑狼疮(SLE)是一种慢性全身性自身免疫性疾病,常引起肾脏损害。因此,我们测量了等离子体的细胞因子水平可能与系统性红斑狼疮患者肾脏功能障碍有关。方法。探讨系统性红斑狼疮肾患者功能障碍之间的差异和健康志愿者血浆细胞因子水平的使用人类细胞因子抗体筛选数组。然后,我们选择了14个细胞因子升高的验证与扩大人类磁Luminex试验样本容量。血浆样本与系统性红斑狼疮患者( )和健康志愿者( )。结果。细胞因子抗体阵列数据显示升高血浆细胞因子在系统性红斑狼疮肾患者功能障碍而健康的志愿者。通过使用人类磁Luminex试验,我们发现,等离子体CHI3L1的水平,GDF-15, IGFBP-2, MIF, ST2, TFF3, uPAR在系统性红斑狼疮患者明显高于健康志愿者。等离子体水平的CXCL4活跃组显著低于非活动组和等离子CHI3L1的水平,IGFBP-2, MIF, MPO活性组显著高于非活动组。我们也分析了血浆细胞因子水平之间的相关性和SLEDAI-2K,和我们的研究结果表明,等离子体水平的14个选择细胞因子与SLEDAI-2K弱相关或不相关。我们进一步分析了细胞因子之间的相关性和肾脏功能障碍。等离子体水平GDF-15和TFF3高度与血清肌酐水平呈正相关,24小时尿蛋白水平。结论。我们的数据表明,等离子体水平GDF-15和TFF3的系统性红斑狼疮患者潜在的肾脏功能障碍标记,但等离子体水平的细胞因子与SLEDAI-2K不相关。进一步的研究是必要的,以确定如何将这些细胞因子调节炎症反应,对系统性红斑狼疮患者发生肾功能不全。

1。介绍

系统性红斑狼疮(SLE)是一种慢性全身性自身免疫性疾病引起多个器官系统损害和特点是抗核抗体(ANA)生产(1,2]。系统性红斑狼疮的流行在中国人口估计大约每100000人(40例3]。考虑到中国的庞大人口,这将是世界上最大的集群情况下。在过去的十年里,已经有增加了解系统性红斑狼疮的潜在的自身免疫过程,包括细胞因子的调节异常,增加表达的I型干扰素(IFN)调节基因,和激活autoreactive B细胞(2,4]。也表明,免疫失调先于临床疾病的发展在系统性红斑狼疮(4,5]。

狼疮肾炎(LN)显著影响系统性红斑狼疮患者的生活质量和寿命6]。肾功能不全是第二个中国系统性红斑狼疮患者死亡的主要原因7]。然而,传统的临床参数不够敏感或特定检测活动和早期复发LN (8]。据报道,一些系统性红斑狼疮患者细胞因子,如干扰素-αB淋巴细胞刺激器(布莱)IL-17, il - 1β、相关疾病活动和器官参与(9- - - - - -11]。识别LN的潜在生物标志物,它的角色是至关重要的细胞因子在系统性红斑狼疮患者肾脏功能障碍。

在这项研究中,我们调查了血浆细胞因子水平之间的相关性和中国系统性红斑狼疮患者的肾脏功能障碍。我们观察到等离子体水平GDF-15和TFF3的潜在中国系统性红斑狼疮患者的肾脏功能障碍标记。此外,需要注意的是,在系统性红斑狼疮细胞因子的表达和功能影响不同人种/种族和环境风险。

2。材料和方法

2.1。病人和样品

系统性红斑狼疮患者( 在1997年美国风湿病学院(ACR)分类标准更新)是从南昌大学第二附属医院招募2017年和2019年之间。系统性红斑狼疮患者和8名健康志愿者招募了七十二人。所有病人提供通知书面同意,研究伦理委员会批准的南昌大学第二附属医院(201620号)。患者的疾病活动和并发药物被医生评估,和空腹血样采集。临床特征和血清学数据相关的ACR分类标准回顾性收集从医院记录。血清自身抗体和补体水平测量使用标准的实验室化验。系统性红斑狼疮疾病活动测量使用系统性红斑狼疮疾病活动指数2000 (SLEDAI-2K)。被定义为活跃的疾病 。所有血浆样本存储在-80°C到分析。

2.2。人类细胞因子XL数组

探讨细胞因子的水平差异系统性红斑狼疮肾患者功能障碍( ,系统性红斑狼疮组)和健康志愿者( ,对照组),细胞因子的平均水平相比,等离子体是在团体使用人类XL细胞因子蛋白质组分析器™数组(ARY022b、研发系统、美国)制造商的指示。简单地说,一夜之间,预先混合等离子体被孵化与屏蔽膜在4°C。膜清洗,孵化为1小时检测抗体的鸡尾酒,和洗了三次,然后孵化与链霉亲和素结合辣根过氧化物酶为30分钟。表达式使用一种增强化学发光检测可视化工具包(# RPN2106,通用电气医疗集团生命科学,美国)。半定量的分析是由测量的密度乐队使用ImageQuant拉斯维加斯4000微型生物分子成像(美国通用电气医疗集团生命科学)。

2.3。量化的血浆细胞因子

检测血浆细胞因子水平,我们进行了人类磁Luminex化验(LXSAHM-14)使用Luminex x - 200。14个细胞因子检测,包括布莱,碳碳趋化因子配体5 (CCL5)几丁质酶3像1 (CHI3L1 C-X-C图案配体4 (CXCL4),生长分化因子15 (GDF-15),细胞间细胞粘附molecule-1 (ICAM-1)、胰岛素样生长因子结合protein-2 (IGFBP-2)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、髓过氧化物酶(MPO),抵抗素,serpin E1,抑制致瘤性2 (ST2),三叶草因子3 (TFF3), urokinase-type纤溶酶原激活物受体(uPAR)。简单地说,50μL标准或样品和50μL微粒鸡尾酒被添加到每个微型板块的好。板是孵化2小时在室温下在水平轨道微型板块瓶。盘子洗后,50μL的稀释biotin-antibody鸡尾酒添加到每个好和孵化瓶1小时在室温下。盘子洗后,50μL稀释streptavidin-PE被添加到每个。板是孵化瓶在室温下30分钟。盘子洗后,样本90分钟内阅读使用Luminex x - 200分析仪。

2.4。统计分析

所有的数据呈现的 。在每组变量正态分布是否确定。分析的数据不是正态分布,对数变换。统计分析是由未配对 - - - - - -测试两组之间,以及变量之间的相关性评估使用皮尔逊测试(GraphPad软件GraphPad棱镜7日,Inc .)。一个值小于0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。在系统性红斑狼疮患者细胞因子水平升高而健康的志愿者

三个系统性红斑狼疮患者和三个健康志愿者招募为人类XL细胞因子蛋白质组分析器™数组,其中3/3(100%)和3/3(100.0%)是女性,平均年龄(±SD) 和 年,分别(表1)。细胞因子阵列数据显示,系统性红斑狼疮患者的血浆细胞因子水平升高与健康志愿者(图1(一))。然后,我们选择了14个细胞因子升高的验证与扩大样本量(图1 (b))。

七十二年系统性红斑狼疮患者和8名健康志愿者招募,其中65/72(90.3%)和8/8(100.0%)是女性,平均年龄(±SD) 和 年,分别(表2)。等离子体CHI3L1的水平,GDF-15 IGFBP-2, MIF, ST2, TFF3, uPAR相比,系统性红斑狼疮患者明显高于健康志愿者(图1 (c))。没有明显差异的其他7细胞因子(补充图。1)。

3.2。微分表达式活跃的和不活跃的系统性红斑狼疮患者的细胞因子

系统性红斑狼疮患者组中,48/72例(66.7%)有活动性疾病( )。活动组比不活跃的年轻组( vs。 年)(表2)。等离子体水平的CXCL4活跃组显著低于非活动组和等离子CHI3L1的水平,IGFBP-2, MIF, MPO活性基团而显著的高于非活动组(图2)。没有明显差异的其他9细胞因子(补充图。2)。我们也分析了血浆细胞因子水平之间的相关性和SLEDAI-2K,和我们的结果表明,这些细胞因子的血浆水平弱相关或不相关的SLEDAI-2K(图3)。

3.3。相关的血浆细胞因子水平与肾脏功能障碍的临床参数

我们进一步分析了细胞因子之间的相关性和肾脏功能障碍。等离子体CHI3L1的水平,GDF-15 IGFBP-2,抵抗素,TFF3 LN患者明显高于在系统性红斑狼疮患者肾脏参与(图4)。没有明显差异的其他9细胞因子(补充图。3)。等离子体水平GDF-15和TFF3高度呈正相关,血清肌酐水平和24小时尿蛋白水平( , ,数据5(一个)和5 (b))。之间没有明显的相关性肾脏功能障碍和其他11细胞因子(补充图。4和补充图。5)。

4所示。讨论

细胞因子调节异常是系统性红斑狼疮的特点(2,12]。增加在系统性红斑狼疮患者血浆细胞因子水平被发现。反过来,这些细胞因子有许多影响驱动狼疮病理生理学,以及增加器官损伤。在我们的研究中,等离子体CHI3L1的水平,GDF-15, IGFBP-2, MIF, ST2, TFF3, uPAR在系统性红斑狼疮患者明显高于健康志愿者。符合我们的研究中,据报道,等离子体水平的IGFBP-2, MIF, ST2, uPAR增加相比,系统性红斑狼疮患者和健康志愿者(13- - - - - -19]。先前的研究表明MIF作为系统性红斑狼疮的治疗目标,在活的有机体内microrna MIF抑制下游细胞因子减少生产和改善小鼠狼疮肾炎(13,14]。然而,升高血浆CHI3L1的角色,GDF-15, TFF3系统性红斑狼疮患者仍然是未知的。

此外,据报道,系统性红斑狼疮疾病活动的相关细胞因子的水平,比如pentraxin-related蛋白质配体(PTX3)和C-X-C图案10 (CXCL10) [9]。我们发现CXCL4水平和降低CHI3L1升高,IGFBP-2, MIF, MPO水平活动的系统性红斑狼疮患者较不活跃的系统性红斑狼疮患者。此外,等离子体水平的这些细胞因子与SLEDAI-2K弱或不相关。据报道,血清IGFBP-2活跃的系统性红斑狼疮患者的水平明显高于那些不活跃的系统性红斑狼疮或健康志愿者在一群中国系统性红斑狼疮患者(17]。增加了系统性红斑狼疮的等离子MPO水平也被报道在巴西20.]。然而,在血浆MPO水平没有显著差异活动的系统性红斑狼疮患者和不活跃的系统性红斑狼疮患者,没有血浆MPO水平之间的相关性和SLEDAI-2K ( , )(20.]。来自澳大利亚的一项研究也报道降低系统性红斑狼疮患者血清MPO水平与健康志愿者(21]。然而,我们发现在活跃的系统性红斑狼疮患者血浆MPO水平高于不活跃的系统性红斑狼疮患者,和等离子SLEDAI-2K (MPO水平弱相关 , )。相比之下,在希腊的一项研究显示,等离子体水平的CXCL4之间类似的系统性红斑狼疮患者和健康志愿者22]。目前尚不清楚为什么不同国家的研究结果不一致。看来环境暴露和种族/民族可能影响细胞因子的表达和功能在系统性红斑狼疮(23,24]。

大多数器官可以参与系统性红斑狼疮,典型的主要器官表现在肾脏和中枢神经系统(25]。人们已经发现,更多的狼疮肾炎的病例和更少的神经精神狼疮病例检测系统性红斑狼疮患者在中国比在其他国家的系统性红斑狼疮患者(26]。更高比例的中国患者伴有肾病(47.4%)比欧洲患者(27.9%)(26]。需要密切关注中国系统性红斑狼疮患者肾脏功能障碍的诊断和治疗。小说血清和尿液标志物,如细胞因子和趋化因子,评价检测早期耀斑LN (8]。在我们的结果中,等离子体CHI3L1的水平,GDF-15, IGFBP-2,抵抗素,TFF3 LN患者明显高于在系统性红斑狼疮患者肾参与。此外,等离子体水平GDF-15和TFF3与肾脏功能障碍的临床参数高度呈正相关。IGFBP-2或许能区分活跃肾系统性红斑狼疮活动nonrenal或不活跃的系统性红斑狼疮(17]。然而,我们的研究结果表明,IGFBP-2水平并没有与肾的临床参数功能障碍( ,补充图。3和补充图。4)。据报道,GDF-15和TFF3与肾脏功能障碍疾病。GDF-15建议是心脏损伤的标志和肾功能障碍接受心脏手术的患者27,28]。循环GDF-15水平显著增加慢性肾病进展的风险(29日]。TFF3被认为是一个高度敏感的和特定的尿生物标志物监测药物引起的肾损伤在临床试验30.]。此外,血清和尿液的浓度TFF3与慢性肾病严重的阶段,这些TFF3的浓度增加可能是由于从受损的肾脏肾小管上皮细胞(分泌31日]。虽然GDF-15和TFF3系统性红斑狼疮的角色并不清楚,我们的研究结果表明,等离子体水平的GDF-15 TFF3反映SLE肾脏功能障碍的严重程度。

总之,我们的数据表明,等离子体水平GDF-15和TFF3的系统性红斑狼疮患者潜在的肾脏功能障碍标记,但等离子体水平的细胞因子与SLEDAI-2K弱或不相关。此外,需要注意的是,在系统性红斑狼疮细胞因子的表达和功能影响不同人种/种族和环境风险。本研究在很大程度上是相对较小的样本容量的限制,我们没有调查这些细胞因子在调节的相关机制系统性红斑狼疮疾病进展。进一步研究需要扩大样本容量,确定这些细胞因子调节炎症反应,对系统性红斑狼疮患者发生肾功能不全。

数据可用性

本研究的数据集生成和分析可从相应的作者以合理的要求。

信息披露

创始人没有参与这项研究。

的利益冲突

作者表明,没有潜在的利益冲突。

作者的贡献

c . y和X.-W。d .的构思和设计实验。j j。年代。,J. R., J. F., X.-Q. F., R.-W. Z., and Z.-B. X. collected plasma samples and clinical data. C. Y., J. R., L. Y., and X.-L. Z. performed the experiments and analyzed the data. C. Y. and X.-W. D. wrote the main manuscript text. All authors reviewed the manuscript. Chen Yan, Le Yu, and Xiu-Ling Zhang contributed equally to this work.

确认

我们愿意承认生物中心人员为他们的辛勤工作和奉献在我们医院研究参与者。本研究从项目提供资助的江西省科学技术厅(没有。20181 bab215019),教育部科学技术研究项目的江西省(没有。GJJ180148也没有。GJJ190148),中国国家自然科学基金(没有。81860425)。

补充材料

补充图1:定量分析水平的细胞因子在系统性红斑狼疮患者和健康志愿者。补充图。2:微分动态和静态系统性红斑狼疮患者细胞因子的表达。补充图。3:微分LN患者细胞因子的表达而non-LN病人。补充图。4:血浆细胞因子水平和血清肌酐水平之间的相关性。补充图。5:血浆细胞因子水平之间的相关性和24小时尿蛋白水平。(补充材料)