miR-21和Pellino-1在自身免疫性卵巢早衰中的表达谱

摘要

背景. 早产性卵巢功能不全（POI）是一种高促性腺激素的低雌激素症状，可导致卵泡的丢失。提示5-30%的POI与自身免疫性疾病有关。MicroRNA-21（miR-21）通过调控和与多个靶基因相互作用，在卵巢卵泡发生中发挥重要作用。在此，我们对miR-21进行靶向预测，确定miR-21及其假定靶点Pellino-1（Peli1）的表达及其相关性，并证实其与自身免疫性POI临床特征的关系。方法. 通过生物信息学分析筛选miR-21可能的靶基因。采用ZP3免疫法建立自身免疫性POI小鼠模型。检测外周血单个核细胞（PBMCs）和调节性T细胞（Tregs）miR-21、Peli1 mRNA水平、一般情况、脾Tregs比值、炎症因子、卵巢内分泌功能和卵巢结构。对于自身免疫性POI患者，获得血清miR-21、PBMCs-Peli1 mRNA水平、一般数据、免疫参数、激素水平和超声检查。分析miR-21与Peli1的相关性及临床特点。结果。Peli1的选择基于4个microRNA预测数据库和文献检索。在小鼠模型中，血清miR-21水平、PBMCs和Tregs Peli1 mRNA以及脾脏Tregs比值均升高 ， ，0.27±0.23和 ，分别低于对照组。在患者中，miR-21水平( ）和Peli1 mRNA( ）低于对照组( 和 );miR-21与Peli1、AMH、E呈正相关₂子宫大小、卵巢体积与FSH、LH、阳性免疫参数（AOAb、EMAb、ACL、ANA、ds-DNA、ACA、IgG、IgA、IgM、IgE、C3、C4）呈负相关。结论。在自身免疫性POI小鼠和患者中检测到miR-21和Peli1的低表达。自身免疫性POI患者中miR-21与Peli1呈正相关，提示miR-21与Peli1可能与自身免疫性POI的发病机制有关。

1.介绍

Premature ovarian insufficiency (POI), which occurs in women before the age of 40, is defined as primary or secondary amenorrhea for more than 4 months and increased follicle-stimulating hormone (FSH) greater than 25 mIU/mL on two occasions [1]。多种病因已经被报道与POI，包括遗传，医源性，免疫性，代谢，和环境因素有关[2，3]. 约有5-30%的临床表现POI曾被诊断为自身免疫性疾病[4，五]。以往的研究表明，30-40％的POI病例大多与甲状腺疾病[相伴6]，其后依次为艾迪生氏病、类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、白癜风、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、糖尿病(DM)等[7-9]。目前，对自身免疫性POI的机制仍知之甚少。因此，没有具体的指导方针和有效的治疗方法。

MicroRNAs (miRNAs)是一种22-24 nt的内源性非编码小rna [10个]。其中，microRNA-21 (miR-21)在生殖系统中起着重要但尚未完全被了解的作用。转录组数据分析显示，miR-21在斑马鱼初级生长和成釉前卵泡中表达，可能介导转录后调控卵泡活化[11个]。miR-21也在羊卵泡中表达，成为卵泡-黄体转化的潜在重要调控因子[德意志北方银行]. 此外，miR-21还参与了单外阴马卵巢卵泡选择和排卵过程中细胞存活、类固醇生成和分化的调节[13个]。同样，我们之前的研究表明过表达miR-21与颗粒细胞(granulosa cell, GC)凋亡的减轻相关，并部分恢复化疗诱导的卵巢损伤，其特点是卵泡数量增加，E₂电平，和卵巢重量和降低FSH水平[14个]。然而，miR-21的和自身免疫性POI之间的关系尚未阐明。

一般来说，一个miRNA可以与多个目标相互作用，反之亦然[15个]. Pellino-1（Peli1）是免疫耐受中的关键E3多泛素连接酶，是miR-21的靶点之一。Marquez等人。[16个显示过表达miR-21抑制了Peli1 3 -体外培养肝细胞中的UTR荧光素酶报告基因。Yuan等[17岁]证明经典霍奇金淋巴瘤（cHL）细胞株中存在低Peli1和高miR-21-5p水平。此外，Luther等人。[18岁]表明间充质干细胞的外来体中上调的miR-21A-5P水平，从而下调凋亡基因Peli1，PDCD4和PTEN在心肌的表达。Peli1已报道在T淋巴细胞和作为T细胞活化的负调节物被大量表达。它与多个自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮（SLE），多发性硬化（MS），和自身免疫性脑脊髓炎（EAE）相关[19个-21岁]。过表达Peli1可改善自我耐受和免疫抑制。相反，缺乏peli1的小鼠易发生自发的自身免疫性疾病，提示其自我耐受能力的丧失[22个]. 因此，我们推测miR-21可能通过下调Peli1参与自身免疫性POI的发生。

在这项研究中，我们预测了miR-21可能的靶基因，并重点研究了Peli1。然后，我们检测了miR-21和Peli1在自身免疫性POI患者和小鼠模型中的表达。最后，我们探讨了miR-21和Peli1在患者中的相关性，以探讨这些参数与包括AMH，E₂、FSH、LH、子宫大小、卵巢容积、阳性免疫参数个数(AOAb、EMAb、ACL、ANA、ds-DNA、ACA、IgG、IgA、IgM、IgE、C3、C4)。本研究首次尝试评估miR-21和Peli1表达之间的关系，并断言它们在自身免疫性POI中的重要性。

2。方法

2.1条。动物

Female BALB/c mice (7-8 wks; 18-22 g) were obtained from the laboratory animal center of Southern Medical University. All rats had unrestricted access to food and water under controlled temperature ( ）光照条件（14 h亮，10 h暗）。每天早上8:00-9:00取小鼠阴道涂片。本实验选用动情周期正常的小鼠。

取24只小鼠眼球外周血。血清miR-21和激素检测，各组6只小鼠外周血立即在4℃3000 rpm离心10 min，分离血清。将每只小鼠的血清冷冻在1 mL小瓶中，并保存在-20°C下以供进一步检查。为了获得PBMCs，红细胞（RBC）是从其余的血液标本中去除使用红细胞溶解（雪松兰，安大略省，加拿大）遵循标准方案。然后在12000 rpm下离心样品，在室温下离心10 min。然后，丢弃上清液，用磷酸盐缓冲盐（PBS）洗涤单核细胞沉淀两次。传统的方法是用台盼蓝（TB）血细胞仪手工计数分离的PBMCs的活性和浓度。

所有24只小鼠的脾脏及双侧卵巢外置作进一步检查。所有的研究符合动物协议的遵守美国国立卫生研究院公布的指南实验动物的护理和使用。该协议被批准在南方医科大学动物实验伦理（授权号2018A030313167）委员会。

2.2。自身免疫性POI小鼠模型的建立

将24只正常动情周期的小鼠随机分为自身免疫性POI组和对照组（每组12只）。小鼠ZP3 330–342肽（NSSSSQFQIHGPR， ）（Jetway Biotech Co., Ltd., Guangzhou, China) were dissolved in threefold-distilled water at 1 mg/mL and sterilized through ultrafiltration. Then, ZP3 solution was emulsified in an equal volume of complete immune adjuvant (CFA) or incomplete immune adjuvant (IFA). Mice of the autoimmune POI group received the first immunization of subcutaneous injection in the hind footpad and abdomen with 0.15 mL CFA emulsion containing 75 μ摹ZP3肽。After 14 days since the first immunization, the mice received the secondary immunization of subcutaneous injection in the same sites with 0.15 mL IFA emulsion containing 75 μ摹ZP3肽。同时，生理盐水的相同体积注射到小鼠的对照组中的相同位点。我们的preexperiment表明，大多数自身免疫POI组中小鼠的呈现不规则或因为在第二次免疫，其中显示，该小鼠模型成功建立6周后延长动情周期。因此，两个组的小鼠在6周第二次免疫后处死。

2.3条。患者与研究设计

根据赫尔辛基宣言，本试验在南方医科大学珠江医院进行。机构审查委员会批准了该研究，并在参与该研究之前获得了所有患者的书面知情同意（许可证编号：2019SL0027）。

共有56名女性参与了这项研究。首次诊断为自身免疫性POI的妇女有资格参加自身免疫性POI组( )。自身免疫性POI的特点是发病年龄在40岁之前，有2次FSH水平大于25 mIU/mL(≥4周)，并伴有自身免疫性疾病和/或自身免疫性抗体。对照组( ）由18-40岁的女性组成，她们有规律的月经周期，激素水平正常（AMH，E₂， FSH和LH)，以及阴性免疫参数。

在自身免疫性POI组和对照组中，接受激素和/或免疫抑制治疗(≤3个月)、卵巢切除术、盆腔照射和既往化疗的妇女均被排除在研究之外。此外，患有血栓栓塞、严重高血压、严重肥胖、肝肾功能不全、卵巢异常和已知核型异常的妇女也被排除在外。

采集每个病人的外周血。对于自身免疫性POI组，在首次诊断自身免疫性POI时取血。对照组优先于月经第3天采血。激素水平和免疫指标检测由南方医科大学珠江医院临床实验室完成。如前所述，从全血标本中获得血清和PBMCs。

2.4。通用数据

研究开始时收集两组患者的一般资料，包括年龄、BMI、更年期症状、初潮年龄、月经周期、月经周期、妊娠和分娩。

2.5。发情周期

每日阴道涂片检查小鼠动情周期。简单地说，阴道分泌物用细尖吸管收集，然后用亚甲基蓝染色，用相差显微镜观察。

2.6。卵巢结构和卵泡计数

每只小鼠的单侧卵巢用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。然后将卵巢分成5个部分μ米厚度，并用苏木精和伊红（HE）染色。该HE-染色载玻片以盲方式进行评分在光学显微镜下评价度自身免疫性卵巢的。根据先前的研究，自身免疫性卵巢的特征在于浸润淋巴浆细胞和/或与卵巢萎缩和/或卵泡的丧失卵巢间质纤维化。卵泡计数，毛囊进一步分为基于形态特征4页的表型：原始卵泡有鳞状颗粒细胞的单层，初级卵泡包含至少三个立方形颗粒细胞单层，次级卵泡有至少两层颗粒的细胞没有胃窦空间，和窦状卵泡有颗粒细胞的至少两层具有胃窦空间。

2.7。脾调节性T细胞的小鼠中的比例

脾脏在含有2％胎牛血清（FBS）的Hanks’平衡盐溶液中破碎，聚集体和碎片通过70除去 μ米啮合。然后，将脾细胞直接设置用RBC裂解缓冲液，然后用PBS，并再悬浮洗涤两次。总共 将细胞与以下抗体和相应的同型对照物（eBioscience，Inc.，CA，USA）结合：抗小鼠CD4（FITC）、抗小鼠CD25（APC）、大鼠IgG2a同型对照物（PE）30 min，然后用固定和渗透细胞渗透试剂盒（Life Technologies，根据制造商的协议。随后用Fc封闭细胞，然后用抗鼠/大鼠Foxp3（PE）染色。最后，在流式细胞术分析之前，将细胞洗涤两次并重新悬浮在染色缓冲液中。

2.8。小鼠treg的分离

脾细胞悬液1000 rpm离心10 min，其余细胞用含2%胎牛血清和1mm EDTA的PBS重悬。使用EasySep™小鼠CD4+CD25+调节性T细胞分离试剂盒II (STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)从脾细胞单细胞悬浮液中分离出CD4+CD25+细胞(STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)。首先，使用EasySep™小鼠CD4+ T细胞分离鸡尾酒(19852C.1)获得CD4+ T细胞。然后，使用EasySep™小鼠CD25调节性T细胞阳性选择鸡尾酒(18782C)选择CD25+ T细胞。最后，使用EasySep™磁铁分离CD4+CD25+ treg细胞，不使用柱状结构。

2.9。实时定量PCR（定量RT-PCR）

采用实时定量PCR方法检测小鼠和患者miR-21和Peli1的表达。用TRIzol（Invitrogen，美国）从分离的PBMCs、CD4+CD25+Tregs和小鼠或患者血清中提取总RNA。以2 为原料合成cDNAμ使用cDNA合成试剂盒(Promega, Madison, USA)提取总RNA g。引物由广州益山生物有限公司合成。使用ABI PRISM®7500序列检测系统的特异性引物进行实时荧光定量PCR。相对表达量按公式2计算^{负极_ΔΔCT}。本研究使用的引物见表1。

2.10条。ELISA法

采用ELISA法检测小鼠血清抗苗勒氏激素(AMH)和卵巢炎症因子水平。采用超灵敏AMH/MIS ELISA试剂盒(瑞士罗氏公司)检测AMH。小鼠卵巢的另一侧在无菌条件下制成匀浆，进行IFN-检测γ和IL-10。卵巢匀浆物通过ELISA试剂盒（Life Technologies公司公司，NY，USA）进行定量。制造商的协议的指示进行所有程序。

2.11条。放射免疫测定法

采用放射免疫法检测小鼠血清促卵泡激素(FSH)水平。检测由北京北方生物技术研究院有限公司完成，北京，中国。

2.12。化学发光

雌二醇水平(E₂）小鼠的是使用血清通过自动化化学发光体系（Bayer公司制，德国勒沃库森）测量。按照制造商的方案进行所有的程序。

2.13条。超声检查

在采血当天进行超声检查，评估子宫大小、卵巢容积和子宫内膜厚度。扫描是由单个观察者使用Acuson 128 XP10模型(Mountain View, CA)获得的。取子宫纵切面和横切面，测量子宫长度(从眼底顶部到子宫颈)、眼底前后径和横切面直径、子宫内膜厚度(子宫肌层和子宫内膜回声界面之间的最大子宫内膜直径)。子宫体积的计算公式为修改过的长椭球体( )。获取卵巢的纵向和横向视图，用于测量每个卵巢的长度、宽度和深度。计算卵巢容积(左右)( )。每个患者的左右卵巢的平均体积用于比较。

2.14条。生物信息学与分析

miR-21的靶基因通过miRDIP（预测http://ophid.utoronto.ca/miRDIP/index.jsp),TargetScan5.1 (http://www.targetscan.org/),miRecords (http://c1.accurascience.com/miRecords/)和米兰达(http://www.microrna.org/)。通过文献查阅，进一步筛选出4个数据库中常见的基因。

2.15条。统计分析

所有数据采用spss22.0进行分析。连续变量的和是 。独立样本当变量为正态分布时，我们使用测试来比较对照组和自身免疫POI组以及Mann-Whitney组的基线特征非参数分布采用检验。皮尔森的确切Fisher精确检验用于计数数据。采用Spearman相关分析法评价miR-21和Peli1与相关因素的相关性。当 。

3.结果

3.1。动物实验

3.1.1条。一般状况

第二次免疫后6周，自身免疫POI组小鼠出现轻度生长迟缓，出现类似抑郁的行为，包括活动迟缓、毛发光泽减弱、食物摄入量减少、步态蹒跚和体重减轻。自身免疫POI组较对照组子宫更小，卵巢体积更小。

3.1.2条。阿姆赫₂，以及FSH水平

血清E水平₂（ ）和抗苗勒氏管激素( ）自身免疫性POI组小鼠明显低于对照组( ， ),而血清中FSH ( ）显著增加( ）（数字图1（a）和桌子2)。

3.2条。卵巢结构与卵泡计数

对照组卵巢表面呈红色和白色点状突起，而自身免疫性POI组为浅白色，白色点状突起较少。显微镜检查显示对照组小鼠没有炎症。相反，在自身免疫性POI组的发育卵泡中观察到严重的淋巴浆细胞炎性浸润（图图1（b）)。然而，自身免疫POI组在不同阶段的卵泡数量明显低于对照组( ）（数字1 (c))。

3.3条。炎症因子

与对照组相比，自身免疫性POI组小鼠IFN水平较高-γ（ ）（ ）及降低IL-10 ( ）（ ）水平(图2(一个))。

3.4。脾脏中treg的比例

所述调节性T细胞的比例在自身免疫性POI组的脾（ ）与对照组相比显著降低( ）（ ）（数字2 (b))。

3.5。Peli1 mRNA和miR-21的表达

在PBMCs中，自身免疫POI组Peli1水平( ）比对照组中显著降低（ ）（ ）（数字2 (c))。同时，在脾的Treg，Peli1的自身免疫性POI组中的水平 ，也低于对照组( ）（ ）（数字2 (d)). 同样，miR-21在自身免疫性POI小鼠中的表达也明显降低( ）（ ）（数字2 (e))。

3.6条。miR-21的生物信息学分析

受miR-21靶基因使用四种预测数据库，包括miRDIP，TargetScan，miRecords，和Miranda筛选。Peli1被选为用于进一步研究（在四个数据库244个共同基因）的靶（图3)。

四。临床试验样品

4.1。通用数据

参与者的人口统计特征如表所示3. 两组在年龄和BMI上无显著性差异。值得注意的是，自身免疫性POI患者的初潮年龄早于对照组( )。此外，缩短了月经期（ ),月经周期延长( ),降低妊娠( ),降低了平价( ）所述自身免疫POI组中也观察到（表3)。

4.2。激素水平

正如预期的那样，自身免疫性POI组患者的平均FSH值较高( ）和LH值( ）对照组患者( ， ; ， )。相反，平均AMH值( ）和E₂价值观( ）明显低于对照组( ， ; ， )。自身免疫性POI组的游离三碘甲状腺素(fT3)、游离甲状腺素(fT4)、促甲状腺激素(TSH)的平均值与对照组比较无显著性差异(表2)4)。

4.3。超声检查

对照组卵巢可见有腔卵泡，自身免疫性卵巢功能不全组未见有腔卵泡(图)4(一))。子宫的自身免疫性POI组中的大小和卵巢体积分别 和 ，分别低于对照组( ， 和 ， ）（数字图4（c）)。两组在子宫大小和卵巢容积上有显著差异，但在子宫内膜厚度上无显著差异。

4.4。免疫指标

在本研究中，血清抗体和免疫因子统称为免疫参数。血清抗体包括抗卵巢组织抗体（AOAb）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、抗心磷脂抗体（ACL）、抗核抗体（ANA）、抗双链DNA抗体（ds-DNA）、抗肾上腺皮质抗体（ACA）。此外，相关免疫因子包括IgG、IgA、IgM、IgE和血清补体3和4（C3和C4）。在两组中，阳性抗体和相关免疫因子的数量相加，计算阳性免疫参数的数量（图图4（b）)。

4.5。Peli1 mRNA和miR-21的表达

所述自身免疫POI组中的miR-21和Peli1 mRNA水平（ 和 ）明显低于对照组( ， 和 ， ）（数字图4（d）)。Peli1与miR-21呈正相关( ， )。

4.6。自身免疫性POI患者miR-21、Peli1与相关因素的相关性

有趋势显示，miR-21和Peli1均与AMH、E呈正相关₂与FSH、LH、阳性免疫参数数量呈负相关(表2)五和6)。

5.讨论

临床上，自身免疫性POI没有明确统一的诊断标准。探讨自身免疫性POI的发病机制对其诊断和治疗具有重要意义。先前的研究表明，miRNAs在卵巢的存在阐明了其在调节卵巢功能下的多种生物过程中的潜在作用。其中，miR-21是各种肿瘤中最早发现的miRNAs，已被发现参与卵巢储备。Mase等人[23个]对eif2c结合的miRNAs进行了高通量测序，发现miR-21在3株人颗粒细胞系和原代人GCs中发挥了功能作用。Karakaya等人。[24个]在卵丘细胞中进行miRNA微阵列，观察miR-21-5p/-3p的表达。此外，Donadeu等人。[25个]所使用的qRT-PCR来确认高度表达的miR-21-5p / -3p的在颗粒卵泡闭锁期间的参与和卵泡膜细胞。在我们的研究中，我们发现miR-21的低表达在自身免疫性POI患者和小鼠模型与对照组相比。接下来，在患者中，我们证实miR-21的与FSH和LH的负相关关系，并与AMH和E证实miR-21的的正相关₂子宫大小、卵巢体积和阳性免疫参数的数目。这些信息与先前的研究一致，这些研究将深入了解miR-21在自身免疫性POI中的作用。

miR-21的起着经由调节靶基因在生殖系统的细胞和生理途径中起重要作用。田等人。[26个]发现升高的miR-21可能通过靶向都与mTOR的，细胞凋亡，和类固醇合成途径的基因维持猪动情周期。Donadeu等。[25个]证实了miR-21-5p/-3p在闭锁卵泡中表达水平较高，其靶基因HIF1A、ETS1、MSH2在闭锁卵泡期间下调。此外，潘和李[27个]进行荧光素酶基因报告基因检测，在3例中发现miR-21的结合位点 -在这一水平上，miR-21可以下调TIMP3，从而促进积云的扩展和卵母细胞的成熟。本研究基于4个预测数据库进行生物信息学分析，筛选miR-21的潜在靶向基因。在这四个数据库共有的基因中，我们选择了无名指E3泛素连接酶家族的成员Peli1作为进一步研究的目标，因为Peli1在多种免疫或炎症调节通路中发挥着关键作用[28个-30个]。Liu等人[21岁]以及Chang等人。[22个]报道，peli1缺陷小鼠自发发展为SLE，其特征是严重的狼疮样损伤和自身抗体的产生。相反，先前的一项研究提出，缺乏peli1的小鼠可导致EAE组织中的病毒载量减少和脑炎减轻[29个]。另一项由Luo等人进行的研究[20个]也发现，经鼻内感染血管口炎病毒(VSV)后，peli1缺陷小鼠的大脑病毒滴度降低，中枢神经系统(CNS)的存活率增加[19个]。然而，Peli1是否与自身免疫性POI的发生有关还有待探索。

本研究表明，自身免疫性POI患者Peli1 mRNA在PBMCs中的表达低于对照组。此外，在小鼠模型中，在PBMCs和脾脏treg中也发现了类似的趋势。我们进一步对自身免疫性POI患者的miR-21与Peli1进行相关性分析，发现Peli1与miR-21呈正相关。相反地，马尔克斯等人[16个]观察肝脏再生过程中miR-21和Peli1 mRNA水平的负相关。在心肌中，Luther等人。[18岁]发现miR-21a-5p下调促凋亡基因Peli1的表达。目前，关于miR-21与Peli1的关系，特别是自身免疫性POI的研究较少。因此，我们结果的不一致可能归因于miR-21与Peli1正相关或负相关的各种条件。此外，我们强调了Peli1在免疫耐受中的作用，但在其他生物学功能如细胞凋亡或再生中没有作用。因此，在我们的研究中，相反的相关性可能是由于Peli1在不同疾病中的特殊功能，这包括不同的机制。一般来说，miR-21可能通过下调Peli1促进自身免疫性POI的发生。

近来，Peli1如何参与自身免疫性POI仍不清楚。既往研究发现Peli1在自身免疫性疾病中的主要信号功能是MAPK或NF-κ乙途径。据报道，通过Peli1 / 2 CIAP1的泛素依赖性上调[调节MyD88依赖性途径TLR31个]。当TLR信号激活后，Peli1作为cIAP1/2的E3连接酶，介导k63连接的泛素化和cIAP1/2在小胶质细胞中的催化活化。活化的cIAP1/2还可以介导K48泛素连接酶活性，促进TRAF3的泛素依赖降解，导致MAPK信号通路激活[19个]。另一项研究表明Peli1在SLE病理的保护作用是通过抑制NF-κB非经典κB活化、促炎细胞因子表达和B细胞抗体产生[21岁]. 此外，Peli1缺乏小鼠通过调节NF而自发地发展成SLE-κB族转录因子的c-Rel的。需要进一步的研究来进行，以探索在自身免疫性POI条件Peli1的特定信号转导途径。

6.结论

本研究发现miR-21和Peli1在自身免疫性POI患者和小鼠模型中表达较低。此外，在患者中，miR-21与Peli1、AMH、E呈正相关₂，子宫的大小，和卵巢体积，并与FSH，LH呈负相关，并且阳性免疫参数的数量（AOAb，EMAB，ACL，ANA，双链DNA，ACA，IgG抗体，IgA的，IgM抗体，IgE的，C3和C4）。总的来说，我们的研究揭示了miR-21的自身免疫性POI的潜在机制，这可能通过调控靶基因Peli1涉及调节性T细胞的比例。

数据可用性

用来支持这项研究的结果的数据是可用的，请相应的作者。

的利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

作者的贡献

李欣然和谢家新贡献相当。

致谢

这项工作得到了广东省自然科学基金的资助（资助编号：2018a30313167）。

参考文献

1. 五十、 韦伯，M.戴维斯，R.安德森等人，“ESHR指南：卵巢早衰妇女的管理，”人类繁殖，第31卷第1期5、2016年第926-937页。查看在：发布者网站|谷歌学者
2. C、 Hernandez Angeles和C.Castelo Branco，“早期更年期：对女性健康的危害”印度医学研究杂志第143卷第1期4、2016年第420-427页。查看在：发布者网站|谷歌学者
3. A、 Overbeek，M.H.van den Berg，F.E.van Leeuwen，G.J.Kaspers，C.B.Lambalk和E.van Dulmen den Broeder，“儿童和青年癌症女性幸存者中与化疗相关的卵巢功能晚期不良反应：一项系统综述”癌症治疗评论，第53卷，第10-24页，2017年。查看在：发布者网站|谷歌学者
4. K. Jagarlamudi，P.雷迪，D.阿迪卡里和K.柳，“遗传修饰的用于卵巢早衰（POF）小鼠模型中，”分子细胞内分泌学，第315卷，不。1-2页，2010年1-10页。查看在：发布者网站|谷歌学者
5. A、 La Marca，A.Brozzetti，G.Sighinolfi，S.Marzotti，A.Volpe和A.Falorni，“原发性卵巢功能不全：自身免疫性原因，”妇产科的最新观点，第22卷，no。4、第277-282页，2010。查看在：发布者网站|谷歌学者
6. R、 Goswami，R.K.Marwaha，D.Goswami等人，“与1型糖尿病和卵巢早衰相比，散发性特发性甲状旁腺功能减退患者甲状腺自身免疫的患病率，”临床内分泌学与代谢卷。91，没有。11，第4256-4259，2006年。查看在：发布者网站|谷歌学者
7. M、 M.Alper和P.R.Garner，“卵巢早衰：与自身免疫性疾病的关系，”妇产科，第66卷，no。1，页27-30,1985。查看在：谷歌学者
8. I. Cohen和L. Speroff，《卵巢早衰:最新进展》妇产科检查，第46卷，第3期，第156-162页，1991年。查看在：发布者网站|谷歌学者
9. R. W. Rebar, G. F. Erickson，和S. S. Yen，“特发性卵巢早衰的临床和内分泌特征”，生育与不育，第37卷，第1期，第35-41页，1982年。查看在：谷歌学者
10. M、 Chekulaeva和W.Filipowicz，“miRNA介导的动物细胞转录后调控机制”细胞生物学的最新观点，第21卷，第3期，第452-460页，2009年。查看在：发布者网站|谷歌学者
11. 黄文文，孙文文，刘少伟等，“斑马鱼卵巢卵泡活化过程中特异性13-miRNA表达特征的鉴定与表征”生物的繁殖，第98卷，第1期，第42-53页，2018年。查看在：发布者网站|谷歌学者
12. D.麦克布莱德，W.卡雷，S. D. Sontakke等人，“在反刍动物卵巢滤泡黄体转变相关联的miRNA的鉴定，”繁殖，第144卷，第2期，第221-233页，2012年。查看在：发布者网站|谷歌学者
13. S、 N.Schauer，S.D.Sontakke，E.D.Watson，C.L.Esteves和F.X.Donadeu，“miRNAs参与马卵泡发育”繁殖，第146卷，no。3、2013年第273-282页。查看在：发布者网站|谷歌学者
14. X. Fu, Y. He, X. Wang等，“化疗诱导卵巢损伤大鼠，干细胞中过表达miR-21，通过靶向PDCD4和PTEN抑制颗粒细胞凋亡，改善卵巢结构和功能。”干细胞研究和治疗，第8卷，第1期，第187页，2017年。查看在：发布者网站|谷歌学者
15. G、 Michlewski和J.F.Cáceres，“miRNA生物发生的转录后控制，”RNA，第25卷，no。1、2019年第1 - 16页。查看在：发布者网站|谷歌学者
16. R. T. Marquez, E. Wendlandt, C. S. Galle, K. Keck，和A. P. McCaffrey，“MicroRNA-21在肝脏再生的增殖阶段上调，以Pellino-1为靶点，抑制NF-kappaB信号，”美国生理学杂志。胃肠和肝脏生理学，第298卷，第4期，第G535-G5412010页。查看在：发布者网站|谷歌学者
17. Y、 Yuan，F.Niu，I.M.Nolte等人，“MicroRNA高通量功能丧失筛查揭示miR-21-5p在霍奇金淋巴瘤中的致癌作用，”细胞生理学和生物化学，第49卷，no。1、pp. 144-159, 2018。查看在：发布者网站|谷歌学者
18. K、 M.Luther，L.Haar，M.McGuinness等人，“miR-21a-5p外体介导间充质干细胞的心脏保护作用，”分子和细胞心脏病学杂志卷。119，第125-137，2018。查看在：发布者网站|谷歌学者
19. Y.肖，J.金，M. Chang等人，“Peli1通过调节TRAF3降解促进小胶质细胞介导的CNS炎症，”自然医学，第19卷，no。5，第595-602页，2013年。查看在：发布者网站|谷歌学者
20. roh .， e.r. Winkelmann, S. Zhu等，“Peli1在西尼罗病毒感染期间促进病毒复制和促进神经炎症，”临床研究杂志，第128卷，编号2018年第4980-4991页。查看在：发布者网站|谷歌学者
21. J. Liu, X. Huang, S. Hao等，“Peli1负调控非规范NF-。κB信号抑制系统性红斑狼疮"自然通讯，第9卷第1期1，2018。查看在：发布者网站|谷歌学者
22. “泛素连接酶Peli1负调控T细胞活化和防止自身免疫，”自然免疫学，第12卷，第10期，第1002-10092011页。查看在：发布者网站|谷歌学者
23. Y. Mase, O. Ishibashi, T. Ishikawa等，“miR-21在rna诱导的沉默复合物中富集，并在人类颗粒细胞系中靶向COL4A1，”生殖科学，第19卷，no。10, pp. 1030-1040, 2012。查看在：发布者网站|谷歌学者
24. C. Karakaya，O. Guzeloglu-Kayisli，A. Uyar等人，“在妇女普尔卵巢响应体外受精经历与在卵丘细胞改变的微RNA表达相关联，”Fertil杂志卷。103，没有。6，第1469-1476.e3，2015。查看在：发布者网站|谷歌学者
25. F. X. Donadeu, B. T. Mohammed和J. Ioannidis，“一个假定参与滤泡闭锁的miRNA靶网络，”家畜内分泌学，第58卷，第76-83页，2017年。查看在：发布者网站|谷歌学者
26. M、 田，张，叶等，“MicroRNA-21和MicroRNA-214在猪动情期生殖调控中起重要作用。”动物科学杂志，第89卷第1期。2018年第1398-1405页。查看在：发布者网站|谷歌学者
27. B、 Pan和J.Li，“MicroRNA-21在卵丘细胞-卵母细胞复合物体外成熟过程中通过下调TIMP3上调金属蛋白酶，”分子细胞内分泌学，第477卷，2018年第29-38页。查看在：发布者网站|谷歌学者
28. P、 N.Moynagh，“Peli1（rel）ieves自身免疫，”自然免疫学，第12卷，no。10，页927-929,2011。查看在：发布者网站|谷歌学者
29. R.R。Lereim，E. Oveland，Y. Xiao等人，“实验性自身免疫性脑脊髓炎在泛素连接酶Peli1敲除小鼠的大脑蛋白质组，”蛋白质组学与生物信息学杂志，第9卷第1期2016年第209-219页。查看在：发布者网站|谷歌学者
30. A. E. Medvedev, M. Murphy, H. Zhou，和X. Li，“E3泛素连接酶Pellinos作为模式识别受体信号和免疫反应的调节因子，”免疫学综述卷。266，没有。1，第109-122，2015。查看在：发布者网站|谷歌学者
31. 黄晓鹏，彭建华，彭建伟等，“Peli1在实验性蛛网膜下腔出血后的小胶质细胞活化、神经炎症反应和神经功能缺损中的作用，”分子神经科学前沿，第10卷，2017年第398页。查看在：发布者网站|谷歌学者

版权

版权所有©2020 Xinran Li等人。这是一篇在知识共享署名许可，其允许在任何介质无限制地使用，分发和再现时，所提供的原始工作正确的引用。