文摘

原发性干燥综合征(pSS)是风湿性疾病的特点是唾液的破坏和泪腺体,和它的发病机制仍不清楚。Gα问的是α蛋白质亚基的heterotrimeric《Gq》。研究表明,Gα问参与一些风湿性疾病的发病机制监管。本研究探讨G的角色α在pSS问。Gα问mRNA水平在外周血单核细胞(PBMCs) 39例患者和健康对照组26例(高碳钢)研究了使用实时PCR。IL-17A 22 pSS患者的血清浓度和23高碳钢被ELISA检测,和G的临床意义α问进行了分析。G的协会α问与interleukin-17A (IL-17A)表达式pSS患者也进行了分析。我们表明,Gα问表达在PBMCs pSS患者明显低于PBMCs高碳钢。Gα问表达水平与pSS疾病密切相关的活动。此外,负面的协会也在IL-17A和Gαq表达水平。这些数据表明,Gα问参与pSS发病机制规定,可能由于Th17监管。这些结果提供新的视角pSS发病机制涉及异常Th17监管。

1。介绍

原发性干燥综合征(pSS),最常见的风湿性疾病,特点是眼睛干涩,口干,由于lymphoplasmocytic渗透和破坏泪腺和唾液腺。除了唾液的机能减退和泪腺体,其他重要器官如肺、肾脏和肝脏也可以破坏pSS患者(1]。

具体细节关于pSS的病因仍不清楚。pSS的诊断总是处于相对较晚阶段当腺体已经存在的不可逆的损害,以及有效的治疗策略是有限的而其他风湿性疾病。密集的研究正试图揭开分子,遗传和免疫机制对这种疾病的发病机制,并提供一个更好的理解pSS (2]。辅助T类型17 (Th17),其特点是生产IL-17、效应辅助T细胞的一个子集,是有别于Th1、Th2细胞(3]。他们已经被证明是主要致病细胞在炎症和自身免疫4]。几项研究已经表明,Th17细胞pSS患者的增加,参与党卫军的腺体组织损伤5- - - - - -7]。然而,Th17的存在总是发现腺的杀伤性与发病有关;中是如何监管Th17 pSS仍不清楚。pSS Th17监管机制的研究可以帮助我们更好的理解pSS在早期发病前腺破坏和pSS的目标可以帮助我们探索更多的治疗。

Gαq是由基因编码GNAQ;这是α蛋白质亚基的heterotrimeric《Gq》。《Gq》蛋白属于heterotrimeric G蛋白的亚科。有三个子heterotrimeric G蛋白质,即α,β,γ。根据的不同α子单元,G蛋白质可以分为四个亚科包括Gαs, Gα我,克αq / 11, G12/13。《Gq》属于Gαq / 11亚科(8]。Gα问广泛表达于多种细胞,包括淋巴细胞。Gα问夫妇和各种各样的膜受体细胞内效应分子。G的重要角色α问在免疫系统揭示近年来,给我们新的认识关于风湿性疾病的发病机制9,10]。我们之前的研究表明,Gαq是参与一些风湿性疾病的发病机制监管,包括系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎(RA),这可能是相关的监管Th17细胞分化[11,12]。pSS与系统性红斑狼疮的发病机制有共同之处或类风湿性关节炎;然而,是否Gα问还参与pSS发病机理仍然未知。

在这项研究中,我们研究了G的表达α问pSS患者和分析G的协会α问表达和pSS患者的临床特点。然后,我们研究了水平IL-17A pSS患者的血清和IL-17A和G之间的关系α问的表情。我们发现G的表达α问pSS患者的显著降低,G的表达α问与pSS的疾病活动,关节炎,和免疫球蛋白水平。IL-17A的浓度明显高于pSS患者,和G的表达式α问是IL-17A负相关。我们的数据表明,Gα问参与pSS发病机制的规定,表明Gα问可以作为一个潜在的目标在pSS的研究和治疗。

2。材料和方法

2.1。病人和控制

39例诊断为pSS (22 pSS PBMCs和血清)患者和健康对照组40(高碳钢17高碳钢PBMCs样品14高碳钢的血清样品,和9高碳钢PBMCs和血清样本)匹配了性别和年龄纳入本研究。pSS患者的门诊和住院部门都是风湿病学和临床免疫学、厦门大学第一附属医院。pSS患者诊断基于标准的美国风湿病学院(13]。数据,如性别、年龄、历史、临床表现、实验室发现,和治疗战略pSS患者收集到的病人的医疗记录。本研究通过第一附属医院医学伦理委员会的厦门大学。的基本临床特点总结了pSS患者和高碳钢表1。

2.2。外周血单核细胞隔离

外周血单核细胞(PBMCs)隔绝高碳钢和pSS患者的血液样本使用标准密度梯度离心法。肝素化的血液样本离心机的Ficoll-Paque +(埃普多夫,蒙古包)。总RNA PBMCs孤立使用试剂盒™试剂(美国表达载体)。RNA被反向转录后,制造商的指示。核糖核酸的浓度是决定Nanodrop ND1000分光光度计。

2.3。RNA的提取和量化转录使用实时聚合酶链反应

PBMCs总RNA提取病人和高碳钢的试剂盒(美国英杰公司)根据制造商的指示。短暂,总RNA是reverse-transcribed第一cDNA使用反转录试剂盒(罗氏,CH)制造商的指示。反应条件如下:50°C 60分钟,然后85°C 5分钟,最后5分钟4°C。GAPDH和G的信使rna表达水平α问进行了实时定量PCR (rt - PCR)使用SYBR绿色(罗氏,CH)。一个10μ包含2 L SYBR绿色rt - pcr反应混合物μ0.2 L的cDNA、μ7.6 L的意义或反义底漆,μL ddH2O使用。根据制造商的指示执行定量PCR(美国ABI7500)。PCR反应是放大如下:2分钟50°C, 95°C 10分钟,40周期在95°C 1分钟15秒和60°C, 95°C, 1分钟变性。GAPDH表达水平被用来G的信使rna表达水平正常化α问;2^−ΔΔCt方法用于确定相对表达式。使用的引物如下:GAPDH,感觉底漆:5-GTGAACCATGAGAAGTATGACAAC-3和反义底漆:5-CATGAGTCCTTCCACGATACC-3和Gα问,感觉底漆:5——GTTGATGTGGAGAAGGTGTCTG-3和反义底漆:5-GTAGGCAGGTAGGCAGGGT-3 。确保扩增特异性,融化曲线分析用于PCR产品每一对引物,然后用琼脂糖凝胶电泳。

2.4。酶联免疫吸附试验(ELISA)

的浓度L-17A高碳钢和pSS患者的血清是由一个酶联免疫试剂盒(美国PeproTech)后,制造商的协议。ELISA标仪是用来测量吸光度在450海里。

2.5。统计分析

使用Mann-Whitney结果进行了分析U测试与棱镜软件(GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。长枪兵的等级测试被用于调查pSS患者的临床参数之间的相关性和Gαq表达水平。值< 0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。G的表达式α问在pSS患者减少

探讨G的角色α问在pSS,我们首先调查了Gαq pSS患者的表达水平。作为淋巴细胞失衡是pSS发病机制的主要因素,我们收集PBMCs SS患者和高碳钢和分析G的mRNA的表达α在PBMCs问。如图1,我们发现G的mRNA的表达α问在PBMCs显著降低SS患者与高碳钢。这些数据表明Gα问可能有潜在作用在党卫军发病机制的规定(图1)。

3.2。G的表达式α问是消极与pSS患者的疾病活动有关

进一步调查G的特定角色α问在pSS发病机制的规定,然后分析了pSS患者的疾病活动与不同表达水平的Gαq。欧拉干燥综合征疾病活动指数(ESSDAI)现在被广泛用于评估pSS疾病活动(14]。我们分析了G的关系α问mRNA表达与ESSDAI PBMCs pSS患者。如图2,我们发现G的表达水平α问mRNA pSS患者ESSDAI负相关。这表明Gα问负调节pSS的发病机制和低水平的Gα问可能导致pSS的疾病发作。

3.3。G的临床意义α在pSS患者问

然后,我们分析了协会的表达Gα问pSS患者的临床特点,探讨G的临床意义α在pSS问。G的表达式α问显著低于pSS患者比那些没有关节炎关节炎(图3(一个)),这表明Gα问可能参与关节炎的发病机制。然而,在G没有差异α问表达式之间pSS患者没有间质性肺病(ILD),眼睛干涩,口干(图中被发现3 (b)- - - - - -3 (d))。我们进一步分析了G的协会α问mRNA表达与其他临床特征,包括在外周血淋巴细胞计数,尿蛋白,血红蛋白(HB)水平、血小板(PLT)水平,补3 (C3)级别,c反应蛋白(CRP)水平,免疫球蛋白G(免疫球蛋白)级别,anti-SSA效价,anti-SSB效价(图4)。G之间存在显著负相关α问mRNA表达和免疫球蛋白水平,而其他人没有发现协会。这些数据表明,Gα问在负调控过程中发挥作用的免疫反应。

3.4。Gα问表达IL-17A浓度负相关,这可能导致G的机制α问参与pSS发病机制监管

我们的数据表明,Gα问参与pSS发病机制的规定,但机制尚不清楚。Th17 pSS发病机理的关键因素,我们先前的研究表明,Gα问的分化抑制Th17 [11]。我们进一步研究了G之间的相关性αq和Th17 pSS患者。我们首先研究了水平IL-17A pSS患者的血清和高碳钢。我们发现的浓度IL-17A pSS患者显著高于在高碳钢(图5(a))。然后分析了G的相关性α问mRNA表达PBMCs与IL-17A pSS患者。G之间的负相关性被发现α问mRNA表达和IL-17A表达式(图5(b))。这些数据表明,Gα问可能是一个因素参与Th17监管pSS患者。

4所示。讨论

在这项研究中,我们首次报告,Gα问mRNA表达pSS患者的淋巴细胞降低,G的表达α问疾病活动密切相关。Gα问mRNA表达消极与IL-17A pSS患者的血清水平。我们的研究表明,Gα问在pSS发病机制调节过程中发挥作用,提供一个新的在pSS Th17细胞是如何监管机制。

pSS是一种障碍,眼睛干涩,口干发生免疫失调的表现(15,16]。干燥的眼睛和嘴往往第一个党卫军的症状,可能表明其他器官的参与,包括唾液腺、肺和肾脏。约5 - 10%的SS患者发展为淋巴瘤(17]。治疗策略pSS相对有限,因为唾液腺的不可逆转的破坏pSS诊断时总是存在。pSS的发病机制的研究需要明确pSS的早期阶段。Th17细胞已被证明是一个因素在pSS发病机理。IL-17 KO小鼠完全抗SS感应,Th17细胞的过继转移诱导党卫军症状的存在免疫IL-17 KO小鼠迅速,证明在pSS Th17发病机理的关键作用18]。水平的提高IL-17还发现在血清以及患者的唾液腺pSS (6,19]。与之前的研究一致,我们还发现IL-17A增加pSS患者的血清,确认pSS Th17细胞发病机理的至关重要的作用。然而,异常Th17细胞是如何监管的pSS仍不清楚。在pSS Th17细胞的调控机制的研究有助于更好地理解阶段开始之前Th17细胞upregulation和唾液腺的破坏和帮助开发更好的管理策略对pSS处于早期阶段。

Gα问的是α蛋白质亚基的《Gq》由基因编码GNAQ [8]。我们以前的研究证实了G的至关重要的作用α问等几个方面的免疫调节树突细胞贩运,选择B细胞和T细胞激活(9,10,20.]。通过使用Gnaq−−/嵌合小鼠通过重组致命辐照C57BL / 6 j受体小鼠Gnaq−−骨髓,我们还揭示了G的角色α问在自身免疫性疾病的发病机制。自身免疫multiorgan参与和关节炎患者可以自发发展Gnaq−−/嵌合小鼠(10]。在以前的研究中,G的表达α问了从RA患者淋巴细胞减少和系统性红斑狼疮疾病活动密切相关,表明G的角色α问在类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮发病机制监管(11,12,21,22]。因此,这些研究显示自身免疫性疾病发病机制的新监管。

本研究证明了G的角色α在pSS问。我们发现G的表达α问也减少了pSS患者的淋巴细胞和G的表达水平α问与pSS的疾病活动密切相关,关节炎,和高水平的免疫球蛋白。我们以前的研究表明,Gnaq−−/嵌合小鼠自发发展类风湿性关节炎(10),G的表达α问了在RA患者淋巴细胞减少,这表明Gαq是参与炎性关节炎发展的监管。pSS与RA发病机制方面有共同之处,通常与RA共存23]。我们的研究表明,Gα问却降低了pSS患者和RA患者,这表明Gα问可能导致重叠在pSS和RA的发病机制。此外,我们发现Gα问表达低pSS患者关节炎的价格相比那些没有关节炎,表明低表达水平的Gα问可能被用作预测pSS的关节炎的存在。然而,需要前瞻性研究证实的能力α问水平预测pSS的关节炎。

这是证明了Gα问可以负调控Th17分化在我们先前的研究,和之间存在负相关的表达Gαq和IL-17A RA患者(11]。在这项研究中,我们还发现负面G之间的联系αq和IL-17A,揭示小说监管机制异常Th17 pSS患者的水平。这是一个潜在的新的研究目标pSS的早期阶段。

总之,本研究表明,Gα问表达参与了pSS发病机制调控,可能是因为监管Th17细胞。这些结果提供了新的机制pSS发病机理有关异常Th17细胞监管。

数据可用性

使用的数据和/或分析在当前的研究中可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Yuechi太阳,应王,陈Shiju这项研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

这项工作是由国家自然科学基金委(自然科学基金)支持格兰特博士U1605223 Guixiu Shi,刘博士国家自然科学基金委资助81501407元;国家自然科学基金委资助81501369 Shiju Chen博士;和技术部门的领导力项目福建省(批准号2015 d011)博士Guixiu史。