尿激酶减弱肺血栓栓塞的动物模型炎症反应的抑制作用

文摘

炎症反应是一个重要的决定因素与肺血栓栓塞病人的死亡率。炎症介质可促进血栓形成,增加血流动力学不稳定。尿激酶是一种常用的药物治疗PTE。PTE的尿激酶对炎症反应的影响尚不清楚。我们的研究旨在评估干预的影响PTE尿激酶和尿激酶,加上阿司匹林的老鼠。结果显示,大量的渗透支气管周围的炎症细胞,血管,和肺间质,甚至肺痈观察PTE的老鼠。CX3CL1 / CX3CR1 coexpression CX3CL1 / NF -κB coexpression, TXA2明显更高。与尿激酶治疗后,肺栓塞部分溶解和炎性细胞浸润明显减少。TNNI3的表达,BNP D2D, PASP, PADP, PAMP时,和TXA2,以及CX3CL1 / CX3CR1 coexpression CX3CL1 / NF -κB coexpression明显降低。阿司匹林没有协同作用。因此,这些发现表明炎症过程中PTE的发生在老鼠。尿激酶治疗减少了炎症反应。

1。介绍

急性肺栓塞(PTE)导致快速血流动力学崩溃和死亡。它是一个潜在的威胁生命的疾病和重大的发病率和致命的结果(1]。由于肺动脉高压,血液流动不稳定的高危患者死于房车故障恶化,心原性休克,> 15%的医院死亡率(2]。大约四分之一的血液流动稳定PTE患者显示成像或生物标志物房车扩张或功能障碍的证据,死亡率从3%到15% (3]。因此,迫切需要新的干预措施。

炎症反应是一个重要的决定因素与肺栓塞病人的死亡率。白细胞增多和先生们是重要的因素决定短期PTE患者的临床结果(4,5]。缺血和肺动脉高压与PTE足以诱导促炎介质的表达,比如趋化因子,并建立一个环境促炎之前在肺缺血再灌注(6]。趋化因子大规模招募单核细胞、NT细胞和T细胞。炎症反应促进血栓形成和肺动脉高压,它与不良预后相关(7,8]。持续的炎症反应也参与了肺血管重建,导致慢性血栓栓塞肺动脉高压(CTEPH) [9,10]。

我们先前的研究报道,CX3CL1 CX3CR1, NF -κB在肺栓塞后显著增加,NF -κB信号通路和CX3CL1 / CX3CR1也许是直接参与整个肺栓塞的炎症反应(11- - - - - -14]。此外,阿司匹林可以显著降低CX3CL1 CX3CR1和NF -κB在大鼠肺血栓栓塞,随后控制炎症反应。尿激酶是最常用的药物治疗PTE。PTE的尿激酶对炎症反应的影响尚不清楚。因此,阿司匹林的协同作用仍然是模糊的。我们还发现,脂多糖(LPS)细胞外signal-regulated蛋白激酶(ERK),核因子-κB (NF -κB),和CX3CL1信号通路存在于人类支气管上皮细胞(14]。所以我们选择干扰CX3CL1尿激酶,CX3CR1, NF -κB通路。

在这项研究中,我们专门研究了尿激酶和尿激酶,加上阿司匹林的抗炎作用。PTE老鼠接受尿激酶和尿激酶加上阿司匹林,分别在这项研究中。肺组织被他走时染色检查。CX3CL1 / CX3CR1 coexpression CX3CL1 / NF -κB coexpression, TXA2被用来观察炎性反应。肺动脉收缩压(PASP)、舒张压(PADP)和平均压力(PAMP时)监测观察炎症反应对肺动脉压力的影响。TNNI3、巴黎银行和D2D被用来确定PTE的严重程度和预后。

2。材料和方法

2.1。动物

这项研究包括男性Sprague-Dawley (SD)老鼠重约200克。老鼠从上海实验动物中心(线性)实验动物有限公司和北京魏通李华实验动物有限公司Specific-pathogen-free (SPF)老鼠被用于这项研究。浙江医学实验动物管理委员会,中国,以及中国浙江医科大学的伦理委员会(杭州)批准了这项研究,和到达方针进行动物实验。

2.2。分组和模型制备

共有50个男性SPF SD大鼠随机分为5组根据计算机生成的随机数字表( 老鼠每组):对照组(集团控制),模拟对照组(集团模拟控制),肺血栓栓塞组(PTE),肺血栓栓塞结合尿激酶组(集团PTE +英国)和肺血栓栓塞结合尿激酶和阿司匹林组(PTE +英国+阿司匹林组)。

2.2.1。肺血栓栓塞模型制备

在操作之前的一天,0.2毫升静脉血撤出尾静脉和孵化37°C水浴过夜。的凝固的血栓取出了一个注射器准备30栓子的2毫米1毫米大小,这些都进一步放入2毫升注射器。老鼠用乙醚麻醉。右颈静脉分离,穿刺针。准备的栓子被推入一般颈静脉穿刺针,其次是推动1毫升的盐水防止栓子留在管或颈静脉。最后,伤口缝合后出血停止。模拟对照组,腹腔麻醉管理后,右颈静脉分离,然后1毫升的盐水很快就被注入静脉。

老鼠intragastrically前一天与药物管理模型建立前的手术和40分钟。老鼠在英国PTE + +阿司匹林组服用300毫克/公斤阿司匹林intragastrically(南京白敬宇制药有限公司、南京、中国)在前面所述的研究(11]。除了对照组,其他组的老鼠是intragastrically管理每天与等量的生理盐水。成立后的肺血栓栓塞模型,大鼠在PTE +英国和英国PTE + +阿司匹林组收到20000 IU /公斤的静脉注射尿激酶(ND制药有限公司、南京、中国)在0.5小时内2毫升生理盐水。对照组的老鼠没有接受任何干预。

2.3。肺动脉压力测量

经过六个小时的模型建立,动物麻醉,和肺动脉压力测量。PTE50导管插入是通过右心室肺动脉。导管的另一端连接到压力传感器。功能试验系统(成都泰国联盟提单- 420 s - typte)被用来记录稳定肺动脉压力波形为3分钟。肺动脉收缩压(PASP)、舒张压(PADP),平均肺动脉压(PAMP时)计算在离线状态。

2.4。检测TXA2)和决心,BNP TNNI3, D2D

动物是用乙醚麻醉后,我们实施安乐死的动物,这些动物的脖子,然后得到了肺组织进行血液测试。血栓素A2 (TXA2 Youersheng科技有限公司、武汉,中国),脑利钠肽(BNP Youersheng科技有限公司、武汉,中国),肌钙蛋白I基因(TNNI3, Youersheng科技有限公司、武汉,中国),和肺动脉栓塞(D2D, Youersheng科技有限公司、武汉,中国)大鼠血清中检测到一个水平double-antibody夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。具体的实验步骤是基于我们之前报道的研究(11- - - - - -13]。肺部病理学检查是如下:考试后肺的病理总值,肺组织是由10%的福尔马林固定24小时。石蜡包埋部分准备然后沾hematoxylin-eosin试剂())。

2.5。CX3CL1 / CX3CR1 Coexpression CX3CL1 / NF -κB Coexpression肺组织被激光共焦扫描检测

4的厚度μ米被切片后准备deparaffinization和二甲苯的补液分级酒精,然后抗原被检索。幻灯片是孵化主要抗体(CX3CL1、圣克鲁斯生物技术公司,sc - 7227;NF -κB / p65 Abcam ab7970;CX3CR1、Abcam ab8021一夜之间)在4°C。冷却30分钟后在室温和洗涤3×5分钟与磷酸盐(PBS)、幻灯片和荧光二次孵化抗体混合物(生活技术,A21206)在室温下为60分钟。在PBS切片又洗了3×5分钟。细胞核与DAPI染色(Sigma-Aldrich)。然后,幻灯片是在室温下孵化10分钟。使用甘油在PBS幻灯片都淹没了,然后被一个倒置显微镜下观察。

2.6。统计分析

统计分析使用IBM SPSS统计软件为Windows 21.0版本。数据表示为±标准差。多因素方差分析(方差分析)是用于比较的组,和事后测试费舍尔最显著差异(LSD)是用于比较的组。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。PTE的存在炎症反应过程和NF -κB通路和CX3CL1 / CX3CR1

检查肺组织)染色法在PTE老鼠显示混合和凝固在肺动脉血栓。大量渗透支气管周围的炎症细胞,血管,和肺间质,甚至肺痈被观察到。然而,肺组织出现的结构清晰,肺泡结构正常出现在控制老鼠。没有观察到明显的炎性细胞浸润,肺间质。有时候,观察气管和血管周围炎症。没有观察到血管血栓形成。模拟的结果控制老鼠类似控制老鼠(图1(a))。CX3CL1 / CX3CR1 coexpression CX3CL1 / NF -κB coexpression(图1(b))、TXA2 TNNI3, BNP D2D, PASP PADP, PAMP时(图1(c), )在PTE老鼠明显更高。实验显示在PTE过程中炎症反应和NF -有关κB信号通路和CX3CL1 / CX3CR1。

3.2。尿激酶减少炎症PTE老鼠

尿激酶治疗PTE老鼠后,肺栓塞部分溶解,在肺组织和一些船只实现血管再通)染色。没有明显的血栓栓塞切片观察。轻微观察血管内皮细胞的增殖和炎症反应是类似轻微(图2(a))。Coexpression CX3CL1 / NF -κB和CX3CL1 / CX3CR1(图2(b))明显改善。TXA2、TNNI3 BNP D2D, PASP PADP, PAMP时(图2(c), )被显著降低。这些结果表明,尿激酶可以改善预后,调节炎症反应。

3.3。尿激酶联合阿司匹林可以降低炎性反应在PTE老鼠

针对阿司匹林的抗炎效应(11- - - - - -14),我们选择尿激酶加上阿司匹林可能会干扰PTE。治疗后,肺栓塞部分溶解,他走时染色显示一些血管的再通肺组织。轻微观察血管内皮细胞的增殖和炎症反应仍然同样温和。他走时染色是类似于尿激酶(图3(a))。Coexpression CX3CL1 / NF -κB(图3(b))和TXA2、TNNI3 BNP D2D, PASP PADP, PAMP时(图3(c), )被显著降低。Coexpression CX3CL1 / CX3CR1较高。尿激酶联合阿司匹林可以减少炎症。

3.4。阿司匹林没有增强抗炎作用

没有显著差异)染色,CX3CL1 / NF -κB coexpression, TXA2、TNNI3 BNP D2D, PASP, PADP, PAMP时尿激酶组和尿激酶,加上阿司匹林组。尿激酶是优越CX3CL1 / CX3CR1 coexpression,阿司匹林(图没有显示出协同行动4)。

4所示。讨论

我们的研究表明,炎症反应是涉及在PTE的过程中,这是与NF -κB信号通路和CX3CL1 / CX3CR1。尿激酶可以改善PTE的炎症反应。阿司匹林没有增强抗炎作用。尿激酶就优于尿激酶加上阿司匹林CX3CL1 / CX3CR1 coexpression。

根据之前的研究实验的结果(11- - - - - -14),大剂量阿司匹林抗炎作用。因此,我们的研究已经建立了尿激酶加上阿司匹林组。在这个实验中,阿司匹林没有显示出增强抗炎作用和coexpression CX3CL1 / CX3CR1已经恶化。考虑到药物的副作用,阿司匹林可能不是结合使用。作为PTE炎症反应是复杂的,这个实验研究只从单一的信号通路。所以,上述结论应该仔细考虑。

越来越多的要注意研究PTE炎症(15,16]。例如,他汀类药物治疗能够降低静脉血栓栓塞的发病率和复发率和有潜力减少postthrombotic综合症(PTS)通过抗炎作用[17,18]。很少有研究探讨抗凝溶栓药物的抗炎作用。在兔急性肺栓塞模型,尿激酶MCP-1水平降低肺组织或血清19]。这些研究结果与我们的研究不一致。相比之下,NF -的表达κB P65蛋白在细胞质和细胞核的肺泡巨噬细胞、血管内皮细胞和肺泡和支气管上皮细胞的PTE兔子尿激酶组略高于PTE。的急性炎症损伤肺组织尿激酶治疗后没有显示出显著减少(20.]。两项研究之间的差异包括使用不同的动物,栓子的大小,和剂量尿激酶。我们使用尿激酶的2倍以上。因此,我们需要进一步研究不同剂量尿激酶浓度的抗炎作用。

然而,我们的研究有一些局限性。首先,尽管炎症反应导致血栓形成的加重,两个因素之间的关系需要进一步探讨。其次,只有5组已建立的大鼠在这项研究中,但是阿司匹林作为对照组并不是建立在我们之前的研究(11- - - - - -13]。这样做是为了减少不必要的动物祭祀。

尽管炎症反应可能不是最PTE的重要机制,它促进栓塞的恶化。因此,有必要进一步探讨两者之间的关系。尿激酶可以抑制炎症反应,但抗炎效应是否依赖于剂量和是否需要联合其他药物需要进一步的研究和讨论。在未来,有效药物用于临床应用的筛选。不仅溶栓药物,但是他们也能改善炎症反应,降低死亡率。

缩写

PTE:	急性肺栓塞
CTEPH:	慢性血栓栓塞肺动脉高压
有限合伙人:	脂多糖
兵:	细胞外signal-regulated蛋白激酶
NF -κB:	核因子-κB
PASP:	肺动脉收缩压
PADP:	舒张压
PAMP时:	平均压力
TNNI:	肌钙蛋白I基因
法国巴黎:	脑利钠肽
D2D:	肺动脉栓塞
SD:	Sprague-Dawley
防晒系数:	Specific-pathogen-free
TXA2:	血栓素A2
ELISA:	酶联免疫吸附试验
):	Hematoxylin-eosin
PBS:	磷酸盐
迷幻药:	最小显著性差异
分:	Postthrombotic综合症
MCP-1:	单核细胞趋化蛋白1。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突,财务或其他。

确认

本研究支持由浙江省自然科学基金(批准号LY17H290006),浙江省高级创新卫生人才的培养计划(2014 - 108),和温岭市肿瘤学的关键学科组。这项研究和出版也是由中国国家自然科学基金资助。

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