文摘
丙型肝炎病毒(HCV)可以摆脱先天和适应性免疫,免疫反应无效。人类白细胞抗原E (HLA-E)调节免疫反应的抗病毒功能,可能导致丙肝病毒的持久性和肝脏疾病的严重程度。本研究旨在评估HLA-E在肝脏的表达及其与丙型肝炎患者肝脏疾病的严重程度。我们进行了回顾性分析肝活检从125名丙肝患者和20没有肝病对照组。综述了肝活检和分类根据纤维化和炎症活动的严重性。病理学家评估的大小HLA-E表达式以一种半定量的方式,将分数从0到3。免疫组织化学显示阳性HLA-E在肝细胞和枯否细胞。肝细胞和枯否细胞HLA-E积极性的速度明显高于在丙肝患者相比,控制。肝脏坏死炎性组织活动提出了更大的样本分为严重纤维化和表达HLA-E枯氏细胞和肝细胞有显著的线性关系。它表明HLA-E表达式有免疫调节作用和可能作用在慢性丙型肝炎肝脏疾病的严重程度。
1。介绍
丙肝病毒感染是慢性肝病的主要原因之一。丙肝病毒感染的长期影响是非常变量,从最小的组织学变化广泛肝纤维化、肝硬化的肝细胞癌(HCC) (1]。大约有80%的患者感染丙肝病毒无法根除病毒,随身带着一个巨大风险,肝纤维化、肝硬化的进展(2]。确切的机制有利于持续感染,导致肝纤维化不是完全清楚。众多的研究表明一个受损的免疫反应和临床结果之间的关联,并有证据表明,免疫细胞调节纤维发生丙型肝炎(3- - - - - -5]。
自然杀伤细胞(NK)是专门提供一线防御的淋巴细胞通过他们的能力杀死pathogen-infected细胞和转化细胞,他们发挥的一个重要antifibrotic活动激活肝星状细胞(hsc) [6- - - - - -10]。NK细胞功能受抑制和激活信号的平衡,这是由一系列不同的细胞表面受体。抑制性受体包括多种杀伤细胞(吉珥)和C-type-lectin immunoglobulin-like受体受体如CD94 / NKG2A。这些受体结合self-major组织相容性复合体(MHC)类分子,这是既定的表达在正常细胞。如果我自身阶级分子表达增加靶细胞,它可以导致增加抑制性信号和受损的NK细胞活性(11]。NK细胞的细胞毒性降低活动被报道在人类巨细胞病毒感染,巴尔病毒、单纯疱疹病毒、丙肝病毒。因此,改变NK细胞可能是一个通用的函数机制病毒逃避免疫系统(5]。
HLA-E是模类MHC分子,几乎对所有的人类组织和细胞系转录。这个分子的作用的先天免疫反应是目前信号sequence-derived其他HLA类分子的肽抑制NK-mediated通过识别CD94 / NKG2A细胞溶菌作用。然而,HLA-E也可以绑定和现在其他肽序列,可以自我或病原体派生,可以被适应的t细胞。HLA-E被认为先天和适应性免疫中发挥作用,通过与NK细胞和互动展示肽抗原CD8 + t细胞(12]。
在我们的研究中,我们分析了HLA-E在肝脏的表达及其与慢性丙型肝炎患者肝脏疾病的严重程度。
2。材料和方法
2.1。病人
这是一个回顾性研究通过修改病历125例诊断为慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性和经历了肝脏活检。20从受试者没有肝病肝活检,死于心血管并发症,被用作控制。当地伦理委员会批准了这项研究(协议编号:13812/2014)。
2.2。组织学分析和免疫组织化学
综述了肝脏对照组样本排除炎症活动的存在,纤维化,脂肪,和铁沉积。综述了丙型肝炎患者的肝活检和分类根据纤维化和炎症活动的严重性(METAVIR分类)13]。
评估肝HLA-E分子的表达进行肝脏标本石蜡块中包含使用免疫组织化学技术。总之,4μ米是在石蜡包埋组织切片和安装在幻灯片用poly-L-lysine预处理。抗原复苏,阻断内源性过氧化物酶,阻止非特异性反应的进行。幻灯片在湿在室温下孵化室一夜之间,anti-HLA-E抗体MEM-E / 02 (EXBIO抗体,捷克共和国),1:100稀释。
HLA-E表达分类根据HLA-E-positive细胞的百分比,通过手动计算10视觉领域×200放大为每个肝脏样本。描述的结果三个类别:0(没有阳性细胞表达),年级1 +(< 25%),2 +(25 - 50%),和三年级+阳性细胞表达的(> 50%)。
2.3。统计分析
连续变量表示为平均值,标准偏差和范围。分类变量与频率和百分比表示。卡方分析和线性趋势卡方是用于比较分类变量和连续变量使用克鲁斯卡尔-沃利斯检验进行了分析。
一个值小于0.05被认为是重要的。执行统计数据的解释使用社会科学统计软件包(SPSS)对Windows 17.0版本。
3所示。结果
丙肝患者和对照组的平均年龄是49.7(±11.7)和58.7(±20)年,分别。丙型肝炎患者大多数是男性(50.8%),对照组的55%是女性。基因型1是最常见的(68%的患者)。在hcv感染的样本,METAVIR肝活检显示以下分类:F0/1: 31%, F2: 33%, F3或F4: 36%, A0/1: 32%, A2: 42%,和A3: 26%。在对照组肝脏样本,没有炎症活动,纤维化,脂肪,或铁矿床。
免疫组织化学显示阳性HLA-E在肝细胞胞浆和枯氏细胞。这些细胞被确定根据他们的形态,和costaining CD68-specific抗体,枯氏细胞,完成(数据1(一)和1 (b))。
(一)
(b)
肝细胞和枯否细胞HLA-E积极性的速度明显高于在丙肝病人相比,对照组(58.6%××10%,20%和45.3%分别地。表1)。
患者年龄超过40年,男性性别与更高频率的HLA-E表达式。百分之六十四的患者年龄超过40年提出HLA-E肝细胞上表达,而36%的患者不到40岁( )。百分之五十五的男性提出HLA-E枯氏细胞中表达,而只有34%的女性患者( )。
重大协会( )被发现之间的程度的坏死性炎症和纤维化和HLA-E丙型肝炎患者肝细胞和枯否细胞表达。肝脏样本分为严重纤维化(METAVIR F3-F4)坏死炎性组织活动(METAVIR A3)或更大的表达式的HLA-E枯氏细胞和肝细胞,与一个线性协会( )。数据2- - - - - -5显示之间的关系HLA-E坏死炎性组织活性表达和肝纤维化/。
4所示。讨论
在这项研究中,一个重要upregulation HLA-E表达肝脏中发现了来自hcv感染的个体相比,HCV-negative科目。检测到表达HLA-E CD68(+)巨噬细胞/枯氏细胞和肝细胞。Nattermann等。还发现在hcv感染的肝脏增强肝内表达HLA-E相比HCV-negative肝脏。表达HLA-E中检测出CD68(+) /枯氏细胞和巨噬细胞CD31(+)正弦内皮细胞,以及CD83和CD14(+)(+)细胞(5]。他们表明,作为一个潜在的潜在机制,丙肝病毒产生的肽(HCV核心氨基酸35-44)结合HLA-E,稳定其表面表达,从而损害NK细胞的细胞毒性(5,14]。
NK细胞重要的贡献的初始控制病毒感染通过他们迅速而有效的细胞毒性的活动。他们也发挥的一个重要antifibrotic活动激活肝星状细胞。因此,NK细胞功能受损可以使进化慢性丙型肝炎感染和肝纤维化的进展(5- - - - - -10),HLA-E分子这一过程的一个关键组件是通过与抑制NK细胞受体的相互作用。Nattermann等人发现了一个显著增加比例的抑制性受体,NKG2A, HCV-positive患者NK细胞表达,导致细胞溶解的活动下降对细胞孵化与HLA-E-stabilizing肽丙肝病毒核心35-44 [15]。除了抑制NK细胞,HLA-E upregulation可能进一步功能的后果。增加HLA-E表达式被特别是肝CD68(+)巨噬细胞/枯氏细胞,应该保护这些细胞对NK细胞溶解,从而延长抗原演示(5]。
流行病学调查表明,纤维化是加速在某些情况下,如老龄雄性(16]。年龄是一个独立的因素,与较高的纤维化进展(17]。研究表明,发展的速度可以300倍患者受疾病影响的第七个十年的生活相比影响在人生的第三个十年18]。同样,男性也被认为是肝纤维化进展的一个重要因素,纤维化10倍的速度增加,独立于年龄(18]。衰老的免疫系统还可以与这些发现,自从丙型肝炎患者肝脏样本年龄超过40年,男性表现出更大的频率HLA-E表达肝细胞和枯否细胞上与年轻女性患者相比,本研究中观察到。
在丙型肝炎患者肝纤维化进展仍然是一个重要的临床问题,这是一个困难的表型进行调查。因为丙肝病毒感染的确切日期通常不是可用,它由环境因素混淆,难以准确量化,有限制的实用性和精度纵向评估(16]。
我们首次报道,HLA-E表达式在肝脏微环境明显高于严重坏死炎性组织活动阶段的纤维化和hcv感染的病人。持续的丙肝病毒感染通常是与肝脏慢性炎症改变,最终导致肝纤维化、肝硬化。不仅直接引起细胞病变的影响,而且免疫介导机制可能参与肝损伤,和我们的数据增强免疫反应参与肝纤维化进展。在我们的分析中,肝脏样本分为坏死炎性组织活性严重纤维化和提出了更大的表达式的HLA-E枯氏细胞和肝细胞,与一个线性协会。
5。结论
的模HLA-E分子可能具有免疫调节作用,在肝脏疾病的严重程度可能作用在慢性丙型肝炎知识的表达谱HLA-E可以帮助识别hcv感染患者预后差和不那么有利的结果。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从作者通过电子邮件请求((电子邮件保护))。
信息披露
本文中讨论的一部分结果提出了之前的海报在第67届会议上美国肝病研究协会:肝脏会议2016 (https://aasldpubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/hep.28799)。
的利益冲突
作者没有利益冲突披露。
资金
本研究开发了自己的融资支持。
确认
作者要感谢胃肠病学的成员,病理学和免疫学实验室的大学医院小溪Preto医学院,巴西圣保罗大学。