的影响Anti-dsDNA抗体在体外Fertilization-Embryo转让和Frozen-Thawed胚胎移植

文摘

我们的目的是探讨是否anti-dsDNA抗体,这是证明进入活细胞并诱导细胞凋亡,可能影响生殖的结果。共有259名女性接受体外fertilization-embryo转移(IVF)周期为在这项研究中,包括52名女性积极的安娜和anti-dsDNA (ANA + / anti-dsDNA +组),86名女性积极的安娜和消极anti-dsDNA (ANA + / anti-dsDNA−集团),和121名女性负面安娜和anti-dsDNA (ANA−/ anti-dsDNA−集团)。136名妊娠妇女259例中IVF-ET周期进入激素替代疗法frozen-thawed胚胎移植(HRT-TET)循环。我们比较三组中基本特征和体外受精结果新鲜胚胎移植和frozen-thawed胚胎移植周期,分别。检索卵母细胞的数量,可用胚胎和优质胚胎的安娜+ / anti-dsDNA +组低于其他两组的新鲜胚胎移植周期。的受精、植入和临床妊娠安娜+ / anti-dsDNA +组最低,而早期流产率最高的安娜+ / anti-dsDNA +集团在新鲜胚胎移植周期和frozen-thawed胚胎移植周期。我们的数据表明,anti-dsDNA抗体可能是重要的标志不孕妇女中有缺陷的卵母细胞或胚胎与任何类型的安娜。

1。介绍

抗核抗体(ANAs)与不孕症有关,卵母细胞质量下降,胚胎发展的障碍,复发性自然流产,体外受精失败(1- - - - - -4]。阿拉斯被一大群自身抗体针对整个细胞包括DNA, RNA,蛋白质,和/或其复合物。它是未知类型的安娜参与贫困生殖的结果。作为诊断的血清学标记的系统性红斑狼疮(SLE), anti-dsDNA抗体发挥了至关重要的作用在狼疮肾炎的发病机制5,6]。有越来越多的文献表明,anti-DNA抗体可以渗透到活细胞与细胞内目标(7- - - - - -13]。这些研究从几个实验室与主流免疫教条,细胞内部访问抗体。Anti-dsDNA抗体可以检测到细胞内部和沉积在肾脏和其他器官Anti-dsDNA抗体管理到nonautoimmune小鼠体内试验(7,14]。后被观察到了类似的发现coculture anti-dsDNA抗体与细胞体外。研究表明,anti-dsDNA抗体在细胞毒性细胞和诱导细胞凋亡15- - - - - -19]。似是而非,anti-dsDNA抗体可能导致异常卵母细胞和胚胎的发展。因此,本研究的目的是探索anti-dsDNA抗体的临床意义卵母细胞的受精和胚胎植入IVF-ET和HRT-TET之后。

2。材料和方法

2.1。病人

本研究的第一部分是调查anti-dsDNA IVF-ET循环的影响。根据入选标准,共有259名女性向体外受精程序在生殖医学中心,中山大学第一附属医院,从2013年12月至2016年5月被招募。招聘标准年龄< 38年,基础FSH < 10 IU / l,窦的卵泡数6至15,没有历史的卵巢手术之前,之前也没有化疗的历史。安娜的主要适应症检测和anti-dsDNA包括体外受精失败(≥2周期),复发性IUI失败(≥3周期),自然流产史。对所有病人,anti-dsDNA和安娜在体外受精程序之前测试的医院的临床实验室。不孕症诊断为所有患者如下:输卵管疾病66例,男性不育夫妇,75年联合53的男性和输卵管不孕夫妇,子宫内膜异位在22个病人,排卵的障碍和其他诊断23例,不明原因的不孕症在20夫妇。自身免疫性疾病患者或临床表现的自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、antiphospholipid综合症,干燥综合征,硬皮病,和自身免疫性甲状腺炎,以及那些其他自身抗体阳性包括anticardiolipin抗体,抗甲状腺抗体,狼疮抗凝,类风湿因子被排除在本研究之外。患者分为三组根据抗体的概要文件。共有259名女性接受体外受精-胚胎移植(IVF -)周期为在这项研究中,包括52名女性积极的安娜和anti-dsDNA (ANA + / anti-dsDNA +组),86名女性积极的安娜和消极anti-dsDNA (ANA + / anti-dsDNA−集团),和121名女性负面安娜和anti-dsDNA (ANA−/ anti-dsDNA−集团)。在frozen-thawed anti-dsDNA胚胎移植周期的影响在第二部分探索。 136 nonpregnant women among 259 patients in the IVF-ET cycle were enrolled, 32 women with positive ANA and anti-dsDNA (ANA+/anti-dsDNA+ group), 48 women with positive ANA and negative anti-dsDNA (ANA+/anti-dsDNA− group), and 56 women with negative ANA and anti-dsDNA (ANA−/anti-dsDNA− group) were included. All patients enrolled in this study were notified about the study, and all of them signed informed consent forms for publishing. The Medical Ethics Committee of The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University approved this study.

2.2。体外受精程序

所有患者的长期执行差别垂体对这些。总之,长效促性腺(0.8毫克,1.0毫克,或1.3毫克)皮下接种在midluteal阶段。当完成观察差别垂体对这些基因,促性腺激素给出控制卵巢过度刺激;促性腺激素的剂量是根据病人的年龄、窦的卵泡数和基础FSH水平。人体绒毛膜促性腺激素(5000 - 10000 IU)注入IM时至少两个卵泡> 18毫米或两个以上的毛囊> 17毫米直径。收集卵母细胞hCG注射后大约36小时,进行体外受精。最多三个胚胎转移到子宫后第三天卵母细胞的收集。在我们的中心,胚胎质量主要由第三天胚胎分级评估体系;一个优质胚胎被定义为六至八,同样大小的卵裂球< 20%卵裂球的碎片。优质胚胎选择转让为主,和高质量的胚胎转移到体外fertilization-embryo转移周期的所有患者的研究。 Fourteen days after ET, the urine and serum hCG levels were measured. Once urine and serum hCG examination showed positive results, the patients received ultrasonography 2 weeks later to determine the presence of clinical pregnancy.

2.3。子宫内膜在激素替代疗法Frozen-Thawed胚胎移植周期的准备

136名妊娠患者中259例在体外受精周期开始口服戊酸雌二醇后月经的第三天IVF-ET治疗3个月以上。初始剂量的基础上选择前检测到超声子宫内膜条件。病人需要接受血液测试和超声波检查定期根据结果调整医疗剂量的子宫内膜厚度和血清性激素水平。当子宫内膜厚度达到8毫米以上和血清雌二醇水平高于100 pg / ml,孕酮(40 mg / d)是肌内注射子宫内膜转化为分泌期。后第三天,第四天的胚胎移植孕激素注射。允许最多3个胚胎移植到子宫腔。孕激素补充每日肌内注射的40毫克每天申请所有的病人。妊娠诊断的阳性血液测试为标准的第三天胚胎移植后14天。证实了临床妊娠的检测胎儿心跳的妊娠囊经阴道超声检查后积极的HCG检测2周。

2.4。安娜和Anti-dsDNA检测

所有的病人发现anti-dsDNA和安娜在体外受精程序。

血清ANAs被间接免疫荧光法检测试验(IFA)幻灯片与人类上皮HEp-2细胞系和肝组织(猴子)衬底(EUROIMMUN,吕贝克,德国)稀释比例为1:1:320年,100年和1:1000。阿拉斯反应的抗原HEp-2细胞基质,形成抗原抗体复合物绑定到细胞核。幻灯片准备按照制造商的建议和方案,评估在荧光显微镜下使用×20或40×目标。安娜的测试被认为是积极的特征荧光信号检测时的组织或细胞,血清稀释比例为1:100 (EUROIMMUN)。Anti-dsDNA被间接免疫荧光试验测试(IFA)在幻灯片上短膜虫属luciliae。Anti-dsDNA被定义为积极的只有当荧光染色检测动基体短膜虫属luciliae。都进行了分析和解释根据制造商的协议。

2.5。数据收集

基本收集临床资料,包括年龄、不孕,基础FSH和LH水平的子宫内膜厚度HCG注射,当天和体外受精的胚胎和数据传输的结果数量:数量的卵母细胞中,可用胚胎,优质胚胎,受精率(2 pb或2 pn卵母细胞在每组/总检索卵母细胞的体外受精周期),临床怀孕率(每组患者检测到胎儿心跳/总病人每组),植入率(每组胚胎和胎儿心跳/总转移胚胎),和早期流产率(患者在妊娠12周的临床妊娠患者在每组/总临床怀孕)。

2.6。统计数据

统计分析是用SPSS统计软件包20.0版本。克鲁斯卡尔-沃利斯测试进行分析三组不同的定量数据,和Mann-WhitneyU测试是用于分析任意两组之间的差异如果三组之间的差异有统计学显著性。的值被认为是显示统计学意义在三组中,和一个吗值< 0.0167被用来表示任意两组之间的统计学意义。卡方检验和分区卡方测试被用来比较定性数据;同样的,被认为是统计学意义在三组中,然后呢是用来表示两组之间的统计学意义。确切概率法作为合适的。

3所示。结果

3.1。背景的病人的特点

在新鲜胚胎移植周期或在frozen-thawed胚胎移植周期并不存在显著的年龄差异,亚足联,不孕,bFSH, bLH三组(表1和3)。

3.2。卵巢刺激和IVF-ET控制结果

统计分析显示没有明显差异的卵巢刺激,总Gn剂量,E2水平HCG治疗,当天和转移胚胎的数量在三组中,而检索卵母细胞的数量,可用胚胎和优质胚胎安娜+ / anti-dsDNA +最低的组。比较差的检索卵母细胞之间安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜+ / anti-dsDNA−集团()或检索的比较不同卵母细胞之间的安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜−/ anti-dsDNA−集团()在统计学上意义重大。安娜之间没有差别在检索卵母细胞+ / anti-dsDNA−组和安娜−/ anti-dsDNA−集团(),这是符合我们之前的研究结果。显著差异被发现在可用胚胎的数量和高质量的任意两组之间的胚胎。在受精率显著差异也发现卡方测试任意两组之间的分区。尽管植入率之间的差异安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜+ / anti-dsDNA−集团()没有统计学意义,区别安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜−/ anti-dsDNA−集团()或差异安娜+ / anti-dsDNA−组和安娜−/ anti-dsDNA−集团()在统计学上意义重大。此外,怀孕率任意两组之间的差异具有统计学意义。怀孕率是最高的安娜−/ anti-dsDNA−组。早期流产率没有统计分析,由于小样本大小(表2)。

3.3。HRT-FET结果中三组

与IVF-ET HRT-FET结果是相同的结果。尽管植入率之间的差异安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜+ / anti-dsDNA−集团()没有统计学意义,区别安娜+ / anti-dsDNA +组和安娜−/ anti-dsDNA−集团()或差异安娜+ / anti-dsDNA−组和安娜−/ anti-dsDNA−集团()在统计学上意义重大。此外,怀孕率任意两组之间的差异具有统计学意义。怀孕率是最高的安娜−/ anti-dsDNA−组。早期流产率没有统计分析,由于小样本大小(表3)。

4所示。讨论

许多研究研究协会的安娜与生殖不良事件包括不孕症、流产,植入失败(1- - - - - -4]。在我们之前的临床研究中,我们发现成熟的卵母细胞,正常受精,卵裂,优质胚胎,植入,和怀孕安娜+组都不如安娜−组明显(20.]。然后,我们收集了卵泡液和丢弃的【胚胎和发现安娜卵泡液中存在和人类胚胎使用ELISA和免疫荧光方法。安娜在血清和卵泡液的水平有正相关关系。此外,ANA阳性血清和卵泡液在胚胎ANA阳性的危险因素。患者ANA阳性发现丢弃的胚胎获得优质胚胎着床率较低,这可能是一个余数,安娜也受损移植优质胚胎形态(21]。

抗核抗体(ANAs)是一大群自身抗体针对整个单元包括dna、rna、蛋白质,和/或其复合物。Anti-dsDNA抗体,安娜的一名成员,对系统性红斑狼疮的诊断血清学标记会筛选了肾炎患者肾脏的活跃,这表明抗体诱导组织损伤可能是重要的。Anti-DNA anti-RNP抗体可以进入活细胞和与他们的细胞内目标由Alarcon-Segovia和他的同事在1978年首先报道(9]。后来许多研究已经证实这一观点(10- - - - - -13]。后管理anti-dsDNA抗体nonautoimmune老鼠,anti-dsDNA抗体检测多个核的细胞类型,如肾小管细胞,肝细胞,神经细胞,成纤维细胞和单核细胞。在肾脏,这是与肾小球内细胞和蛋白尿有关。核本地化在场后注入F (ab)这些anti-DNA抗体片段,这表明定位发生通过分子的抗原结合区和货代独立。狼疮肾炎的临床症状出现后注入人类和小鼠anti-dsDNA抗体正常小鼠。一些研究表明,anti-dsDNA可能渗透进入细胞后诱导细胞凋亡16- - - - - -20.]。其他的研究还表明,细胞内渗透通过anti-dsDNA抗体可以上调mRNA的表达细胞因子il - 1、il - 6,引发,TGF -β(22,23]。

细胞凋亡,名叫程序性细胞死亡,是至关重要的胚胎发育,体内平衡,监测,和消除病变。其主要功能是染色体缩合、染色体断裂,细胞体积,减少和细胞凋亡的身体。DNA降解酶的破坏是不可逆的过程中细胞凋亡(24]。细胞凋亡是重要的发展的卵母细胞和胚胎在生理情况下。发展受阻和死亡会发生如果细胞凋亡程度超出生理范围。低质量与细胞凋亡相关的胚胎(25,26]。高水平的DNA片段在卵母细胞与低生育率TUNEL检测(27]。如今,胚胎发育潜力的评估方法是胚胎形态评分主要生殖医学中心。但该方法的预测价值是有限的,主观的。最近的研究证明,胚胎细胞凋亡的调控机制是至关重要的潜力和细胞凋亡程度的胚胎是反射胚胎质量的关键因素之一28]。Anti-dsDNA抗体诱导大鼠系膜细胞凋亡而不影响p53和Fas基因表达15]。人类嗜中性粒细胞发生细胞凋亡也随着coculture anti-dsDNA源自狼疮小鼠(16]。增加裂引起的DNA anti-dsDNA说明anti-dsDNA诱导细胞凋亡(17]。根据这些证据,提供间接证明anti-dsDNA抗体不孕症患者可能会渗透到卵母细胞和胚胎诱导细胞凋亡。这可能是不良生育状况的原因。毫无疑问,更高的细胞凋亡率是否存在于卵母细胞和胚胎从anti-dsDNA抗体阳性患者和anti-dsDNA抗体是否可以直接检测到卵母细胞和胚胎从anti-dsDNA抗体阳性患者将来需要验证实验。

5。结论

到目前为止,很少有临床意义的信息改进anti-dsDNA人工生殖技术(ART)的结果。本研究分析了体外受精和HRT-TET结果安娜+ / anti-dsDNA +集团,ANA + / anti-dsDNA−集团和安娜−/ anti-dsDNA−组检索,发现卵母细胞的数量,可用胚胎,优质胚胎,施肥、和临床妊娠安娜+ / anti-dsDNA +最低的组。所有差异都显著。尽管早期流产率没有统计分析由于小样本大小,我们发现所有怀孕的患者遭受堕胎的安娜+ / anti-dsDNA +集团和anti-dsDNA可以通过进入活细胞诱导卵母细胞和胚胎细胞凋亡可能是可怜的生殖机制的结果。这些结果可能会提供新的方法来理解自身抗体参与生殖结果anti-dsDNA积极的女性患有试管受精失败。

伦理批准

第一附属医院医学伦理委员会批准了中山大学的这项研究。

同意

知情同意是获得所有个体参与者包括在这项研究中。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。

作者的贡献

焦粉丝参与数据收集和管理,数据分析,和手稿写作。叫喊声中参与协议的发展。陈Cuina参与了数据收集。

确认

这项研究是由广东省科技项目(没有。2013 b021800271)、科技和信息局广州市(2014 j4100161),广东省人口和计划生育委员会(20132048)。

引用

1. a . s .凯德b·d·凯德·b·Janowicz和r . g . Roussev“Immunodiagnostic评价女性生殖失败,”美国生殖免疫学》杂志上,42卷,不。6,335 - 346年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. k .菊池h . Shibahara y Hirano et al .,“抗核抗体减少怀孕率在第一IVF-ET治疗周期而不是累积妊娠率没有特定的药物,”美国生殖免疫学》杂志上,50卷,不。4、363 - 367年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j·j·迪亚斯·r·m·德·奥利维拉和m . s . Abrao“抗核抗体和子宫内膜异位症,”国际妇产科杂志,卷93,不。3、262 - 263年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. c . Ticconi f . Rotondi m . Veglia et al .,“反核自身抗体与复发性流产的女性,”美国生殖免疫学》杂志上,卷64,不。6,384 - 392年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. b·h·哈恩“DNA抗体”,《新英格兰医学杂志》上,卷338,不。19日,1359 - 1368年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b . Deocharan x清、大肠乞求和c . Putterman”anti-double-stranded DNA抗体抗原触发器和分子靶点,”红斑狼疮,11卷,不。12日,第871 - 865页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. r·h·Weisbart m . Stempniak美国哈里斯·d·j·扎克和机构组织,k . Ferreri”的修改自身抗体作为交付系统针对细胞核:治疗意义,”自身免疫杂志,11卷,不。5,539 - 546年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. k·濑进和m . p . Madaio“核本地化anti-DNA抗体进入细胞通过caveoli和调节的p53和窖蛋白的表达,“自身免疫杂志,24卷,不。2、145 - 151年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. d . Alarcon-Segovia a Ruiz-Arguelles大肠什拜因,“核核糖核蛋白抗体穿透生活人类单核细胞通过Fc受体,”自然,卷271,不。5640年,第69 - 67页,1978年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d . Alarcon-Segovia a Ruiz-Arguelles l .略伦特,“打破教条:自身抗体的渗透到活细胞,”今天免疫学,17卷,不。4、163 - 164年,1996页。视图:谷歌学术搜索
11. m·h·福斯特,t . Kieber-Emmons m . Ohliger和m . p . Madaio”分子和结构分析的核本地化anti-DNA狼疮抗体,”免疫研究,13卷,不。2 - 3、186 - 206年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. m . Reichlin“自身抗体的细胞功能障碍引起的渗透到活细胞:细胞损伤和功能障碍由dsDNA和核糖体P蛋白抗体,”自身免疫杂志,11卷,不。5,557 - 561年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. d·j·扎克·m·Stempniak a . l . Wong c·泰勒和r·h·Weisbart“细胞渗透机制和核本地化的anti-double链DNA自身抗体,”免疫学杂志,卷157,不。5,2082 - 2088年,1996页。视图:谷歌学术搜索
14. m·r·Ehrenstein d·r·卡茨m·h·格里菲斯et al .,“人类免疫球蛋白anti-DNA抗体沉积在SCID小鼠肾脏和引起蛋白尿,”肾脏国际,48卷,不。3、705 - 711年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. c . l . Yu m·h·黄c . y .蔡et al .,“人类的影响多克隆anti-dsDNA自身抗体对培养的大鼠肾小球系膜细胞凋亡基因的表达,”斯堪的纳维亚风湿病学杂志》,27卷,不。1,54-60,1998页。视图:谷歌学术搜索
16. s . c .谢长廷k h .太阳,c . y .蔡et al .,“单克隆anti-double链DNA抗体是一种leucocyte-binding蛋白调控interleukin-8基因的表达,引起细胞凋亡的正常人类多形核中性粒细胞,”风湿病学(牛津),40卷,不。8,851 - 858年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. t .日本久保田公司:渡边、y Kanai和b . d . Stollar”增强氧化乳沟的DNA结合位点的两个anti-double-stranded DNA抗体,”《生物化学》杂志上,卷271,不。11日,第6561 - 6555页,1996年。视图:谷歌学术搜索
18. e·科伦·m·Koscec m . Wolfson-Reichlin et al .,“小鼠和人类天然DNA抗体的交叉反应的A和D SnRNP多肽培养肾细胞造成直接伤害,”免疫学杂志,卷154,不。9日,第4864 - 4857页,1995年。视图:谷歌学术搜索
19. s . Schmidt-Acevedo b Perez-Romano, a . Ruiz-Arguelles“LE细胞吞噬凋亡的结果引起的身体抗核抗体,”自身免疫杂志,15卷,不。1、15 - 20,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. y, y . p .钟,c .问:周et al .,“抗核抗体预测一个贫穷IVF-ET结果:卵子和胚胎发育障碍和怀孕率降低,”免疫学研究第41卷。。5,458 - 468年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. y, y . p .钟,c .问:周et al。”进一步勘探的影响抗核抗体在体外fertilization-embryo转移的结果,“美国生殖免疫学》杂志上,卷70,不。3、221 - 229年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. s . j . k . h .太阳,c . l . Yu Tang和g . h .太阳,“DNA单克隆anti-double-stranded自体抗原刺激IL-1beta的表达和释放,il - 6,引发,il - 10和tnf正常人类单核细胞包括红斑狼疮发病机理,“免疫学,卷99,不。3、352 - 360年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. k·h·c·l . Yu太阳,c . y .蔡s . c .谢长廷和h . s . Yu”Anti-dsDNA抗体让白介素6,但不是cyclo-oxygenase,肾小球系膜细胞的基因表达:免疫介导的肾损害的标志吗?”炎症反应的研究,50卷,不。1、12 - 18,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. s . m . Delimitreva r s Zhivkova i t . Vatev和d . i Toncheva“染色体疾病和核和细胞破坏人类胚胎在裂开,“国际发育生物学杂志》上卷,49号4、409 - 416年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. r·利维“基因调控胚胎生存,”细胞学的国际评论卷。210年,1-37,2001页。视图:谷歌学术搜索
26. k·哈迪,斯帕诺,d·贝克·安内利r·m·温斯顿·j·斯塔克,“从细胞死亡到胚胎逮捕:人类胚胎发展的数学模型,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷98,不。4、1655 - 1660年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 佩雷斯g . i和j·l·蒂莉,”积云细胞所需卵母细胞的凋亡增加潜在的老鼠岁”人类生殖,12卷,不。12日,第2783 - 2781页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. x l . j . Wu张,王,“人类卵母细胞体外成熟和细胞凋亡与年龄相关,”生育与不孕,卷74,不。6,1137 - 1141年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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