文摘

严重的皮肤药物不良反应(疤痕)是危及生命的反应。强烈的关联HLA-B 58:01等位基因和allopurinol-induced伤疤认出。筛查HLA-B 58:01等位基因在处方之前别嘌呤醇在某些人群推荐。几个单核苷酸多态性(snp) 6号染色体的发现是紧密相连的HLA这些snp等位基因,已经被提议作为代理的标记HLA-B 58:01等位基因。本研究旨在评估之间的联系三个单核苷酸多态性在6号染色体和泰国人口allopurinol-induced疤痕。之间的连锁不平衡HLA-B 58:01这些snp等位基因和也被评估。结果表明,三个单核苷酸多态性,包括rs9263726 rs2734583, rs3099844 allopurinol-induced疤痕但显著相关程度较低的协会与相比HLA-B 58:01等位基因。敏感性,特异性,PPV和NPV的这些snp是可比的HLA-B 58:01等位基因。尽管SNP的检测是简单和便宜的价格相比HLA-B 58:01这些snp等位基因,并不完全与HLA-B 58:01等位基因。使用这些代理标记snp的检测HLA-B 58:01等位基因,以避免疤痕之前别嘌呤醇政府需要谨慎,因为他们的不完美的链接的HLA-B 58:01等位基因。

1。介绍

别嘌呤醇,尿酸acid-lowering代理,是最常见的罪魁祸首之一药物严重的皮肤药物不良反应(疤痕)。这些反应包括史蒂文斯—约翰逊综合征(sj)和中毒性表皮坏死松解症(10)与嗜酸性粒细胞和系统性药物反应症状(衣服)。虽然allopurinol-induced疤痕的发病率是罕见,他们是危及生命的反应。系统评价的数据显示,虽然在亚洲人口是痛风的患病率低于白人人口,在亚洲人别嘌呤醇引起的超敏反应报告是报告病例的73%左右1]。在台湾,一年一度的别嘌呤醇过敏症的发病率是4.68每1000新用户,2.02每1000新用户相关的住院治疗,和0.39每1000新用户相关的死亡率(2]。别嘌呤醇过敏在台湾的死亡率是8.3%2]。同样,allopurinol-induced疤痕的发生率在泰国报道从泰国最大的医院是2.13每1000新用户(3]。与其他药物引起的疤痕相比,allopurinol-induced疤痕观察泰国人口的死亡率是最高的11% (4]。

尽管allopurinol-induced疤痕视为特殊反应,目前的研究已经确定了几个风险因素的致命的反应包括遗传和nongenetic因素(4- - - - - -6]。遗传因素、特定的等位基因的人类白细胞抗原(HLA),即HLA-B 58:01是第一个遗传标记等位基因,被发现与allopurinol-induced疤痕在台湾人口密切相关(7]。本协会已经确认在泰国4,8,9和汉族10,11)的人口。不像HLA-B 15:02等位基因是针对中国和东南亚人口之间的联系HLA-B 58:01等位基因和allopurinol-induced伤疤也展示了在日本12,13),韩国(14),和高加索人群(15]。协会的力量范围从一个比值比(或)39 - 696 (16的敏感性和特异性HLA-B 58:01等位基因的预测allopurinol-induced伤疤是93%(95%置信区间:85 - 97%)和89%(95%可信区间,87 - 91%)亚洲和白人人口(16]。到目前为止,美国风湿病学院推荐的测试HLA-B 58:01等位基因在某些种族的高频等位基因和显示allopurinol-induced疤痕的风险升高HLA-B 58:01等位基因携带者等汉族、泰国和韩国人口(17]。

由于高度多态的性质HLA基因,需要特定的方法来确定一个特定的HLA等位基因,特别是HLA-B等位基因外显子2和3的区域表现出最高的可变性。几个分子技术包括特定的测序引物PCR (SSP), sequence-specific寡核苷酸(SSO)探针和sequencing-based类型(SBT)演示了具体的确定方法HLA基因型;然而,这些技术非常昂贵,耗时,不常用在医院实验室。最近的全基因组关联研究在日本人口已经发现了大量的单核苷酸多态性(snp)在6号染色体与allopurinol-induced疤痕(密切相关13]。这些snp包括rs2734583HLA-B-associated记录1(BAT1)基因,rs3099844HLA复杂P5(HCP5)基因,和rs9263726银屑病易感性1候选人1(PSORS1C1)基因。由于绝对rs9263726和之间的连锁不平衡HLA-B 58:01等位基因中发现27日本病人遭受allopurinol-induced伤疤,rs9263726已被建议作为代孕的标志allopurinol-induced sj / 10 [18]。同样,绝对rs9263726之间的连锁不平衡和allopurinol-induced伤疤也最近报道17中国东部患者(19]。种族特异性之间的关联HLA等位基因和药物引起的疤痕很认可20.]。这些snp是allopurinol-induced疤痕的好代理人是否在其他民族社会或不需要评估。本研究旨在评价之间的关系程度,所选择的三个单核苷酸多态性在6号染色体包括rs9263726, rs2734583, rs3099844 allopurinol-induced疤痕在泰国人口有一个相对较高的频率HLA-B 58:01等位基因。此外,这些选定的单核苷酸多态性的敏感性和特异性的预测allopurinol-induced伤痕和连锁不平衡的HLA-B 58:01等位基因在本研究的特点。

2。材料和方法

2.1。研究人口评估和登记

共有96名allopurinol-induced疤痕患者包括23连衣裙和73 sj /十个病人参与了这一研究。这些患者被诊断出患有allopurinol-induced疤痕在前3个月别嘌呤醇曝光。疤痕的表型个体病人由奥尔登(得分和评估21)或RegiSCAR算法(22]而诱发药物的评估是使用Naranjo执行的算法(23]。所有的疤痕患者代表至少可能参与了这一研究。

控制人群比较,193患者招募患者使用别嘌呤醇超过6个月没有任何的皮肤反应的证据。从每个病人得到书面知情同意。研究协议在医院网络的孔敬大学孔敬伦理委员会批准的人类研究泰国孔敬大学(HE510837)。每个医院,研究方案也通过IRB函数可用。

2.2。基因组DNA制备

白细胞被离心分离外周血在3500 rpm 15分钟或口腔拭子。基因组DNA (gDNA)从使用QIAamp白细胞DNA分离血液迷你包(试剂盒GmbH是一家现代化、希尔登,德国)。gDNA被检查的数量和质量下降纳米机器(热科学NanoDrop 2000 C)和保持在−20°C到使用。

2.3。检测的HLA-B 58:01等位基因

的HLA-B 58:01等位基因检测使用一个商业PG5801 DNA检测设备(Pharmigene Inc .,台北,台湾)如前所述[8]。的HLA-B基因型的患者HLA-B 58:01等位基因被证实使用PCR sequence-specific寡核苷酸探针方法被描述在一个先前的研究(24]。

2.4。检测rs9263726、rs2734583 rs3099844 snp

的rs9263726PSORS1C1基因检测使用聚合酶链reaction-restriction片段长度多态性(PCR-RFLP)试验如前所述18]。PCR条件设定在94°C 5分钟紧随其后35周期放大在94°C,持续30秒,60°C 45秒,72°C 45秒和最终扩展72°C的7分钟。260个基点的长度PCR产品消化霍英东我核酸内切酶(美国新英格兰生物学实验室,贝弗利,MA),和DNA片段被琼脂糖凝胶电泳检测。

的rs2734583BAT1基因(化验ID: C__26778946_20)和rs3099844HCP5基因(化验ID: C__27455402_10)检测到TaqMan®SNP基因分型检测(美国生活技术,卡尔斯巴德,CA)。

2.5。统计分析

双尾学生的t以及和确切概率法被用来比较差异的伤疤和宽容控制人口数据(SPSS为Windows;IBM公司,纽约,美国)。allopurinol-induced疤痕的风险计算使用的主要模型和单变量逻辑回归分析通过SPSS软件(IBM公司,纽约,美国)。伍尔夫霍尔丹修改的公式中使用样品含有零。的Bonferroni-corrected值(Pc-value)被乘法计算价值4这是多重比较的数量占观察到的单核苷酸多态性在这项研究中,和Pc-value小于0.05被认为是具有统计学意义。个体敏感性,特异性,阳性预测值(PPV)以及阴性预测值(NPV)HLA-B 58:01等位基因或选定的单核苷酸多态性筛选allopurinol-induced疤痕。

估计连锁不平衡系数(D”)和相关系数(r²)之间的HLA-B 58:01等位基因和选定的单核苷酸多态性计算使用叮铃声(V1.07)计划。

3所示。结果

3.1。比较之间的关联HLA-B 58:01等位基因和选定的snp Allopurinol-Induced伤疤

(即九十六年allopurinol-induced伤痕。,23DRESS and 73 SJS/TEN patients) and 193 allopurinol-tolerant controls were recruited for the study. The demographic and clinical characteristics of the case and the control groups are shown in Table1。

九十六年allopurinol-induced疤痕患者,90例(93.75%)进行HLA-B 58:01等位基因包括服装的21/23(91.30%)的患者组和69/73(94.52%)的病人在sj /十组(表2)。与疤痕组织相比,只有23岁的193名(11.92%)患者在宽容的对照组进行等位基因(表2)。单变量分析的结果表明,HLA-B 58:01等位基因是与allopurinol-induced伤疤OR为110.87 (95% CI -282.15 = 43.57, Pc-value = 2.05×10⁻²²)(表2)。allopurinol-induced礼服的风险为77.61倍(95% CI = 17.07 - -352.85, Pc-value = 7.12×10⁻⁸病人带着)HLA-B 58:01等位基因与不携带这种基因。类似于观察sj / 10的风险allopurinol-induced sj / 10HLA-B 58:01等位基因携带者是127.50倍(95% CI -382.27 = 42.53, Pc-value = 1.99×10⁻¹⁷)(表2)。

在6号染色体三选单核苷酸多态性,rs2734583BAT1基因显示最allopurinol-induced礼服OR为64.56 (95% CI -291.16 = 14.31, Pc-value = 2.35×10⁻⁷)的rs3099844紧随其后HCP5基因(或= 59.38,95% CI -266.97 = 13.21, Pc-value = 4.04×10⁻⁷)和rs9263726PSORS1C1基因(或= 22.21,95% CI -69.46 = 7.10, Pc-value = 3.91×10⁻⁷)(表2)。相比之下,最强的关联allopurinol-induced sj /观察十rs9263726(或= 63.60,95% CI = 23.85 - -169.56, Pc-value = 4.22×10⁻¹⁶)。当考虑服装和sj /十伤痕,这三个单核苷酸多态性明显与别嘌呤醇引起的疤痕与协会的力量从45到60(表2)。所有这些snp的研究人群随访哈迪温伯格平衡。

敏感性,特异性,NPV和PPV的HLA-B 58:016号染色体等位基因与所选择的三个单核苷酸多态性在预测的礼服和sj /十别嘌呤醇所致如表所示3。这些参数的HLA-B 58:01等位基因预测的衣服或sj /十是最高的。敏感性,特异性,PPV和NPV的这三个单核苷酸多态性预测sj /十以及疤痕(表非常相似3)。应该注意的是,这些值的rs9263726预测的衣服相对低于其他两个单核苷酸多态性(表3)。

关于这三个单体型的选择单核苷酸多态性(rs9263726-rs2734583-rs3099844), 69.57%(16/23)的患者在服装组和83.56%(61/73)的患者在sj /十组进行GA-TC-CA单体型比例为12.44%(24/193)的控制(表2)。约80.83%(156/193)的控制患者进行GG-TT-CC单体型。少数患者情况和对照组进行其他单(数据没有显示)。相比GG-TT-CC单体型,风险患者把CA-TC-GA allopurinol-induced礼服的单体型约为52.00倍(95% CI = 11.24 - -240.51, Pc = 1.17×10⁻⁶)而allopurinol-induced sj / 10约为99.13倍(95% CI = 33.03 - -297.52, Pc = 9.90×10⁻¹⁶)(表2)。敏感性,特异性,PPV和NPV的CA-TC-CA单体型筛查的预测服装和sj /十如表所示3。

3.2。之间的一致性HLA-B 58:016号染色体等位基因和选定的snp

连锁不平衡的结果(LD)研究人群的分析(结合病例组和对照组的数据, 显示每个SNP显示强大的连锁不平衡HLA-B 58:01等位基因与D的值超过0.90值超过0.8(表4)。亚组分析LD的服装集团透露,这三个单核苷酸多态性是一个完整的LD的HLA-B 58:01等位基因(D' = 1.0),但完美的LD的1.0被发现只有rs9263726 rs2734583和rs3099844但不( )(表4)。sj /十和伤疤组织,这三个单核苷酸多态性是摩门教的完成HLA-B 58:01等位基因(D = 1.0)但值小于0.8(表4)。

4所示。讨论

别嘌呤醇是一种有效和廉价的药物治疗痛风;然而,allopurinol-induced疤痕可能危及生命的药品不良反应。因此,预测患者可能是这些反应的风险增加药物的安全是必要的。符合之前的报道,这项研究的结果清楚地表明HLA-B 58:01等位基因是密切相关的表型的疤痕,包括服装和sj /十别嘌呤醇所致。高灵敏度和高特异性的HLA-B 58:01等位基因的预测这些致命的反应观察PPV(93.75%和88.08%)和净现值的79.65%和96.59%。相比HLA-B 58:016号染色体等位基因,所选单核苷酸多态性在显示相对较低敏感性和特异性以及低PPV和预测的NPV allopurinol-induced伤疤。与先前的报道日本人口相比,rs9263726, rs2734583, rs3099844 snp是不完整的,完美的像HLA-B 58:01等位基因在泰国人口。

单变量分析的结果显示HLA-B 58:01等位基因是密切相关的服装和sj /十别嘌呤醇所致(表2)。的或HLA 58:01等位基因sj / 10约1.6倍高于礼服。的整体或HLA预测两种表型的等位基因allopurinol-induced伤疤是110.87 (95% CI = 43.57 - -282.15, Pc = 2.05×10⁻²²)。值得注意的是sj / 10 86名患者和182例对照组的患者一样报道在前面研究[4]。之间或更低HLA-B 58:01allopurinol-induced疤痕在本研究观察到和以前的研究由于缺乏HLA-B 58:01等位基因的一些疤痕患者目前本研究招募了。由于高灵敏度、高特异性、高PPV和高NPV观察到在目前的研究和其他先前的研究[5,7,15,25),HLA-B 58:01等位基因筛查已被建议作为一个有效的遗传标记筛选可能的高危患者allopurinol-induced伤疤。到目前为止,准则和建议HLA-B 58:01等位基因筛查之前别嘌呤醇管理特别是在某些种族的高频HLA-B 58:01等位基因携带者等汉族、泰国和韩国人口已经发布了(17,26]。此外,包括泰国和台湾在内的几个国家的数据表明,HLA-B 58:01等位基因筛查是一个具有成本效益的干预对预防allopurinol-induced疤痕(27,28]。

最近的一项研究使用全基因组关联研究在日本人口(包括14 allopurinol-related sj /十个病人和991种族匹配控制)发现了一组在6号染色体snp,尤其是rs9263726PSORS1C1基因,rs2734583BAT1基因和rs3094011HCP5密切相关的基因HLA-B 58:01等位基因(13]。此外,中国人口结果显示三个snp包括rs9263726 rs2734583, rs309984, rs9263726显示协会的最高学位allopurinol-induced sj / 10(或= 108.8,95% CI = 13.9 - -850.5, Pc-value = 1.1×10⁻⁷)相同的值的HLA-B 58:01等位基因(19]。中国人口的不同的报告,或值的rs9263726预测allopurinol-induced伤疤礼服和sj /一分之十泰国人2 - 3.5倍比低HLA-B 58:01等位基因(表2)。敏感性,特异性,PPV和NPV的rs9263726 allopurinol-induced疤痕在泰国人口的预测比相对较低HLA-B 58:01等位基因(表3)。

的rs9263726PSORS1C1据报道基因已经完成LD (D' = 1)和完美的摩门教( )HLA-B 58:01等位基因在日本人口( )[13]。类似的,最近的一项研究在120年从中国东部地区(中国 显示一个完整的LD之间HLA-B 58:01等位基因和rs9263726 (D' = 1),但他们的LD并不完美( )[19]。相比之下,据报道在澳大利亚外加剂rs9263726并不与人口HLA-B 58:01等位基因(D' = 0.059; 附近)表明这两个等位基因在基因遗传的独立于彼此在一个澳大利亚外加剂人口(29日]。应该注意的是,本研究的结果表明,尽管rs9263726在完成LD (D= 1)HLA-B 58:01等位基因在衣着,sj / 10,疤痕,宽容对照组但这SNP似乎不是完美的LD的HLA-B 58:01因为值小于1(范围从0.4524到0.7884,表4)。最低的值的SNP与allopurinol-induced衣服被发现。这些结果表明,rs9263726可能不是一个好代理标记或标记的SNPHLA-B 58:01等位基因筛查患者疤痕的风险,特别是衣服别嘌呤醇引起的。

在比较HLA-B 58:01等位基因,发现之间的关联强度allopurinol-induced连衣裙和allopurinol-induced sj / 10和rs2734583或rs3099844约1.3低-2.39倍(表2)。敏感性,特异性,PPV和NPV这两个snp是可比的HLA-B 58:01等位基因(表3)。虽然这两个snp是完整的(D' = 1)和完美的摩门教( )HLA-B 58:01等位基因在allopurinol-induced裙子,他们不是完美的LD (0.5466 - -0.8318)HLA-B 58:01等位基因在sj /对照组(表10和宽容4)。这些结果表明,无论是rs2734583还是rs3099844是个好代理的标记HLA-B 58:01泰国等位基因筛查患者疤痕的风险。rs2734583和rs3099844似乎是完整和完美的摩门教的伤疤组但不是完美的摩门教的对照组(数据没有显示)。这三个单核苷酸多态性检测单没有显著增加的敏感性,特异性,PPV和NPV的预测allopurinol-induced伤疤比单身SNP检测(表3)。

到目前为止,这些snp的确切作用药物引起的疤痕的发病机制仍然未知。的PSORS1C1基因编码一种银屑病易感性1候选基因的蛋白质。虽然这种蛋白质的功能不清楚,PSORS1C1基因多态性报道与银屑病易感性,有关恶性增生性皮肤病(30.,31日),类风湿性关节炎32),而BAT1基因编码一种蛋白质,这种蛋白质剪接和RNA的表达下调炎性细胞因子生产出口机制,如肿瘤坏死因子(TNF),及白细胞介素- 6 (33]。的多态性BAT1基因被报道与类风湿性关节炎(34]。的HCP5基因编码一种人类内源性逆转录病毒的元素序列同源性逆转录病毒波尔基因。的HCP5在淋巴细胞表达,提出了控制通过反义逆转录病毒扩散机制(35]。感兴趣的,HCP5遗传多态性曾被报道与nevirapine-induced sj / 10 [36和abacavir过敏症37]。应该注意的是,本研究的三个单核苷酸多态性研究位于6号染色体3是相同的地区MHC分子被认为是一个关键元素的发病机理几位药物引起的疤痕38]。很可能强劲的这三个单核苷酸多态性和allopurinol-induced伤疤之间的联系可能是由于连锁不平衡的HLA-B 58:01等位基因。

总之,所选择的三个单核苷酸多态性,rs926372 rs2734583,和rs3099844显著与服装和sj /十别嘌呤醇所致,但关联的程度低于的HLA-B 58:01等位基因。敏感性,特异性,PPV和NPV的这些snp是可比的HLA-B 58:01等位基因;然而,这些snp并不完美的摩门教HLA-B 58:01等位基因。虽然单个SNP的检测与检测相比是更简单,更便宜的多态基因一样HLA-B 58:01等位基因,结果从筛查allopurinol-induced疤痕的风险使用这些snp作为代理的制造商HLA-B 58:01等位基因需要仔细解释。

的利益冲突

所有作者声明没有利益冲突。

确认

奖学金的支持泰国大学研究基金和Phayao通过皇家金禧博士计划(PHD55K0050) Wichittra Tassaneeyakul和Niwat Saksit医学院的资助,孔敬大学承认。支持从Sumitra Suttisai, Napacha Piriyachananusorn, Pawinee Tiwong, Supinya Phoomwanitchakit,和Patcharee Karnjanawat样本采集是承认的。作者感谢教授James a .将大学麦迪逊分校的宝贵意见和评论的手稿。