轻微炎性树突状细胞的免疫调节特性加德纳菌属鞘突:细菌性阴道炎的“隐形人”?

文摘

细菌性阴道炎(BV)、生殖期的女性,最常见的生殖感染与性传播疾病的风险增加相关。其病因尚不清楚,特别是所扮演的角色加德纳菌属(G。)鞘突,厌氧细菌的BV-alteration阴道生态系统的特征。在生殖器粘膜树突状细胞(dc)细菌的微环境通过受体,然后编排不同T细胞的免疫反应的诱导子类型。我们调查了之间的相互作用g .鞘突和人类monocyte-derived DCs使用广泛的细菌浓度(从0.01到100感染复数),和这个病原体PHA-induced淋巴细胞增殖的影响。电子显微镜观察到和血细胞计数,g .鞘突DCs的内化能力减少了细胞外形成集群和诱导DC的成熟,也不是DC细胞因子的分泌,除了在最高剂量与早期DC成熟状态。相同的概要文件被观察到淋巴细胞显著增加的增殖和细胞因子分泌只在细菌浓度最高。我们的发现表明g .鞘突对DCs和T细胞具有轻微的刺激活动,反映了这样一个有缺陷的炎症反应,引起非典型非或低度炎症的临床疾病概要文件。

1。介绍

细菌性阴道炎(BV)是最常见的低生殖器感染在生殖期的女性中,29%的患病率在14 - 49岁的美国女性中,几乎40%的高危个体的性传播感染(性病)[1]。BV与严重的并发症,包括不良妊娠结局,子宫内膜炎,盆腔炎性疾病如子宫内膜异位2,3]。BV也会增加女性获取性传播感染的风险,特别是艾滋病毒感染(4,5]。

临床上,一半BV-positive女人无症状而其他人只受了轻微的症状,如均匀白色阴道分泌物和胺(可疑的)气味6]。这些迹象与阴道pH > 4.5和相关特征的存在“线索细胞”在显微镜检查。这四个构成Amsel表现的临床标准(6]。BV的微生物诊断通常是基于纽金特的得分,其中包括评估的乳酸杆菌革兰氏染色的阴道分泌物样本。BV的变更与阴道的生态系统,以减少氢peroxide-producing乳酸菌(l)物种如l . crispatus和l . jensenii厌氧细菌和随之而来的幼童腹壁薄弱加德纳菌属(G。)鞘突(7,8]。

BV的微生物病因尚不清楚,一个有争议的问题9]。存在两种对立的假设(10]。历史上第一个在monomicrobial假说,g .鞘突是单身,特定病原体的BV (11]。假设,在幼童腹壁薄弱已得到普遍的接受在过去的20年里,g .鞘突行为与其他厌氧菌synergically不平衡阴道菌群和引发的疾病12]。阴道在猴子接种实验显示厌氧菌的同现,因此g .鞘突需要引起BV (13]。此外,g .鞘突经常被孤立在健康女性BV (14]。然而,最近的作品重新确认其重要性的争论的疾病的病理生理学。g .鞘突主要见于阴道BV-associated生物膜,与持续的BV,构成阻力的主要因素标准治疗(15]。

树突状细胞(dc)是专业的抗原呈递细胞(apc),通过诱导耐受和免疫力,是编排的适应性免疫反应的关键(16]。未成熟dc驻留在外围粘膜,他们感觉到微环境通过模式识别受体(PRRs)承认其为分子模式(pamp)。通常PRRs包括的toll样受体)和c型凝集素受体(clr) [17]。PRR刺激触发一个DC成熟过程与膜分子的上调或下调(CD83、CD86和HLA-DR DC-SIGN和甘露糖受体,分别地)和细胞因子的生产。直流激活几个pamp,通过不同的PRRs拮抗或协同效应,调节他们的区别,其次确定极化效应T细胞的反应,也就是说,之间的平衡Th1、Th2, Th17和T监管(Treg)子集18]。细胞因子的生产由DCs在这个过程中是一个重要因素。白介素生产驱动向Th1细胞极化,而il - 1的合成βil - 6, TGFβIL-23, il - 10促进感应Th17或Treg细胞,分别为(19]。这些免疫反应的不同阶段中描述最近人类生殖器粘膜。值得注意的是,在上部和下部之间的大片,存在一些直流子集和表达特定的通常,如TLR-6 tlr 7, TLR-8, clr,如langerin DC-SIGN,能够诱导不同T细胞亚群(20.- - - - - -22]。

粘膜的影响液体BV或女性健康的植物,没有涉及细菌物种的分析,对直流功能检查(23,24]。BV诱导il - 12和IL-23生产样品,以及成熟的表达标记(HLA-DR、CD40和CD83)由monocyte-derived DCs (moDCs)。有关T细胞,然而没有调查BV的极化的影响不同的淋巴细胞亚群。只有一个研究报告的影响BV Treg细胞的百分比在外周血单核细胞(PBMCs)。然而,这项研究并没有测试的特定影响的可能性g .鞘突和它没有体现差异在BV + Treg的分布与BV−阴性妇女,减少Treg仅观察到在BV + / HIV阳性妇女相比,BV−/ HIV阳性妇女[25]。许多研究试图衡量cervicovaginal生产BV的细胞因子,但不同的结果。大多数文章报道il - 1的高度β少,一直在il - 6和引发,BV-affected女性(26- - - - - -29日]。此外,BV粘膜液被发现在同种异体混合型白血球增加T细胞增殖反应(高)23]。最后,具体的影响g .鞘突在直流和T细胞从未被评估。

不同于传统的阴道炎,特点是燃烧,排尿困难,性交困难,和频繁的瘙痒,BV导致缺乏炎症迹象没有主要影响女性的疼痛或瘙痒(14]。同样,相对缺乏的炎症细胞和正常的阴道附近中性粒细胞是BV地位的特征。针对文献数据,我们假设BV对应于一个独特的当地免疫环境,轻度炎症,可能由迄今为止未知的免疫调节机制的作用g .鞘突阴道的免疫系统,特别是在DCs和T细胞。在目前的研究中,我们调查了这一假设在体外模型通过监测(我)内部化,成熟,和细胞因子分泌moDCs;(2)淋巴细胞增殖和细胞因子子集生产,后细胞接触g .鞘突或共餐者或病原微生物可能在阴道粘膜。

2。材料和方法

2.1。菌株和文化条件

g .鞘突ATCC14018是生长在脑心浸液(Biomerieux)补充麦芽糖(0.1%)、葡萄糖(0.1%)、酵母提取物(1%),和马血清(10%)5%股份有限公司₂在37°C 72 h。这种l .Rogosa ATCC23272是生长在德曼,夏普(夫人)介质(BD Difco™一夜之间)在37°C。白色念珠菌ATCC10231是生长在Sabouraud肉汤一夜之间在37°C。微生物细胞被离心收获(11000 g×10分钟),颗粒被洗了两次然后resuspended RPMI 1640 (Cambrex生物科学)。光密度(OD)在620纳米测量进行调整的最终浓度微生物悬浮,确切数字的集落形成单位(CFU)是由电镀系列稀释的接种物适应琼脂板上(哥伦比亚5%羊血琼脂、夫人或Sabouraud)。被添加到前细胞样本,微生物细胞被暴露于紫外线灭活1 h。失活的有效性被镀20评估μL辐照接种物的适应琼脂板上。

2.2。道德声明

本研究中使用的人体细胞产生的健康志愿者的血沉棕黄层从当地获得法国血液机构(Etablissement法语du唱,EFS,圣艾蒂安)。这是一个法定要求献血者是完全必要的信息(公共卫生R.1221-5条代码,12/01/2009、11/06/2006法规)。书面知情同意被EFS获得所有的志愿者参与我们的研究。

2.3。在体外Monocyte-Derived树突状细胞的分化

从PBMCs DCs生成。短暂,PBMCs隔绝健康志愿者的buffy-coats Ficoll-Histopaque(σ)密度梯度离心法。PBMCs RPMI 1640和resuspended洗两次在最后5×10的浓度⁷细胞每毫升的磷酸缓冲盐(PBS)补充2%胎牛血清(FCS Biowest-Abcys)和1毫米EDTA。单核细胞被消极的选择使用EasySep纯化^®人类单核细胞浓缩设备制造商推荐的(干细胞技术)。然后他们被培养5天RPMI 1640年补充谷酰胺(σ),1% FCS 10%,和0.5% penicillin-streptomycin(σ),在500 U /毫升IL4(研发系统)和800 U /毫升集落刺激因子(gm - csf、研发系统)。经过3天的孵化,一半体积的新鲜培养基含有2 x IL4浓度和gm - csf是添加到每个。

2.4。电子显微镜观察

DCs获得如前所述在无菌12-well镀板1×10的浓度⁶细胞/毫升。g .鞘突添加到井在感染复数(MOI) 10 1 h(扫描电子显微镜、SEM)和莫伊的0.01,1,或者100 3 h(透射电子显微镜,TEM)。细胞被收获,离心机(400 g×10分钟),冲洗与钠甲次砷酸盐(0.2 M pH值7.4)10分钟,然后用戊二醛固定在4°C隔夜1.6%钠甲次砷酸盐缓冲。样本然后冲洗,后缀为1%锇酸(1 h,室温),再次冲洗,脱水与分级系列乙醇(100%到70)和最终hexamethyldisilazane为100%。最后,隔夜干燥后,样品被放在Jeol SEM过滤和金属与碳(40)的。TEM,干样本嵌入聚合2毫米厚环氧树脂涂料,和超薄部分与Formvar-coated拿起铜网格(300网)。部分是复染色水醋酸双氧铀为4%。负染法,细菌生长在m63b1 - 0.4% Glu介质和负沾2%磷钨酸Formvar-coated铜网格(300网)。图像捕获中心d 'Imagerie Cellulaire桑特(CICS)的大学d 'Auvergne Jeol地产- 6060 lv (SEM)和日立h - 7650 (TEM)。

2.5。流式细胞术分析DC成熟和生存能力

6天,从每个被收获,不成熟的DCs集中,离心机,然后在1×10⁵细胞/毫升。UV-killed细菌被添加在10μL的暂停/达成最终的浓度从10³到10⁷CFU /毫升,也就是说,0.01和100之间的莫伊。脂多糖(LPS)大肠杆菌(σ)100 ng / mL的最终浓度作为积极的控制。未成熟dc没有添加有限合伙人或细菌被用作消极的控制。48 h后37°C的成熟有限公司5%₂收集大气、DCs、离心机和resuspended在PBS 1%牛血清白蛋白(BSA,σ)。细胞表面沾有适当的fluorescence-labeled小鼠抗体:APC-Cy7-conjugated anti-CD14 (LPS coreceptor特定于单核细胞),PE-conjugated anti-CD86 (costimulatory分子,激活标记),V450-conjugated anti-HLA-DR, PerCP-Cy5.5-conjugated anti-DC-SIGN (DC-specific ICAM-3 grabbing-nonintegrin或CD209, CLR家族的成员,特定的未成熟dc的标志),Alexa萤石^®488 -共轭anti-MR(甘露糖受体或CD206, CLR家族的成员,特殊的标记不成熟的DCs和巨噬细胞),和链霉亲和素APC-conjugated anti-TLR4(生物素抗体,LPS受体的激活函数)。抗体是来自BD生物科学,除了anti-MR (Biolegend)。相应的小鼠isotype-matched和非标签抗体(BD生物科学或Biolegend)被用作控制。分析了细胞由BD-LSRII流式细胞分析仪与FACSDiva软件在CICS (BD生物科学)。进行荧光补偿调整。盖茨在生活DCs基于他们的前锋/侧散射(FSC / SSC)属性。3000年停止分析计数DCs。染色的水平表示为平均荧光强度(MFI)。文化上层清液被收集并存储在−20°C到细胞因子分析。决定细胞生存能力,染料/死了^®珠子(可固定的蓝色死细胞染色设备,紫外线激发生命技术)被添加到细胞和用作标记的死细胞。直流死亡率评估控制死细胞和活DCs SSC / FSC图。另外两个盖茨创建这门独立的两种群。从死细胞门,细胞表达生活/死亡标记被认为是有效地死亡。这个死细胞的数字是表示为一个比第一个创建整体门获得死直流百分比。

2.6。淋巴细胞增殖试验

植物凝集素的促有丝分裂的反应,植物凝集素(PHA),通常用于测量细胞免疫在哺乳动物一般,尤其是在人类30.]。这些测试命名淋巴细胞增殖试验或淋巴细胞转化试验(图片)。他们在这里进行研究的功能属性g .鞘突特别是它的功能调节PHA-induced T细胞增殖。1天,PBMCs收集从血沉棕黄层如前所述调整1×10的浓度⁶细胞每毫升的完全培养基,也就是说,RPMI 1640 FCS补充谷酰胺为1%和10%。细胞悬液沉积在无菌96孔板(100μL /)。每一个测量是一式三份完成的。多克隆淋巴细胞的增殖与2诱导μ克/毫升的PHA(σ)。细胞没有PHA和细菌作为消极的控制与PHA没有细菌和细胞积极。g .鞘突被添加到其他PHA-treated井获得浓度从10³到10⁷CFU /毫升。72 h孵化后37°C下5%的股份有限公司₂,1μCi的氚化胸苷(珀金埃尔默)添加到每一个细胞,进一步培养4 h。标签被冷却板停止4°C。真空下的细胞被收集到一个绘画纸滤纸和氚化胸腺嘧啶核苷掺入测量使用β计数器(2300年Tri-Carb tr, Canberra-Packard)。扩散结果表示为平均cpm(每分钟计数)一式三份的测量值。相同的孵化项目,然而,没有添加氚化胸苷,在平行于收集上层的细胞因子进行量化。

2.7。细胞因子量化

对DC成熟实验,细胞因子il - 10, TNF -α干扰素-γ在文化上层清液,IL-12p70化验Biolegend酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒根据制造商的指示。淋巴细胞增殖测定、细胞因子干扰素-γil - 10、il - 4、IL-17A, IL-12p70, TNF -α量化在PBMC文化的上层清液使用Pro人类细胞因子组1 6-Plex 1×96工具包(Bio-Rad)生物丛吗^®200 (Bio-Rad)。

2.8。统计分析

所有数据都表示为+ SD方法。方差色散测试后,进行三种不同的统计测试。双向方差分析与事后Bonferroni测试,弗里德曼的测试与Nemenyi集团,邓恩和克鲁斯卡尔-沃利斯检验测试被用来分析细菌的显著影响DCs或PBMCs XLStat v7.5.2软件(Addinsoft、巴黎、法国)。值低于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。电子显微镜观察g .鞘突直流交流

在活的有机体内,第一步阴道粘膜免疫反应的对应于细菌和不成熟的DCs之间的相互作用,导致细菌的内化。模仿这个初始的现象在体外,我们将联系DCsg .鞘突在1到3 h, SEM和TEM照片。SEM产生3 d图像的细胞和细菌表面接触后1 h(数字1(一)和1(b))。g .鞘突细菌是很少发现在孤立的细胞形式(在与我们观察到的乳酸菌,数据未显示),一般组织的集群(图1(a))。然而,直流树突与此集群的细菌,有时周围(图1(b))。TEM意识到在3 h,允许细胞有时间内化细菌,证实了直流树突与集群的互动g .鞘突(数据1(c)和1(d))。图1(c)显示另外细菌在一个包衬下的集群是由细胞外基质与DCs。TEM显示内化细胞内g .鞘突细菌,但只有孤立的形式,没有细胞内集群(图1(e))。0.01的我没有DCs与内化g .鞘突被发现的,很少的莫伊1,100年只有35%的莫伊(指望100 DCs)。每个直流与内化g .鞘突,细菌的数量从1到9不等细菌每个细胞。这个实验是并行执行的这种l .在同一浓度。的内化乳酸菌,不像g .鞘突,可以观察到一些细胞在莫伊0.01,大多数细胞的莫伊1,和高达82%的细胞在莫伊100(指望超过160 DCs)。的数量乳酸菌内化在这些细胞比与高g .鞘突因为它从6到18不等细菌每细胞(数据没有显示)。结论在本部分中,我们表明,DCs能够相互作用g .鞘突有效地和内化,但低于乳酸杆菌,可能由于g .鞘突能力形成细胞外的集群。

3.2。流仪分析微生物对DC表型的影响

在免疫反应,细菌内部化可以引起直流激活和成熟,导致修改被众多膜标记和血细胞计数允许区分未成熟DC和成熟的。在我们的研究中,DC活化和成熟是评估影响细胞膜的一个广泛的表型变化。正如所料,未成熟dc是CD86的特点是低水平,HLA-DR,和CD14表达(后者与单核细胞的初始水平il - 4和gm - csf治疗之前,数据未显示),加上高水平的DC-SIGN和表达式(数字2和3)。相对,LPS-induced DCs表达的表型特征完全成熟水平增加的DCs CD86和HLA-DR(数字3(一个)和3 (b))与DC-SIGN水平降低有关,先生,TLR4和CD14(数字3 (c),3 (d),3 (e),3 (f))。

与低或中等剂量的孵化g .鞘突(10³-10年⁶CFU /毫升,也就是说,莫伊从0.01到10)不改变细胞表面未成熟DC表型,如通过没有显著改变膜标记(数字2和3)。在最高浓度(10⁷CFU /毫升,也就是说,莫伊100),g .鞘突造成稍微增加一些HLA-DR表达式(非标准统计,图3 (b))结合适度减少先生和CD14表达(非重要,数字3 (e)和3 (f)),这反映出成熟的早期迹象。然而,缺乏CD86表达的增加和减少DC-SIGN和TLR4表达表明这个成熟过程是不完整的。

综上所述,我们的整体仪结果表明g .鞘突诱导没有成熟的DCs或高剂量的不完整的DC成熟过程。

不像g .鞘突,这种l .和白念珠菌诱导一个明确存在剂量依赖的相关性更高CD86的表达和HLA-DR成熟的DCs(数字3(一个)和3 (b))。结合DC-SIGN表达降低,先生,CD14和TLR4(数字3 (c),3 (d),3 (e),3 (f)),这些结果表明,最后两个微生物诱导完全成熟的dc,同样有限合伙人提取。

3.3。流仪分析g .鞘突对直流死亡率的影响

考虑到非常低的DC的成熟水平g .鞘突观察到在我们的实验中,我们假设这一毒株不会诱发DC细胞毒性。为了测试这个断言,可行性标记被添加在流仪实验。未成熟dc本身几乎没有死亡。相比之下,暴露的DCs有限合伙人提取物诱导轻微,但意义重大,增加死亡率(图4)。3种不同浓度的g .鞘突测试分析其影响直流生存吗。结果表明,从10³到10⁷CFU /毫升(MOI 0.01至100年),g .鞘突在死亡的DCs诱导没有增加。

3.4。细胞因子分泌Microbial-Matured DCs

体内,成熟dc迁移到二级淋巴器官和现在的抗原T细胞。在这种交互,DCs提供三个信号,尤其是cytokinic信号偏振淋巴细胞的分化成几个亚种。破译T细胞极化引起的优先路径g .鞘突四个细胞因子被认为是特别感兴趣的是选择ELISA测量。与未经处理的未成熟dc相比,DCs孵化g .鞘突并没有显著增加的生产TNF -α或il - 10,除了在上剂量10⁷CFU /毫升(数字5(一个)和5 (b))。此外,IL-12p70和干扰素的生产γ没有或几乎没有检测g .鞘突治疗或未成熟dc(数字5 (c)和5 (d))。相反,一个强大的增加存在剂量依赖的相关性生产TNF -α和诱导了il - 10这种l .和白念珠菌在较小程度上,IL-12p70的这种l .和干扰素-γ通过白念珠菌(数据5(一个),5 (b),5 (c),5 (d))。褶皱的变化决定通过比较产生的细胞因子水平DCs暴露于10⁷CFU /毫升g .鞘突(也就是说,莫伊的100),由未成熟dc il - 10 = 8.9, 6.5 TNF -α,只有IL-12p70和干扰素- 1.1和1.3γ,分别。相比之下,折叠引起的相同剂量的变化这种l .或白念珠菌从70年到307年不等il - 10和TNF -α生产。任何的浓度g .鞘突,DC-produced细胞因子的水平只由LPS-treated DCs的10 - 28%。整体而言,这些结果表明,g .鞘突几乎没有引发cytokinic分泌,依照我们的发现对DC成熟(图3),从而指示,或轻微的感应,直流激活的g .鞘突。

3.5。轻微增加PHA-Stimulated淋巴细胞增殖g .鞘突

探讨淋巴细胞激活,下一个古典阶段的免疫反应,我们进行功能测试bacterium-induced调制的淋巴细胞增殖,使用的模型PHA-induced T细胞增殖。增加压力介质在PHA-stimulated引起了轻微的增加存在剂量依赖的相关性淋巴细胞增殖淋巴细胞相比控制化验没有细菌(图6)。扩散的增加只是显著的剂量10⁷CFU /毫升(),获得了较高的平均值20% PHA-stimulated控制的细胞。低浓度的g .鞘突没有造成任何重大的调制PHA-stimulated淋巴细胞增殖。我们类似的实验表明,并行执行这种l .和白念珠菌没有产生类似的模式(数据没有显示)。

3.6。g .鞘突由PHA-Stimulated白细胞端依赖细胞因子分泌增加

描述中涉及的免疫反应的类型g .鞘突端依赖增加PHA-stimulated淋巴细胞增殖,分泌细胞因子的四个主要的T细胞(IFN -亚种群γ,IL-17A il - 4和il - 10对应Th1、Th2, Th17、或Treg resp)或由apc (IL-12p70和TNF -α)测定淋巴细胞增殖的细胞外媒体化验。PHA (2μg / mL)单独诱导分泌的干扰素γIL-12p70 IL-17A, il - 10, TNF -α从PBMCs(图7)。一个明确的增加存在剂量依赖的相关性在干扰素-γ和IL-17A生产在PHA-stimulated PBMCs暴露于不同浓度的g .鞘突(数据7 (c)和7 (d))。如图所示为PHA-stimulated扩散之前,只有最高剂量的g .鞘突测试诱导显著增加这两种细胞因子的生产,相比PHA控制没有细菌。肿瘤坏死因子-α、IL-12p70和il - 10,增加非重要,即使在高剂量(数字7(一),7 (b),7 (e))。控制条件相比没有细菌,暴露在10⁷CFU /毫升g .鞘突诱导褶皱增加4.9,4.0,3.0,2.2,2.2,干扰素-γil - 10, TNF -α分别,IL-17A IL-12p70生产。与之相反,分泌的il - 4水平几乎没有可衡量的或在任何剂量的察觉g .鞘突(没有显示)。此外,在他们的最高浓度,这种l .和白念珠菌引起细胞因子分泌增加,根据不同的细胞因子,是4 - 5倍高于所致g .鞘突(数据没有显示)。总的来说,这些数据显示g .鞘突能引起轻微的分泌细胞因子在炎症存在剂量依赖的相关性(IFN -γ肿瘤坏死因子-α、IL-17A IL-12p70)和抗炎(il - 10)。

4所示。讨论

DCs,主要的免疫系统的哨兵,丰富人类阴道粘膜的上皮和固有层(21]。在这种粘膜面积,间接DCs也与腔的微生物通过上皮或直接运输机制通过树突扩展跨上皮细胞吸收细菌从阴道内腔31日,32]。BV的特征是一个不平衡的正常H₂O₂的第乳酸菌植物对多态厌氧与主要菌群g .鞘突,很可能随后阴道DCs的PRRs受这个变更的影响。了解的病理生理作用g .鞘突在BV,我们决定将这种细菌之间的相互作用和DCs。

我们首先进行了电子显微镜研究bacteria-DC交互,第一阶段的免疫反应,确定g .鞘突可以内化DCs。这证实了使用TEM,但我们观察到细菌非常稀疏表示在培养基的自由形式而形成的集群在细胞外基质涂层。比一个乳酸菌物种仍在免费形式,g .鞘突内化了DCs更有效率。它可以被合理认为,这种差异的倾向有关g .鞘突形成集群。此外,g .鞘突的形式,在活的有机体内生物膜在阴道,这一过程涉及BV发病机理(33]。这些集群可能是生物膜的形成的开始。细菌生物膜减少宿主免疫反应减少内化由于大尺寸和事实,细胞外基质可以防止抗原识别的装甲运兵车[34]。因此,这种构象可能允许细菌g .鞘突更少的内化的DCs相对紧张乳酸菌无法形成生物膜。

然后我们研究的内化的影响g .鞘突对DC成熟状态。成熟的DCs之间的平衡是一个重要的决定因素的耐受性和免疫原性能力35]。不成熟或semi-mature DCs通常促进耐受性反应而成熟的DCs促进免疫原性反应(36]。流式细胞仪分析显示,无论细菌浓度,g .鞘突引起最小直流膜表型的变化,从而导致一个不完整的人类DC的成熟。同时,细胞因子的生产相比仍然很低,从LPS-induced DCs或完全成熟这种l . - - - - - -或白念珠菌,成熟dc,即使在高剂量的微生物。综上所述,我们的仪和cytokinic数据描述非炎症直流响应在低g .鞘突剂量和非常轻微炎性直流响应的最高浓度。g .鞘突浓度交互在活的有机体内在人类的生殖道粘膜DCs尚未广泛评估。然而,在女性BV,细菌的数量可以等于或优于10⁸每毫升的阴道分泌物,包括约10⁷CFU /毫升g .鞘突(37,38]。虽然未知,但实际数量的细菌直接接触阴道粘膜内DCs肯定是远低于这个数字。因此,的浓度g .鞘突与阴道黏膜的DCs交互BV的女性可能对应于我们的模型中使用的低或中间通过,导致没有或很少的DC成熟。获得的结果与g .鞘突比较同其他两个微生物可能在阴道粘膜,共生的细菌(这种l .)和致病性酵母菌负责霉菌性阴道炎(白念珠菌)。每个诱导一个明确的DCs的成熟,类似于我们以前观察到与其他病原体和益生菌菌株39,40但在强烈的对比g .鞘突直流响应。在我们的模型中,g .鞘突没有引起直流死亡率,与其他两个微生物(数据未显示)。总的来说,我们的研究结果表明g .鞘突略促炎症,但小于乳酸菌我们作为控制。

的影响g .鞘突在DCs中观察到我们的研究更比在其他的研究报告,显示激活和成熟的人类moDCs当暴露于女性的粘膜液与BV (23,24]。在这些以往的研究,DCs暴露在大量的细菌的混合物产品特点多态BV植物和分泌的分子产生的粘膜免疫系统与BV的女性。相比之下,在我们的模型中,DCs的存在g .鞘突独自找到新证据的作用作为一个公认的BV病因代理人。因此,没有或很轻微g .鞘突全身的DC的成熟在体外直接接触引起的不符合DC成熟大大分泌产品整体BV的植物,例如,有限合伙人的普氏菌bivia。阴道粘膜,g .鞘突可能当地具体的调节对免疫细胞的影响,整体影响的独立BV植物的成熟。

我们下一个执行功能测试使用模型的淋巴细胞增殖的PHA-stimulated PBMCs探讨激活淋巴细胞,后阶段古典免疫反应。没有观察到显著的剂量的淋巴细胞增殖的变化g .鞘突我们使用,除了最高的一个显著增加测量。这些发现符合变化在直流状态并确认g .鞘突很少诱发免疫效应在低剂量和轻微炎性反应浓度最高,它不太可能遇到在活的有机体内。此概要的免疫反应g .鞘突可以解释的特征缺乏外部炎症迹象BV期间,与细菌或霉菌性阴道炎相比,尽管增加促炎症TLR2和TLR4信号和il - 1β分泌报道其他地方(41- - - - - -43]。根据我们的结果,我们假设,根据其实际接触粘膜免疫细胞,g .鞘突可以被忽视或诱导慢性炎症吗在活的有机体内。

探索轻微的机制g .鞘突大型面板增加全身的淋巴细胞增殖的细胞因子测定细胞上清液包括分子由apc (il - 10、IL-12p70和分泌TNF -α)和/或T细胞(IFN -γ,IL-17A il - 4和il - 10)。我们证明一个类似的g .鞘突支持所有这些细胞因子的分泌,除了il - 4,仍然发现不了的。病原体的剂量越高,细胞因子分泌的PHA-stimulation越强。因此,这显然细胞因子分泌概要文件相关的扩散PHA-stimulated PBMCs,无论反或促炎症细胞因子的性质。的响应g .鞘突四个主要的亚种群的T细胞,细胞因子分泌表明一个明确的剂量依赖性Th1(干扰素的诱导γIL-12p70)和Th17 (IL-17A)和亚群(il - 10),但不是Th2 (il - 4)。因此,Th1、Th17和亚群可能参与了高剂量的免疫反应g .鞘突。这个话题在将来的研究中值得进一步调查的T细胞极化。

综上所述,我们的研究结果表明g .鞘突,形成集群和减少直流的内在能力,引发轻微的宿主免疫反应包括DCs的成熟淋巴细胞增殖,和pro-Th1 pro-Th17, pro-Tregs细胞因子的生产。这些免疫调节特性符合典型BV的临床资料,其中的特点是一个低度炎症过程,当我们观察到在体外模型在最高剂量的细菌。我们的结果显示潜在的免疫效果的细菌阴道菌群和显示机制BV的存在及其相关的植物成分的变化可能影响宿主阴道免疫力。最后,这些结果借体重的假定的作用g .鞘突病理生理学的BV和开辟更广阔的前景,特别是对于理解当地的免疫学变化的贡献与BV女性性传播感染的风险增加。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢法国克莱蒙费朗CICS的和非常感激Christelle Blavignac,克莱尔·Szczepaniak和洛林Novais Gameiro慷慨的合作。这项工作是支持的部分地区委员会的资助奥弗涅。

引用

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