树突细胞活动受重组牛结核分枝杆菌卡介苗生产人类的地震,在健康成年人BCG接种疫苗

文摘

结核病仍然是一个巨大的全球负担,尽管宽与卡介苗(BCG)疫苗接种覆盖率,唯一对这种疾病的疫苗,这表明BCG-driven免疫力不足以保护人类免受肺结核。在这项研究中我们构建重组卡介苗生产人类的地震(rBCGhIL-18)和人类的地震调查是否由rBCGhIL-18调节直流功能和增强Th1反应人类的分枝杆菌抗原。我们发现costimulatory CD86和CD80分子显著调节rBCGhIL-18-infected DCs,而DCs与nonrecombinant BCG的刺激是不那么有效。相反,两人都对人类的DCs BCG菌株降低DC-SIGN表达式。rBCGhIL-18增加IL-23、il - 10和IP-10生产比nonrecombinant BCG DCs在更大程度上。在一个coculture CD4的系统⁺T细胞和加载DCs, rBCGhIL-18支持强大的干扰素-γ但也由幼稚T细胞il - 10生产但不是记忆T细胞。这是更少的nonrecombinant BCG。因此地震的表达通过重组BCG增加IL-23 IP-10, il - 10表达人类DCs和诱发干扰素,提高他们的能力γ由幼稚T细胞和il - 10表达,而不影响dc的成熟表型。

1。介绍

分枝杆菌感染的全球负担仍然是一个主要的公共健康问题,尽管卡介苗(BCG)广泛使用的疫苗,这带来好防止传播儿童结核病(TB),但在成人提供变量预防肺病。

有充分的证据表明,保护了BCG接种疫苗会随着年龄的增长而减少。因此,疫苗是迫切需要改善,但他们的发展是受到免疫保护机制的知识不足。开发一个新的结核病疫苗的一个方法是提高BCG免疫调节器优越的表达目标的免疫途径,都是至关重要的,在保护性免疫1]。th1反应一直是公认的基本机制防止分枝杆菌疾病,包括肺结核(2,3]。白介素18岁,于1989年首次描述为“干扰素-γ诱导因素,”最初孤立的血清牛分枝杆菌BCG-infected老鼠挑战与有限合伙人(4),被认为扮演了一个重要的角色在促进Th1反应。它是由激活巨噬细胞和树突状细胞(dc)还通过T细胞和B细胞和其他细胞类型(5- - - - - -7]。地震可能是一个治疗的有效工具对严重细菌感染(8]。此外,它已被证明,系统化管理地震-提高了回归的主要肿瘤的机制,取决于CD8 + T细胞,Fas和FasL,内源性干扰素-γ,特别是在结合其他细胞因子(9- - - - - -11]。然而,最近的研究表明,外生的地震给小鼠诱导一个夸张的炎症反应,导致副作用包括neutrophil-mediated肺和/或肠道损伤(12]。它可能会限制可能在人类使用的地震作为治疗剂。为了克服这个困难,我们假设一个细菌构造生产少量的地震可以直接调节dc的抗原表达的upregulation Th1反应,但避免外源性的地震的潜在有害影响。BCG杆菌,强大的Th1抗病诱导剂,似乎是一个有用的地震-表达的平台。地震可以增强宿主防御分枝杆菌感染(13- - - - - -15]。老鼠缺乏地震,但不是地震-受体,非常容易结核分枝杆菌感染(16]。在小鼠中,BCG可以协同为IFN -地震γ生产,可能导致增强保护性免疫对分枝杆菌(17]。地震- IFN -的协同效应γ生产取决于地震-受体表达Th1但不是Th2细胞(18]。是观察重组BCG菌株生产小鼠感染的老鼠的地震(rBCGmIL-18)强烈增强BCG的极化对Th1型免疫反应(19]。在小鼠模型MBT-2浅表膀胱癌,重组BCG分泌的地震也增强巨噬细胞对癌细胞的细胞毒性,干扰素-γ依赖的方式(20.]。在小鼠实验性过敏性哮喘模型rBCGmIL18被证明是更有效的抑制比nonrecombinant allergen-driven肺嗜酸性粒细胞Th2反应和BCG (21]。地震也增加干扰素-γ在人类巨噬细胞感染结核分枝杆菌(22]。然而,仍然对分枝杆菌的综合效应,地震对人类DCs。

在这项研究中,我们构建了一个重组BCG菌株生产人类的地震(rBCGhIL-18)和检查它的影响对人类monocyte-derived DCs (MoDCs),获得健康的年轻受试者与BCG接种出生时和学校的年龄。人类在这个模型我们比较卡介苗的影响和rBCGhIL-18 MoDC考虑:(a)细胞表面信号受体的表达,这是从事DCs和T细胞之间的直接交互,(b)细胞因子的生产,提供对T细胞的分化,(c)抗原的有效诱导效应CD4的函数⁺T细胞。

2。材料和方法

2.1。人类建设地震-表达载体

的牛分枝杆菌BCG疫苗株1173 p2(世界卫生组织,斯德哥尔摩,瑞典)转基因生产成熟的人类的地震(hIL-18)通过与pENhIL-18转换(图1),一个pRR3导数(23含有成熟hIL-18-encoding基因)的控制下BCGhsp60启动子和修改,替换原有的信号肽解理与分枝杆菌信号肽序列编码序列来自波士顿咨询公司α抗原。获得的512个基点的DNA片段编码hIL-18一总RNA从u - 937细胞激活和有限合伙人(1 6 hμg / mL)。总RNA提取使用RNAzol(应用Oncor)根据制造商的建议。一是如前所述[17)与gene-specific引物序列如下:TATAGGATCCTACTTTGGCAAGCTTGAA和TATAGGTACCGGCATGAAATTTTAATAGC(Eurogentec,列日,比利时)。126 - bp DNA片段编码αBCG抗原信号序列PCR使用扩大了染色体DNA提取如前所述[24)与引物5′- GGCACAGGTCATGACAGACGTGAGCCGAAAGATTCGA-3′, 5′-GCCGGGATCCCGCGCCCGCGGTTGCCGCTCCGCC-3′(Eurogentec)。PCR片段编码hIL-18限制Bgl二世和Asp718年和PCR片段编码的α抗原信号序列的限制Bsp你好,Bam嗨插入举办::hsp60(24)限制以区域我和Asp718年,从而生成举办::hIL-18。1.32 kbPvu二世从举办的片段::hIL-18跨越BCGhsp60启动子、核糖体结合位点α抗原信号肽编码序列,成熟hIL-18编码序列,前面插入pRR3,消化ScapENhIL-18即产生的穿梭载体,用于转换BCG,转化株抗卡那霉素被选中。Kanamycin-resistant BCG分析了殖民地的质粒内容通过electroduction [25]。重组株名叫rBCGhIL-18。

2.2。检测HIL-18分枝杆菌重组

分枝杆菌细胞提取准备如前所述[19从10 mL文化收获mid-log阶段。相对应的蛋白质溶解产物,ca。5×10⁶细菌,通过sds - page分离15%聚丙烯酰胺凝胶(26]。总蛋白质被转移到Hybond-C额外的膜(Amersham法国)。膜饱和1%牛血清白蛋白在磷酸盐(PBS) -0.1%渐变20 (PBST),然后孵化与兔子anti-IL-18抗血清稀释可以说。山羊anti-rabbit碱性phosphatase-conjugated抗体(威斯康星州麦迪逊Promega。美国)稀释1/7.000 PBST被用于开发免疫印迹。

2.3。菌株和生长条件

牛分枝杆菌波士顿咨询公司(巴斯德应变117 p2;斯德哥尔摩,瑞典)和rBCGhIL-18 mid-log阶段发展到在静止的烧瓶,C 7 h9麦德液体介质(Becton Dickinson)补充:十八烯acid-albumin-dextrose 10%过氧化氢酶(OADC) (Difco BD生物科学)和0.05% 80年渐变,冷冻,直到使用。

集落形成单位(CFU)计数,细菌在PBS含有0.05%渐变连续稀释80和镀麦德7 h11琼脂补充OADC浓缩为10%。细菌生长3 - 4周C CFU枚举。

2.4。献血者

健康志愿者血液收集从60岁年轻25 - 35岁小时候接种卡介苗,根据国家政策。研究都是经当地伦理委员会批准。健康志愿者签署了同意参与研究之前采血。

2.5。Monocyte-Derived直流准备

外周血获得使用真空采血管管和spray-coated肝素(正)。单核细胞分离PBMC的immunomagnetic积极使用CD14分离⁺微(Miltenyi生物技术,德国)27]。CD14⁺细胞纯度决定是96%到99%的基础上向前边撒门结合CD14染色使用标准的流式细胞术(数据没有显示)。

单核细胞是悬浮在rpmi - 1640(德国Sigma-Aldrich)补充与100 U /毫升青霉素、链霉素0.1毫克/毫升,谷酰胺(Polfa Tarchomin,波兰)和富含10% (v / v)胎牛血清(FCS、热灭活;Cambrex、比利时)。密度是适应的/毫升,单核细胞被置于6-well平底的文化板块和允许分化成DCs为6天孵化rpmi - 1640年补充1%的抗生素和10% FCS的25 ng / mL gm - csf和10 ng / mL人类重组il - 4(美国研发系统)。经过6天的文化,这些细胞被收获,汇集、统计。

2.6。刺激与BCG直流,rBCGhIL-18或纯蛋白衍生物(产后抑郁症)

未成熟dc被放入6-well盘子1×10的密度⁶细胞/毫升和孵化24 h (37°C, 5%的公司₂)和活卡介苗,rBCGhIL-18感染复数(MOI) 1: 1或10μg / mL产后抑郁症(staten血清研究所,哥本哈根,丹麦)。脂多糖(LPS)大肠杆菌O55: B5 (1μg / mL)(σ)是作为积极控制直流活动和直流介质(unpulsed DC)代表消极的控制。评估是否中和反地震-抗体减少rBCGhIL-18在激活的效应细胞,小鼠单克隆反地震-抗体(MBL) (1μg / mL)如果是添加到文化和刺激。

2.7。DCs准备流式细胞术

antigen-stimulated,如果从6-well DCs采集板通过使用EDTA PBS / 2毫米。洗后在PBS直流孵化为30分钟C以下马伯:异硫氰酸荧光素(FITC)共轭anti-CD86, anti-CD40, anti-HLA-DR, anti-DC-SIGN;藻红蛋白(PE)共轭anti-CD80或无关紧要的isotype-matched mAb用作控制。马伯都从正欲购买(BD)。数据获取和分析使用流式细胞仪LSRII (BD)和FlowJo软件,最低10000事件被收集。计算平均荧光强度代表细胞表面上的分子密度和积极的直流的比例为每一个标记。

2.8。细胞因子和趋化因子浓度

上层清液的纯化DCs,脉冲与BCG, rBCGhIL-18,产后抑郁症,或有限合伙人,是收获24 h后刺激,离心机(400 g×10分钟),并存储在−20°C,直到进一步的使用。上层清液被检测的ELISA (Eli-pair Diaclone测试)的存在il - 10, IL-12p70和IL-23(检测灵敏度:5 pg / mL il - 10和IL-12p70;IL-23 20 pg / mL),人类的地震(RayBiotech:检测灵敏度0.5 pg / mL)和IP-10的存在(CXCL10)通过使用特定的ELISA(研发系统:检测灵敏度:5 pg / mL)。细胞因子的量化,参照标准曲线得到单个细胞因子标准由制造商提供。

2.9。T细胞的准备

自体天真CD45RA⁺CD4⁺和内存CD45RO⁺CD4⁺细胞筛选了CD14的孤立⁻使用一个天真的CD4细胞分数⁺t细胞隔离设备,如前所述28),或CD4记忆⁺t细胞隔离设备(Miltenyi),根据制造商的协议。两个孤立的细胞分数(纯度> 95%)被冻结,直到使用。

2.10。DC-T细胞Coculture

保存天真和记忆T淋巴细胞细胞/毫升解冻和cocultured BCG - rBCGhIL-18,或产后抑郁症——(10μg / mL)致敏DC 10每一个感染的T细胞的比例,5天C和5%股份有限公司₂。收集上层清液进行干扰素-γ通过ELISA和il - 10的生产使用商用设备(Diaclone)。检测极限是干扰素- 5 pg / mLγ和il - 10。

2.11。统计分析

所有的数据进行了分析使用STATISTICA 8.0 PL软件。不同抗原为每个参数使用非参数克鲁斯卡尔-沃利斯测试进行评估。当观察统计学意义,Mann-Whitney差异进行了分析测试(用于受损数据)来验证假设两个样品来自两个不同人口统计分析。值< 0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。生产和分泌hIL-18 rBCGhIL-18

构建rBCGhIL-18, hIL-18-encoding cDNA准备如前所述[19)和修改替换原始的地震信号肽编码序列与BCG的分枝杆菌分泌信号序列α抗原(29日]。修改后的hIL-18 cDNA是插入到表达载体pRR3 [23)(图1),然后引入BCG。重组BCG建设,名叫rBCGhIL-18,发现产生人类的地震,如图所示,使用了反地震-兔抗血清的免疫印迹分析。免疫反应性的蛋白质检测的溶解产物rBCG生产hIL-18,但不溶解产物的nonrecombinant控制应变(图2)。rBCGhIL-18提取包含一种immune-reactive蛋白质与规模预期noncleaved pro-IL-18,以及乐队的类似于成熟的地震,它指示的pro-hIL-18 rBCGhIL-18部分加工成成熟的形式,类似于我们之前的研究描述了表达和免疫小鼠的地震活动产生的重组BCG (19]。检查的地震-表达重组BCG在整个研究期间,总是用相同的结果。量化了hIL-18 ELISA的浓度在细胞培养上清液BCG -或rBCGhIL-18-stimulated直流。三个健康individuals-tested,文化包含5 - 10 pg / mL和在18到22岁的pg / mL hIL-18, 24 h后刺激与卡介苗或rBCGhIL-18,分别。如果文化只包含3 - 7 pg / mL hIL-18。

3.2。成熟标志Mycobacteria-Pulsed DCs的表达式

调查人类monocyte-derived rBCGIL-18 DC成熟的影响,脉冲与rBCGhIL-18 DCs, BCG,或产后抑郁症和比较控制条件(即。,如果DCs -控制,LPS-pulsed DCs作为积极的控制)。不同T细胞聚集有关表面标记(CD80, CD86和CD40),以及HLA-DR表达式,通过流式细胞术进行评估。LPS诱导的upregulation CD86(图3(一个))和CD80(图4(一))和CD40 HLA-DR(数据未显示),以上的差别,对这些DC-SIGN。直流孵化与产后抑郁症没有修改CD86的表达,CD80、CD40, HLA-DR,但下调DC-SIGN的表达。相比之下,孵化用的两个BCG菌株的莫伊1:1诱导upregulation这些表面标记的差别,再次对这些DC-SIGN。此外,我们可以发现一个更高比例的BCG - rBCGhIL-18-stimulated MoDCs CD86表达,如果DC相比,那些潜伏在产后抑郁症(图3 (b))。这种差异并没有观察到的CD80(图4 (b))、HLA-DR CD40标记(数据没有显示)和DC-SIGN(图5(一个))。当20个不同捐赠者的中值进行了分析,观察CD86表达显著增加在孵化与卡介苗或rBCGhIL-18与未经处理的直流和孵化与产后抑郁症(图3 (c))。同时,显著降低DC-SIGN表达观察孵化与BCG, rBCGhIL-18,产后抑郁症或有限合伙人,与DC成熟表型一致。然而,BCG和rBCGhIL-18之间没有显著差异。(图5 (c))。

3.3。BCG和rBCGhIL-18生产由人类DCs细胞因子和趋化因子

接下来,我们分析了细胞因子的可能影响t细胞极化mycobacterial-pulsed直流。特别是,我们可以分析il - 12、IL-23和il - 10的上层清液中DCs与产后抑郁症孵化,卡介苗或rBCGhIL-18。在所有献血者,LPS-primed MoDCs产生显著的IL-12p70水平。相比之下,DCs感染BCG和rBCGhIL-18或刺激与产后抑郁症,未能在6小时分泌IL-12p70文化(数据未显示)以及24小时文化(图6)。以来生物活性il - 12 p35区域和p40子单元,和p40单元也出现在其他白介素家族成员,如IL-23,我们确定的上层清液的分泌IL-23 mycobacterial-stimulated特区文化。在分枝杆菌产品中,只有rBCGhIL-18诱导显著IL-23生产比较unpulsed DCs (),尽管远低于有限合伙人(约1/3少)。nonrecombinant BCG的趋势也见过,但不具备统计学意义,因此BCG和rBCGhIL-18(图之间的统计学意义6)。除了IL-23, rBCGhIL-18也诱导il - 10的DCs的生产,尽管大量的il - 10也产生刺激与BCG,但不是与产后抑郁症。然而,rBCGhIL-18诱导il - 10明显多于BCG (),尽管远低于有限合伙人。最后,rBCGhIL-18还诱导显著水平的IP-10 (CXCL10),已知参与Th1细胞招聘,而这并不是对产后抑郁症或nonrecombinant BCG,表明rBCGhIL-18可能支持T细胞向Th1概要文件。

3.4。rBCGhIL-18诱发干扰素,γ和il - 10的生产由幼稚T细胞而非记忆T细胞

为了调查是否rBCGhIL-18-pulsed直流极化T细胞可以向Th1概要文件,我们分析了自体天真和记忆的CD4细胞因子响应⁺T细胞在孵化与DCs刺激与产后抑郁症,卡介苗或rBCGhIL-18。如图7(一),幼稚T细胞产生更多的干扰素-γrBCGhIL-18-stimulated直流coincubation,相比与DCs刺激T细胞孵化与产后抑郁症或卡介苗,96 h后24 h后和文化。产后抑郁症,或者BCG-stimulated DCs诱导只有低水平的干扰素-γ由幼稚T细胞。也同样,rBCGhIL-18-pulsed DC刺激分泌il - 10的幼稚T细胞,而这是更少的产后抑郁症,或者BCG-pulsed DCs(图7 (b))与幼稚T细胞,记忆T细胞产生干扰素-γ在coculture BCG -、rBCGhIL-18——或PPD-pulsed直流在类似水平。类似的结果用于生产的il - 10 T细胞。有趣的是,两种干扰素-γ上级和il - 10,在生产过程中通过与rBCGhIL-18-pulsed幼稚T细胞在孵化,而记忆T,而反向干扰素-γ在与产后抑郁症或BCG-pulsed coculture DCs。没有差异的天真和记忆T细胞il - 10生产应对PPD-pulsed MoDCs。

rBCGhIL-18-driven增强的地震-特异性干扰素-γ生产DC-naive T细胞cocultures anti-IL-18中和实验中演示了3个人(图8)。如图8在人类anti-IL-18抗体的存在,干扰素的生产γ由幼稚T细胞减少rBCGhIL-18-stimulated直流coincubation,在24和96 h的文化;这是更少的rBCGhIL-18-stimulated DC-memory T细胞培养。

4所示。讨论

以前在白鼠身上进行的相关研究曾显示,针对BCG,地震可能会支持Th1细胞因子的生产。之间的协同效应的地震和BCG干扰素-γ端依赖anti-mycobacterial保护性免疫的报告。使用重组卡介苗生产的地震可能是一个有吸引力的工具极化免疫反应参与具体的防御机制。这里,我们构建了一个重组BCG菌株生产人类的地震和调查其效果对DCs和DC-dependent干扰素-γ生产CD4⁺在一个人类T细胞在体外模型。活卡介苗杆菌生产还是不生产人类的地震研究中使用刺激人类的DCs。

首先,我们调查了rBCGhIL-18对细胞表面信号转导受体的表达在DCs上。地震报道促进costimulatory和巨噬细胞粘附分子的表达和DCs (30.,31日]。因此,我们调查了rBCGhIL-18对DC表面受体的表达在免疫突触的形成不可或缺的DCs和T细胞。我们发现rBCGh-IL-18调节CD86,程度较轻,CD80,而其他DC表面分子(HLA-DR CD40)没有调节。Nonrecombinant BCG也增加了这些受体的表达在DCs,由Manickam与结果报告和Sivanandham32]显示减少BCG CD80但不是CD86的表达——或者从宫颈癌患者PPD-stimulated DCs。两项研究之间的差异的原因还不清楚,可能是由于不同的实验条件,如两项研究中使用的不同的月和DCs捐赠者的健康状况。DC-SIGN表面表达似乎减少了在DCs与产后抑郁症的孵化,BCG, rBCGhIL-18或有限合伙人,而如果DCs。DC-SIGN的作用作为一个重要的分枝杆菌感染主机配体似乎更复杂的自几DC-SIGN配体牛分枝杆菌描述了波士顿咨询集团(33]。一些研究已经表明结核分枝杆菌,m . avium无性系种群。副结核和牛分枝杆菌BCG可以绑定DC-SIGN促进进入人类的DCs和肺泡巨噬细胞,这些细菌可以存活(34,35]。减少DC-SIGN表达式在孵化与分枝杆菌卡介苗已经影响吸收和胞内分枝杆菌的生存。

考试的第二部分,细胞因子的刺激DCs显示没有明显的活卡介苗或rBCGhIL-18和产后抑郁症对il - 12的影响生产,尽管这种细胞因子诱导了LPS-stimulated DCs。缺乏白介素感应是奇怪的,因为结核分枝杆菌H37Rv、BCG和牛分枝杆菌描述了诱导小鼠巨噬细胞il - 12的生产和DCs (36,37]。其他研究已经表明,结核分枝杆菌H37Rv和BCG不诱导il - 12在人类巨噬细胞和DCs生产(38,39]。BCG的无能或rBCGhIL-18诱导il - 12通过DCs可能与il - 10感应这些分枝杆菌,作为内源性il - 10在DCs显示抑制BCG-driven il - 12的生产,,此外,会使移民antigen-loaded DCs的引流淋巴结,从而降低抗细胞反应(40,41]。它也表明,il - 10的能力有关结核分枝杆菌逃避宿主免疫反应和调节长期感染(42]。在我们的实验条件,我们发现rBCGhIL-18诱导更多的il - 10的DCs相比nonrecombinant卡介苗或产后抑郁症。更高水平的il - 10也被证实感染小鼠的脾细胞重组卡介苗生产从小鼠感染小鼠脾细胞相比,地震non-recombinant BCG (19]。

白介素相比,DCs与rBCGhIL-18产生大量的IL-23刺激,而DCs治疗卡介苗或产后抑郁症。IL-23 heterodimeric细胞因子,这股票p40和il - 12亚基,但是这个亚基共价链接到特定的p19亚基(43,44]。这种细胞因子可以调节炎症和病理过程通过激活Th17细胞或直接刺激巨噬细胞分泌il - 1、TNF -α,il - 6 (45,46]。最初,重叠功能,il - 12和IL-23被假定为干扰素-γ在爆炸PHA生产T细胞以及CD45RO⁺记忆T细胞(44]。后来的研究,在体外和在活的有机体内显示,IL-23可能负调控IL-12-induced效应函数。IL-23强烈降低IL-12-driven分泌干扰素-γ由CD8⁺T细胞,NK和CD4不太突出的效果⁺T细胞(47]。Zhang et al。37)表明,牛分枝杆菌诱发优先IL-23而不是来源于DCs的il - 12的小鼠骨。这些研究结果是一致的,当我们发现IL-23略有增产BCG-treated DCs控制DCs相比,虽然这没有达到统计学意义。

在趋化因子参与Th1细胞特定的吸引力,CXCL10 (IP-10)被描述为最主要的一个48,49]。增强生产IP-10与分枝杆菌dc刺激据报道(50,51],IP-10甚至被提议作为生物标志物结核分枝杆菌感染(52]。在这项研究中,我们发现,人类的生产的地震的能力显著增强卡介苗诱发IP-10生产由DCs,暗示这可能导致增强的DCs Th1细胞群的交互。

我们以前报道,天真CD45RA传播⁺CD4⁺从总量作为分母志愿者成为这效应T细胞辅助细胞产生干扰素-γ根据自体DC刺激脉冲与产后抑郁症或感染活卡介苗(28]。

现在扩展这些观测结果显示显著提高干扰素-γ生产由天真的CD4⁺T细胞刺激rBCGhIL18-infected DCs。相同的DCs诱导干扰素的生产——弱得多γ在内存中CD4⁺T细胞。然而,刺激的直流rBCGhIL-18或nonrecombinant BCG导致类似水平的干扰素-γ生产记忆T细胞。强烈的诱导干扰素-γ由幼稚T细胞分泌孵化与rBCGhIL-18-stimulated直流没有检测到大量的il - 12的可能是由于表面存在IL-18R幼稚T细胞。另一方面,强干扰素-γ生产可能导致upregulation IL-18R DCs (31日),这可能会导致一个优化为直流与天真的CD4细胞因子环境⁺T细胞,从而提高Th1反应。

天真的CD4 cocultures⁺T细胞和rBCGhIL18-infected DCs中的一个显著增强il - 10生产注意。更低水平的il - 10的cocultures在场幼稚T细胞与DCs以前接触过卡介苗或产后抑郁症。这个观察是一致的结果报告的马都拉拉森et al。39表明BCG之间的交互和DCs的发展导致幼稚T细胞成IL10-producing T细胞。在小鼠模型中,牛分枝杆菌刺激DCs也由CD4诱导高水平的il - 10⁺T细胞(37]。rBCGhIL18-infected DCs的歧视影响il - 10生产由天真和CD4记忆⁺T细胞,如图所示在这项研究中,开放的潜在创新发展的新的结核病疫苗的可能性。在我们的实验模型重组rBCGhIL18-infected DCs优先诱导il - 10在天真的CD4生产⁺T细胞,而DCs感染non-recombinant BCG有效诱导il - 10在内存中CD4生产⁺T细胞。

总之,在本报告中,我们演示了一个显著的优势重组rBCGhIL-18生产人类的地震nonrecombinant BCG在人类直流优先触发强烈刺激干扰素-γ由天真的CD4细胞分泌⁺T细胞,伴有轻度升高il - 10的生产。虽然干扰素-γ防止结核病所需的反应很明显,最近的研究表明缺乏相关性的程度BCG和干扰素引起的免疫保护γ生产CD4⁺T细胞(53,54]。此外,我们最近观察到显著提高干扰素-γ对特定抗原的反应结核分枝杆菌活动性结核病患者(55]。因此,抗原干扰素-γ反应可能发挥重要作用在防止分枝杆菌和参与mycobacteria-driven炎症过程。因此,随之而来的增强干扰素-γ和il - 10生产cocultures rBCGhIL-18 DCs和天真的CD4细胞的刺激⁺T细胞可能提供平衡的免疫效果。显然,更多的工作是需要更好地理解不同的活动之间的关系的重组rBCGhIL-18生产人类的地震。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

承认

这项工作是受科技部授予的高等教育在波兰没有。N N401 015236。

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