作为新型疫苗的现场减毒重组伪论病毒的概述

抽象的

假崇拜病毒（PRV）是一种双链DNA的猪病毒，基因组近似为150kb。PRV具有许多非态度基因，可以用编码异源抗原的基因代替，但对病毒繁殖没有有害影响。表达本地和外来抗原的重组PRV能够刺激免疫应答。在本文中，我们审查了现场减毒的重组PRV和活性PRV的载体疫苗的当前状态，其具有控制动物病毒感染的可能性。

1.介绍

1.1。PRV的背景信息

Pseudorabies病毒（PRV）是家庭Herpesviridae的成员，亚家族alphaherpesvirinae [1以及伪狂犬病(PR)或奥耶斯基病的病原体。PRV感染可导致神经紊乱、呼吸窘迫、体重下降、幼猪死亡和流产[2］.病毒具有双链线性DNA基因组1.43×10^5. kb in length [3.]并包含独特的长区域（UL），唯一的短区域（US），终端重复序列（TRS）和内部重复序列（IRS）[4.］.

迄今为止，已鉴定出PRV至少11种不同的糖蛋白(gB, gC, gD, gE, gG, gH, gI, gK, gL, gM，或gN)，并对编码这些蛋白的基因进行了测序。PRV必需糖蛋白包括gB gD、gH、gL和gK;其他的被认为是不必要的[5.那6.］.PRV的几种非结构蛋白如胸腺激酶（TK）和蛋白激酶（PK），其与毒力相关[6.那7.];然而，这种基因子集可以由异源基因代替而不影响感染性或病毒繁殖，所以必要的基因保持完整。关于PRV基因组中的基因插入的常见位点的示意图如图所示1。

已经研究了多价PRV疫苗的功效。在此，我们通过应用于推进RPRV载体疫苗的疫苗候选的疫苗候选，审查使用减毒重组PRV（RPRV）的研究进展。

1.2。Live Taveenated PRV疫苗简介

重组病毒是一种特别有前途的疫苗研究途径，无论是改进现有疫苗还是开发新疫苗[8.那9.］.原则上，PRV载体疫苗的设计是基于活PRV的基因组被用来插入和表达编码来自其他病原体(包括病毒、细菌和寄生虫)的保护性抗原的基因[10.］.表达的外来抗原可随后用于刺激相关免疫反应[11.］.大型伪狂犬病病毒基因组中存在大量非必需基因，可以同时插入多个外源基因，以期同时接种疫苗预防多种疾病[12.］.

Bartha-K61是一种常见的PRV亲本株。这是一种减毒的PRV，已在猪肾细胞、鸡蛋和鸡胚胎细胞中反复传代[13.］.在这种应变中，已删除完整的GE和GI基因的一部分[14.］.尽管如此，这种结构在开发控制各种传染病的多价疫苗方面取得了良好的成功[4.那10.那15.］.

使用rPRV的常见策略包括构建一个携带部分PRV基因组的转移载体。将该载体与天然PRV一起转染到敏感细胞中，然后筛选细胞中是否存在重组病毒。除了部分PRV基因组外，转移载体还包含启动子、感兴趣的外源基因和报告基因。PRV序列应出现在载体的开始和结束，以允许载体臂和病毒基因组之间的同源重组。一项研究表明，人类巨细胞病毒(CMV)启动子在指导病毒基因合成方面比PRV启动子更有效[4.］.因此，CMV的直接早期基因启动子成为这些结构中最常用的启动子。它也可用于rprv的鉴定。除了传统的产生重组体的方法外，病毒基因组可以克隆到细菌人工染色体(BAC)载体中。使用疱疹病毒BACs产生位点定向和转座子诱变重组的方法已被综述[16.］.

2.活病的PRV疫苗的疗效

迄今为止，大多数插入PRV基因组的外源基因编码来自动物病毒的关键抗原。表中提供了到目前为止开发的构造的摘要1包括亲本PRV品系、外源基因和插入位点。下面的示例更深入地讨论了使用这种技术的成功。

2.1。PRRSV / PRV重组病毒疫苗

猪生殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种包膜，正链RNA病毒，是FaparyARIVIRIDAE的成员[17.］.它造成全球经济损失，是猪正在集中筹集的国家中最重要的疾病[18.-20.］.PRRSV的基因组长度为15 kB，含有九个开放阅读框（ORFS）指定的ORF1a，ORF1b，ORF2a，ORF2b，ORF3，ORF4，ORF5，ORF6和ORF7 [21.-23.］.

10年前，一种减毒rPRV——rPRV-GP5被开发出来，它表达PRRSV的GP5包膜蛋白;GP5蛋白由ORF5编码。rPRV-GP5能够对接种猪的临床症状提供显著的保护，并减少由PRRSV挑战引起的致病性病变。用PRRSV或PRRSV灭活疫苗免疫的猪攻毒前后均保持临床健康。免疫后仅出现短时间(3天)轻度发热(≤41℃)，肺、肾病变逐渐好转，出现短期病毒血症(分别为2周、3周);但攻毒前未检测到抗prrsv抗体[24.］.为了改善RPRV-GP5的保护效果，合成了修饰的GP5基因（GP5M），其中在N-末端和中和GP5表位之间插入平底锅DR辅助细胞表位（PADRE）序列。新的RPRV-GP5 M引发了比RPRV-GP5的更高水平的PRRSV特异性中和抗体和细胞免疫应答[25.］.

最近，该组产生了另一种名为RPRV-GP5M-M的构建体，其表示在同一载体中的PRRSV的两个主要膜相关蛋白（GP5和M）[11.］.用rPRV-GP5 m-M免疫的小鼠产生了PRV特异性的体液免疫反应，并对PRV的致命攻击提供了完全的保护。同时，在免疫小鼠中观察到高水平的prrsv特异性中和抗体和淋巴细胞增殖反应。一旦在小鼠身上证明了这一原理，研究就深入到仔猪。与市上可买到的PRRSV灭活疫苗相比，rPRV-GP5 m-M免疫动物产生更高的PRRSV特异性中和抗体和更高的淋巴细胞增殖反应，从而更好地保护动物免受PRRSV。这些数据表明，PRV是研制基于病毒的PRV和PRRSV疫苗的良好载体。

２.２.PCV2/PRV重组病毒疫苗

猪胃肠病毒2型（PCV2）是切换多系统浪费综合征（PMWS）的主要原因，这是一种衰弱淋巴结病和间质肺炎的猪的全球疾病[26.那27.］.PCV2是一种单链环状DNA病毒，属于圆环病毒科[28.］.PCV2有三个主要的orf;ORF1编码两种与复制相关的蛋白质，Rep和Rep '，它们对病毒DNA复制至关重要[29.];ORF2编码PCV2的主要衣壳蛋白;和ORF3编码非结构态orf3蛋白[30.］.构建表达ORF1和2的融合蛋白的RPRV及其在小鼠和猪中测试的免疫原性[10.］.RPRV-PCV2在BALB / C小鼠中引发强抗PRV2和抗PCV2抗体，其中RPRV-PCV2保护小鼠免受致命攻击的致命的PRV。在猪中，RPRV-PCV2引发了针对PRV和PCV2的显着免疫应答。

仅表达第二个RPRV，仅表达用于免疫仔猪的ORF2基因。结果表明，RPRV-ORF2引发了对PRV和PCV2的显着体液免疫应答，其中在免疫后49天可以检测PCV2特异性淋巴细胞增殖反应[31.］.与同时表达ORF1和2的rPRV相比，rPRV- orf2诱导仔猪保护性免疫反应的效果更好。这些发现表明，rPRV-PCV2可能是一种适合的抗PRV和PCV2的双价疫苗，多样性并不总是疫苗开发的最佳方法。

2.3。FMDV / PRV重组病毒疫苗

口蹄疫病毒（FMDV）具有高度传染性的，并影响所有克罗夫蹄家畜，包括牛，绵羊，山羊，猪和水牛[32.］.它是阳性单链RNA病毒，长度约为8.5kb，属于Picornaviridae的家庭。通过L蛋白酶从多蛋白酶切割并释放FMDV胶囊前体P1-2A，并由病毒蛋白酶3c加工，形成四个结构蛋白，VP1，VP2，VP3和VP4 [33.］.FMDV有7种血清型，A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3，每一种血清型都包含多个亚型[34.-37.］.

使用PRV作为载体，VP1基因融合到PRV基因组。重组产物的免疫原性在15个FMDV血液猪中测试。虽然抗体水平低于商业上可获得的FMDV疫苗诱导的水平，但未观察到对毒性FMDV的保护，RPRV-VP1构建体仍缓解感染猪的临床症状[38.］.为了提高免疫应答，产生另一种RPRV，其表达FMDV的P1-2A;其保护作用在白猪中进行了评估[39.］.与早期的版本相比，这些猪对FMDV和PRV展示了高水平的中和抗体，并进一步显示出对FMDV抗原活化的强烈CTL响应。在与市售疫苗相比时，在新的RPRV构建疫苗中，FMDV的复制显着降低。

最近，又开发了一种共表达P1-2A和病毒蛋白酶3C的rPRV，并在仔猪中进行了试验[40］.这些结果表明，RPRV-P12A3C诱导高水平的中和抗体和FMDV特异性淋巴细胞增殖反应。相对于提供100％保护的灭活FMDV疫苗，RPRV-P12A3C在挑战的仔猪处仅诱导60％的保护，但能够降低致病病变。这些发现表明，RPRV-P12A3C在保护仔猪比以前的构建体中更好，并支持进一步发展FMDV和PRV的疫苗。现在必须专注于针对FMDV的其他血清型，希望能够找到一个患有良好疗效的疫苗对所有或大多数血清型具有良好的疗效。

2.4。PPV / PRV重组病毒疫苗

猪细小病毒(PPV)是引起猪繁殖失败的重要原因。它的特征是胎儿死亡、木乃伊化、死产和延长分娩间隔[41.］.PPV是一种单链DNA病毒，属于细小病毒科。其基因组大小为5kb，包含两个大orf;左边的ORF编码非结构蛋白NS1，右边的ORF编码三种衣壳蛋白[42.］.三种衣壳蛋白之一，VP2，可以自我组装成病毒样颗粒(VLPs)，在免疫上与灭活的全病毒疫苗无区别[43.］.

构建RPRV以表达PPV的VP2基因[44.］.用RPRV-VP2疫苗的仔猪引发了PRV-和PPV特异性体液免疫应答，并对致命剂量的PRV产生了完全保护。该发现引入了对二价疫苗的发展，特别是对抗PRV和PPV的推动。

2.5。FMDV / PPV / PRV重组病毒疫苗

构建了FMDV P1-2A和PPV VP2共表达的rPRV，用于BALB/c小鼠免疫[12.］.对PRV的总抗体和中和抗体水平相当于市售的PRV疫苗。与灭活疫苗相比，对FMDV或PPV的保护> 60％。通过其对FMDV或PPV的RPRV构建体诱导的抗体滴度为其各自的灭活疫苗诱导的水平的50％。

与之前的构建体不同，该疫苗候选者证明使用RPRV开发三价疫苗的可行性，特别是对抗PRV，FMDV和PPV。应在猪中进行未来的工作，以测试这些病毒的天然宿主中这些疫苗的效用。

2.6。CSFV / PRV重组病毒疫苗

猪瘟病毒(CSFV)是全球猪产品贸易的重大障碍，造成相当大的经济损失[45.］.CSFV是属于属的包膜，阳性，单链RNA病毒瘟疫Flaviviridiae的家族[46.那47.］.它的基因组是12.3kb长，编码单个糖蛋白[48.]糖蛋白酶El（后来称为E2），其高度免疫原性，能够诱导保护性免疫应答[49.那50.］.

合成了gD/gE阴性表达E2糖蛋白的二价rPRV。仔猪接种疫苗对猪瘟和猪瘟均有较强的保护作用[51.]支持使用基于RPRV的二价疫苗对CSFV。

2.7。SIV / PRV重组病毒疫苗

猪流感病毒(SIV)是一种a型病毒，由负单链RNA包裹而成。它是正粘病毒家族的一员，其基因组编码10种病毒蛋白。RNA第4段包含编码大血凝素糖蛋白的基因，大血凝素糖蛋白是主要的表面糖蛋白。它也是一种主要的免疫原，在动物中诱导亚型特异性的保护性细胞和体液免疫反应[52.那53.］.片段5编码核蛋白(NP)基因[54.]

表达血清型H3N2亚型SIV（A / SWINE / INNER MONGOLIA / 547/2001）的rPRV构建[55.[其免疫原性在小鼠中进行了测试。在挑战后，没有从疫苗的小鼠中分离病毒;然而，在肺部中观察到轻微的病理病变。同时，RPRV-HA构建使用异源毒力SIV（A / SWINE / HEILONGJIANG / 74/2000）的攻击来构建受保护的小鼠。RPRV-HA疫苗代表针对SIV的候选疫苗。最近，Klingbeil等人。[56.使用BAC技术产生衍生自克隆到PRV的猪H1N1病毒的HA基疫苗。所得病毒与亲本菌株差异很小。猪鉴于单一注射疫苗，产生了在H1N1-衍生的HA蛋白的高水平抗体，并在攻击时保护免受临床感染的临床迹象。

2.8。其他RPRV疫苗

PRV拥有各种主持人，包括猪，羊，牛和狗[3.］.因此，PRV载体已被用于在其他宿主和与病毒保护无关的系统(即原生动物寄生虫)中开发重组疫苗。

2.8.1。刚地弓形虫/ PRV重组

将rPRV表达来自原生动物寄生虫的SAG1，弓形虫[57.］.SAG1蛋白质结构域属于一组糖基磷脂酰肌醇（GPI） - 链接蛋白质，其具有可以在寄生虫表面上发现的狭小术相关序列。在BALB / C小鼠中测试了RPRV-SAG1构建体的保护性。与RPRV-SAG1接种疫苗的所有小鼠开发出高水平的特异性抗体弓形虫裂解物抗原（TLA）和中和抗体。此外，它们观察到脾细胞增殖反应的增加，IFN-γ.和IL-2和强细胞毒性T淋巴细胞反应。当小鼠用高毒性的RH镇定攻击弓形虫， rPRV-SAG1结构诱导部分保护(60%)。这可能与原生动物寄生虫极其复杂的生活史和SAG1表达的阶段特异性有关。

为了改善保护响应，开发出表达SAG1或微量蛋白质MIC3（RPRV-MIC3）的另外两种RPRV，并用于单独和同时免疫BALB / C小鼠[58.］.所有接种了rprv的小鼠都产生了高水平的抗体弓形虫裂解物抗原，脾细胞增殖，IFN-γ.和IL-2。进一步的实验表明，RPRVs在体内刺激了体内的体液和细胞免疫反应。接种疫苗的小鼠在致命的挑战中幸存下来弓形虫RH株;然而，保护并不完全。

这些结果支持以前的研究表明表达的效用弓形虫PRV中的保护性抗原作为对伪论和弓形虫病的疫苗候选者进行疫苗候选的一种新方法;然而，需要额外的研究来增加宿主动物的活力，以寄生动物攻击。一种方法是制备一种多价疫苗，其靶向一种以上的感染阶段或测试其他寄生虫抗原。与病毒不同，寄生虫在生物学和遗传上更复杂，其使重组疫苗发育的方法复杂化。

2.8.2。日本血吸虫/ PRV重组

三个rprvs表达S.Paponicum.谷胱甘肽S-转移酶（SJ26GST），脂肪酸结合蛋白（SJFABP），或两者都分别构建并命名为RPRV / SJ26GST，RPRV / SJFABP和RPRV / SJ26GST-SJFABP [59.］.他们保护小鼠和绵羊的能力S.Paponicum.评估挑战。结果表明，所有RPRVS诱导对总蠕虫提取物，增加的脾细胞增殖和升高的IFN-的抗体应答γ.和免疫小鼠的IL-2水平然而，与给予rPRV/Sj26GST或rPRV/SjFABP相比，给予rPRV/Sj26GST或rPRV/SjFABP的动物观察到更好的免疫刺激。此外，在所有免疫的绵羊中，治疗被认为是安全的，在挑战后蠕虫和鸡蛋的负担明显降低。

这些结果表明，多价rprv为基础的疫苗S.Paponicum.可以产生显着的保护，并能够预防原生动物寄生虫感染。然而，在推定的寄生虫疫苗中，少于100％的保护，这是一个常见的寄生虫疫苗，受到阻碍接受和进一步发展。

2.8.3。JEV /拟就重组

构建表达日本脑炎病毒(JEV) NS1蛋白的rPRV [60.］.Balb / c小鼠和猪都被免疫。使用10的测试^6.pfu在小鼠、仔猪和怀孕母猪中的应用表明rPRV具有良好的安全性。给予rPRV-NS1病毒的动物产生了jev特异性的体液和细胞免疫反应，并保护动物免受PRV Ea毒株的致命挑战。这些实验表明，rPRV可作为一种新型疫苗的候选，可用于控制伪狂犬病和日本脑炎。

2.8.4。狂犬病毒/拟就重组

构建表达狂犬病病毒糖蛋白的RPRV [61.］.通过口服和肌肉内接种途径对犬进行安全的，这种重组病毒被认为是安全的，并诱导对狂犬病和伪的保护性免疫反应。疫苗接种后5周，中和抗体抗体抗体滴度和伪表达的抗体滴度，并保持至少6个月。该实验表明，这里设计的构建体在宿主中良好存活，使接种动物的免疫曲线长寿命。

3.其他病毒载体

显然，还有其他病毒基因组可以作为疫苗载体，如腺病毒、痘病毒和杆状病毒。这些都已作为外源性抗原的递送载体进行了测试，这些外源性抗原以前曾在PRV载体中表达。腺病毒是目前应用最广泛的基因传递系统之一。作为载体，它们具有较高的外源基因插入能力(5-36 kb)，能够诱导广泛的细胞类型[62.]，并以试剂盒形式商业上可获得用于随后的遗传修饰。

Poxviruses是最大已知的动物DNA病毒组。它们已被广泛地用作表达载体，用于疫苗接种，大外来基因的表达，以及细胞和体液免疫应答的诱导[63.］.在更常见的痘病毒中，改性痘苗病毒Ankara（MVA），禽类病毒和ORF病毒。MVA一直是多年来的小疫苗，最近它已被用作病毒载体，以防止癌症和传染病[64.］.其他例子包括使用金丝雀痘为基础的重组，包含西尼罗河病毒的PrM和E基因，以诱导对猫和狗的保护。该研究结果导致了WNV基因的表达和保护性免疫的诱导[65.］.orf病毒利用E2基因产生对CSV的保护性免疫[66.猪中的伪论[67.］.因为ORF病毒很少导致系统感染并具有狭窄的感染宿主范围;它是开发多价病毒疫苗的逻辑选择。

杆状病毒是在昆虫细胞中过表达重组蛋白的极好工具。它的宿主特异性最初被认为局限于节肢动物的细胞;然而，最近的研究表明，携带哺乳动物细胞活性启动子的杆状病毒能够在各种哺乳动物细胞类型以及动物模型中转移和表达外源基因[68.］.Baculovirus Systems非常受欢迎，因为与腺病毒一样，它们也可在商业上和套件形式提供，以便于遗传修饰。

上述病毒也已被用于开发RRSV，PCV2，FMDV，CSFV和SIV的成分的重组活病毒。这些许多病毒载体中关键免疫效率的比较如表所示2。

4.结束语

RPRV作为表达外源抗原的载体的过去成功导致构建的新的RPRV，其致病性较低。RPRV有许多优点。首先，活病变PRV具有大基因组，其中基因组的一半被认为是非，从而允许修改而不影响诸如感染性的关键字。虽然这些基因中的一些与毒力有关，但外源基因的缺失和替代对PRV的繁殖没有不利影响[31.］.关于父母病毒中的常见插入位点的代表性信息总结在表中1。病毒载体的益处是它们不仅表达了自己的保护性抗原，而且表明了任何插入的外源基因。因为它们使用宿主机制来复制和表达蛋白质，所得外源基因产物具有正确修饰或折叠后缺乏的细菌系统的东西的概率更高。因此，源自RPRV的产品更可能模拟天然免疫原，并且正确地诱导免疫动物中的肱骨和/或细胞反应。如上所示，可以在单个矢量构建体内靶向多种疾病。其次，使用PRV基因缺失疫苗存在最小的风险。PRV疫苗菌株已被使用数十年，并在体内表现出高安全性和功效曲线。第三，PRV拥有广泛的主机范围，包括猪，牛，山羊和其他人。这使得可以在不诉诸多个载体的情况下靶向多个宿主的动物疾病以表达抗原。第四，天然PRV诱导细胞免疫并导致潜在感染。 Therefore, rPRVs can be maintained for long periods in a given host thereby providing constant stimulation of the protective immune responses. Finally, PRV can be propagated in various cell lines including SPF chicken embryo fibroblast cells. This permits simplifying virus production and keeping manufacturing costs under control.

在开发基于prv的载体疫苗时需要考虑的其他点是，该载体系统需要一个强大的启动子来维持高稳定的表达水平。此外，在PRV基因组中选择非必需基因以替代感兴趣的外源基因也会影响优化免疫应答。考虑到载体来源的免疫应答和外源性蛋白来源的免疫应答之间的利益冲突，重组结构应该根据最佳接种剂量来确定。为了开发有效的rPRV疫苗，在今后的所有工作中都必须考虑到疾病的致病特征、保护机制和流行病学。

这里报道的许多rPRV候选疫苗要么没有进一步研究，要么还没有商业化。总的来说，有一些因素使这些产品的市场推广复杂化。首先，需要优化病毒感染和复制，以生产适合释放到环境中的高效和安全的疫苗。为此，需要在病毒内部确定更多合适的非必要区域，以增强外源基因的表达，特别是在多价rprv正在发展的情况下。考虑到PRV的基因组规模大，以及重要区域和外源性基因之间的相互作用，可以影响病毒的毒性和复制，这不是一项简单的任务。其次，在产生rPRV时，往往需要对亲本PRV进行修改，以消除或替换现有的标记基因或重要的调控元件，使构建物更适合临床应用。第三，需要制定计划，在现有疫苗和rprv衍生疫苗之间进行过渡。同时或重叠接种这两种疫苗将对随后基于rprv的免疫的效力和传播产生重大和有害的影响。最后，许多使用rprv的研究还没有深入到自然宿主，也就是猪。临床试验的高成本、生产足够数量的生物制剂以推进这些研究以及向环境中释放生物制剂等问题往往是限制因素。 Yet these studies are necessary to get a more comprehensive picture of the immunogenicity of the expressed genes, the persistence of the viral infection, and longevity of the stimulation in the natural host and to study the potential for tumorigenesis when using uniquely modified rPRV-based vectors.

利益冲突

提交人声明没有关于本文的出版物的利益冲突。

致谢

作者的研究是由中国教育部大学的新世纪优秀人才（NCET-10-0144）的资金提供资金，研究团队在黑龙江省大学科技创新研究团队方案（2011TD001）和中国教育部的重点项目（212038）。

参考

1. H. Nauwynck，S.Glorieux，H.Favoreel和M.Pensaert，“细胞生物学和分子特征在细胞培养物中和猪的山药中的伪病毒感染，重点呼吸道”兽医研究第38卷第2期2，页229-241,2007。视图:出版商网站|谷歌学术
2. T. C. FEATTENELITER，“Aujeszky的疾病（伪表达）病毒：1999年6月的病毒和分子发病状态 - ”兽医研究，卷。31，不。1，pp。99-115,2000。视图:谷歌学术
3. B.G.Klupp，C.J.Hengartner，T.C. Fortenleiter，L.W. Enquist，“纯粹的伪诉病毒基因组序列”，病毒学杂志第78期1，页424-440,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
4. B. J. L. Hooft van Iddekinge, N. de Wind, G. Wensvoort, T. G. Kimman, A. L. J. Gielkens, R. J. M. Moormann，“重组伪狂犬病毒对猪伪狂犬和猪瘟的保护效果的比较;不同启动子对基因表达和保护的影响疫苗，卷。14，不。1，pp。6-12,1996。视图:出版商网站|谷歌学术
5. M. Kopp, H. Granzow, W. Fuchs, B. Klupp，和T. C. Mettenleiter，“同时缺失伪狂犬病病毒被膜蛋白UL11和糖蛋白M严重损害次级包膜，”病毒学杂志第78期6，PP。3024-3034,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
6. L.M.Olsen，T.H.Ch'ng，J.P.Card和L.W. Enquist，“神经元感染期间假崇拜病毒US3蛋白激酶的作用”病毒学杂志，卷。80，不。13，pp。6387-6398,2006。视图:出版商网站|谷歌学术
7. B. J. Kelly, C. Fraefel, A. L. Cunningham，和R. J. Diefenbach，“1型单纯疱疹病毒被膜蛋白的功能作用”，病毒的研究第145卷第1期2，第173-186页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术
8. Y. Osorio和H.Ghiasi，“重组疱疹单纯形病毒类型1（HSV-1）作为分子佐剂作为分子佐剂的单胞介素-12P35增强了对眼HSV-1攻击的保护性免疫应答”病毒学杂志，第79卷，第5期。6，pp。3297-3308,2005。视图:出版商网站|谷歌学术
9. A. P. D. Souza，L. Haut，A. Reyes-Sandoval和A.R.Pinto，“重组病毒作为疫苗，免受病毒疾病的疫苗”，“巴西医学和生物研究杂志第38卷第2期4，页509-522,2005。视图:谷歌学术
10. 陈志强，陈志强，陈志强等，“表达猪圆环病毒2型ORF1-ORF2融合蛋白的重组伪狂犬病毒的免疫原性研究”，兽医微生物学，第109卷，第2期。3-4，页179-190,2005。视图:出版商网站|谷歌学术
11. Y.江，芳，S. Xiao等，“重组伪表达的免疫原性和保护效果表达猪生殖和呼吸综合征病毒的两个主要膜相关蛋白”，疫苗，卷。25，不。3，pp。547-560,2007。视图:出版商网站|谷歌学术
12. 钱萍，李新民，于晓林，陈慧春，“一种重组伪狂犬病毒FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和猪细小病毒VP2蛋白共表达的三价候选疫苗”，生物技术字母，第29卷，第2期11，页1677-1683,2007。视图:出版商网站|谷歌学术
13. J. B. McFerran和C. Dow，“猪的猪免疫研究患有Aujeszky疾病病毒，”兽医科学研究，卷。19，没有。1，pp。17-22,1975。视图:谷歌学术
14. B. G.Klupp，B.Lomniczi，N.Visser，W.Fuchs和T.C. Fortenleiter，影响UL21基因的突变有助于伪病毒疫苗菌株Bartha的失明，“病毒学第212卷第2期2，第466-473页，1995。视图:出版商网站|谷歌学术
15. J. Q. Lu，H. C. C. C. Chen，J.L. Zhao，L. R. Fang，Q.1. G. He和F. Xiong，“Xiong”的开发表达猪Parvovirus VP2基因的重组伪论病毒和对其生物学特征的研究，“中国病毒学杂志，卷。20，pp。133-137,2004。视图:谷歌学术
16. C. Warden，Q. Tang和H.朱，“Herpesvirus Bacs：过去，现在和未来，”生物医学和生物技术杂志，卷。2011年，2011年16页第124595号。视图:出版商网站|谷歌学术
17. J.J.M. Meulenberg，M.M.Hulst，E. J. de Meijer等，“Lelystad病毒，猪流行流产的致病剂和呼吸综合征（梨），与LDV和EAV相关，”病毒学，卷。192年，没有。1，pp。62-72,1993。视图:出版商网站|谷歌学术
18. “猪繁殖与呼吸综合征病毒的异质性:对当前疫苗有效性和未来疫苗开发的影响”，X. J.孟，“猪繁殖与呼吸综合征病毒的异质性:对当前疫苗有效性和未来疫苗开发的影响”，兽医微生物学第74卷第1期4，页309 - 329,2000。视图:出版商网站|谷歌学术
19. J. J. M. Meulenberg，“PRRSV，病毒”兽医研究，卷。31，不。1，pp。11-21,2000。视图:谷歌学术
20. “猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪的免疫反应”，中国农业大学学报(自然科学版)，病毒免疫学，卷。15，不。4，pp。533-547，2002。视图:谷歌学术
21. W.H.Wu，Y.Fang，R. Farwell等，“由ORF2B编码的猪生殖和呼吸综合征病毒的10kDa结构蛋白”，病毒学，卷。287，没有。1，pp.183-191,2001。视图:出版商网站|谷歌学术
22. C. A. Gagnon, H. Mardassi, B. Pirzadeh, and D. Rogan，“关于猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)病毒结构蛋白的最新知识:北美和欧洲分离株的比较”，病毒学档案馆第145卷第1期4，页659-688,2000。视图:谷歌学术
23. J.J.M. Meulenberg，A.P.D.BOSEN，E.P.DEKLUYVER，R.J.Dekluyver，R.J.M. Moormann，W.M.M. Schaaper和G. Wensvoort，“由狮子渣毒素2至7编码的蛋白质表征”，“病毒学，卷。206，没有。1，PP。155-163,1995。视图:出版商网站|谷歌学术
24. H. J. Qiu，Z. Z. Tian，G.Z.Ing等，“通过重组伪论病毒引起的保护免疫表达仔猪生殖和呼吸综合征病毒的GP5，”兽医免疫学和免疫病理学，第106卷，第2期。3-4，页309-319,2005。视图:出版商网站|谷歌学术
25. “表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性”，盛武龚成薛宝，卷。21，不。6，PP。858-864,2005。视图:谷歌学术
26. G. M. Allan，F. McNeilly，S. Kennedy等，“猪循环循环病毒样病毒与美国和欧洲的浪费疾病”，“兽医诊断调查杂志，卷。10，不。1，pp。3-10,1998。视图:谷歌学术
27. J.A.Ellis，A.Bratanich，E.G.Clark等，“猪循环病毒和猪的猪繁殖，猪在猪中，具有自然地发生的连续的多系统浪费综合征”兽医诊断调查杂志，卷。12，不。1，pp。21-27,2000。视图:谷歌学术
28. D.托德，J.H. Weston，D. Soike和J.A.Smyth，“基因组序列测定和从鹅和鸽子的新循环血管病毒分析”病毒学，卷。286，没有。2，pp。354-362,2001。视图:出版商网站|谷歌学术
29. A. Mankertz，R.Çaliskan，K.Hattermann等，“猪循环血症的分子生物学：基因表达和病毒复制分析”兽医微生物学第98卷第1期2，页81-88,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
30. A.L.Hamel，L.L.Lin和G.P.S.Nayar，“猪循环系统病毒的核苷酸序列与猪的后期多系统浪费综合征相关”，“病毒学杂志，卷。72，没有。6，pp。5262-5267，1998。视图:谷歌学术
31. 宋勇，金敏，张士生等，“表达2型猪圆环病毒帽蛋白的重组伪狂犬病毒的产生及其免疫原性”，兽医微生物学，卷。119，没有。2-4，pp。97-104,2007。视图:出版商网站|谷歌学术
32. M. Sáiz, J. I. Núñez, M. A. Jimenez-Clavero, E. Baranowski，和F. Sobrino，“口蹄疫病毒:生物学和疾病控制前景”，微生物和感染，卷。4，不。11，PP。1183-1192，2002。视图:出版商网站|谷歌学术
33. P. De Felipe, L. E. Hughes, M. D. Ryan，和J. D. Brown，“口蹄疫病毒2A肽的共转译，核糖体内切割多肽”，生物化学杂志，卷。278，没有。13，pp。11441-11448,2003。视图:出版商网站|谷歌学术
34. E. Domingo, C. Escarmís, E. Baranowski等人，“口蹄疫病毒的进化”，病毒的研究第91卷第1期1，pp。47-63,2003。视图:出版商网站|谷歌学术
35. M. J. Grubman和B. Baxt，“口蹄疫”，临床微生物学评价，卷。17，不。2，pp。465-493,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
36. P. W.Mason，M. J. Grubman和B. Baxt，“FMDV发病机制的分子基础”病毒的研究第91卷第1期1，pp。9-32,2003。视图:出版商网站|谷歌学术
37. N. J.诺尔闻和A. R. Samuel，“口蹄疫病毒的分子流行病学”，病毒的研究第91卷第1期1，第65-80页，2003。视图:出版商网站|谷歌学术
38. 钱萍，李新民，金茂林，彭国强，陈洪昌，“基于伪狂犬病毒减毒基因的口蹄疫疫苗的研究方法:单次使用VP1基因产生对猪口蹄疫和伪狂犬的抗体应答试验”，疫苗，卷。22，没有。17-18，PP。2129-2136，2004。视图:出版商网站|谷歌学术
39. X. Li，R. Liu，H. Tang，M.Jin，H. Chen和P.Quan，通过免疫接种乳酸的免疫催乳剂伪论病毒，表达毛衣前体编码地区的衣壳前体诱导 - 及- 急疾病病毒，“疫苗第26卷第2期22，pp。2714-2722,2008。视图:出版商网站|谷歌学术
40. K. Zhang，J. Huang，Q. Wang等人，“表达FMDV的P12A和3C的重组伪表达病毒可以部分保护针对FMDV挑战的仔猪，”兽医科学研究第91卷第1期1，pp。90-94,2011。视图:出版商网站|谷歌学术
41. 孟岭，李文华，“猪细小病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒对猪繁殖性能的影响”，动物繁殖科学，卷。60-61，pp。199-210,2000。视图:出版商网站|谷歌学术
42. A. I. Ranz, J. J. Manclús, E. Díaz-Aroca, J. I. Casal，“猪细小病毒的DNA序列和基因组组织”，常规病毒学杂志，卷。70，pp。2541-2553,1989。视图:谷歌学术
43. dr . M. Soares, A. Cortez, M. B. Heinemann et al，“通过分析结构编码基因VP2的部分序列揭示猪细小病毒分离物的遗传变异”，常规病毒学杂志，卷。84，否。6，PP。1505-1515,2003。视图:出版商网站|谷歌学术
44. 陈勇，郭伟，徐志伟等，“一种表达细小病毒VP2基因的新型重组伪狂犬病毒的免疫原性及其对猪的保护作用，”病毒学杂志，卷。8，第307条PP。1-8，2011年。视图:出版商网站|谷歌学术
45. R. J. Ophuis，C. J. Morrissy和D.B.Boyle，“使用实时RT-PCR测定的古典猪瘟病毒的检测和定量发病性研究”病毒学方法杂志，卷。131，没有。1，pp。78-85,2006。视图:出版商网站|谷歌学术
46. R. I. B. Francki，C. M. Fauquet，D. L. Chaudson和F. Brown，病毒的分类和命名。病毒分类委员会第五次报告，补编2,1991。
47. Y.L.Huang，V.F.Pang，C.H.Pan等人，“开发逆转录多重实时PCR，用于古典猪瘟病毒的检测和基因分型，”病毒学方法杂志，卷。160，否。1-2，pp.111-118，2009。视图:出版商网站|谷歌学术
48. P. Lowings，G.Ibata，J. Consureham和D. Paton，“古典猪瘟病毒多样性和进化”，常规病毒学杂志第77期6，第1311-1321页，1996。视图:谷歌学术
49. M. M. Hulst, D. F. Westra, G. Wensvoort，和R. J. M. Moormann，“在昆虫细胞中表达的猪霍乱病毒糖蛋白E1保护猪免受猪霍乱”，病毒学杂志，卷。67，没有。9，pp。5435-5442，1993。视图:谷歌学术
50. G.Wensvoort，J.Boonstra和B.G.Bodzinga，“免疫亲和性纯化和猪霍乱病毒的封套蛋白E1的纯化和表征”，常规病毒学杂志，第71卷，第71期3，第531 - 540,1990。视图:谷歌学术
51. B. PEETERS，K.Bienkowska-Szewczyk，M. Hulst，A.Gielkens和T.Kimman，“生物安全，非传播的伪论病毒载体疫苗保护猪免受Aujeszky的疾病和古典猪瘟”常规病毒学杂志第78期12，pp。3311-3315,997。视图:谷歌学术
52. M. Tang，J.A. Harp和R. D. Wesley，“从猪H3N2流感病毒编码HA基因的重组腺病毒部分保护小鼠免受异源病毒的攻击：A / HK / 1/68（H3N2），”病毒学档案馆，卷。147，没有。11，PP。2125-2141,2002。视图:出版商网站|谷歌学术
53. R. D. Wesley，M. Tang和K. M. Lager，通过用人腺病毒5重组病毒疫苗接种来保护断奶猪，表达血凝素和H3N2猪流感病毒的核蛋白，“疫苗，卷。22，没有。25-26，PP。3427-3434，2004。视图:出版商网站|谷歌学术
54. R.A.LAMB和R. M. Krug，“Othomyxoviridae：病毒及其复制”病毒学领域，D. M. Knipe，P. M. Howley，D. E. Griffin等，EDS。，PP。1487-1531，Lippincott Williams＆Wilkins，Philadelphia，Pa，USA，第4版，2001年。视图:谷歌学术
55. Z. J. Tian，G. H. Zhou，B.L. Zheng等，“从H3N2亚型猪流感病毒中编码HA基因的重组伪论病毒保护小鼠免受毒性挑战的影响”兽医免疫学和免疫病理学，卷。111，没有。3-4，第211-218,2006。视图:出版商网站|谷歌学术
56. K.Klingbeil，E. Lange，J.P.P.Teifke，T.C. Fortenleiter，以及W. Fuchs，“用减毒的伪论病毒重组的W. Fuchs，表达大流行猪源H1N1流感的血凝素H1N1流感病毒”常规病毒学杂志，卷。95，pp。948-959,2014。视图:出版商网站|谷歌学术
57. “表达TgSAG1的重组伪狂犬病毒可以抵御毒性的挑战刚地弓形虫Balb / c小鼠中的RH应变和伪症状，“微生物和感染，卷。10，不。12-13，pp。1355-1362,2008。视图:出版商网站|谷歌学术
58. 熊丙奇等，“表达两种重组伪狂犬病毒的免疫原性和保护效果刚地弓形虫SAG1和MIC3蛋白，”兽医寄生虫学，卷。181年，没有。2-4，第215-221,2011。视图:出版商网站|谷歌学术
59. F. Wei，Y. Zhai，H.Jin等，“重组伪表达SJ26GST和SJFABP的制导和免疫原性日本血吸虫”,疫苗，卷。28，不。32，pp。5161-5166，2010。视图:出版商网站|谷歌学术
60. 徐国栋，徐旭东，李振东等，“表达乙型脑炎(SA14-14-2)病毒NS1蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其安全性和免疫原性，”疫苗，卷。22，没有。15-16，PP。1846-1853,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
61. Z.元，S.张，Y.Liu等，“表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪症病毒：狗的安全性和免疫原性，”疫苗第26卷第2期10，页1314-1321,2008。视图:出版商网站|谷歌学术
62. J. R. Mascola，A.Ambor，K.Beaudry等，“通过用DNA质粒免疫猴子免疫引起的中和抗体，并具有表达人免疫缺陷病毒1型蛋白的重组腺病毒载体”。病毒学杂志，第79卷，第5期。2，页771-779,2005。视图:出版商网站|谷歌学术
63. Y.C.Wng，L.C.W.W.Lin，C.R.Melo-Silva，S.A. Smith和D. C. T.C. Tscarke，“使用紧凑的GFP-Blasticidin抵抗融合基因进行选择，”工程重组痘病毒选择，“病毒学方法杂志(第171卷)1，页295-298,2011。视图:出版商网站|谷歌学术
64. M. K. Slifka，“天花疫苗的未来：是关键的MVA？”医学免疫学， 2005年第4卷第2条。视图:出版商网站|谷歌学术
65. K. Karaca, R. Bowen, L. E. Austgen等人，“重组金丝雀痘载体西尼罗河病毒(WNV)疫苗可以保护狗和猫免受蚊子的西尼罗河病毒挑战，”疫苗，卷。23，不。29，pp。3808-3813,2005。视图:出版商网站|谷歌学术
66. H.Voigt，C.Merant，D.Vienhold等，“患典型猪瘟的培养有效糖蛋白E2，表达ORF病毒重组（ORFV VRV-E2），”疫苗，卷。25，不。31，PP。5915-5926，2007。视图:出版商网站|谷歌学术
67. D. Dory，T.Fischer，V.Béven，R.Cariolet，H.J.Rziha和A. Jestin，使用DNA疫苗和重组ORF病毒的素升免疫保护猪对伪病毒（疱疹三分之一），“疫苗，卷。24，不。37-39，pp。6256-6263，2006。视图:出版商网站|谷歌学术
68. T. A.Kost，J.P. Condreay和D.L.Jarvis，“Baculovirus是昆虫和哺乳动物细胞中蛋白质表达的多功能载体”自然生物技术，卷。23，不。5，pp。567-575，2005。视图:出版商网站|谷歌学术
69. “表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M融合蛋白的重组腺病毒诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答，”兽医免疫学和免疫病理学，卷。113，没有。1-2，pp。169-180，2006。视图:出版商网站|谷歌学术
70. 樊洪波，潘颖，方力等，“表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组假杆状病毒的构建及其免疫原性，”病毒学方法杂志，卷。150，没有。1-2，pp。21-26,2008。视图:出版商网站|谷歌学术
71. C.上金，M.Cortey和J.Segalés，“来自猪Provovirus的NS1和VP1 / VP2基因序列的系统发育和演变，”病毒的研究，卷。140，没有。1-2，PP。209-215,2009。视图:出版商网站|谷歌学术
72. J. M. Liu，X.Z.Cai，J.J.Lin等，“基因克隆，表达和疫苗测试日本血吸虫SJFABP，“寄生虫免疫学第26卷第2期8-9，pp。351-358,2004。视图:出版商网站|谷歌学术
73. J.Cai，Y.Ma，J.Li，C. yan，R. Hu和J. Zhang，“猪生殖和呼吸综合征病毒的GP5和M蛋白的重组犬腺病毒的构建和表征”兽医医学科学，卷。72，没有。8，pp。1035-1040，2010。视图:出版商网站|谷歌学术
74. Y. Sun，H. Y. Li，X. J. Zhang等，“重组腺病毒对古典猪瘟的保护效果的比较”免疫学信件，卷。135，不。1-2，第43-49,2011。视图:出版商网站|谷歌学术

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