MALT1-A20-NF——表达模式的替代办法B类风湿性关节炎患者

文摘

类风湿性关节炎(RA)是一种炎症性自身免疫性疾病;异常T细胞免疫在RA的发展起着至关重要的作用。最近,A20被认定为关键负调节T细胞激活和炎症信号,可能参与了RA的发病机制。在这项研究中,我们分析了A20的表达水平,NF -B, A20调节因子mucosa-associated淋巴组织淋巴瘤易位基因1 (MALT1)在RA患者。实时PCR用于确定MALT1的表达水平,MALT-V1, A20和NF -B基因在RA和健康人(你好)。显著降低A20表达式被发现在RA患者与健康组相比,虽然NF -B超表达可能在RA患者中发现。此外,MALT1和MALT1-V1表达水平下调在RA患者。MALT1之间的正相关和表达A20 MALT1-V1 A20在RA患者被发现,和消极的倾向之间的相关性被发现MALT1和NF -MALT1-V1和NF - BB, A20和NF -b .总之,我们首先描述MALT1的另类表达模式,A20, NF -B在RA,这可能与异常T细胞激活。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种常见的慢性、系统性、和炎症性自身免疫性疾病,主要影响的小动关节手和脚,影响到大约1%的世界人口1- - - - - -3]。这种疾病的主要特征是滑膜增生,淋巴细胞浸润,异常增殖呈synoviocytes (FLS的)会导致骨和软骨的破坏和最终的残疾4]。异常T细胞免疫在RA的发展起着至关重要的作用。无数的因素涉及到替代T细胞激活的特点,包括炎症细胞的活化和各种细胞因子的表达。炎症介质,如白细胞介素- 6 (il - 6)、(il - 1)及肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),在滑膜组织和丰富的流体从RA患者,和这些细胞因子促进慢性炎症和关节的过度破坏。许多炎症介质参与风湿性关节炎的病理是由核转录因子(NF -κBB)转录因子(5,6]。异常NF -B激活发生在许多病理条件包括过敏和autoinflammatory疾病和恶性肿瘤(7]。

最近,NF - A20,消极的监管机构B,被确认为炎症信号的关键调节器和可能参与RA发病机理8]。A20报道与几个ubiquitin-editing酶功能。样子也被称为肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子α-)诱导蛋白3 (TNFAIP3),迪克西特和他的同事在1990年首次被发现的细胞因子诱导的基因在人类脐静脉内皮细胞(9,10]。随后的研究表明,A20过度抑制NF -B激活,以应对不同的刺激11- - - - - -13]。A20启动子的克隆和表征了两种NF -B DNA结合元素,NF -识别序列转录因子。它也发现多个NF -通过NF - B激活刺激诱导表达A20表达式B网站A20启动子(14]。因此,A20已经证明自己表达下调表达,它提出了表达A20参与减弱TNF -负反馈循环α全身炎症反应。A20过度后来证明阻止NF -B激活TNF -介导的αil - 1,有限合伙人、佛波醇酯和过氧化氢在不同细胞类型(11,12,15- - - - - -18]。这最有可能是由于抑制抑制NF -B激活内皮细胞在炎性刺激平滑肌细胞和抗增殖的影响被观察到在表达A20超表达在体外。所有的这些发现表明A20变弱的活动近端信号复合物在促炎的受体(19- - - - - -21]。

A20受CARMA1-Bcl-10-MALT1 (mucosa-associated淋巴组织淋巴瘤易位基因1)上游信号通路复杂,这桥T细胞抗原受体(TCR)信号与规范化/ NF - B激酶(IKK)B通路(20.,22- - - - - -25]。细胞刺激诱发招聘A20 Bcl-10适配器蛋白质进入MALT1复杂,导致MALT1-mediated A20处理。同样,API2-MALT1表达A20乳沟。MALT1劈开A20精氨酸439,会损害其NF -B抑制功能。因此,A20被认定为MALT1衬底,强调的重要性MALT1蛋白水解活动“微调”T细胞抗原受体信号(26]。

A20障碍缺失或突变被发现在许多淋巴细胞恶性肿瘤(27]。最近,多态性表达A20地区报告了自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、克罗恩病、牛皮癣。单核苷酸多态性表达A20地区包括rs13192841 rs2230926,和rs6922466独立与系统性红斑狼疮的易感性增加有关(28,29日,这一发现提供了一个关键的样子和系统性红斑狼疮的病因之间的联系。最近,这是表明A20缺乏髓细胞触发腐蚀性多发性关节炎,像RA myeloid-specific, A20-deficient小鼠模型(30.]。有三个密切相关的遗传变异,包括rs6920220 rs6927127, rs6933404,导致表达A20功能降低风湿性关节炎(8]。

风湿性关节炎的病因仍有待理解;然而,A20不足可能是一个关键调节器在RA炎症。在RA描述表达A20的角色,我们分析了A20的表达水平,NF -B, A20监管因素MALT1中国RA患者样本中学习。

2。材料和方法

2.1。样品

这个研究包括16治疗RA患者(年龄:26 - 71年)和20个健康人(年龄:22 - 70年)曾担任控制。RA的诊断是基于美国风湿病学院标准和专家意见(1987 ACR标准)。所有例RA患者评估临床疾病活动由一个训练有素的风湿病学家使用疾病活动得分(DAS) [28]。最近红细胞沉降率(ESR)、c反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF)收集(表1)[31日]。

所有的程序都是按照指南进行医学伦理委员会中国的广东省卫生局。肝素抗凝外周血样本收集,外周血单核细胞(PBMCs)使用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离方法。RNA提取和互补脱氧核糖核酸的合成进行了根据制造商的指示。

2.2。实时定量rt - pcr(存在)

引物的序列MALT1, A20, NF -B基因扩增是列在表中2。根据MALT1基因的结构,有两个变量,即MALT1-V1 MALT1-V2,后者包含33个基点删除位于外显子6和8。放大两个MALT1转录变异,MALT-V1-for和MALT-V1-rev底漆对设计MALT1-V1放大MALT1-V2覆盖的地区失踪,和MALT1-for MALT1-rev底漆对旨在放大保守区域,包含的变体。

A20的表达水平,MALT1 MALT1-V1, NF -B,β2-microglobulin (β2米)基因是由SYBR绿色我实时PCR。简单地说,PCR在20μL总量进行了大约1μ0.5 L的cDNA、μ米每一对引物,9μL(2.5×真正掌握混合(Tiangen生物科技(北京)有限公司,北京,中国),和9μL dH的₂在95°C o .初始变性后15分钟,45以下程序进行:周期30秒95°C和40秒60°C的β2米,MALT1-V1 MALT1、A20和NF -B基因。板是阅读后60°C使用一个MJ研究DNA引擎内髓2步PCR循环(Bio-Rad、大力神、钙、美国)32]。感兴趣的基因的相对量β2 m参考基因在两个独立的测量分析。具体的,放大PCR产品被融化曲线分析分析。给出的数据感兴趣的基因的相对表达与内部控制基因决定的2 ()方法(33]。此外,分析MALT1-V1表达特点,我们计算MALT1-V1表达式比MALT1-V1 / MALT1×100%。

2.3。统计分析

两个independent-samples Wilcoxon测试进行比较平均为每个基因表达水平在RA患者和对照组之间。皮尔逊相关性和线性回归分析是用来确定不同基因在不同组织之间的关系。一个被认为是统计学意义(34]。

3所示。结果和讨论

异常T细胞激活类风湿性关节炎是一种常见的特征(35),和一些积极的upregulation调节因素,如肿瘤坏死因子-α、il - 6和- 2被确认在RA的起始。负监管差别相比之下,对这些因素有相同的影响开始RA (16]。例如,T细胞激活的差别导致了对这些基因的表达A20成熟胸腺细胞和外周T细胞的表达9,10]。最近,异常表达A20表达式描述了RA患者(8),并增加了NF - A20减少结果B表达和增强炎症(25]。在这项研究中,我们分析了表达A20在16个RA患者在活跃的阶段,和一个显著降低表达A20(中间值:6.530)被发现与健康组(中值:44.614,)(图1(一))。这些结果类似于发现不同的报告研究小鼠模型或RA患者(8,36]。A20-deficient老鼠发展严重multiorgan炎症。此外,它也承认,NF -的激活B-dependent基因表达中发挥着关键作用在RA的发展30.];因此,减少表达A20 NF -可能是一个关键原因在RA B超表达。我们的研究也表明NF -B超表达可以检测到在RA患者与健康对照组相比(中间值:0.798)(中值:0.605,)(图1 (b)),这表明减少A20导致NF -B超表达也是中国RA患者的一个共同特征。

低表达A20表达A20基因位点的多态性有关(29日];然而,是否存在失调在表达A20上游通路因素是未知的。MALT1上游A20路径是一个因素,劈开A20精氨酸439,会损害其NF -B抑制功能。描述MALT1和表达A20表达之间的关系,我们还研究了MALT1的表达水平。有趣的是,MALT1表达水平下调在RA患者(中间值:0.541),而与健康组(中值:1.638,)(图2(一个))。这个结果似乎与更低的样子和更高的NF -不一致B表达水平的结果因为MALT1也是一个积极的调节因子NF -b .众所周知,有两个MALT1变异,MALT1-V1 MATL1-V2,数据显示在基因库,和我们以前的研究发现,这些MALT1变异可以通过rt - pcr和测序鉴定(数据没有显示)。此外,我们分析了表达水平不同的变体,也发现类似的结果包括一个显著降低MALT1-V1表达水平检测RA患者(中间值:0.062)与健康对照组相比(中值:0.140,)(图2 (b))。

因为我们不能直接放大MALT1-V2,其中包含33个基点删除MALT1-V2只能间接的表达水平计算的相对表达MALT1-V1 /总MALT1 [37),而没有显著差异的比值之间总MALT1 MALT1-V1 / RA患者和健康对照组(%与%),这意味着MALT1-V2表达水平也在RA表达下调。总的来说,MALI1-V1或MALT1-V2在RA下降,与T细胞的发现急性髓系白血病(AML),我们发现MALT1-V1表达水平明显高于T细胞的AML患者与健康对照组相比,虽然MALT1-V2表达水平下调(37];这可能表明不同的表达模式这两个在RA MALT1变异。人们很少知道功能变体之间的区别,以及是否这是一个反馈响应表达式模式表达A20和NF -B在RA是未知的,因为影响MALT1 A20乳沟的NF -调节能力B只有部分阐明(24]。需要进一步研究来描述上游通路监管者表达A20除了MALT1。

MALT1在炎症的发展在很大程度上是未知的类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病,且只有一个研究报告,病人MALT-type淋巴瘤可能也患有类风湿性关节炎由于MALT1障碍和连续NF -B激活(38]。一项研究报道,MALT1重排在胃麦芽淋巴瘤常与干燥综合征(39]。最近,Brustle和同事表示,MALT1中央细胞内在因素决定了实验性自身免疫性encephalitogenic炎症Th17细胞的潜力在活的有机体内(40]。看来MALT1可能发展的自身免疫性疾病中发挥作用,它可能会干扰特异性T细胞的子集。因此,我们发现MALT1低表达可能意味着失去控制的T细胞活化在一些T细胞在类风湿性关节炎子集,这仍然是一个悬而未决的问题。还需要进一步的研究来探讨通路的上游MALT1 tcr - cd3,则信号不同T细胞在RA子集。

一般来说,表达A20 MALT1劈裂;因此,这两个基因的表达水平应负相关表达式模式表达A20和MALT1 [24]。然而,我们发现MALT1和表达A20(之间的正相关关系,)(图3(一个))和MALT1-V1 A20 (,)(图3 (b))在RA和倾向之间的负相关发现MALT1和NF -B (,),MALT1-V1和NF -B (,),A20和NF -B (,),表明MALT1-A20-NF -B在RA表达模式可能更复杂。

总之,我们的特点,首次MALT1的另类表达模式,A20, NF -B在RA,这可能与异常T细胞激活。缺乏表达A20和MALT1中国RA患者的功能障碍是常见的特点,和我们的研究结果提供了新的目标考虑治疗RA炎症。此外,进一步的研究需要跟进不同的MALT1-A20-NF——患者B表达模式及其与癌症协会的发展。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

李Yangqiu导致了概念开发和研究设计。徐王、朱利华国际、紫薇廖,风扇张执行实时PCR。严凌徐,徐、陈少华和杨Lijian PBMC隔离执行,RNA提取和互补脱氧核糖核酸的合成。利华国际朱和易建联周负责临床数据的收集。Yangqiu李、徐王、朱利华国际和紫薇廖协调研究和帮助起草。所有作者阅读和批准了期末论文。徐王、朱利华国际和紫薇廖同样对本文亦有贡献。

确认

本研究由国家自然科学基金支持的中国没有。91129720)和HK-Macao-TW格兰特合作的科学技术部(2012 dfh30060)。

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