一个牛结核分枝杆菌诱导CD4 BCG-Naked DNA启动—提高疫苗接种策略⁺和CD8⁺t细胞的反应与结核分枝杆菌免疫原

文摘

结核分枝杆菌感染仍然是一个主要的全球公共卫生问题。目前唯一的结核病疫苗是卡介苗(BCG),虽然未能充分预防成人肺结核。为了解决这个问题,迫切需要新的有效疫苗的发展。BCG-prime DNA-booster疫苗接种战略已被证明会诱发更大的比卡介苗预防结核病(TB)。一些研究已经证明,这两个基因(Rv1769和Rv1772)是优秀的t细胞抗原,诱导t细胞免疫反应。在这项研究中,我们构建了BCG-C或BCG-P prime-recombination质粒PcDNA3.1-Rv1769或PcDNA3.1-Rv1772增加疫苗接种BALB / c小鼠进行免疫接种策略和评价其免疫原性。数据表明BCG-C + 3.1 -72战略可能引起最持久和最Th1-type细胞免疫反应和BCG-C + 3.1 -69战略可以诱导高水平CD8 + t细胞反应在特定的时间点。这些发现支持启动—提高策略的思想,结合疫苗可能比单一疫苗预防结核病。

1。介绍

今天结核病仍然是一个主要的传染病导致的发病率和死亡率在世界范围内,世界三分之一的人口是潜伏性感染结核分枝杆菌。卡介苗(BCG)是唯一可用的结核病疫苗目前,保护效果的变量从0到80%在许多田间试验,尚不清楚在成人肺结核1),但它阻止粟粒状的肺结核在新生儿和婴幼儿2,3]。这些大的原因诱发的保护的差异了解甚少,和它的一些局限性可能涉及短期BCG-induced免疫反应性。这就引发了一个问题,一种新型结核病疫苗可以防止成人肺结核是急需的3,4],而卡介苗接种疫苗的新生儿应继续有效。以前的结核病疫苗主要分为4组:(1)DNA疫苗,(2)重组BCG疫苗,(3)亚单位疫苗,和(4)减毒疫苗,和目前大多数努力提高BCG的保护性免疫与波士顿咨询公司专注于策略,将启动,重组卡介苗或其他减毒分枝杆菌,后跟一个不等的助推器免疫,旨在改善反应的持续时间和效果(5- - - - - -7]。考虑各种各样的原因,我们决定选择不同的启动—提高疫苗接种策略组成的启动与BCG和增加新的候选疫苗(8,9]。

细胞免疫反应的控制至关重要结核分枝杆菌感染,这取决于多重的CD4⁺和CD8⁺t细胞反应(10,11]。1型(Th1) CD4 T辅助⁺主要T细胞可以分泌干扰素-γ(IFN -γ),这是很重要的结核分枝杆菌感染和疾病预防12]。CD8⁺细胞溶解的T淋巴细胞(ctl)细胞内的间隙至关重要结核分枝杆菌感染(13)通过分泌穿孔素、granulysin和细胞外酶的免疫突触(14]。不等的启动—提高策略被用于许多致病性感染模型(15],一些研究表明,启动—提高策略使用BCG '和不同的结构如DNA重组,重组腺病毒重组痘病毒,提高免疫原可以提高CD4细胞⁺和CD8⁺对结核病的t细胞反应(6,7,16- - - - - -18]。

寻找一种新型有效的候选疫苗提高BCG的保护,很多策略已经尝试和抗原的研究。在我们的研究中,我们选择两个BCG substrains (BCG-Pasteur1173和BCG-China)是不同的两个删除叫做RD14 N-RD18 [19,20.出现在BCG-China],但在BCG-Pasteur1173缺席。我们注意到两个基因在RD14删除(Rv1769和Rv1772),研究了表面上,一些研究表明Rv1769和Rv1772应考虑潜在的亚基疫苗(21,22]。

在以往的研究中,研究人员重视ESAT-6, CFP-10, Ag85 [7,16,23- - - - - -25,很少有人注意到RD14删除。也许基因位于这个删除负责BCG-Pasteur和BCG-China之间的不同的免疫原性。基于以上的原因,我们构造了疫苗接种战略BCG-C或BCG-P以及推动重组质粒pcDNA3.1-Rv1769或pcDNA3.1-Rv1772免疫BALB / c小鼠和评价其免疫原性。这项研究表明,这种策略可以引起的体液和细胞免疫反应CD4细胞组成⁺和CD8⁺对抗结核病小鼠T淋巴细胞,但其保护效果没有在本研究证明。

2。材料和方法

2.1。菌株,媒体和质粒

牛分枝杆菌BCG-Pasteur和BCG-China请成都生物制品研究所提供的。bcg Sauton的介质(MgSO维护₄0.5 g、K₂HPO₄0.5 g,柠檬酸2 g,谷氨酸钠8 g,甘油60毫升,ZnSO₄0.01 g, ferrum-ammonium柠檬酸0.05 g在1000毫升,ph1.4 - 7.5)。我们实验室的质粒最初是守恒的。

2.2。质粒构建

Rv1769和Rv1772 BCG-China基因组的基因扩增并克隆到pcDNA3.1(+)生成重组质粒pcDNA3.1-Rv1769 pcDNA3.1-Rv1772。经测序序列的表达载体(上海,中国)。Endotoxin-free质粒是准备使用一个EndoFree质粒纯化工具包(ω,美国)。质粒被调整到最后1毫克/毫升的浓度在PBS和存储−20°C。

2.3。动物和免疫协议

雄性小鼠购买4-5-week-old无菌BALB / c从四川大学动物研究所的实验室(中国成都)。小鼠的免疫接种计划如表所示1。BALB / c组()的被试PBST、BCG-China或BCG-Pasteur1173周0和推动与质粒DNA或控制质粒,星期3,星期6。小鼠皮下注射免疫BCG的CFU一卷0.1毫升/鼠标和肌内50μg DNA量0.1毫升每一次鼠标。小鼠处死在10,14日,18日和22周(每组四只老鼠在每个时间点)。血液收集retroorbital窦和血清分离后被储存在−20°C到使用。

2.4。ELISA抗体反应

特定的结核抗体间接ELISA测定方法。该方法被描述为前(22,26]。三个复制每个血清样品进行了测试,结果表示为平均值±标准错误。

2.5。脾细胞的增殖

动物的牺牲(如前所述),脾脏被无菌。淋巴细胞的增殖是由MTT测试试验[3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyl tetrazoliumbromide]。该方法被描述为前(22,27]。结果表示为刺激指数(SI)的价值。如果= OD的刺激/ OD的如果。

2.6。流式细胞术

脾细胞的准备和培养如前所述27,28),在6-well的平底盘子镀和脾细胞(细胞2毫升cRPMI / 100)μL TB-PPD (1μg / mL;XiangRui生物科技有限公司、北京、中国)在每一个和孵化72 h (37°C, 5%的股份有限公司₂)。收集细胞,洗了三次0.1 PBS (),然后兔子anti-Mouse CD4⁺体育和anti-Mouse CD8⁺-FITC(美国eBioscience)加入EP管在冰浴保持30分钟孵化出太阳。最后,这些细胞被洗两次,CD4细胞的比例⁺和CD8⁺T细胞流式细胞术测定(FACSCalibur BD)。

2.7。细胞因子释放试验

脾细胞都以同样的方式处理,流式细胞术测定先前描述,以及浓度的IFN -γ和il - 4在中测定的酶联免疫试剂盒(美国eBioscience)根据生产的协议。

2.8。统计分析

测量这些数据表示为平均值±标准错误(S.E.)。我们用单向方差分析分析组和事后测试之间的差异来分析两组之间的差异。当,被认为是具有统计学意义的差异。

3所示。结果

3.1。抗体的血清

ELISA测定抗体滴度进行检测,以反映对结核的体液免疫反应。的水平在免疫小鼠的血清抗体反应在不同时间点在图所示1。结果表明,第一组中的免疫球蛋白和IgG2a抗体的滴度免疫与BCG-C + 3.1 -69和BCG-C + 3.1 -72人高于其他7组8周();第二,免疫球蛋白浓度BCG-C + 3.1 -69人组高于BCG-P + 3.1 -72年,PBST,质粒控制和积极控制在4日和12周(),在其他8组高于16周();第三组中的IgG2a抗体的滴度免疫与BCG-C + 3.1 -69和BCG-C + 3.1 -72人高于BCG-P + 3.1 -72年,PBST,质粒控制和积极控制在12周()。IgG1抗体的滴度集团除了免疫与BCG-C + 3.1 -69人在其他8组高于4日8日和16周()。图1 (d)显示组BCG-C + 3.1 -69年,BCG-C + 3.1 -72年,BCG-P + 3.1 -69年,BCG-P + 3.1 -72都表明一个转向Th1免疫反应在12周。

3.2。Lymphoproliferation化验

检测细胞介导的免疫反应,脾淋巴细胞增殖是通过MTT试验评估。结果表明,脾细胞的增殖BCG-C + 3.1 -69, BCG-C + 3.1 -72年,BCG-P + 3.1 -69年,BCG-P + 3.1 -72组高于PBST,质粒控制,和积极的控制在12周(),但是没有有意义的统计差异上述四组(BCG-C + 3.1 -69年,BCG-C + 3.1 -72年,BCG-P + 3.1 -69,和BCG-P + 3.1 -72),同时该集团BCG-C + 3.1 -69显示比另一个更大的脾细胞增殖8组在第4周(比BCG-C + 3.1)和-72年,PBST,质粒控制和积极控制团体在第八周()。SI值-69和BCG-C BCG-C + 3.1 + 3.1 -72组在12周达到高峰,之后而增殖水平降低了。重要的是,组织的增殖反应BCG-C + 3.1 -72年仍然保持在一个较高的水平(图16周2)。

3.3。脾细胞的百分比子集

脾细胞的比例子集通过流式细胞仪测定。如图3所示,BCG-C + 3.1 -72组诱导CD4的比例大大提高⁺T细胞在第八周与BCG-P + 3.1 -69相比,BCG-P + 3.1 -72年,PBST,质粒控制和积极控制组织()。此外,BCG-C + 3.1 -69年,BCG-C + 3.1 -72年,BCG-P + 3.1 -69年,BCG-P + 3.1 -72组诱导显著CD4的比例更大⁺T细胞在第12周与PBST相比,质粒控制,和积极控制组织(),BCG-C + 3.1 -69的地位,BCG-C + 3.1 -72年,BCG-P + 3.1 -69组持续16周除了BCG-P + 3.1 -72。最后,CD8的比例⁺-69年BCG-C + 3.1 T细胞组高于其他8组在12周()(图3)。

3.4。细胞因子的生产

确定Th1、th2型免疫反应,干扰素-γ和il - 4从重新刺激脾细胞ELISA检测。根据图4结果清楚地表明,干扰素-的浓度γ组中的BCG-C + 3.1 -69年和-72年BCG-C + 3.1高于其他7组在12周()和干扰素-γBCG-C + 3.1 -72的浓度高于-69组BCG-C + 3.1, BCG-P + 3.1 -69年,PBST,质粒控制和积极控制在第八周()(图4)。il - 4保持在低水平,并没有显著的变化在任何团体包括PBST集团()(数据未显示)。

4所示。讨论

不等的' /提高疫苗接种战略采用重组细菌、病毒、蛋白质,和裸DNA疫苗已被证明和更加多样化的细胞免疫反应引起强于单独卡介苗(5- - - - - -7,22]。在人类中,DNA疫苗本身没有提供令人满意的结果,而DNA疫苗接种时产生更好的结果作为一个启动—提高策略29日,30.]。根据这些观测前,我们建立了这个工作评估两个基因的免疫原性(Rv1769和Rv1772)不等的' /提升策略。本文的数据支持的理论不同的启动—提高疫苗接种比卡介苗诱发更健壮的细胞免疫反应。

以前,许多启动—提高免疫接种方案展示了不同的成功进行各种传染病模型。在结核病实验中,启动—提高疫苗的协议包括BCG /蛋白质启动—提高(8,22),DNA /蛋白质启动—提高(31日),DNA /腺病毒5启动—提高[32),DNA / BCG prime - boost [33],BCG / MVA prime - boost [5疫苗接种时间表,这些启动—提高协议使用Ag85A [5,8],MT_1721 [31日],ESAT-6 [33],Rv1769, Rv1772 [22)作为抗原。考虑BCG免疫在儿童早期,我们的研究已经开始BCG '。

抗原Rv1769和Rv1772有趣因为BCG-China的基因组编码基因存在,只有从BCG-Pasteur中删除。我们假设超表达的基因提高现有BCG的免疫反应。更重要的是,我们成功地提高疫苗的免疫原性通过使用启动—提高疫苗接种卡介苗。

结核病的致病细菌结核分枝杆菌,这是细胞内的细菌和细胞免疫在间隙是非常重要的。在感染早期,CD4细胞⁺T细胞可以释放干扰素-γ2,TNF -α,它可以激活巨噬细胞对抗结核分枝杆菌(34]。在本文中,干扰素-γ作为代表,通过ELISA检测,结果表明,群体BCG-C -69和BCG-C + 3.1 + 3.1 -72人干扰素-最高水平的γ浓度。此外,流式细胞术结果显示组BCG-C + 3.1 -69年和-72年BCG-C + 3.1可以引起CD4的最大比例⁺T细胞。根据流式细胞仪的数据,我们发现,CD4细胞⁺T细胞和干扰素-γBCG-C + 3.1 -72水平上升从第8周和第12周后;然而,CD4细胞的比例⁺-69年BCG-C + 3.1 T细胞持续16周。所以,我们假设集团BCG-C + 3.1 -69可能提高更强和更持久的t细胞免疫反应结核分枝杆菌早期感染。最近,许多研究表明,CD8⁺诱导T细胞至关重要的保护人类结核病免疫(35),额定马力(36),啮齿动物(37),和牛38]。CD8⁺T细胞可以分泌穿孔素、granulysin和胞外酶促进细菌schizolysis [13,34]。在我们的研究中,流式细胞术结果显示,CD8的比例⁺-69年BCG-C + 3.1 T细胞组在12周最高。考虑到这些,我们想到了集团BCG-C不仅诱导多重的CD4 + 3.1 -69⁺T细胞,也是一个健壮的CD8⁺小鼠t细胞反应。

测量TH1-type免疫反应更好,我们也决定这些候选疫苗诱导的抗体反应。研究结果表明,组织BCG-C + 3.1 -69年和-72年BCG-C + 3.1可以引起高水平的免疫球蛋白和IgG2a抗体并持续很长时间。此外,IgG2a / IgG1的比率显示了转向Th1-type免疫反应。

最后,脾细胞的增殖率增加与其他实验结果一致;集团BCG-C + 3.1 -69的脾细胞增殖率上升在第4周和第12周达到峰值。由于上面的论证,我们认为集团BCG-C + 3.1 -69可以诱发更强更持久的TH1-type比本地BCG免疫反应或其他启动—提高组小鼠CD4细胞⁺和CD8⁺T细胞。

一些研究表明BCG和重组BCG能引起中央CD8记忆⁺t细胞分化在活的有机体内(6,39]。因为CD4⁺对驾驶CD8记忆T辅助细胞重要⁺t细胞分化[40,41),BCG生成CD8记忆的能力⁺T细胞能刺激CD4倾向⁺辅助T细胞的增长。有人建议,t细胞的功能异质性反应可能与成功有关微生物感染的控制。t细胞多官能度的程度已经与小鼠的保护利什曼病,人类hiv - 1 (42,43],SIV在非人灵长类动物44]。在这项研究中,一个主要策略可以诱导CD8 BCG-boost DNA⁺t细胞分化以及CD4细胞⁺T细胞;我们假设这个人类结核病疫苗接种策略获得成功和基因Rv1769可能是一个优秀的候选疫苗。

总理BCG-boost质粒Rv1769策略提高了BCG疫苗免疫原性,和亚单位疫苗接种可以用来改善现有由BCG免疫原性唤起,甚至被用于未来的临床试验。最近的协议表明,猕猴和人类裸DNA性能更好的启动—提高政权(30.]。因此,应该使用BCG '和裸DNA提高疫苗接种有几个原因:首先BCG需要包含在未来的疫苗试验对抗结核病;其次裸DNA疫苗已被证明是有效的在启动—提高提交疫苗接种疫苗的协议;最后这个疫苗接种制度可以提高BCG-induced免疫原性。

总之,我们的研究结果提供的证据表明,BCG-naked DNA启动—提高疫苗接种协议代表了一种有价值的候选人(基因Rv1769)未来的疫苗试验针对全球的主要健康问题之一。

在未来,我们会考虑建立一个在活的有机体内挑战模式来扩展我们的发现感染/疾病保护系统。

缩写

PBST:	PBS-Tween 80
波士顿咨询公司:	卡介苗
BCC-C:	群体免疫与疫苗BCG-China substrain
BCG-P:	群体免疫与疫苗BCG-Pasteur1173 substrain
BCG-C + pcDNA3.1:	该组织免疫BCG-China '质粒pcDNA3.1提振
BCG-P + pcDNA3.1:	该组织免疫BCG-Pasteur1173 '质粒pcDNA3.1提振
BCG-C + 3.1 -69:	该组织免疫BCG-China '质粒pcDNA3.1-Rv1769提振
BCG-P + 3.1 -69:	该组织免疫BCG-Pasteur1173 '质粒pcDNA3.1-Rv1769提振
BCG-C + 3.1 -72:	该组织免疫BCG-China '质粒pcDNA3.1-Rv1772提振
BCG-P + 3.1 -72:	该组织免疫BCG-Pasteur1173 '质粒pcDNA3.1-Rv1772提振。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由中国国家重点支持项目的传染病(2012 zx10003008 - 004)和博士科研基金MOE (20110181110046)。

引用

1. 谁,”波士顿咨询集团(肺结核)”,2011年,http://www.who.int/biologicals/areas/vaccines/bcg/Tuberculosis/en/。视图:谷歌学术搜索
2. p . e . m .好卡介苗疫苗:一个粗略的向导”,临床感染疾病,20卷,不。1,11 - 14,1995页。视图:谷歌学术搜索
3. s·h·e·考夫曼”是一种新的结核病疫苗的发展可能吗?”自然医学》第六卷,没有。9日,第960 - 955页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. i m·奥姆镇“超越BCG:潜在的更有效的结核病疫苗,”分子医学今天,5卷,不。11日,第492 - 487页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. e . z . Tehilian c . Desel e·k·福布斯et al .,“免疫原性和保护效果与重组ΔureC启动—提高方案的他⁺牛结核分枝杆菌BCG和修改牛痘病毒安卡拉表达结核分枝杆菌抗原85对小鼠肺结核”,感染和免疫,卷77,不。2、622 - 631年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m . j . Cayabyab b . Korioth-Schmitz y太阳et al .,“重组牛结核分枝杆菌BCG prime-recombinant腺病毒增强疫苗接种在恒河猴抒发健壮的多官能的猴免疫缺陷病毒特异性t细胞反应,”病毒学杂志,卷83,不。11日,第5513 - 5505页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. c . c . Cai j . Lu Wang et al .,“免疫原性和保护效果小鼠肺结核启动—提高方案的BCG和DNA疫苗表达ESAT-6 Ag85A融合蛋白,”临床免疫学和发展文章ID 617892卷,2011年,10页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. j . v .布鲁克斯,a . a .弗兰克·m·a .敏锐的j . t . Bellisle和i m·奥姆镇“提高结核病疫苗,”感染和免疫,卷69,不。4、2714 - 2717年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. n . p . Goonetilleke h·麦柯肖恩,c·m·汉纳·r·j·安德森,r·h·布鲁克斯和a . v . s .希尔”增强的免疫原性和保护效果结核分枝杆菌卡介苗疫苗使用粘膜管理和提高修改牛痘病毒重组安卡拉,”《免疫学,卷171,不。3、1602 - 1609年,2003页。视图:谷歌学术搜索
10. j·l·弗林和j . Chan“免疫学肺结核。”年度回顾的免疫学,19卷,第129 - 93页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p . Wong和e . g . pam CD8 T细胞反应传染性病原体,”年度回顾的免疫学卷。21日,29 - 70年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. n . Caccamo g . Guggino s a Joosten et al .,“多功能CD4细胞⁺T细胞与活跃结核分枝杆菌感染。”欧洲免疫学杂志,40卷,不。8,2211 - 2220年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. d . Sud c . Bigbee j·l·弗林和d·e·柯式”CD8的贡献⁺T细胞来控制的结核分枝杆菌感染。”《免疫学,卷176,不。7,4296 - 4314年,2006页。视图:谷歌学术搜索
14. j . s . Woodworth y . Wu, s m .比哈尔。”结核分枝杆菌特殊技能CD8⁺T细胞需要穿孔素杀死靶细胞并提供保护体内,”《免疫学,卷181,不。12日,第8603 - 8595页,2008年。视图:谷歌学术搜索
15. s·h·e·考夫曼和a·j·麦克”取销危险的联络:艾滋病和结核病疫苗接种策略”自然医学,11卷,不。4,S33-S44, 2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. m·罗马诺·s·D’索萨,P.-Y。Adnet et al .,“启动,但不增加质粒DNA编码mycolyl-transferase Ag85A结核分枝杆菌增加的生存时间牛结核分枝杆菌BCG接种小鼠对低剂量静脉与挑战结核分枝杆菌H37Rv。”疫苗,24卷,不。16,3353 - 3364年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. m . Santosuosso s麦考密克x张a . Zganiacz和z兴”,鼻内增加一个adenovirus-vectored疫苗明显增强保护肠胃外牛结核分枝杆菌BCG接种对肺结核。”感染和免疫,卷74,不。8,4634 - 4643年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. j . m . Vuola基廷,d·p·韦伯斯特et al .,“各种不同的启动—提高疫苗的免疫原性差方案使用DNA和病毒载体在健康的志愿者,“《免疫学,卷174,不。1,第455 - 449页,2005。视图:谷歌学术搜索
19. 诉Tran j . Liu, a . s .梁,d . c .亚历山大和b·朱”BCG疫苗:衰减机制和影响安全和防护功效,“人类疫苗,5卷,不。2、70 - 78年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a . s .梁诉Tran z,吴et al .,”小说在BCG疫苗株基因组多态性和对疗效的影响,“BMC基因组学第413条,卷。9日,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. p . j .小舟美国诉戈登,a al, b . m .洗矿槽,r . g . Hewinson和h . m . Vordermeier”小说的识别结核分枝杆菌抗原与潜在的诊断试剂或亚单位疫苗候选人通过比较基因组学,”感染和免疫,卷70,不。12日,第7003 - 6996页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. m . Lu, z . y .夏和l .包”增强的抗细菌Th1-cell反应牛结核分枝杆菌BCG prime-protein提高疫苗接种策略,”细胞免疫学,卷285,不。1 - 2、111 - 117年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. j·杨,k, j .郑L .魏和j·L粉丝,“有限的T细胞受体β变量曲目反应ESAT-6 CFP-10感染者结核分枝杆菌”,肺结核卷,93年,第537 - 529页,2013年。视图:谷歌学术搜索
24. h·l . Zhang, y赵et al .,”的影响结核分枝杆菌ESAT-6 / CFP-10融合蛋白在小鼠巨噬细胞的自噬功能,“DNA和细胞生物学没有,卷。31日。2、171 - 179年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m . Legesse g . Ameni g . Medhin et al .,“IgA应对ESAT-6 / CFP-10和Rv2031 culture-confirmed肺结核患者抗原不同,健康结核分枝杆菌和未受感染的个人来华的结核病流行设置,埃塞俄比亚,”斯堪的纳维亚免疫学杂志,卷78,不。3、266 - 274年,2013页。视图:谷歌学术搜索
26. 黄懿慧邓,z太阳,x l·杨和l .包”,提高了重组的免疫原性牛结核分枝杆菌表达的融合蛋白Ag85A-ESAT-6卡介苗菌株结核分枝杆菌”,斯堪的纳维亚免疫学杂志,卷72,不。4、332 - 338年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. x y邓、l .包和杨”免疫原性和保护效果的评价结核分枝杆菌重组引发的感染牛结核分枝杆菌BCG表示人类Interleukin-12p70和早期分泌抗原具体目标6融合蛋白,”微生物学和免疫学,55卷,不。11日,第808 - 798页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. x, l .包重组和邓y”,一本小说牛结核分枝杆菌卡介苗应变表达人类粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和结核分枝杆菌早期分泌抗原目标6复杂增强Th1免疫力,”Biochimica et Biophysica学报,43卷,不。7,511 - 518年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. r·r·麦格雷戈r·金斯堡k . e . Ugen et al .,”t细胞反应诱导包含hiv - 1在正常志愿者与dna疫苗免疫env,牧师,”艾滋病,16卷,不。16,2137 - 2143年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. s . j .麦康基w·h·h·莉丝v . s . Moorthy et al .,“增强t细胞免疫原性的质粒DNA疫苗得益于重组修改牛痘病毒安卡拉对于人类来说,“自然医学,9卷,不。6,729 - 735年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. m . j . Cayabyab s . s . Kashino引发的免疫反应和a . Campos-Neto健壮的小说和独特的结核分枝杆菌蛋白质使用一个优化DNA /异种的' /提高协议,”免疫学,卷135,不。3、216 - 225年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 公元前g·德·阿伦卡尔,p . m . Persechini f.a.h ayek Haolla et al .,“穿孔素和γ干扰素表达CD4所需⁺和CD8⁺T-cell-dependent保护性免疫对抗人类的寄生虫,鲁兹锥体,引起不同的质粒DNA prime-recombinant腺病毒5提高接种疫苗,”感染和免疫,卷77,不。10日,4383 - 4395年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. m·A·斯金纳b . m .洗矿槽,d . n .婚姻et al .,“DNA ' -牛结核分枝杆菌BCG提高疫苗接种策略对牛结核病牛诱发保护?”感染和免疫,卷71,不。9日,第4907 - 4901页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. m·e·蒙克和m . Emoto”功能的t细胞和细胞因子子集分枝杆菌感染,”欧洲呼吸杂志,8卷,不。20日,页。668 - 675年代,1995年。视图:谷歌学术搜索
35. s . m . Smith, a . s .马林p t . Lukey et al .,”人类的特征牛结核分枝杆菌反应性CD8卡介苗⁺T细胞”,感染和免疫,卷67,不。10日,5223 - 5230年,1999页。视图:谷歌学术搜索
36. d . c . y . Chen黄r·c·王et al .,“CD8的至关重要的作用⁺肺结核的T细胞在非人类灵长类动物模型,”PLoS病原体,5卷,不。4篇文章ID e1000392 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. y, j . s . Woodworth d s Shin s·莫里斯,s m .比哈尔,“疫苗诱导滤液蛋白特异性CD8 10-kilodalton文化⁺T细胞是充分协调保护结核分枝杆菌感染。”感染和免疫,卷76,不。5,2249 - 2255年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. a·e·豪格,a, p .贝弗利,c·j·霍华德和b . Villarreal-Ramos CD8抗原记忆⁺t细胞反应诱导牛驻留在CD8 BCG⁺γ/δTCR-CD45RO⁺t细胞数量。”疫苗,27卷,不。2、270 - 279年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. h . van Faassen m .沙尔丹哈,d . Gilbertson r . Dudani l·克里希和悲伤,“减少CD8的刺激⁺T细胞在感染细胞内细菌促进分化主要到中央(CD62LhighCD44high)子集,”《免疫学,卷174,不。9日,第5350 - 5341页,2005年。视图:谷歌学术搜索
40. d·j·夏德罗克和h .沈CD4要求⁺在生成功能CD8 T细胞帮助⁺T细胞记忆”科学,卷300,不。5617年,第339 - 337页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. j . c .太阳和m·j·贝文”CD8缺陷⁺没有CD4记忆T细胞在急性感染⁺T细胞的帮助。”科学,卷300,不。5617年,第342 - 339页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. j·r·阿尔梅达d . a .价格l . Papagno et al .,“高级控制CD8的hiv - 1的复制⁺T细胞是反映在他们的贪欲,多官能度,和克隆营业额。”实验医学杂志,卷204,不。10日,2473 - 2485年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. p . a . Darrah d·t·帕特尔,p . m . de Luca et al .,“多功能TH1细胞定义vaccine-mediated保护对利什曼虫主要的关联,”自然医学,13卷,不。7,843 - 850年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. m . Genesca t·洛克李j . et al .,“减毒活疫苗慢病毒感染引发多重的猴免疫缺陷病毒产生CD8⁺与降低T细胞凋亡易感性控制病毒复制的恒河猴与致病性SIVmac239挑战后,“《免疫学,卷179,不。7,4732 - 4740年,2007页。视图:谷歌学术搜索

版权

版权©2014陆苗族等。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。