肝移植后的免疫反应相比,肾移植:有用的监测外周血CD4 +三磷酸腺苷活性和细胞色素P450 3 a5基因型分析

文摘

39七十活体肝移植和肾移植(KT)患者被随机筛选通过外周血CD4 +活动三磷酸腺苷(ATP)试验(才是理想试验)。患者被分为2组在每个器官移植模式才是ATP水平较低(< 225 ng / mL)或高(> 225)(LT-L:KT-L:LT-H:,KT-H:、职责)。细菌或病毒感染的发生率明显高于LT-L组比LT-H组(74.0和8.5%:)。总病毒感染的发生KT-L也显著高于KT-H(36.8和10%:)。才是理想试验的敏感性和特异性识别肝移植的患者感染的风险为0.810和0.878,0.727和0.607 KT的病人。肝细胞色素P450 3 a5患者的百分比(CYP3A5)或基因型(明示)LT-L组明显高于LT-H组(53.8和20.7%:)。在肝和KT病人,才是理想试验可以用于监测细菌或病毒感染的免疫方面。CYP3A5明示LT-L组术后感染有关。

1。介绍

在实体器官移植,包括肝移植(LT)和肾移植(KT)移植物和患者的生存已经大大提高了在最近的二十年里,主要是由于引入各种免疫抑制药物包括钙调磷酸酶抑制剂(CIs)以及手术技术的进步和围手术期管理。然而,独联体有狭窄的治疗窗,和太少使用免疫抑制剂可能会增加风险的急性和慢性排斥反应(1),而太多的免疫抑制可能导致感染,恶性疾病,和其他不受欢迎的副作用2,3]。独联体结合实验室数据的测量槽水平是被广泛接受的实践监控实体器官移植(4,5),虽然他们两人总是敏感或特定的评估当前的免疫抑制状态。

ImmuKnow(才是理想)分析,这是2002年由美国食品和药物管理局批准,可以监测CD4 + T细胞功能通过测量细胞内三磷酸腺苷(ATP)的浓度。这个试验被用于标识移植患者感染的风险(低才是ATP水平)或拒绝(才是ATP水平高)6,7),而另一些反对它的预测作用[8,9]。在每一个器官移植接受者,才是真正的效益分析监测免疫方面需要澄清。

在LT和KT患者中,使用最广泛的免疫抑制药他克莫司,主要由细胞色素P450 (CYP) 3 a4代谢和CYP3A5小肠和肝脏10,11]。换句话说,在LT但不是KT病人,收件人以及捐赠者的CYP3基因型影响他克莫司的血药浓度。LT通常需要更少的免疫抑制与KT和其他实体器官移植相比,其中一个原因可能是肝移植患者他克莫司的新陈代谢。尽管CYP3A5起着关键作用的药物动力学他克莫司尤其是活体供肝移植(肝)患者(12)以及KT患者(13,14),CYP3A5基因型在移植后免疫功能的影响仍不清楚。

我们假设模式才是试验可以用于监测肝移植免疫方面的以及KT和CYP3A5基因型也影响术后患者免疫功能后KT除了中尉本研究的目的是评估肝移植后的免疫反应比较KT通过使用模式才是化验和CYP3A5基因型。

2。患者和方法

2.1。病人

九十八的高(2002年3月至2012年12月)和39 KT(1980年10月到2012年12月)患者,接受手术,一直跟着三重大学医院的门诊,候选人在这项研究中。入选标准是肝和KT病人,恰巧被作为住院病人或他返回去诊所2010年1月至2012年12月期间。唯一的排除标准是如果病人之后在另一个比三重大学医院中心。本研究回顾性队列研究。共有70个肝移植的患者和39 KT患者使用才是理想实验和临床观察的筛选。根据以前的报告(6],225 ng / mL截止ATP水平确定感染的风险,我们这些病人分为四组:LT-L组:肝移植的病人谁至少1才是ATP水平< 225 ng / mL, LT-H组:肝移植的病人谁没有才是ATP水平< 225 ng / mL, KT-L组:KT病人中至少1才是ATP水平< 225 ng / mL, KT-H组:KT病人谁没有才是ATP水平< 225 ng / mL。每个病人的完整的医疗记录。感染被定义为一个病人需要抗生素或抗病毒药物。急性细胞排斥反应是九分定义的班夫拒绝活动指数(15]为轻度,中度或严重基于肝活检的时候经历才是当拒绝被怀疑临床试验。42 LT CYP3A5基因型检测和2005年9月23日KT病人移植后(16]。这个研究(才是理想试验和CYP3A5基因型)米氏大学医院的机构审查委员会批准,每个病人的同意。

2.2。ImmuKnow(才是理想)测定

血液样本被收集在肝素钠管,以及细胞内三磷酸腺苷(ATP)的活动水平是衡量使用才是分析工具包(MBL,名古屋,日本)。血样样本收集当天处理。简单地说,250年μL(实际上全血与提供的样品稀释剂稀释1000年第四卷μl .样本添加到井的96孔板和孵化15到18 h和植物凝集素在37°C和5%的公司₂的气氛。经过浓缩的CD4 + T细胞通过添加磁性粒子涂上了反CD4单克隆抗体(Dynabeads Dynal,奥斯陆,挪威),细胞被清洗和细胞溶解释放细胞内ATP。释放ATP测定荧光素/荧光素酶光度计测定。病人的免疫应答水平表示为ATP (ng / mL)的数量。根据以前的报告(6),我们使用225 ng / mL的截止ATP水平确定感染的风险和525 ng / mL拒绝,我们定义了一个目标免疫响应区范围226 - 525 ng / mL。

2.3。免疫抑制

在肝移植患者,免疫抑制协议由他克莫司和低剂量的类固醇。他克莫司的血槽水平目标是10到12 ng / mL在前2周,之后大约10 ng / mL, 5到10 ng / mL后第二个月高。如果他们的肝功能稳定,收件人在3个月后脱离类固醇的高。在KT患者,29例(74.4%)患者使用他克莫司和8(20.5%)使用环孢霉素。他克莫司的血槽水平目标是大约5 ng / mL。两个病人(5.1%)没有使用钙调磷酸酶抑制剂。29例(74.4%)患者接受霉酚酸酯。

2.4。评价他克莫司血药浓度和浓度/剂量()比

然后他克莫司血药浓度是衡量使用半自动的微粒酶免疫分析法(IMx,阿博特有限公司,东京,日本)。记录的日常剂量他克莫司和它的体重调整一下给剂量(毫克/公斤/天)计算。然后,测量血液他克莫司浓度是由相应的归一化剂量每体重24 h后血液采样获取/剂量(浓度)比,当时用于估计他克莫司剂量需要实现目标槽浓度。

2.5。基因型的细胞色素P450 3 a5

根据我们以前的报告(16],CYP3A5 A6986G (rs776746)多态性的检测分析等位基因,因为的主要缺陷是等位基因,因为其他功能其实snp是罕见的在日本人口(17]。关于CYP3A5基因型,患者分配分成2组:或(明示)和(nonexpressors)。

2.6。巨细胞病毒(CMV)和细菌感染的定义

巨细胞病毒感染定义为发热性疾病的临床症状和巨细胞病毒的检测血液中(通过定量核酸测试或antigenemia)。当病人呈阳性pp65 antigenemia或超过10000人巨细胞病毒/副本μL在血液里,我们管理2 - 4周的静脉注射更昔洛韦出院后口服缬紧随其后。细菌感染是定义为一个发热性疾病临床症状和细菌的检测痰,腹腔液或血液。当病人有细菌感染时,抗生素对易感细菌接种到临床症状改善。

2.7。统计分析

所有的值被表示为平均值±标准偏差(SD)和中位数。皮尔森相关系数是用来确定之间的关系他克莫司的血药浓度和剂量他克莫司和他克莫司血药浓度之间的模式才是ATP水平LT和KT的病人。费舍尔的确切的测试被用于分类的因素。学生的以及用于比较ATP水平和他克莫司比率LT-L LT-H, KT-L KT-H。数据分析使用统计软件药学分析师II(日本东京Hakuhousha有限公司)。一个价值被认为是表明一个统计上的显著差异。

3所示。结果

病人的肝移植的患者特征表所示1。有23 LT-L组患者和47 LT-H组。两组相似的年龄,男女比例,终末期肝病模型(MELD)评分,和肝的病因。也没有在巨细胞病毒血清学测试两组之间的差异在每个捐赠者和接受者。CYP3A5基因型检测在42例(LT-L组:13和LT-H组:29)2005年9月后接受了肝移植。在肝移植受者,他们的百分比或基因型(明示)LT-L组明显高于LT-H组(分别为53.8%和20.7%,)。在肝移植的捐赠,有两组之间无显著差异。在中间间隔时间没有显著差异的高。

在KT患者中,19例KT-L组和20 KT-H组(表2)。年龄没有显著差异,男性/女性比率,KT, ABO-incompatible比,比他克莫司的使用,在每个供体和受体和巨细胞病毒血清学测试。CYP3A5基因型检测在23 KT患者(KT-L组:11和KT-H组:12);两组之间没有显著差异。也没有显著差异在中间间隔时间的高。

3.1。他克莫司和模式才是ATP水平的药物动力学

没有统计上显著的他克莫司的血药浓度之间的关系和他克莫司剂量的肝移植受者(,)(图1(一))和KT患者使用他克莫司(,)(图1 (b))。也没有统计上显著的他克莫司血药浓度之间的关系和模式才是ATP水平在肝移植接受者(,)(图2(一个))和KT患者使用他克莫司(,)(图2 (b))。临床上,没有像离群值的样本数据1和2。

3.2。才是ATP水平和他克莫司LT和KT患者的比率

LT-L患者平均ATP含量显著低于LT-H (185.7 ng / mL(82 - 310)和442.7 (238 - 966),),KT-L病人才是ATP水平也低于KT-H患者(225.6 ng / mL(80 - 359)和488.6 (277 - 770),)(图3(一个))。的意思是他克莫司比率是184.5 (43 - 366)ng / mL / LT-L病人和130.5毫克/公斤/天(41 - 460)在LT-H没有显著差异。也没有显著区别KT-L和KT-H (62.2 (30 - 131) ng / mL / 76.0毫克/公斤/天与(26 - 248),)(图3(一个))。

3.3。发生的LT和KT排斥和感染的病人

拒绝发生在经病理组织切片证实LT-L组3例(13%),8例(17%)在LT-H集团这个调查期间。两组之间没有显著差异()。没有排斥反应发生在KT-L和KT-H病人(图4(一))。细菌或病毒感染的发生率明显高于LT-L组(74%)比LT-H组(8.5%)()。感染具有重要的意义发生在8例(42%)在KT-L组3例(15%)相比KT-H集团()(图4 (b))。

3.4。发生感染的LT和KT患者根据才是ATP水平

在这个调查中,20个肝移植患者细菌感染和17遭受病毒感染包括巨细胞病毒感染和复发丙型肝炎(丙肝)(表3)。在肝移植的患者中,发生各种感染LT-L明显高于LT-H ()。在KT患者中,2经验丰富的细菌感染和9遭受病毒感染。总病毒感染的发生KT-L显著高于KT-H ()。

当我们使用截止225 ng / mL的ATP水平确定感染的风险根据以前的报告(6),才是理想的诊断准确性良好的敏感性为0.810,特异性为0.878在肝移植的病人,也满意的敏感性为0.727,特异性为0.607在KT的病人。

4所示。讨论

传染病对所有类型的移植患者仍然很重要,有时严重的并发症主要是由于监控免疫抑制状态(18]。除了槽水平的CIs与实验数据相结合,才是理想的分析预测是一个潜在的有用的工具发展的感染和拒绝集在肝移植受者19]。另一方面,另一个荟萃分析(20.建议才是理想不是能够识别个体的风险感染或排斥和额外的研究仍需要澄清这个测试的有效性,但有一个重要的研究包括不同的同种异体移植物类型之间的异质性,对照组,截止值。在目前的研究中,我们评估模式才是化验LT和KT病人在同一机构通过使用相同的截断值(才是ATP水平:225 ng / mL),因为可能会有差异的LT和KT之间的免疫反应,具有重要的意义,我们专注于每一个器官移植的差异。

在我们的研究中,我们有23例(32.9%)肝移植的患者低免疫反应(LT-L),他们中的大多数经历过细菌或病毒感染,虽然在他克莫司没有区别比LT-L和LT-H之间。才是理想的诊断准确性分析对于识别肝移植的患者感染的风险也是有利的。这些结果表明,才是理想试验是一个有用的诊断工具确定感染的风险在肝移植的患者中,像以前的报告19]。对于肝移植患者丙肝病毒,的具体发病机制移植肝肝后,5个6丙肝复发病例属于LT-L组。才是理想试验还可以额外的有价值的工具来区分复发性丙肝病毒和急性排斥反应。

在KT患者中,有19个(48.7%)患者较低的免疫反应(KT-L)和8人(42%)有细菌或病毒感染无显著区别KT-L KT-H除了总病毒感染病例。才是理想试验的敏感性和特异性识别KT患者感染的风险也令人满意,但低于在肝移植的病人。在KT而不是LT病人,才是真正的效益分析监测免疫方面仍然是有争议的。尽管一些研究表明,才是理想试验可能是一个潜在的有用的预测不良事件后KT (6,7),Huskey et al。8)报道,单一时间点才是化验不帮助预测未来的机会性感染通过使用相同的截断值(225 ng / mL)作为我们的研究。KT患者的模式才是水平相对较低的肝移植患者比较,和截止水平确定感染的风险可能会更好地定义为低于225 ng / mL。

当我们专注于感染的发生在LT和KT患者根据才是ATP水平,肝移植病人遭受感染虽然才是肝移植患者的ATP水平相对较高的KT病人进行比较。这可能是由于肝脏的免疫抑制药物代谢中所起的作用,除了在手术应激LT和KT之间的区别。

CYP3A5已知发挥关键作用的药物动力学在LT(他克莫司12)和KT患者(13,14),以及肠道CYP3A5肝CYP3A5扮演着一个重要的角色在口服他克莫司管理的初步的效果,直到35天(21]。KT患者、肝脏和肠道功能通常是正常的即使在围手术期处理,另一方面,有时遇到移植肝肝移植患者和/或肠道功能障碍导致术后并发症包括拒绝,门脉高压,或血管并发症,尤其是在肝移植后早期阶段。

我们以前报道,他克莫司率显著低于科目比的等位基因(明示)等位基因(nonexpressor),表明高剂量他克莫司在明示需要实现目标槽水平(16]。在肝移植患者的研究中,的百分比CYP3A5明示以及感染的发生在LT-H LT-L组显著高于组,这意味着LT-L明示往往是在免疫抑制患者,因为实现目标槽水平,导致感染。然而,在KT病人,没有CYP3A5和感染性并发症之间的联系,尽管小数目。这一结果的原因之一可能是截断值不足才是理想的ATP水平但仍是未知的。

我们的研究有一些局限性,包括小样本大小,回顾性质,使用单一的时间点测量模式才是ATP水平在某些病人。才是化验经历了有时偶然的时候,没有明确的原因分析可以确定,这意味着辅助研究不足或可疑迹象才是化验。在KT的同种异体移植物排斥反应呈现这个小组的分析非常困难。此外,CYP3A5基因型检测只有42肝移植的患者(60%)和23 KT病人(59%)。

5。结论

总之,我们的研究指出,才是理想试验可以用于监测细菌或病毒感染的免疫学方面LT和KT的病人。CYP3A5明示,影响他克莫司药物动力学,LT-L组术后感染有关。

的缩写列表

才是:	ImmuKnow免疫细胞功能测定
CYP3A5:	细胞色素P450 3 a5
肝:	活体供肝移植
LT:	肝移植
KT:	肾移植
比例:	浓度/剂量比率。

利益冲突

Shugo美津浓和其他合作者没有利益冲突。

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